RESUMO
Nucleic acid editing holds promise for treating genetic disease, particularly at the RNA level, where disease-relevant sequences can be rescued to yield functional protein products. Type VI CRISPR-Cas systems contain the programmable single-effector RNA-guided ribonuclease Cas13. We profiled type VI systems in order to engineer a Cas13 ortholog capable of robust knockdown and demonstrated RNA editing by using catalytically inactive Cas13 (dCas13) to direct adenosine-to-inosine deaminase activity by ADAR2 (adenosine deaminase acting on RNA type 2) to transcripts in mammalian cells. This system, referred to as RNA Editing for Programmable A to I Replacement (REPAIR), which has no strict sequence constraints, can be used to edit full-length transcripts containing pathogenic mutations. We further engineered this system to create a high-specificity variant and minimized the system to facilitate viral delivery. REPAIR presents a promising RNA-editing platform with broad applicability for research, therapeutics, and biotechnology.
Assuntos
Proteínas de Bactérias/metabolismo , Sistemas CRISPR-Cas , Endonucleases/metabolismo , Técnicas de Silenciamento de Genes , Edição de RNA , Adenosina Desaminase/genética , Adenosina Desaminase/metabolismo , Proteínas de Bactérias/classificação , Proteínas de Bactérias/genética , Biotecnologia , Diabetes Insípido Nefrogênico/genética , Diabetes Insípido Nefrogênico/terapia , Endonucleases/classificação , Endonucleases/genética , Anemia de Fanconi/genética , Anemia de Fanconi/terapia , Terapia Genética , Células HEK293 , Humanos , Mutagênese , Engenharia de Proteínas/métodos , Proteínas Recombinantes de Fusão/genética , Proteínas Recombinantes de Fusão/metabolismoRESUMO
En el presente trabajo se describen parte de las técnicas de biología molecular que se utilizan en medicina. Actualmente las principales aplicaciones de estas técnicas son en el diagnóstico de enfermedades hereditarias, infecciosas y neoplásicas, así como en estudios de regulación de la expresión génica y en terapia con proteínas recombinantes. Con la aplicación de las técnicas de biología molecular en diversas áreas de la medicina, se abre también la posibilidad de poder realizar terapia génica en humanos