RESUMO
INTRODUÇÃO: Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por Leishmania major, no entanto, são permissivos à infecção por Leishmania amazonensis. Os estudos conduzidos, até o momento, sobre o papel desempenhado pela autofagia na infecção por Leishmania levaram a dados controversos. OBJETIVO: No presente trabalho, avaliamos se a resposta autofágica de macrófagos infectados pode ser responsável pela diferença no curso da infecção por essas duas espécies de Leishmania. MATERIAL e MÉTODOS e RESULTADOS: Inicialmente, demonstramos por qPCR e por análise de dados de microarranjos públicos que um número maior de genes relacionados à autofagia é modulado positivamente em células infectadas por L. amazonensis em comparação às infectadas L. major. Ingenuity Pathway Analysis (IPA) demonstrou modulação oposta dos genes relacionados à autofagia entre os macrófagos infectados com L. amazonensis daqueles infectados com L. major. Após 24 h de infecção, a relação LC3-II/Act é aumentada tanto em macrófagos infectados por L. amazonensis quanto nos infectados por L. major em comparação com controles não infectados, mas menos do que em células tratadas com cloroquina. Embora, os vacúolos parasitóforos induzidos por L. major tenham apresentado maior positividade para o marcador degradativo, DQBSA, o recrutamento de LC3 foi maior nos vacúolos parasitóforos induzidos por L. amazonensis. Interessantemente, tanto a indução farmacológica quanto a fisiológica da autofagia aumentaram a viabilidade intracelular de L. amazonensis e L. major, enquanto a inibição da autofagia não teve efeito sobre a viabilidade intracelular desses parasitas. Também demonstramos que a indução da autofagia reduziu a produção de NO por macrófagos infectados por L. amazonensis ou L. major, mas não alterou a atividade da arginase, A análise de componentes principais e agrupamento hierárquico de clusters discriminaram completamente os macrófagos infectados por L. major de células infectadas por L. amazonensis de acordo com a intensidade da infecção e características autofágicas dos vacúolos induzidos por essas duas cepas. CONCLUSÃO: Em conclusão, a infecção por L. amazonensis ou L. major, apesar de ativar similarmente o fluxo autofágico em macrófagos infectados e os parasitos terem sua viabilidade favorecida pela indução da autofagia, promove expressão diferenciada de genes relacionados à autofagia e interação distinta dos vacúolos parasitóforos com compartimentos autofágicos. Essas diferenças são capazes de separar completamente os macrófagos infectados por L. amazonensis daqueles por L. major
INTRODUCTION: CBA mouse macrophages (MΦ) control Leishmania major infection yet are permissive to Leishmania amazonensis. The role played by autophagy in Leishmania infection needs further investigation. OBJECTIVE: Thus, we assessed whether activation of autophagic pathway may account for differences in the response of infected MΦ to these two parasite strains. MATERIAL and METHODS and RESULTS: First, we demonstrated by qPCR and by analysis of publicly available microarray data that a greater number of autophagy-related genes (Atg) are positively modulated in cells infected by L. amazonensis compared to those infected by L. major. Ingenuity Pathway Analyses (IPA) demonstrated opposite modulation in genes in L. amazonensisand L. major-infected MΦ. After 24 h of infection, the autophagic flux measured by LC3-II/Act ratio was similarly increased in either L. amazonensis- or L. majorinfected MΦ compared to uninfected cells. Although L. major-induced parasitophorous vacuoles exhibited greater positivity for the degradative marker, DQ-BSA, LC3 recruitment was increased in L. amazonensis-induced parasitophorous vacuoles. Interestingly, autophagy induction enhanced intracellular L. amazonensis and L. major viability, although autophagy inhibition caused no effect on infection profile. We also demonstrated that autophagy induction reduced NO production by Leishmania-infected MΦ, yet did not alter arginase activity. Moreover, principal component analysis completely discriminated L. major-infected MΦ from L. amazonensis-infected cells regarding infection intensity and autophagic features of parasite-induced PV. CONCLUSION: In conclusion, infection by L. amazonensis or L. major, although similarly activates the autophagic flux in infected MΦ and the parasites have their viability favored by autophagy induction, these Leishmania species cause differentiated expression of Atg and distinct interaction of their parasitophorous vacuoles with autophagic vacuoles. These differences are capable to discriminate MΦ infected by L. amazonensis from those infected by L. major
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Humanos , Autofagia/imunologia , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/genética , Leishmania/parasitologiaRESUMO
A leishmaniose é considerada como um grupo de doenças, causadas por parasitos do gênero Leishmania. O gênero inclui mais de 20 espécies de parasitos que são transmitidas ao homem pela picada da fêmea, infectada, dos insetos da família dos flebotomíneos e as diferentes espécies estão associadas a diferentes manifestações clínicas da doença. Uma característica marcante na infecção é a presença de macrófagos infectados no sítio de inoculação do parasito e em órgãos internos do hospedeiro. Estudos prévios, demonstraram que a infecção de fagócitos mononucleares com Leishmania amazonensis, L. infantum ou L. braziliensis promove uma diminuição na adesão celular ao tecido conjuntivo inflamado da pele. Esta diminuição da adesão é decorrente, principalmente, de mecanismos envolvidos na regulação da molécula VLA-4, uma integrina da família beta 1 que se liga à VCAM-1...
