Parasitosis y antígenos TF, Tn y sTn / Parasitosis and TF, Tn and sTn antigens

Resumen Las investigaciones realizadas establecen una relación entre los epítopos T, Tn y sTn y las enfermedades parasitarias. Estos epítopos se expresan en un alto porcentaje de tumores epiteliales e inicialmente fueron relacionados con el síndrome T, caracterizado por trombocitopenia, leucopenia y anemia hemolítica. Se ha identificado la expresión de Tn en varios carcinomas, aunque los eventos asociados a su exposición en éstos parecen ser diferentes de los observados en el síndrome Tn. Diversos estudios comunicaron que estructuras asociadas a tumores, tales como los antígenos Tn y sialil-Tn, se expresan en algunos protozoarios y helmintos, y plantearon numerosos interrogantes a nivel de la interacción parásito-hospedador, de la glicobiología parasitaria y de las eventuales relaciones entre la biología de algunos parásitos y las células cancerígenas. Los hematíes son poliaglutinables cuando son aglutinados por casi todas las muestras de suero humano normal. Algunas formas de poliaglutinidad se deben a la exposición del determinante antigénico TF, mediante la eliminación del ácido N-acetilneuramínico, por la acción de neuraminidasas bacterianas o virales, aunque en los últimos años se ha comunicado el desenmascaramiento de este antígeno críptico eritrocitario por Ascaris lumbricoides y Trichinella spiralis. Debido a la importancia clínica de la activación T, se destaca la necesidad de estudiar la exposición del antígeno críptico TF en todos los parásitos cuyo hábitat sea la sangre, o bien en aquellos cuyos ciclos de vida comprendan una migración por el torrente circulatorio, pues su desenmascaramiento puede ocasionar autoaglutinación y/o hemólisis.

Abstract The investigations carried out establish a relationship between the T, Tn and sTn epitopes and the parasitic diseases. These epitopes are expressed in a high percentage of epithelial tumors, and they were initially related to the T syndrome, characterised by thrombocytopenia, leukopenia, and hemolytic anemia. The expression of Tn has been identified in several carcinomas, although the events associated with its exposure appears to be different from those observed in the Tn syndrome. Various studies report that tumor-associated structures such as Tn and sialyl-Tn antigens are expressed in some protozoa and helminths, raising numerous questions at the level of parasite-host interaction, parasitic glycobiology and eventual relationships between the biology of some parasites and cancer cells. Red cells are polyaglutinate when agglutinated by almost all normal human serum samples. Some forms of polyaglutinity are due to the exposure of the antigenic determinant TF, through the elimination of N-acetylneuraminic acid, by the action of bacterial or viral neuraminidases, although the unmasking of this erythrocyte cryptic antigen by Ascaris lumbricoides and Trichinella spiralis has been reported in recent years. Due to the clinical importance of T activation, the need to study the exposure of the cryptic TF antigen in all parasites whose habitats are blood or whose life cycles include migration through the circulatory stream is highlighted, since its unmasking can cause autoagglutination and/or hemolysis.

Resumo As investigações realizadas estabelecem uma relação entre os epítopos T, Tn e sTn e doenças parasitárias. Esses epítopos são expressos em alta porcentagem de tumores epiteliais e foram inicialmente relacionados à síndrome T, caracterizada por trombocitopenia, leucopenia e anemia hemolítica. A expressão de Tn foi identificada em vários carcinomas, embora os eventos associados à sua exposição neles pareçam ser diferentes dos observados na síndrome Tn. Vários estudos relatam que estruturas associadas a tumores, tais como antígenos Tn e sialil-Tn, são expressos em alguns protozoários e helmintos, levantando inúmeras questões no nível da interação parasita-hospedeiro, glicobiologia parasitária e eventuais relações entre a biologia de alguns parasitas e células cancerígenas. Os glóbulos vermelhos são poliaglutináveis quando são aglutinados por quase todas as amostras de soro humano normal. Algumas formas de poliaglutinidade são devidas à exposição do determinante antigênico TF, pela eliminação do ácido N-acetilneuramínico, pela ação de neuraminidases bacterianas ou virais, embora nos últimos anos tenha sido relatado o desmascaramento desse antígeno eritrocitário críptico por Ascaris lumbricoides e Trichinella spiralis. Devido à importância clínica da ativação T, destaca-se a necessidade de estudar a exposição do antígeno críptico TF em todos os parasitas cujo habitat seja o sangue ou naqueles cujos ciclos de vida incluam migração pela corrente circulatória, uma vez que seu desmascaramento pode causar autoaglutinação e/ou hemólise.

Immunogenicity of Foot-and-Mouth Disease Virus Dendrimer Peptides: Need for a T-Cell Epitope and Ability to Elicit Heterotypic Responses.

An approach based on a dendrimer display of B- and T-cell epitopes relevant for antibody induction has been shown to be effective as a foot-and-mouth disease (FMD) vaccine. B2T dendrimers combining two copies of the major FMD virus (FMDV) type O B-cell epitope (capsid proteinVP1 (140-158)) covalently linked to a heterotypic T-cell epitope from non-structural protein 3A (21-35), henceforth B2T-3A, has previously been shown to elicit high neutralizing antibody (nAb) titers and IFN-γ-producing cells in both mice and pigs. Here, we provide evidence that the B- and T-cell epitopes need to be tethered to a single molecular platform for successful T-cell help, leading to efficient nAb induction in mice. In addition, mice immunized with a non-covalent mixture of B2T-3A dendrimers containing the B-cell epitopes of FMDV types O and C induced similarly high nAb levels against both serotypes, opening the way for a multivalent vaccine platform against a variety of serologically different FMDVs. These findings are relevant for the design of vaccine strategies based on B- and T-cell epitope combinations.

Surgeon-led 7-VINCut Antibiotic Stewardship Intervention Decreases Duration of Treatment and Carbapenem Use in a General Surgery Service.

Antibiotic stewardship programs optimize the use of antimicrobials to prevent the development of resistance and improve patient outcomes. In this prospective interventional study, a multidisciplinary team led by surgeons implemented a program aimed at shortening the duration of antibiotic treatment <7 days. The impact of the intervention on antibiotic consumption adjusted to bed-days and discharges, and the isolation of multiresistant bacteria (MRB) was also studied. Furthermore, the surgeons were surveyed regarding their beliefs and feelings about the program. Out of 1409 patients, 40.7% received antibiotic therapy. Treatment continued for over 7 days in 21.5% of cases, and, as can be expected, source control was achieved in only 48.8% of these cases. The recommendations were followed in 90.2% of cases, the most frequent being to withdraw the treatment (55.6%). During the first 16 months of the intervention, a sharp decrease in the percentage of extended treatments, with R2 = 0.111 was observed. The program was very well accepted by surgeons, and achieved a decrease in both the consumption of carbapenems and in the number of MRB isolations. Multidisciplinary stewardship teams led by surgeons seem to be well received and able to better manage antibiotic prescription in surgery.