Leishmaniasis is considered a group of diseases, caused by parasites of the genus Leishmania. The genus includes more than 20 species of parasites that are transmitted to humans by the bite of vector female insect, of the phlebotomine family, and the different species are associated with different clinical manifestations of the disease. A striking feature of infection is the presence of infected macrophages at the site of inoculation of the parasite and internal organs of the host. Previous studies have demonstrated that infection of mononuclear phagocytes with Leishmania amazonensis, L. infantum or L. braziliensis promotes a decrease in cellular adhesion to the inflamed connective tissue of the skin. This decrease in adhesion results mainly from mechanisms involved in the regulation of the VLA-4 molecule, a beta 1 integrin that binds to VCAM-1...
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Humanos , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/imunologia , Leishmania/parasitologia , Leishmania/patogenicidade , Monócitos/imunologiaRESUMO
INTRODUÇÃO: Leishmaniose visceral é uma zoonose grave que acomete uma gama de animais. O cão é considerado o principal reservatório urbano da Leishmania infantum e pode ser clinicamente assintomático ou sintomático na infecção. Poucos estudos abordam os aspectos clínicos e histopatológicos na leishmaniose visceral, sobretudo estudos sistemáticos, que fazem descrição detalhada dos achados de histopatologia e façam a correlação desses aspectos na doença. A hipótese da pesquisa é que cães naturalmente infectados com L. infantum apresentam alterações histopatológicas distintas que se relacionam com as manifestações clínicas, tendo significados diagnóstico e prognóstico. OBJETIVO: O objetivo do trabalho foi a descrição sistemática das alterações histopatológicas encontradas nos diversos órgãos de cães com leishmaniose visceral naturalmente infectados, correlacionando com diferentes manifestações clínicas. MÉTODOS: Para este estudo foram coletados amostras e dados provenientes de 58 cães...
INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a serious zoonosis that affects a range of animals. The dog is considered the main urban reservoir of Leishmania infantum and may be clinically asymptomatic or symptomatic in infection. Few studies address the clinical and histopathological aspects in visceral leishmaniasis, especially systematic studies, which are detailed description of histopathology findings and making the correlation of these aspects of the disease. The hypothesis of the research is that dogs naturally infected with L. infantum have distinct histopathologic changes that relate to the clinical manifestations, diagnosis and prognosis. OBJECTIVE: The objective was the systematic description of histopathology found in the various organs of dogs with visceral leishmaniasis naturally infected, correlated with different clinical manifestations. METHODS: For this study were collected samples and data from 58 dogs...
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Animais , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/imunologia , Leishmania/parasitologiaRESUMO
Os resultados das co-infecções nas leishmanioses cutânea (LC) são variáveis. Neste estudo,. demonstramos o desfecho da co-infecção com Trypanosoma brucei brucei sobre a LC, causada. por L. major. Infectamos camundongos C57BL/6 com T. b. brucei e estes foram tratados com. o Berenil para controlar a infecção antes da transmissão da L. major por picadas de Lutzomyia. longipalpis infectados. Nossos resultados revelam que, a infecção ativa com o T. b. brucei. controla a patologia da LC causada por L. major. Comparados aos controles, camundongos coinfectados. mostraram uma diminuição significativa do tamanho da lesão até 6 semanas após. infecção. Adicionalmente, uma diminuição significativa da carga parasitária foi observada 3. semanas após a infecção. É importante salientar que a proteção observada não foi devido a. reação cruzada entre os antígenos do T. b. brucei e L. major, mas por uma ativação não. específica das células T efetoras, tanto sistemicamente como localmente no sítio da infecção,. induzindo uma resposta inflamatória intensa, em particular com a produção de IFN-γ e em. menor concentração de IL-10. Concluímos que a ativação das células T pelo curso da infecção. com T. b. brucei, modulou a infecção com L. major, resultando em proteção.
The outcome of co-infections on cutaneous leishmaniasis (CL) is variable. Here, we determined the outcome of a co-infection with Trypanosoma brucei brucei on CL caused by L. major. We infected C57BL/6 mice with T. b. brucei and treated them with Berenil to control parasite growth prior to L. major transmission by infected Lutzomyia longipalpis bites. Our results revealed that an active infection with T. b. brucei controls the pathology of CL by L. major. Compared to controls, co-infected mice show a significant decrease in lesion size up to 6 weeks post-infection. Additionally, a significant decrease in the parasite load was observed at 3 weeks post-infection. Importantly, the observed protection was not due to cross-reactivity between antigens of T. b. brucei and L. major but to a non-specific activation of effector T cells, both at the site of infection and systemically, that induces a strong inflammatory response, in particular IFN-γ and at a lower IL-10 level. We conclude that activation of T cells by an ongoing T. b. brucei infection modulates the outcome of infection with L. major resulting in protection.
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Humanos , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/imunologia , Leishmania/parasitologiaRESUMO
A leishmaniose é uma antropozoonose causada por protozoários do gênero Leishmania e é considerada uma das principais doenças negligenciadas. Modelos experimentais são amplamente utilizados para uma melhor compreensão da doença e dos mecanismos relacionados à resistência e susceptibilidade à infecção. Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por Leishmania major ao passo que são permissivos a Leishmania amazonensis. Além disso, estudos baseados em abordagem proteômica demonstraram padrões distintos de expressão proteica em macrófagos derivados de medula óssea (BMMΦ) infectados por essas espécies de Leishmania. Dentre as proteínas diferentemente expressas, foram identificadas proteínas envolvidas no metabolismo de ferro moduladas positivamente em macrófagos infectados por L. amazonensis. Adicionalmente, embora ainda existam controvérsias, diversos estudos têm abordado a participação do elemento ferro na interação parasito-hospedeiro e no estabelecimento das infecções por tripanossomatídeos, incluindo Leishmania. Assim, para melhor compreender os mecanismos envolvidos nessa doença, o presente estudo buscou explorar o modelo comparativo de resistência e suscetibilidade do camundongo CBA para determinar o papel do ferro na infecção por Leishmania. Nossa hipótese é que a expressão de proteínas envolvidas no metabolismo de ferro é modulada diferentemente em macrófagos de camundongos CBA infectados por L. amazonensis, em comparação à L. major, favorecendo a sobrevivência intracelular do parasito. Nosso objetivo foi avaliar a expressão de proteínas que participam do metabolismo de ferro, como receptor de transferrina (Tf), CD71, e heme oxigenasse-1, HO-1, e determinar o efeito da modulação da disponibilidade de ferro na infecção por Leishmania. Observamos maior expressão de HO-1 em BMMΦ infectados por L. amazonensis (18,34 ± SD ng/mL), quando comparados a BMMΦ infectados por L. major (7,07 ± SD ng/mL), utilizando ELISA. Maior expressão de CD71 também foi observada na infecção por L. amazonensis (MFI 2.103) em comparação à infecção por L. major (MFI 472), utilizando FACS, além de uma maior ligação e captação de HoloTf (Tf carregada com ferro). Embora tenha sido observado que essas proteínas encontram-se diferentemente expressas em BMMΦ infectados por essas duas espécies de Leishmania, não foram observadas diferenças significativas na concentração intracelular do ferro. Em seguida, ensaios funcionais a partir da modulação da disponibilidade intracelular de ferro foram realizados com o objetivo de avaliar seu papel no desfecho da infecção por Leishmania. Os resultados mostraram que a depleção de ferro reduz em 90% o percentual de BMMΦ infectados por L. amazonensis e 70% dos infectados por L. major...