Trichinella spiralis y Trichinella patagoniensis: estudio de la carga globular aplicando el método de Azul Alcian / Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis: study of globular charge applying Alcian Blue method / Trichinella spiralis e Trichinella patagoniensis: estudo da carga globular pelo método de Azul de Alcian

Resumen Los residuos de ácido siálico de las glicoproteínas de superficie son los principales responsables de la carga negativa eritrocitaria. El objetivo de este trabajo fue estudiar alteraciones de carga globular producidas por Trichinella spiralis y Trichinella patagoniensis. Se trabajó con concentrados de larvas musculares de ambas especies y con eritrocitos frescos. Se incubó el sedimento globular con igual volumen de concentrado larval (1 y 2 horas). Los controles fueron incubados con solución salina. Se aplicó el método de Azul Alcian y se determinó el coeficiente experimental de carga aniónica eritrocitaria (CexpCAE). Los resultados mostraron que la carga disminuyó con el aumento del tiempo de tratamiento para ambas especies. Los valores de CexpCAE de las suspensiones incubadas con T. spiralis fueron menores que con T. patagoniensis, indicando que T. spiralis produjo mayor disminución de carga que T. patagoniensis. Se concluye que la desialización producida por ambas especies no es la misma, lo que sugiere que la relación hospedador-parásito que se establecería in vivo sería distinta.

Abstract The sialic acid residues of the surface glycoproteins are mainly responsible for the erythrocyte negative charge. The objective of this work was to study alterations of globular charge produced by Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis. Work was carried out on muscle larvae concentrates of both species and fresh erythrocytes. The treatment was performed by incubating the globular pellet with equal volume of larval concentrate (1 and 2 hours). Controls were incubated with saline solution. The Alcian Blue method was applied and the experimental coefficient of erythrocyte anion charge (expCEAC) was determined. The results showed that the globular charge decreased with increasing treatment time for both species. The expCEAC values of the suspensions incubated with T. spiralis were lower than with T. patagoniensis, indicating that T. spiralis produced a greater decrease in charge than T. patagoniensis. It is concluded that the desialization produced by both species is not the same, suggesting that the host-parasite relationship that would be established in vivo would be different.

Resumo Os resíduos de ácido siálico das glicoproteínas de superfície são os principais responsáveis pela carga negativa dos eritrócitos. O objetivo desse trabalho foi estudar as alterações da carga globular produzidas por Trichinella spiralis e Trichinella patagoniensis. Trabalhamos com concentrados de larvas musculares de ambas as espécies e com eritrócitos frescos. O tratamento foi realizado incubando o sedimento globular com igual volume de concentrado larval (1 e 2 horas), Os controles foram incubados com solução salina. Foi aplicado o método de Azul de Alcian e se determinou o coeficiente experimental de carga aniônica de eritrócitos (CexpCAE). Os resultados mostraram que a carga diminuiu com o aumento do tempo de tratamento para ambas as espécies. Os valores de CexpCAE das suspensões incubadas com T. spiralis foram menores que com T. patagoniensis, indicando que T. spiralis produziu uma diminuição maior na carga que T. patagoniensis. Conclui-se que a dessalinização produzida por ambas as espécies não é a mesma, sugerindo que a relação hospedeiro parasita que seria estabelecida in vivo é diferente.

Trichinella spiralis y Trichinella patagoniensis: cinética de desialización eritrocitaria / Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis: kinetics of erythrocyte desialization / Trichinella spiralis e Trichinella patagoniensis: cinética de dessialização eritrocitária

El objetivo del trabajo fue estudiar la cinética de desialización eritrocitaria producida por larvas infectantes de Trichinella spiralis y Trichinella patagoniensis. Se trabajó con 7 suspensiones eritrocitarias incubadas con 1.000±200 larvas musculares/mL, durante 2 horas, tomando muestra al tiempo inicial y cada 15 minutos. Los respectivos eritrocitos controles se incubaron de la misma manera con solución salina. Se aplicaron el método de titulación por Polibrene calculando el CexpST y un análisis de varianza (ANOVA) con las comparaciones múltiples según Tukey. Los resultados mostraron que el valor promedio de CexpST disminuyó con el aumento del tiempo de incubación, para ambas especies. En el tratamiento con T. spiralis no hubo diferencias significativas entre el valor medio del coeficiente a tiempo 60 y 75 minutos, mientras que con T. patagoniensis, a 45 y 60 minutos. Todas las restantes diferencias fueron significativas. La comparación entre los tratamientos, para cada uno de los tiempos, mostró que al tiempo inicial el coeficiente promedio no difirió entre las especies, pero que a todos los otros tiempos fue significativamente menor en la incubación de los eritrocitos con T. spiralis. Se concluye que la relación hospedador-parásito que se establece en ambos casos es distinta y probablemente también la capacidad de adaptación y de daño al hombre.

The objective of this work was to study the kinetics of erythrocyte desialization produced by infective larvae of Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis. It was performed on 7 erythrocyte suspensions incubated with 1,000±200 muscle larvae/ mL for 120 minutes, taking samples at the initial time and every 15 minutes. The respective control erythrocytes were incubated in the same way with saline solution. The Polybrene Titration method calculating the CexpST and variance analysis (ANOVA) with the multiple comparisons according to Tukey were applied. The results showed that the average value of CexpST decreased with the increase in incubation time, for both species. There were no significant differences between the mean value of the coefficient at 60 and 75 minutes in the treatment with T. spiralis, while neither were there any differences between 45 and 60 minutes in the incubation with T. patagoniensis. All other differences were significant. The comparison between the two treatments, for each of the times, showed that at the initial time the average coefficient did not differ between the species, but at all other times it was significantly lower in the incubation of the erythrocytes with T. spiralis. It is concluded that the parasite host relationship that is established in both cases is different and probably also is the ability to adapt and cause harm to man.

O objetivo do trabalho foi estudar a cinética de dessialização eritrocitária. produzida por larvas infectantes de Trichinella spiralis e Trichinella patagoniensis. O trabalho foi feito com 7 suspensões eritrocitárias incubadas com 1.000±200 larvas musculares/mL por 2 horas, colhendo amostras no tempo inicial e a cada 15 minutos. Os respectivos eritrócitos-controle foram incubados da mesma forma com solução salina. Foi aplicado o método de titulação por Polibreno calculando o CexpST e também uma análise da variância (ANOVA) com as comparações múltiplas de acordo com Tukey. Os resultados mostraram que o valor médio de CexpST diminuiu com o aumento do tempo de incubação para ambas as espécies. No tratamento com T. spiralis não houve diferenças significativas entre o valor médio do coeficiente no tempo 60 e 75 minutos, ao passo que com T. patagoniensis, aos 45 e 60 minutos. Todas as diferenças restantes foram significativas. A comparação entre os tratamentos, para cada um dos tempos, mostrou que no tempo inicial o coeficiente médio não diferiu entre as espécies, mas que em todos os outros tempos foi significativamente menor na incubação dos eritrócitos com T. spiralis. A conclusão é que a relação hospedeiro-parasita, estabelecida em ambos os casos, é diferente e provavelmente também a capacidade de adaptação e dano ao homem.

A bivalent B-cell epitope dendrimer peptide can confer long-lasting immunity in swine against foot-and-mouth disease.

Foot-and-mouth disease virus (FMDV) causes a widely extended contagious disease of livestock. We have previously reported that a synthetic dendrimeric peptide, termed B2 T(mal), consisting of two copies of a B-cell epitope [VP1(140-158)] linked through maleimide groups to a T-cell epitope [3A(21-35)] of FMDV, elicits potent B- and T-cell-specific responses and confers solid protection in pigs to type O FMDV challenge. Longer duration of the protective response and the possibility of inducing protection after a single dose are important requirements for an efficient FMD vaccine. Herein, we show that administration of two doses of B2 T(mal) elicited high levels of specific total IgGs and neutralizing antibodies that lasted 4-5 months after the peptide boost. Additionally, concomitant levels of IFN-γ-producing specific T cells were observed. Immunization with two doses of B2 T(mal) conferred a long-lasting reduced susceptibility to FMDV infection, up to 136 days (19/20 weeks) post-boost. Remarkably, a similar duration of the protective response was achieved by a single dose of B2 T(mal). The effect on the B2 T(mal) vaccine of RNA transcripts derived from non-coding regions in the FMDV genome, known to enhance the immune response and protection induced by a conventional inactivated vaccine, was also analysed. The contribution of our results to the development of FMD dendrimeric vaccines is discussed.