Leishmaniasis is an anthropozoonosis caused by the protozoan parasite Leishmania and is considered one of the main neglected diseases. Animal models are widely used to better understand the disease and the mechanisms involved in resistance and susceptibility to infection. CBA mouse macrophages control the infection by L. major, while are permissive to L. amazonensis. Proteomic studies showed different protein profiles in bone marrow macrophages (BMMΦ) infected these species of Leishmania. We also observed that proteins involved in iron metabolism were positively modulated in L. amazonensis-infected macrophages. In addition, although literature review showed controverse data, several studies have addressed the role iron plays in host-parasite interaction and the establishment of trypanosomatids infections, including Leishmania. To better understand the mechanisms of the disease, this study sought to evaluate in a comparative model of resistance and susceptibility, using CBA macrophages, the role iron plays in Leishmania infection. Our hypothesis is that the expression of proteins involved in iron metabolism is differently modulated in CBA mice macrophages infected with L. amazonensis in comparison to L. major, favoring the intracellular survival of the parasite. Our goal was to evaluate the expression of proteins involved in iron metabolism of CBA mice macrophages, such as transferrin receptor (Tf), CD71, and heme oxygenase 1 (HO-1) and determine the effect of the modulation of intracellular iron in Leishmania infection. Using ELISA, we confirmed a higher expression of HO-1 in L. amazonensis- (18.34 ng/mL) compared to L. major-infected CBA macrophages (7.07 ng/mL). Using FACS analysis, CD71 showed to be higher expressed in L. amazonensis- (MFI 2.103) than in L. major-infected macrophages (MFI 472), in addition to higher binding and take up of HoloTf in these cells. Although it has been observed that proteins involved in iron metabolism were differently expressed in BMMΦ infected with these Leishmania species, no significant differences were observed in intracellular iron concentration. To further evaluate the role iron plays in the outcome of Leishmania infection, we modulated iron availability to Leishmania-infected cells using iron chelates or iron supplements. The results show that iron depletion reduces in 90% L. amazonensis infection and in 70% L. major infection. In addition, iron supplementation increased the percentage of L. amazonensis-infected cells from 69.64 to 82.79% and parasite load from 2,996 to 4,001 Leishmania/cell, as well as in the intracellular viability of both Leishmania species. In sum, these data indicate that although there is a positive modulation...
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Humanos , Ferro/análise , Ferro/sangue , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/imunologia , Leishmania/parasitologia , Macrófagos/patologia , Leishmania/patogenicidadeRESUMO
A Leishmania é um parasito intracelular obrigatório que vive e se multiplic adentro dos vacúolos parasitóforos em macrófagos no hospedeiro vertebrado. Apesar dos vacúolos induzidos por diferentes espécies de Leishmania apresentarem semelhanças bioquímicas, esses compartimentos apresentam diferenças significativas nos seus tamanhos. Os vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania mexicana e Leishmania amazonensis apresentam grandes dimensões e contêm uma grande quantidade de amastigotas, enquanto que os induzidos por Leishmania major e Leishmania donovani são pequenos e com pouco espaço ao redor das amastigotas. Estudos recentes demonstraram que compartimentos induzidos por microrganismos intracelulares são capazes de interagir com a via autofágica e esta pode controlar ou promover o estabelecimento da infecção a depender da natureza do microrganismo. Até o momento, poucos estudos foram realizados para avaliar o papel da autofagia na biogênese e maturação dos vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania. Recentemente, foi demonstrado que em macrófagos de camundongos BALB/c...
Leishmania is an intracellular parasite that lives and multiplies within parasitophorous vacuoles in macrophages in the vertebrate host. Despite the fact that vacuoles induced by different species of Leishmania present biochemical similarities, these compartments have significant differences in their sizes and composition. The parasitophorous vacuoles induced by Leishmania mexicana and Leishmania amazonensis are large and contain a large number of amastigotes, while vacuoles induced by Leishmania major and Leishmania donovani are small and tight. Recent studies have demonstrated that depending on the type of intracellular microorganism, the induced compartments can interact with the autophagic pathway and control or promote the establishment of infection. To date, few studies have been conducted to evaluate the role autophagic process plays in the biogenesis and maturation of parasitophorous vacuoles induced by Leishmania. Recently, it has been demonstrated that in macrophages of BALB/c...
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Camundongos , Autofagia/imunologia , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/parasitologia , Leishmania/patogenicidadeRESUMO
Protozoários do gênero Leishmania provocam uma ampla gama de doenças, e passam por um processo de diferenciação entre o inseto vetor e a forma intracelular no hospedeiro mamífero. Apesar das diferenças entre as formas do ciclo de vida, não estava descrita ferramenta para expressar proteínas de modo estágio específico. Neste trabalho apresentamos um plasmídio para Leishmania que expressa proteína recombinante de forma estágio específica. Testamos uma possível construção que usava as região 3 UTR do gene amastina para controlar a expressão de uma proteína fluorescente e a expressar exclusivamente na fase amastigota. Também utilizamos a região 3 UTR de uma tubulina para obter uma fluorescência homogênea em todos os estágios do ciclo de vida do parasita. Assim como esperado, obtivemos uma fluorescência exclusiva para a fase amastigota quando utilizamos a região 3 UTR da amastina, e uma fluorescência constitutiva quando a expressão foi regulada pela região 3 UTR da tubulina. O plasmídio descrito neste trabalho é versátil, pois a droga de seleção ou a proteína a ser expressa podem ser substituídas com grande facilidade. Adicionalmente, como o plasmídio pFL expressou um gene repórter exclusivamente no estágio amastigota ou constitutivamente, acreditamos que este plasmídio pode também ser utilizado para expressar proteínas de forma restrita aos estágios promastigota metacíclico e procíclico. Alguns possíveis usos desta nova ferramenta também são discutidos nesta tese.
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Animais , Estágios do Ciclo de Vida/fisiologia , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/parasitologia , Leishmania/patogenicidade , Proteínas , Proteínas/genéticaRESUMO
Visceral leishmaniasis (VL) is a severe chronic disease caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Better knowledge on the effects caused by this disease can help develop adequate clinical management and treatment. Parasitological and immunohistochemical studies were performed golden hamsters Mesocricetus auratus infected with bone marrow from individuals with VL in the State of Mato Grosso do Sul, central-west Brazil. The effects of parasitism in the spleen, liver, kidneys, lungs, heart and brain of the animals were examined. Eighteen hamsters were inoculated intraperitoneally, and six healthy animals were used as negative controls. The animals were kept in the animal house and checked for clinical signs. Specimens of each organ were examined for the presence of amastigotes. Immunohistochemical technique was performed in all brain specimens and organs negative on the direct examination of parasites. Direct examination of amastigotes was positive in the spleen and liver of all infected animals; 33.3 percent showed the parasite in the kidneys and lungs, and 16.7 percent in the heart. Parasitic forms were seen in 83.3 percent (15/18) of the brain examined. Immunohistochemistry confirmed the results of the direct examination, except in two specimens of lung tissue and in the brain specimens. Other studies are needed to further clarify the effect of the parasite in the central nervous system.
A leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica grave, causada pelo parasito Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Esclarecer as alterações provocadas pela doença é fundamental para que se adotem condutas clínicas e de tratamento adequadas. Com o objetivo de analisar a infecção experimental em hamsters da linhagem golden, Mesocricetus auratus, infectados com tecido de medula óssea de pacientes com LV no Estado de Mato Grosso do Sul, foram realizados estudos parasitológicos e de imunomarcação. Foi verificada a distribuição do parasitismo no baço, fígado, rim, pulmão, coração e encéfalo desses animais. Foram utilizados 18 hamsters experimentalmente inoculados via intra-peritoneal, e seis animais sadios como controles negativos. Os animais foram mantidos em biotério de experimentação e observados, em busca de alterações clínicas. Com fragmentos de cada órgão, procedeu-se a confecção de lâminas por aposição para pesquisa de amastigotas. Nos órgãos com resultado negativo na pesquisa direta do parasito, e em todas as amostras de encéfalo, foi realizada a técnica de imunohistoquímica. A pesquisa direta de amastigotas foi positiva no baço e fígado de todos os animais infectados; 33,3 por cento apresentaram o parasito em rim e pulmão, e 16,7 por cento no coração. Quando realizada a pesquisa em encéfalo, formas parasitárias foram observadas em 83,3 por cento (15/18) dos animais. A imunomarcação confirmou os resultados da pesquisa direta, exceto em duas amostras de tecido pulmonar e nas amostras de encéfalo. Mais estudos são necessários, para esclarecer o real papel do parasito no sistema nervoso central.
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Animais , Cricetinae , Encéfalo/parasitologia , Leishmaniose Visceral/parasitologia , Estágios do Ciclo de Vida , Leishmania/crescimento & desenvolvimentoRESUMO
Aunque existen varios mecanismos inmunológicos para eliminar a los patógenos intracelulares, éstos han elaborado una variedad de estrategias para escapar de la respuesta del sistema inmune y asegurarse su supervivencia y replicación en el huésped. Algunos parásitos modulan la producción de numerosas moléculas tóxicas sintetizadas por el sistema inmune. Varios parásitos son altamente sensibles al óxido nítrico (ON) y sus derivados. El ON es producido en macrófagos (MΦ) luego de la estimulación con productos microbianos o con citoquinas. En el pasado, los MΦ se identificaban como células puramente inflamatorias (MΦ activados en forma clásica), capaces de secretar mediadores inflamatorios, actuar como células presentadoras de antígenos y matar patógenos intracelulares. Sin embargo, los MΦ activados representan un grupo más heterogéneo de células con distintos marcadores biológicos que pueden llevar a cabo diferentes funciones inmunológicas. Los MΦ activados alternativamente, fallan en producir ON en virtud de la inducción de la enzima arginasa y consecuentemente tienen disminuida su capacidad para matar patógenos intracelulares. Se ha comunicado la inducción de arginasa por parte de varios parásitos, por lo tanto este mecanismo podría favorecer su supervivencia en el huésped. En un modelo de infección con Trypanosoma cruzi, en nuestro grupo estudiamos la participación de arginasa y de las señales intracelulares involucradas en su inducción, durante la replicación de este parásito en los MΦ. La información obtenida a partir de nuestros trabajos permitiría comprender algunos mecanismos por los cuales distintas células del sistema inmune pueden ser programadas para favorecer el establecimiento de infecciones parasitarias crónicas.