Swine T-Cells and Specific Antibodies Evoked by Peptide Dendrimers Displaying Different FMDV T-Cell Epitopes.

Dendrimeric peptide constructs based on a lysine core that comprises both B- and T-cell epitopes of foot-and-mouth disease virus (FMDV) have proven a successful strategy for the development of FMD vaccines. Specifically, B2T dendrimers displaying two copies of the major type O FMDV antigenic B-cell epitope located on the virus capsid [VP1 (140-158)], covalently linked to a heterotypic T-cell epitope from either non-structural protein 3A [3A (21-35)] or 3D [3D (56-70)], named B2T-3A and B2T-3D, respectively, elicit high levels of neutralizing antibodies (nAbs) and IFN-γ-producing cells in pigs. To assess whether the inclusion and orientation of T-3A and T-3D T-cell epitopes in a single molecule could modulate immunogenicity, dendrimers with T epitopes juxtaposed in both possible orientations, i.e., constructs B2TT-3A3D and B2TT-3D3A, were made and tested in pigs. Both dendrimers elicited high nAbs titers that broadly neutralized type O FMDVs, although B2TT-3D3A did not respond to boosting, and induced lower IgGs titers, in particular IgG2, than B2TT-3A3D. Pigs immunized with B2, a control dendrimer displaying two B-cell epitope copies and no T-cell epitope, gave no nABs, confirming T-3A and T-3D as T helper epitopes. The T-3D peptide was found to be an immunodominant, as it produced more IFN-γ expressing cells than T-3A in the in vitro recall assay. Besides, in pigs immunized with the different dendrimeric peptides, CD4+ T-cells were the major subset contributing to IFN-γ expression upon in vitro recall, and depletion of CD4+ cells from PBMCs abolished the production of this cytokine. Most CD4+IFN-γ+ cells showed a memory (CD4+2E3-) and a multifunctional phenotype, as they expressed both IFN-γ and TNF-α, suggesting that the peptides induced a potent Th1 pro-inflammatory response. Furthermore, not only the presence, but also the orientation of T-cell epitopes influenced the T-cell response, as B2TT-3D3A and B2 groups had fewer cells expressing both cytokines. These results help understand how B2T-type dendrimers triggers T-cell populations, highlighting their potential as next-generation FMD vaccines.

Larvas recién nacidas de Trichinella spiralis: cinética de agregación eritrocitaria / Newborn larvae of Trichinella spiralis: erythrocyte aggregation kinetics

El objetivo de este trabajo fue estudiar la cinética de agregación eritrocitaria producida por dos concentraciones de larvas recién nacidas (LRN) de Trichinella spiralis. Se trabajó con 5 suspensiones eritrocitarias incubadas con 500 y 1.000±100 LRN/mL durante 120 minutos, con tomas de muestra al tiempo inicial y cada 15 minutos. Los respectivos controles se incubaron de la misma manera con solución salina. Se aplicaron el método de titulación por Polibrene calculando el CexpST y la técnica de análisis de la variancia con las comparaciones múltiples según Tukey. Los resultados mostraron para ambas concentraciones de LRN, que el coeficiente promedio disminuyó con el aumento del tiempo de incubación. En el tratamiento con 1.000 LRN/mL, el coeficiente promedio no presentó diferencias significativas a tiempo 0 y 15 minutos, ni entre 60 y 75 minutos, mientras que con 500 LRN/mL no hubo diferencias entre los tiempos 0, 15 y 30 minutos. Todas las restantes diferencias fueron significativas para ambas concentraciones larvales. El valor promedio de CexpST no difirió significativamente entre los dos tratamientos a tiempo 0 y 15 minutos, pero a todos los otros tiempos fue menor a mayor concentración de larvas. La experiencia realizada indicaría que in vivo, la cantidad de LRN y el tiempo que permanecen en circulación determinan el grado de desializacion eritrocitaria, y por lo tanto el riesgo de activación T y de alteraciones hemorreológicas en el hospedador.

The aim of this work was to study the kinetics of erythrocyte aggregation produced by two concentrations of Trichinella spiralis newborn larvae (NL). Work was performed with 5 erythrocyte suspensions incubated with 500 and 1000 ± 100 NL/mL for 120 minutes, taking samples at the initial time and every 15 minutes. The respective controls were incubated in the same way with saline solution. The Polybrene titration method calculating the CexpST and the variance analysis technique with the multiple comparisons according to Tukey were applied. The results showed that the average coefficient decreased with the rise in incubation time for both NL concentrations. The average coefficient did not present significant differences between the initial time and 15 minutes, nor between 60 and 75 minutes in the treatment with 1000 NL/mL, while there were no differences between 0,15 and 30 minutes in the treatment with 500 NL/mL. All other differences were significant for both larval concentrations. The average value of CexpST did not differ significantly between the two time treatments at zero time and 15 minutes, but at all other times it was less at a higher concentration of larvae. The experience carried out would indicate that in vivo, the amount of NL and the time that they remain in circulation determines the degree of erythrocyte desialylation, and therefore, the risk of T activation and hemorrheological alterations in the host.

O objetivo desse trabalho foi estudar a cinética de agregação eritrocitária produzida por duas concentrações de larvas recém nascidas (LRN) de Trichinella spiralis. O trabalho foi feito com 5 suspensões eritrocitárias incubadas com 500 e 1.000 ± 100 LRN/mL por 120 minutos, colhendo amostras no tempo inicial e a cada 15 minutos. Os respectivos controles foram incubados da mesma forma com solução salina. Foi aplicado o método de titulação por Polibreno e se calculou CexpST. e a técnica de análise da variância com as comparações múltiplas de acordo com Tukey. Os resultados mostraram, para ambas as concentrações de LRN, que o o coeficiente médio diminuiu com o aumento do tempo de incubação. No tratamento com 1.000 LRN/mL o coeficiente médio não mostrou diferenças significativas no tempo 0 e 15 minutos ou entre 60 e 75 minutos, ao passo que não houve diferenças com 500 LRN/mL entre tempos 0, 15 e 30 minutos. Todas as restantes diferenças foram significativas para ambas as concentrações de larvas. O valor médio de CexpST não diferiu significativamente entre os dois tratamentos no tempo de 0 e 15 minutos, mas em todos os outros tempos foi menor em maior concentração de larvas. A experiência realizada indicaria que in vivo a quantidade de LRN e o tempo que permanecem em circulação determina o grau de dessialização dos eritrócitos e, portanto, o risco de ativação T e de alterações hemorreológicas no hospedeiro.

Efecto de Trichinella spiralis y de Trichinella patagoniensis n.sp. sobre la desialización / Effect of Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis n.sp. on desialization

El ácido siálico tiene importantes funciones biológicas, muchas de las cuales determinan su participación en la respuesta inmune. El objetivo del trabajo fue comparar el efecto de Trichinella spiralis y Trichinella patagoniensis n.sp. sobre la desialización eritrocitaria. Se trabajó con 10 concentrados de larvas musculares de T. spiralis y 10 de T. patagoniensis de la misma concentración larval. Se realizó el tratamiento incubando el sedimento de eritrocitos frescos con igual volumen de concentrado larval (37 ºC), tomando muestra a los 30, 60 y 90 minutos. Los controles fueron incubados de la misma forma con solución salina. Se aplicó el método de Titulación de la Agregación por Polibrene y se determinó el CexpST. Los resultados mostraron que el valor medio del CexpST en los eritrocitos tratados con T. spiralis fue significativamente menor que en los glóbulos tratados con T. patagoniensis, para todos los tiempos estudiados. El aumento del tiempo de tratamiento también disminuyó significativamente el valor medio del CexpST para las dos especies. Éste fue significativamente menor a los 90 minutos de incubación que a los 60 minutos y éstos a su vez menores que a los 30 minutos. Se concluye que T. spiralis provocó mayor desialización eritrocitaria que T. patagoniensis en las condiciones experimentales estudiadas.

Sialic acid has important biological functions, many of which determine its participation in the immune response. The objective of this paper was to compare the effect of Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis n.sp. on erythrocyte desialization. Work was performed on 10 larval concentrates of muscle larvae of T. spiralis and 10 of T. patagoniensis of the same larval concentration. The treatment was carried out incubating the sediment of fresh erythrocytes with an equal volume of larval concentrate (37 °C), taking samples at 30, 60 and 90 minutes. The controls were incubated in the same way treated with saline solution. Titration of aggregation by Polybrene Method was applied and the CexpST was determined. The results showed that the mean value of CexpST in erythrocytes with T. spiralis was significantly lower than in the globules treated with T. patagoniensis, for all the studied times. The increase in treatment time also significantly decreased the mean value of CexpST for the two species, being significantly lower at 90 minutes of incubation than at 60 minutes and these in turn lower than at 30 minutes. It is concluded that T. spiralis caused greater erythrocyte desialization than T. patagoniensis in the experimental conditions studied.

O ácido siálico tem importantes funções biológicas, muitas das quais determinam sua participação na resposta imune. O objetivo foi comparar o efeito de Trichinella spiralis e Trichinella patagoniensis n.sp. sobre a dessialização eritrocitária. Trabalhou-se com 10 concentrados de larvas musculares de T. spiralis e 10 de T. patagoniensis da mesma concentração larval. Realizou-se o tratamento incubando o sedimento de eritrócitos frescos com igual volume de concentrado larval (37 ºC), tomando amostra aos 30, 60 e 90 minutos. Os controles foram incubados da mesma forma com solução salina. Foi aplicado o método de Titulação da Agregação por Polibrene e se determinouo CexpST. Os resultados mostraram que o valor médio do CexpST nos eritrócitos Tratados com T. spiralis foi significativamente menor que nos glóbulos tratados com T. patagoniensis, para todos os tempos estudados. O aumento do tempo de tratamento também diminuiu significativamente o valor médio do CexpST para as duas espécies, sendo significativamente menor aos 90 minutos de incubação que aos 60 minutos e eles por sua vez menores que aos 30 minutos. Conclui-se que T. spiralis provocou maior dessialização eritrocitária que T. patagoniensis nas condições experimentais estudadas.

Alteración del ácido siálico eritrocitario por efecto de Trichinella spiralis aplicando el método de Azul Alcian / Alteration of erythrocyte sialic acid by the effect of Trichinella spiralis applying the Alcian Blue method / Alteração do ácido siálico eritrocitário por efeito da Trichinella spiralis aplicando o método de Alcian Blue

Actualmente se reconoce que los ácidos siálicos están involucrados en múltiples funciones biológicas y que tienen un papel importante en la interacción parásito-hospedador. El objetivo del trabajo fue estudiar la alteración del ácido siálico eritrocitario por efecto de T. spiralis aplicando el método de Azul Alcian. Se trabajó con 11 concentrados de larvas musculares de T. spiralis (LM) y 9 de larvas recién nacidas de T. Spiralis (LRN) (total: 20) y con suspensiones de eritrocitos frescos. Se realizó el tratamiento incubando el sedimento globular con igual volumen de concentrado larval (37 ºC durante 1 hora). Los controles fueron incubados de la misma forma con solución salina. Se aplicó el método de Azul Alcian y se determinó CAE% en el control y en los glóbulos tratados. Se calculó CexpCAE. Los resultados mostraron que 5/9 de los concentrados de LRN y 9/11 de LM modificaron la carga globular. La media y la desviación estándar de los CexpCAE de las suspensiones en que la carga disminuyó por contacto con LRN y LM, fueron 0,614±0,1946 y 0,656±0,1865 respectivamente, mientras que en las que no se modificó resultó 0,955±0,0289 en el tratamiento con LRN y 0,93±0,0141 con LM. Se concluye que el Método de Azul Alcian es útil para estudiar las variaciones en la carga eritrocitaria por efecto de LRN y LM de T. spiralis.

It is now recognized that sialic acids are involved in multiple biological functions and that they have an important role in the parasite-host interaction. The objective of this work was to study the alteration of erythrocyte sialic acid by the effect of T. spiralis applying the Alcian Blue method. Work was carried out with 11 larval concentrates of ML and 9 of NL (total 20) and with fresh erythrocyte suspensions. The treatment was performed incubating the globular sediment with equal volume of larval concentrate (37 °C for 1 hour). The controls were incubated in the same way with saline solution. The Alcian Blue method was applied and CAE% was determined in the control and in the treated globules. CexpCAE was calculated. The results showed that 5/9 of the NL concentrates and 9/11 of ML modified the globular charge. The mean and standard deviation of the CexpCAE of the suspensions in which the charge decreased by contact with NL and ML were 0.614±0.1946 and 0.656±0.1865 respectively, whereas in those that did not change, it was 0.955±0.0289 in the NL treatment and 0.93±0.0141 in the ML. It is concluded that the Alcian Blue Method is useful to study the variations in erythrocyte charge due to NL and ML of T. spiralis.

Atualmente se reconhece que os ácidos siálicos estão envolvidos em múltiplas funções biológicas e que têm um papel importante na interação parasita-hospedeiro. O objetivo do trabalho foi estudar a alteração do ácido siálico eritrocitário por efeito de T. spiralis aplicando o método do Alcian Blue. Trabalhou-se com 11 concentrados de larvas musculares de T. spiralis (LM) e 9 de larvas recém-nascidas de T. Spiralis (LRN) (total: 20) e com suspensões de eritrócitos frescos. Realizou-se o tratamento incubando o sedimento globular com igual volume de concentrado larval (37 ºC durante 1 hora). Os controles foram incubados da mesma forma com solução salina. Aplicou-se o método de Azul Alcian e determinou-se CAE% no controle e nos glóbulos tratados. Calculou-se CexpCAE. Os resultados mostraram que 5/9 dos concentrados de LRN e 9/11 de LM modificaram o carga globular. A média e o desvio padrão dos CexpCAE das suspensões em que a carga diminuiu por contato com LRN e LM, foram 0,614±0,1946 e 0,656±0,1865 respectivamente, enquanto que naquelas onde não se modificou, resultou 0,955±0,0289 no tratamento com LRN e 0,93±0,0141 com LM. Conclui-se que o método de Alcian Blue é útil para estudar as variações na carga eritrocitária por LRN e LM de T. spiralis.