Although there are several immunological mechanisms to eliminate the intracellular pathogens, they have elaborated a variety of strategies to escape of the immune response and to make possible their survival and replication in the host. Some parasites modulate the production of several toxic molecules synthesized by the immune system. Several parasites are highly sensitive to nitric oxide (ON) and their derivatives. ON is produced in macrophages (MΦ) after stimulation with microbial products or cytokines. In the past, M Φ were defined as inflammatory cells (classically activated MΦ), able to produce inflammatory mediators, to act like antigens presenting cells and to kill intracellular pathogens. Nevertheless, activated MΦ involve a more heterogeneous group of cells with different biological markers that can carry out different immunological functions. Alternatively activated MΦ fail to produce ON due to the arginase induction and consequently they have diminished their capacity to kill intracellular pathogens. It has been reported the induction of arginase by different parasites; therefore this mechanism could favor their survival in the host. In our group, we studied the participation of arginase in a model of Trypanosoma cruzi infection and the intracellular signals involved in the replication of this parasite in MΦ. The data obtained from our works would allow the understanding of some mechanisms by which cells can be programmed to favor the establishment of chronic parasitic infections.
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Animais , Camundongos , Arginase/metabolismo , Doença de Chagas/imunologia , Ativação de Macrófagos/imunologia , Macrófagos/imunologia , Trypanosoma cruzi/crescimento & desenvolvimento , Antígenos de Protozoários/imunologia , Arginase/imunologia , Modelos Animais de Doenças , Indução Enzimática/imunologia , Interferons/imunologia , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Proteínas Quinases Ativadas por Mitógeno/imunologia , Óxido Nítrico/biossíntese , Óxido Nítrico/imunologia , Fator de Necrose Tumoral alfa/imunologiaRESUMO
Experimental chronic (45-day-old) skin lesion in hamster hind foot induced by Leishmania (Viannia) lainsoni infection showed the presence of promastigote forms in the tissue, inside parasitophorous vacuoles, as assessed by transmission electron microscopy. Experimental in vitro interaction (24 and 48 h) between Leishmania (V.)lainsoni and J774-G8 macrophage cells also demonstrated the same profile. This morphological aspect is unusual, since in this parasite genus only amastigote forms have been described as the resistant and obligate intracellular forms.
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Animais , Cricetinae , Leishmania/fisiologia , Leishmaniose/parasitologia , Macrófagos/parasitologia , Linhagem Celular , Doença Crônica , Modelos Animais de Doenças , Interações Hospedeiro-Parasita , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/ultraestrutura , Leishmaniose/patologia , Mesocricetus , Microscopia Eletrônica de Transmissão , Macrófagos , Fatores de TempoRESUMO
We compared the in vitro growth of promastigotes from two Leishmania species in TC-100 and Schneider media. Leishmania (Leishmania) amazonensis replication rates were similar in both tissue culture media and reached maximum rates by 48 h. In contrast Leishmania (Viannia) braziliensis growth was significantly greater in TC-100 but maximum rates were achieved by 96 h. Folic acid appears to be the limiting factor and supplementation of Schneider media with this nutrient improved L. (V.) braziliensis replication rates and decreased the time of maximum replication to 48 h.