Desialización eritrocitaria por larvas recién nacidas de Trichinella spiralis incubadas in vitro / Erythrocyte desialylation by Trichinella spiralis newborn larvae incubated in vitro / Dessialização eritrocitária por larvas recém-nascidas da Trichinella spiralis incubadas in vitro

Trichinella spiralis es la especie que causa la mayoría de los casos de infección humana en todo el mundo. Se comunicó que el contacto de los eritrocitos con concentrados de larvas recién nacidas (LRN) no viables provoca la disminución de ácido siálico globular. El objetivo del trabajo fue estudiar la desialización eritrocitaria producida por LRN mantenidas en cultivo. Se realizaron 2 experiencias en las que se incubaron 80 larvas con 100 μL de eritrocitos en 1 mL de medio RPMI suplementado durante 1, 2, 3, 4 y 24 horas a 37 ºC. Se aplicó el Método de Titulación de la Agregación por Polibrene y se calculó Título, Score Total y CexpCASP en los eritrocitos control e incubados con LRN. Los resultados mostraron que en la primera y segunda hora la captación de ácido siálico fue moderada. A las 3 horas el título disminuyó significativamente en relación al del control y el CexpCASP (0,14±0,014) indicó la pérdida casi total de ácido siálico globular. Ambos valores se mantuvieron a las 4 y 24 horas. Al comparar con estudios similares realizados con larvas infectantes, se sugiere que, in vivo, las LRN captarían más rápidamente el ácido siálico que las larvas musculares.

Trichinella spiralis is the species that causes most human cases of infection in the world. It was reported that contact of erythrocytes with concentrates of non-viable newborn larvae (NL) causes the decrease in erythrocyte sialic acid. The objective was to study erythrocyte desialylation produced by NL maintained in culture. Two experiments were conducted, in which 80 larvae were incubated with 100 μL of erythrocytes in 1 mL of supplemented RPMI medium for 1, 2, 3, 4 and 24 hours at 37 ºC. Titration of Aggregation by Polybrene Method was used and Title, Total Score and CexpCASP were calculated in Control erythrocytes and erythrocytes incubated with NL. The results showed that the sialic acid capture was moderated in the first and second hour. At three hours of incubation, the Title decreased significantly in relation to Control and CexpCASP (0.14±0.014) indicated almost total loss of erythrocyte sialic acid. Both values were maintained at 4 and 24 hours. When compared to similar studies conducted with infective larvae, it is suggested that, in vivo, NL would capture sialic acid faster than muscle larvae.

Trichinella spiralis é a espécie que causa a maioria dos casos de infecção humana em todo o mundo. Comunicou-se que o contato dos eritrócitos com concentrados de larvas recém-nascidas (LRN), não viáveis, provoca a diminuição de ácido siálico globular. O objetivo do trabalho foi estudar a dessialização eritrocitária produzida por LRN mantidas em cultivo. Foram realizadas duas experiências nas quais se incubaram 80 larvas com 100 μL de eritrócitos em 1 mL de meio RPMI suplementado durante 1, 2, 3, 4 e 24 horas a 37 °C. Foi aplicado o Método de Titulação da Agregação por Polibreno e se calculou Título, Pontuação Total (ST) e CexpCASP nos eritrócitos. Os resultados mostraram que na primeira e segunda hora a captação de ácido siálico foi moderada. Às 3 horas o título diminuiu significativamente em relação ao do controle e o CexpCASP (0,14±0,014) indicou a perda quase total de ácido siálico globular. Ambos os valores se mantiveram às 4 e 24 horas. Ao comparar com estudos similares realizados com larvas infetantes, sugere-se que, in vivo, as LRN captariam mais rapidamente o ácido siálico que as larvas musculares.

Desialización eritrocitaria con y sin exposición del antígeno T producida por Trichinella spiralis / Erythrocyte desialylation with and without T antigen exposure produced by Trichinella spiralis / Desialylation eritrocitaria com e sem exposição antigénio T produzida por Trichinella spiralis

El objetivo del trabajo fue estudiar la desialización de eritrocitos que desenmascaran el antígeno T y de los glóbulos que no lo exponen, por contacto con larvas recién nacidas (LRN) de T. spiralis. Se trabajó con 15 suspensiones eritrocitarias en medio enzimático, incubadas con LRN. Los GR control se incubaron con solución salina. Para analizar el efecto del parásito sobre la exposición del antígeno T, se aplicó el Método de Aglutinación anti-T con antígeno T y se estudió la agregación por los métodos de Polibrene y de Análisis Digital de Imágenes, determinando CexpST, CCA y Distribución de los agregados eritrocitarios (DAE). La media de los coeficientes en los eritrocitos que expusieron el antígeno T fueron CexpST=0,22±0,179 y coeficiente de células aisladas (CCA)=0,73±0,108 y en los que no 0,86±0,125 y 0,205±0,163 respectivamente. La DAE mostró que los GR que lo expusieron, presentaron marcada disminución de células aisladas y pronunciado aumento de grandes agregados en relación a los controles, mientras que los GR en los que no hubo exposición, la disminución de células aisladas con respecto a los controles fue menor y el aumento de agregados estuvo homogéneamente distribuido entre todas las categorías. La experiencia realizada concluye que los valores obtenidos de los coeficientes difieren significativamente en los GR que exponen el antígeno T y en los que no, por lo que estas técnicas podrían ser predictivas para detectar desenmascaramiento T.

The aim of this work was to study the desialylation of erythrocytes that expose the T antigen by contact with T. spiralis newborn larvae (NL) and of those that do not. Work was carried out with 15 red cell suspensions in enzymatic medium, which were incubated with NL. The respective Control RBC were incubated with saline solution. To analyze the effect of the parasite on the exposure of the T antigen, the Anti T- antigen T Agglutination Method was applied and the aggregation was studied by Polybrene and Digital Image Analysis Methods determining CexpTS, ICC and Distribution of Erythrocyte Aggregates (DEA). The mean of coefficients in the erythrocytes that exposed the T antigen were CexpTS= 0.22 ± 0.179 and ICC= 0.73 ± 0.108 and of those that did not it was 0.86±0.125 y 0.205±0,163 respectively. DEA showed that the RBCs that exposed it showed a marked decrease of isolated cells and a pronounced increase of large aggregates in relation to the Controls, while the RBCs in which there was no exposure, the decrease of isolated cells with respect to Controls was lower and the increase of aggregates was homogeneously distributed among all categories. The experience concludes that the obtained values of the coefficients differ significantly in the RBCs that expose the T antigen from those that do not, so these techniques could be predictive to detect T unmasking.

O objetivo do trabalho foi estudar a desialização de eritrócitos que desmarcaram o antígeno T e dos glóbulos que não o expõem, por contato com LRN de T. spiralis. Trabalhou-se com 15 suspensões de eritrócitos em meio enzimático, incubadas com LRN. Os GV controle foram incubados com solução salina. Para analisar o efeito do parasita sobre a exposição do antígeno T, foi aplicado o Método de Aglutinação anti T com antígeno T e se estudou a agregação pelos Métodos de Polibrene e de Análise Digital de Imagens, determinando CexpST, CCA e Distribuição dos agregados eritrocitários (DAE). A média dos coeficientes nos eritrócitos que expuseram o antígeno T foram CexpST= 0.22±0.179 e CCA= 0.73±0.108 e naqueles que não o expuseram 0.86±0.125 y 0.205±0,163 respectivamente. Foi demonstrado que os GV que o expuseram, apresentaram marcada diminuição de células isoladas e pronunciado aumento de grandes agregados em relação aos controles, enquanto que os GV nos quais não houve exposição, a diminuição de células isoladas com respeito aos controles foi menor e o aumento de agregados esteve homogeneamente distribuído entre todas as categorias. A experiência realizada conclui que os valores obtidos dos coeficientes diferem significativamente nos GV que expõem o antígeno T e nos que não, portanto estas técnicas poderiam ser preditivas para detectar desmascaramento T.