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Animais , Meios de Cultura , Ácido Fólico/metabolismo , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania braziliensis/classificação , Leishmania braziliensis/crescimento & desenvolvimento , Leishmania braziliensis/metabolismo , Leishmania/classificação , Leishmania/metabolismo , Especificidade da EspécieRESUMO
Introducción. La Leishmaniasis Cutánea Localizada, en la Península de Yucatán, es causada predominantemente por Leishmania (L.) mexicana. Las especies de Leishmania son parásitos intracelulares obligados dimórficos. Los promastigotes, formas flageladas y móviles, se replican y diferencian en el intestino del insecto vector. Los mastigotes, formas intracelulares inmóviles, viven dentro del fagolisosoma del macrófago huésped. Los amastigotes son más difíciles de obtener, debido a que se requieren ser aislados de tejidos y/o cultivos en líneas celulares de macrófagos. La alternativa es el cultivo axénico de formas de amastigotes. Material y métodos. El presente estudio describe la obtención de formas de amastigotes de tres cepas de Leishmania (L.) mexicana, (M/HOM/MX/94/VMC/663,M/HOM/MX/94/JM/758,M/HOM/MX/MX/95LPD/787), mediante la variación del pH y la temperatura de incubación en el medio de cultivo de Grace. Resultados. Los resultados mostraron un comportamiento diferente en cada cepa, determinado por la densidad celular y el porcentaje relativo de transformación. Los promastigotes de cada cepa se transformaron en más del 80 por ciento a formas de amastigotes al segundo día de incubación a pH 5.5 y temperatura de 35ºC. Por otro lado, la variación del pH, de 7.2 a 5.5 a 25ºC, permitió la transformación de promastigotes en metacíclicos. Conclusiones. La variación del pH y la temperatura de incubación permitió obtener las tres etapas de transformación del parásito (promastigotes, metacíclicos y amastigotes), los cuales podrán emplearse en futuros estudios bioquímicos e inmunológicos
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Humanos , Meios de Cultura/análise , Meios de Cultura/classificação , Leishmania/classificação , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/isolamento & purificação , Estudos de Séries TemporaisRESUMO
Aunque el efecto de la temperatura en la transformación axénica de Leishmania ha sido ampliamente estudiado, el papel que esta variable juega en la transformación del parásito intracelular se desconoce. El objetivo del presente trabajo fue evaluar si la transformación intracelular de promastigotes en amastigotes ocurre a bajas temperaturas. Cuando se infectaron macrófagos murinos de la línea celular J-774 a dos temperaturas diferentes (24 y 33§C), se observaron formas intracelulares de Leishmania amazonensis a las dos temperaturas. Los parásitos intracelulares producidos se compararon mediante criterios morfológicos, inmunológicos y ultraestructurales. Los resultados indican que los parásitos obtenidos en infecciones a 33§C son similares morfológica, inmunológica y ultraestructuralmente con las formas intracelulares obtenidas in vivo conocidas como amastigotes; sin embargo, los parásitos producidos a temperaturas más bajas (24§C) no tienen similitud antigénica ni ultraestructural con los anteriores. Se concluye que la temperatura cumple un papel relevante en la transformación de la forma extracelular de Leishmania amazonensis hacia la forma intracelular durante su invasión a macrófagos murinos
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Animais , Adaptação Fisiológica , Técnicas In Vitro , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , TemperaturaRESUMO
Una caracterización y diferenciación bioquímica preliminar de cinco cepas de Leishmania (cuatro de refencia de la OMS y una de pacientes Venezolanos) fue realizada comparando los patrones enzimáticos obtenidos mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). De once sistemas enzimáticos procesados, siete mostraron resultados útiles para el análisis comparativo. Los resultados de este análisis revelaron que el complejo donovani difiere del resto para los siete sistemas comparados (EST, MDH, LDH, G6PDH, GPI, SOD and ME); adicionalmente, empleando cinco de estas enzimas (MDH, LDH, GPI, SOD and ME) fue posible diferenciar entre los tres complejos ensayados: braziliensis, mexicana y donovani. Las subespecies L mexicana mexicana y L.m. pifanoi difieren en dos de ellas (MDH y GIP). Vriaciones dentro de los cultivos de los complejos braziliensis y mexicana fueron detectadas debido probablemente a la excesiva subcultivación y envejecimiento de los cultivos. Bandas bien definidas fueron obtenidas para 6 enzimas (LDH, MDh, G6PDH, GPI, ME and PGDH) en nueve aislados de pacientes Venezolanos. Al comparar los patrones enzimáticos de las cepas de referencia de la OMS con los de los aislados de pacientes, fue posible caracterizar estos últimos como cepas de L. braziliensis braziliensis. La caracterización bioquímica puede ser empleado en estudios posteriores para establecer las relaciones filogenéticas dentro del grupo
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Animais , Classificação/métodos , Leishmania/classificação , Leishmania/crescimento & desenvolvimentoRESUMO
The direct agglutination test (DAT) was evaluated for serodiagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in human and canids (dogs and foxes Cerdocyon thous). The results were compared with those of the immunofluorescent antibody assay (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The sera used were from: humans (303): confirmed VL (16), suspected VL (65), other conditions (102), negative controls (15) and individuals from an endemic area (105); dogs (82): from an endemic area (68), Salvaterra/Marajó/Pará (21 of which were parasitologically positive), and negative controls (14), from Belém; foxes (9): caught on Marajó Island. Antigens for DAT were prepared from promastigots of L. (L.) donovani, L. (L.) chagasi. Antigens used in ELISA and IFAT were prepared from promastigotes (soluble antigen) and amastigotes respectively of L. (L.) chagasi. In humans, the specificity and sensitivity of DAT using L. (L.) donovani were high (98.4 per cent and 100 per cent respectively) and comparable to that of IFAT (97.5 per cent and 100 per cent). ELISA was less specific (84.8 per cent) although similarly sensitive (100 per cent). In dogs, DAT was more specific using L. (L.) donovani as antigen than using L. (L.) chagasi. However, both DAT and ELISA were less sensitive (both 71.4 per cent) than IFAT (100 per cent). This difference was reflected in the results from endemic dogs, 87 per centof which were positive by IFAT but only 54 per cent by ELISA and 49 per cent by DAT. Similarly, all 9 fox sera were positive by IFAT, 7 of 9 (78 per cent) by ELISA but none by DAT. In conclusion, DAT using L. (L.) donovani antigen can provide a useful test for human VL; utilization on a large scale would be possible with a suitable reference laboratory to monitor antigen quality. However, DAT appears less useful for canine studies, as it was less sensitive than ELISA and especially IFAT in detecting canine infection.
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Humanos , Animais , Cães , Testes de Aglutinação , Leishmaniose Visceral/diagnóstico , Antígenos de Protozoários/imunologia , Brasil , Doenças do Cão/diagnóstico , Doenças do Cão/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Raposas , Leishmaniose Visceral/imunologia , Leishmaniose Visceral/veterinária , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmania/imunologiaRESUMO
1. The course of infection with the protozoan parasite Leishmania is determined in part by its early replication in macrophages, the exclusive host cells for these organisms. Resistance to and recovery from leishmanial infection is related to cell-mediated immune responses in all forms of human and murine leishmaniasis. 2. Factors contributing to the early inhibition or proliferation of Leishmania are poorly understood, but cytokines such as IFNÔ, IL-10 or transforming growth factor ß (TGF-ß) are known to influence the replication of Leishmania in macrophages. 3. TGF-ß is a multipotential cytokine with diverse effects on cells of the immune system, including down-regulation of certain macrophage functions. Infection of murine or human macrophages by Leishmania induces the production of active TGF-ß. Recombinant TGF-ß added to murine or human macrophage cultures leads to increased intracellular replication of Leishmania. Exogenous TGF-ß administered in vivo promotes enhancement of infection, whereas its neutralization by monoclonal antibodies decreases the level of in vitro infection, and protects susceptible mice. 4. Susceptible animals treated with anti-TGF-ß monoclonal antibodies change their immune response, not increasing the expression of IL-4 while increasing the expression of IFNÔ mRNA in their draining lymph nodes. Resistant animals treated with TGF-ß also change their pattern of immune response as indicated by an increase of the important Th2 cytokine IL-10 mRNA in the draining lymph node. 5. TGF-ß has profound effects on the host response to Leishmania in both mouse and man, and probably is an important parasite escape mechanism
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Humanos , Animais , Camundongos , Leishmaniose Cutânea/metabolismo , Fator de Crescimento Transformador beta/metabolismo , Anticorpos Monoclonais , Cicatrização , Citocinas/imunologia , Citocinas/farmacologia , Leishmania/efeitos dos fármacos , Leishmania/crescimento & desenvolvimento , Leishmaniose Cutânea/imunologia , Macrófagos/imunologia , Fator de Crescimento Transformador beta/imunologia , Fator de Crescimento Transformador beta/farmacologiaRESUMO
Our main interest have focused on Chagas disease and Leishmaniasis, working in the areas of: 1--The molecular biology of Trypanosomes and Leishmaniae, and 2--The immunology of Chagas disease, cutaneous leishmaniasis and visceral leishmaniasis. In this article we summarize the work realized in the last 20 years in the Immunobiology Laboratory at the IVIC with special emphasis in the development of a vaccine against leishmaniasis that is being currently used in a field trial in human beings of the endemic area of Guatire, Miranda State, Venezuela