Exposición de criptoantígeno eritrocitario por larvas recién nacidas de Trichinella spiralis / Exposure of erythrocyte cryptic antigen by Trichinella spiralis newborn larvae / Exposição do cripto antígeno eritrocitário por larvas recém-nascidas de Trichinella spiralis

La desialización del eritrocito puede exponer determinantes antigénicas crípticas de la membrana, entre las cuales se encuentra el antígeno T. Se ha comunicado que las larvas recién nacidas de Trichinella spiralis (LRN), las cuales circulan por el torrente sanguíneo del hospedador, captan el ácido siálico eritrocitario. El objetivo de este trabajo fue estudiar in vitro la exposición del criptoantígeno T por la desialización producida por distintas concentraciones de LRN. Se trabajó con 30 suspensiones eritrocitarias en medio enzimático, que fueron incubadas en partes iguales con concentrados de LRN (GR Tratados) durante 2 horas a 37 ºC con agitación continua. Los respectivos GR Controles se pusieron en contacto con solución salina. El tratamiento de 10/30 suspensiones globulares se realizó con 500 LRN/mL, 10 con 300 LRN/mL y las últimas 10 con 150 LRN/mL. Se aplicó el Método de Aglutinación anti-T con antígeno T (en Placa y Tubo) enfrentando las suspensiones a suero de adulto y suero de cordón. El tratamiento de 9/10 de las suspensiones con 500 LRN/mL, el de 7/10 con 300 LRN/mL y el de 2/10 con 150 LRN/mL las expuso al criptoantígeno. Se concluye que en pacientes diabéticos, hipertensos o con otra patología que produzca disminución de ácido siálico eritrocitario y que cursen simultáneamente una infección por T. spiralis, en la etapa de circulación de larvas por el torrente sanguíneo podría producirse la activación T con la consecuente hemólisis, trombocitopenia y trombosis.

Erythrocyte desialylation can expose cryptic antigenic determinants of the membrane, among which is the T antigen. It has been reported that newborn larvae (NL), which circulate in the bloodstream of the host, capture erythrocyte sialic acid. The aim of this study was to study in vitro exposure of cryptic T antigen by the desialylation produced by different concentrations of NL. Work was carried out on 30 red cell suspensions in enzymatic medium, which were incubated in equal parts with NL concentrates (Treated RBC) for 2 hours at 37 ºC with continued agitation. The respective Control RBC was incubated with saline solution. Treatment of 10/30 globular suspensions was performed with 500 NL/mL, 10 with 300 NL/mL and the last 10 with 150 NL/mL. Anti T- antigen T Agglutination Tests (Plate and Tube) were made, facing the globular suspensions against adult and cord human sera. Treatment of 9/10 suspensions with 500 NL/mL, 7/10 with 300 NL/mL and 2/10 with 150 NL/mL exposed T antigen. It is concluded that in patients with diabetes, hypertension or other diseases with lower content of erythrocyte sialic acid and who simultaneously have a T. spiralis infection, T activation may occur in the stage of larvae circulating through the bloodstream, with consequent haemolysis, thrombocytopenia and thrombosis.

A dessialização do eritrócito pode expor determinantes antigênicos crípticos da membrana, entre os quais se encontra o antígeno T. Foi comunicado que as larvas recém-nascidas de Trichinella spiralis (LRN), as quais circulam na corrente sanguínea do hospedeiro, capturam o ácido siálico eritrocitário. O objetivo foi estudar in vitro a exposição do cripto antígeno T pela dessialização produzida por diferentes concentrações de LRN. Trabalhou-se com 30 suspensões eritrocitárias em meio enzimático, incubadas em partes iguais com concentrados de LRN (GV Tratados) durante 2 horas a 37 °C com agitação contínua. Os respectivos GV Controles entraram em contato com solução salina. Tratamento de 10/30 suspensões globulares foi realizado com 500 LRN/mL, 10 com 300 LRN/mL e as últimas 10 com 150 LRN/mL. Foi aplicado o Método de aglutinação anti T-antígeno T (em Placa e Tubo) enfrentando as suspensões a soro de adulto e soro de cordão. O tratamento de 9/10 suspensões com 500 NRL / mL, o de 7/10 com 300 LRN/mL e o de 2/10 com 150 LRN/mL expuseram o cripto antígeno. Conclui-se que em pacientes diabéticos, hipertensos ou com outra patologia que produza diminuição do ácido siálico eritrocitário, e que padeçam simultaneamente uma infecção por T. spiralis, na fase de circulação de larvas pela corrente sanguínea, poderia ocorrer a ativação T com a consequente hemólise, trombocitopenia e trombose.

Cinética de desialización eritrocitaria producida por larvas musculares vivas de Trichinella spiralis / Erythrocyte desialylation kinetics produced by living Trichinella spiralis muscle larvae / Cinética de dessialização eritrocitária causada por larvas musculares vivas da Trichinella spiralis

Las larvas musculares (LM) de T. spiralis alteran la agregación eritrocitaria. El objetivo del trabajo fue estudiar la cinética de desialización eritrocitaria producida por LM vivas de T. spiralis. Se realizaron 3 experiencias en las que se incubaron 60 larvas con 30 μL de eritrocitos en 1 mL de solución salina durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 18, 20, 22 y 24 horas. Se aplicó el Método de Titulación de la Agregación por Polibrene y se calculó Título, Score Total y CexpCASP en los eritrocitos Control e incubados con LM. Los resultados mostraron que en la primera hora no hubo captación de ácido siálico. A las 2 horas el coeficiente comenzó a decrecer y a las 3 horas el Título disminuyó en una dilución y el coeficiente fue 0,62±0,021. En los siguientes tiempos el Título se mantuvo y el valor del coeficiente presentó pequeñas disminuciones, hasta alcanzar el valor de 0,45±0,010 a las 22 horas, tiempo en que se produjo la disminución significativa del Título. A las 24 horas hubo una nueva disminución del Título del Control y CexpCASP fue 0,13±0,093. Se concluye que las LM vivas durante incubación in vitro con eritrocitos comenzarían a captar ácido siálico a partir de las 2 horas de contacto logrando la desialización casi completa del eritrocito a las 24 horas.

T. spiralis muscle larvae (ML) alter erythrocyte aggregation. The objective of this work was to study erythrocyte desialylation kinetics produced by living T. spiralis ML. Three experiments were conducted in which 60 larvae were incubated with 30 μL of erythrocytes in 1 mL of saline solution for 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 18, 20, 22 and 24 hours. Titration of Aggregation by Polybrene Method was used and Title, Total Score and CexpCASP were calculated in Control erythrocytes and erythrocytes incubated with ML. The results showed that in the first hour there was no capture of sialic acid. The coefficient began to decrease at 2 hours, and at 3 hours the Title decreased in one dilution and the coefficient was 0.62±0.021. The title was maintained at the following times and the coefficient value presented small decreases, until reaching 0.45±0.010 value at 22 hours. It was then that, a significant decrease in Title occurred. Within 24 hours, there was a further decrease of Control Title, and CexpCASP was 0.13±0.093. It can be concluded that living ML during in vitro incubation with erythrocytes began to capture sialic acid after 2 hours of contact, getting almost complete desialylation of erythrocytes at 24 hours.

As larvas musculares (LM) de T. spiralis alteram a agregação eritrocitaria. O objetivo do trabalho foi estudar a cinética de dessialização eritrocitária produzida por LM vivas de T. spiralis. Realizaram-se 3 experiências nas quais foram incubadas 60 larvas com 30 μL de eritrócitos em 1 μL de solução salina durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 18, 20, 22 y 24 horas. Foi aplicado o Método de Titulação da Agregação por Polibreno e se calculou Título, Pontuação Total (ST) e CexpCASP. Os resultados mostraram que na primeira hora não houve captura de acido siálico. Às 2 horas o coeficiente começou a decrescer e às 3 horas o Título diminuiu numa diluição e o coeficiente foi 0,62±0,021. Nos tempos seguintes o Título se manteve e o valor do coeficiente apresentou pequenas diminuições, até atingir o valor de 0,45±0,010 às 22 horas, tempo em que se produziu a diminuição significativa do Título. Às 24 horas houve uma nova diminuição do Título do Controle e o CexpCASP foi 0,13±0,093. Conclui-se que as LM vivas durante incubação in vitro com eritrócitos, começariam a captar ácido siálico a partir das 2 horas de contato conseguindo a dessialização quase completa do eritrócito às 24 horas.

Captación de ácido siálico por larvas musculares de Trichinella spiralis durante incubación in vitro / Sialic acid capture by Trichinella spiralis muscle larvae during incubation in vitro / Captação de ácido siálico por larvas musculares de Trichinella spiralis durante a incubação in vitro

Se ha comunicado que los eritrocitos (GR) incubados in vitro con larvas infectantes (LM) de T. spiralis presentan mayor agregación que los GR Controles incubados con solución salina, lo que indica que el parásito capta el ácido siálico globular. El objetivo del trabajo fue estudiar la captación de ácido siálico por LM durante incubación in vitro. Se incubaron 30, 60, 90 y 180 larvas con 30 mL del sedimento de GR en 1 mL de solución salina durante 24 y 48 h (37 °C). Se aplicó el Método de Agregación por Polibrene y se calculó Tïtulo, Score Total y CexpCASP. Los resultados mostraron una disminución significativa de estos 3 valores en relación al Control, excepto en el cultivo con 30 LM donde solo se observó un descenso moderado del Score Total y CexpCASP. La captación fue máxima a las 24 h, sin diferencias con los valores obtenidos a las 48 h. Posteriormente se incubaron 60 LM durante 1, 2 y 3 h. Se observó que no hubo captación de ácido siálico en la primera hora de incubación y que fue moderada a las 3 h. La experiencia demostró la captación de ácido siálico globular por las LM in vitro, lo que sugiere que podrían secuestrarlo del miocito con el objeto de evadir y/o interferir la respuesta inmune a los fines de asegurar su permanencia en el hospedador.

It has been reported that erythrocytes (RBC) incubated with infective larvae of T. spiralis (ML) exhibit higher aggregation than Control RBC incubated with saline solution, indicating that the parasite captures erythrocyte sialic acid. The objective of this work was to study sialic acid capture by ML during in vitro incubation. A total of 30, 60, 90 and 180 larvae were incubated with 30 mL of GR sediment in 1 mL of saline solution for 24 to 48 hours (37 °C). Aggregation by Polybrene Method was used, and Titre, Total Score and CexpCASP were calculated. The results showed a significant decrease of these three values compared to Control except in the culture with 30 ML where only a moderate decrease of Total Score and CexpCASP were observed. The capture was maximal at 24 hours, with no difference with the values obtained at 48 hours. Then, 60 ML were incubated for 1, 2 and 3 hours. It was noted that ML did no capture sialic acid in the first hour of incubation and the capture was moderate at 3 hours. The experience showed globular sialic acid capture by ML in vitro, suggesting that they could sequester it from the myocyte in order to evade and/or interfere with the immune response for the purposes of assuring their permanence in the host.

Foi informado que os eritrócitos (GV) incubados in vitro com larvas infetantes (LM) da T. spiralis apresentam maior agregação que os GV Controles incubados com solução salina, indicando que o parasita capta o ácido siálico globular. O objetivo do trabalho foi estudar a captação de ácido siálico por LM durante a incubação in vitro. Foram incubadas 30 , 60 , 90 e 180 larvas com 30 μL do sedimento de GV em 1 mL de solução salina durante 24 a 48 horas (37 °C). Foi aplicado o Método de Agregação por Polibrene e se calculou o Título, Pontuação Total e CexpCASP. Os resultados mostraram uma diminuição significativa desses três valores em relação ao Controle, exceto na cultura com 30 LM, onde foi observada apenas uma redução moderada da Pontuação Total e CexpCASP. A captação foi máxima às 24 horas, sem diferença com os valores obtidos às 48 horas. Posteriormente 60 LM foram incubadas durante 1, 2 e 3 horas. Observou-se que não houve captação alguma de ácido siálico na primeira hora de incubação e que foi moderada às 3 horas. A experiência mostrou captação de ácido siálico globular pelas LM in vitro, sugerindo que poderiam sequestrá-lo do miócito visando a evadir e/ou interferir a resposta imune, para garantir sua permanência no hospedeiro.

Estudio de la desialización producida por larvas musculares de Trichinella spiralis / Desialylation study produced by muscle larvae of Trichinella spiralis

Trichinella spiralis es agente causal de una zoonosis endémica en Argentina. El objetivo fue estudiar la desialización eritrocitaria producida por larvas musculares (LM) de T. spiralis. Se trabajó con concentrados de LM, incubados en partes iguales con glóbulos rojos (GR) Grupo O (37 °C) durante 3 horas (con y sin agitación controlada) durante 150 minutos, a intervalos de 30 minutos, para estudiar el curso de la desialización en el tiempo. Los GR controles fueron incubados de la misma manera, con igual volumen de solución fisiológica. Se aplicó el método de titulación de la agregación, calculando título y coeficiente de puntuación total (CexpST). Se encontró que los eritrocitos incubados con LM presentaron mayor agregación que los controles. El valor medio de CexpST con agitación (0,43) fue significativamente menor que cuando los GR no se agitaron (0,72). El estudio de la desialización eritrocitaria en el tiempo mostró que el título de los GR control disminuyó significativamente a los 90 minutos en 5/10 repeticiones y a los 150 minutos en 9/10. El aumento del tiempo de incubación produjo el incremento de la desialización excepto a los 120 y 150 minutos donde no existieron diferencias significativas en el valor de CexpST. La experiencia realizada in vitro, sugeriría que en la infección in vivo, las LM podrían captar el ácido siálico a partir de los residuos sializados presentes en la célula muscular.

Trichinella spiralis is the cause of an endemic zoonosis in Argentina. The objective was to study the erythrocyte desialylation by T. spiralis muscle larvae (ML) applying an aggregation titulation method. We worked with ML concentrates, which were incubated with an equal volume of O Group erythrocytes (RBCs) at 37° C for 3 hours, (with and without controlled agitation) and for 150 minutes, taking samples at 30 minutes intervals to study the course in time of the desialylation. RBCs control were incubated with an equal volume of physiological saline solution. Aggregation titulation method was applied and the title and total score coefficient (TSexpC) were calculated. The results showed that erythrocytes incubated with ML showed more aggregation than controls. The average TSexpC with agitation (0.43) was significantly lower than when erythrocytes were not stirred (0.72). The course in time of the erythrocyte desialylation showed that the RBCs contol title decreased significantly at 90 minutes in 5/10 repetitions and at 150 minutes in 9/10. Increasing the incubation time produced an increase in erythrocyte desialylation, except at the 120 and 150 minutes interval where no significant differences in TSexpC values were found. The in vitro experience would suggest that in cases of in vivo infection, ML could capture sialic acid from sialylate residues present in the muscle cell.

Alteración de la agregación eritrocitaria por larvas recién nacidas de Trichinella spiralis / Alteration of the erythrocyte aggregation by newborn larvae of Trichinella spiralis / Alteração do agregação eritrocitária por larvas recém-nascidas da Trichinella spiralis

El objetivo del trabajo fue estudiar las alteraciones en la agregación eritrocitaria producidas por recién nacidas (LRN) de T. spiralis. Se usaron concentrados de larvas LRN incubados en partes iguales con glóbulos rojos (GR) Grupo O (GR Tratados) durante 2 horas, con y sin agitación controlada, tomando muestras al tiempo inicial, 60 y 120 minutos. Los Controles fueron incubados con igual volumen de solución salina. Se aplicó Análisis Digital de Imágenes para estudiar la distribución de los agregados eritrocitarios y calcular el valor de coeficiente de células aisladas (CCA) y la Técnica de Titulación de la Agregación para determinar el Título y el CexpST. Se utilizó ANOVA bifactorial para analizar el efecto de la agitación y del tiempo de incubación en los valores de CCA. Los resultados mostraron que el aumento del tiempo de tratamiento produjo la disminución de las células aisladas y los pequeños rouleaux, y el aumento de los agregados formados por 5 o más glóbulos, lo cual incrementó significativamente el valor de CCA. El análisis estadístico determinó que la agregación de los GR Tratados a los 60 minutos fue mayor que al tiempo 0, y a los 120 minutos mayor que a los otros dos tiempos. La Titulación de la agregación mostró la disminución del CexpST y del Título de los GR Tratados. Las metodologías empleadas no mostraron diferencias significativas en tratamientos con y sin agitación. Se concluye que la disminución de carga eritrocitaria producida por LRN podría provocar alteraciones hemorreológicas en el hospedador.

The aim of this paper was to study the alterations in the erythrocyte aggregation produced by newborn larvae (NL) of T. spiralis. Work was performed with NL concentrates, which were incubated with an equal volume of O Group RBC (Treated RBC) for 2 hours, with and without controlled agitation, taking samples at the initial time, at 60 and 120 minutes. RBC Controls were incubated with equal volume of saline solution. Digital Image Analysis was applied to study the distribution of erythrocyte aggregates and to calculate ICC values, and the Aggregation Titration Technique was used to determine the Title and TSexpC. Two-factor ANOVA was used to analyze the effect of agitation and incubation time on the ICC values. The results showed that at higher treatment time, there was a decrease of isolated cells and small rouleaux and an increase of the aggregates formed by 5 or more cells, with a significant increase of ICC values. Statistical analysis determined that Treated RBC aggregation at 60 minutes was higher than at initial time and that at 120 minutes it was higher than the other two times. Aggregation Titration showed a decrease in the Treated RBC Title and TSexpC. The methodologies employed showed no significant differences in treatments with and without agitation. It is concluded that the decrease in erythrocyte charge produced by NL could cause hemorrheologic alterations in the host.

O objetivo foi estudar as alterações na agregação de eritrócitos produzidas por larvas recém-nascidas (LRN) da T. spiralis. O trabalho foi feito com concentrados de LRN incubados em partes iguais com glóbulos vermelhos (GV) Grupo O (GV Tratados), durante 2 horas, com e sem agitação controlada, levando as amostras ao tempo inicial, 60 e 120 minutos. Os controles foram incubados com igual volume de solução salina. Análise Digital de Imagens foi aplicada para estudar a distribuição dos agregados de eritrócitos e calcular o valor do Quoficiente de Células Isoladas (QCI) e a Técnica de Titulação da Agregação para determinar o Título e CexpST. Para analisar o efeito da agitação e do tempo de incubação sobre os valores do QCI foi utilizada ANOVA bifatorial. Os resultados mostraram que o aumento do tempo de tratamento produziu a diminuição das células isoladas e os pequenos rouleaux, e o aumento dos agregados formados por 5 ou mais glóbulos, aumentando o valor de QCI significativamente. A análise estatística determinou que a agregação de GV Tratados aos 60 minutos foi maior que no tempo inicial e, aos 120 minutos era maior que durante os outros dois tempos. A Titulação da Agregação mostrou a diminuição do CexpST e do Título de GV Tratados. As metodologias usadas não mostraram diferenças significantes em tratamentos com e sem agitação. Conclui-se que a diminuição de carga de eritrócitos produzida por LRN poderia resultar em alterações hemorreológicas no hospedeiro.

Estudio del efecto de Trichinella spiralis sobre la desialización aplicando el Método de Polibrene / Study of Trichinella spiralis effect on desialylation by Polybrene Method / Estudo do efeito de Trichinella spiralis em desialylation aplicando o Método de Polibreno

Experiencias previas comunicaron que los eritrocitos (GR) incubados con larvas recién nacidas (LRN) y larvas musculares (LM) de T. spiralis presentan menor contenido de ácido siálico que los correspondientes GR Controles. El objetivo del trabajo fue estudiar el efecto de LRN y LM sobre la desialización aplicando el Método de Polibrene. Se trabajó con concentrados de LRN y LM incubados en partes iguales con GR Grupo O, en medio salino y enzimático, durante 120 min a intervalos de 30 min. Los Controles fueron incubados con igual volumen de solución salina. Se aplicó el Método de Polibrene y se calculó el valor del coeficiente CexpCASP. Para analizar el efecto del parásito, medio de incubación y tiempo de tratamiento en los valores de CexpCASP, se utilizó un ANOVA multifactorial. Los resultados mostraron que el medio enzimático y el aumento del tiempo de incubación producen la mayor disminución de carga globular, reflejada en menores valores de CexpCASP, sin diferencias significativas con el estadio larval utilizado. La experiencia sugeriría que durante su migración por el torrente circulatorio las LRN podrían captar ácido siálico eritrocitario y alterar el comportamiento hemorreológico, así como también permitiría especular que ambos estadios larvales podrían secuestrarlo de células del hospedador para interferir y/o evadir su respuesta inmune...

Estudio de la cinética de captación de ácido siálico por larvas musculares de Trichinella spiralis / Study of kinetics of sialic acid capture by muscle larvae of Trichinella spiralis / Estudo da cinética de captaçao de ácido siálico por larvas musculares da Trichinella spiralis

Se ha comunicado que los eritrocitos (GR) incubados con larvas infectantes de Trichinella spiralis presentan mayor agregación que los GR Controles incubados con solución salina, lo cual indica que el parásito capta el ácido siálico globular. El objetivo fue estudiar la cinética de captación de ácido siálico por larvas musculares de T. spiralis aplicando Análisis Digital de Imágenes. Se trabajó con concentrados larvales de T. spiralis incubados en partes iguales con GR Grupo O, en medio salino y enzimático (GR Tratados), durante 120 minutos a intervalos de 15 minutos. Los Controles fueron incubados con igual volumen de solución salina. Se aplicó Análisis Digital de Imágenes y se calculó el valor del Coeficiente de células aisladas (CCA). Para analizar el efecto del tiempo de incubación en los valores de CCA, se utilizó un análisis de la variancia para un diseño en bloques completos aleatorizados. Los resultados mostraron que el valor promedio de CCA, en ambos medios, varió significativamente con el tiempo de incubación, lo que evidencia que el aumento del contacto de las larvas con los GR produce una disminución del ácido siálico que se refleja en mayores valores de CCA. La experiencia realizada sugeriría que durante su permanencia y viabilidad en el quiste, las larvas de T. spiralis podrían ir captando ácido siálico de la célula muscular con el objeto de interferiry /o evadir la respuesta inmune del hospedador...