Coinfection of Leishmania guyanensis and Human Immunodeficiency Virus-Acquired Immune Deficiency Syndrome: Report of a Case of Disseminated Cutaneous Leishmaniasis in Ecuador.

AbstractReported herein is the first case of Leishmania-human immunodeficiency virus (HIV) coinfection in Ecuador. In Ecuador, HIV infections overlap endemic areas of leishmaniasis. Immunosuppression is a well-established risk factor for developing severe disease. This is a severe case of a 32-year-old man presenting with disseminated pleomorphic ulcers, papules, and cutaneous plaque-like lesions over his whole body. Numerous amastigotes were observed in both skin scrapings and biopsies. The sequence of the cytochrome b gene confirmed the presence of Leishmania guyanensis. The patient was treated but failed to respond to meglumine antimoniate and amphotericin B. Six months later, the patient died due to bacterial septic shock.

Disseminated Autochthonous Dermal Leishmaniasis Caused by Leishmania siamensis (PCM2 Trang) in a Patient from Central Thailand Infected with Human Immunodeficiency Virus.

AbstractSeveral case reports of autochthonous leishmaniasis in Thailand have been published since 1996. Most of the previous cases presented with visceral leishmaniasis (VL) and were mostly reported in southern part of Thailand. Recently, it has been evident that Leishmania martiniquensis is the main cause of Leishmania infection in Thailand. However, Leishmania siamensis (PCM2 Trang isolate) was found to be of a separate lineage with restricted distribution in southern Thailand and also a cause of disseminated dermal and visceral leishmaniasis in one published case. Here we report the first patient from central Thailand with human immunodeficiency virus infection presenting with disseminated dermal leishmaniasis. Polymerase chain reaction and DNA sequencing analysis (large subunit of RNA polymerase II and 18S ribosomal RNA internal transcribed spacer 1) from the tissue biopsy sample revealed the pathogen sequences to be highly homologous to PCM2 Trang strain previously reported from southern Thailand.

Importância da resolvinas na infecção por Leishmania Amazonensis / Importance of resolvins in Leishmania Amazonensis infection

A Leishmaniose Cutânea Difusa (LCD) é uma manifestação clínica. rara causada pela Leishmania amazonensis que é caracterizada por uma resposta celular. parasitária ineficiente e macrófagos intensamente parasitados nas lesões cutâneas.. Mediadores lipídicos e seus precursores desempenham um papel crucial durante a. infecção por Leishmania. Estudos prévios demonstram que pacientes com leishmaniose. tegumentar, exibem um distinto balanço de eicosanoides in situ e sistêmico.. Recentemente, demonstrou-se que mediadores lipídicos especializados na pró-resolução. desempenham um papel crítico na redução de processos inflamatórios patológicos. induzindo a restauração da homeostasia em diferentes modelos experimentais. Entre. esses mediadores, as resolvinas da série D exibem potente atividade anti-inflamatória e. imuno-regulatória que inclui a inibição da quimiotaxia leucocitária e bloqueio na. produção de citocinas pró-inflamatórias. No entanto, ainda é desconhecido se as. resolvinas desempenham um papel significativo no estabelecimento e persistência da. infecção por Leishmania. OBJETIVO: Nesse estudo, avaliamos os níveis circulantes. de Resolvina D1 (RvD1) em pacientes com leishmaniose tegumentar apresentando a. forma clínica cutânea localizada (LCL) ou difusa. RESULTADOS: Nossos resultados. demonstram que pacientes com LCD apresentam maiores níveis plasmáticos de RvD1. quando comparados a LCL ou controles endêmicos. Além disso, os níveis séricos de. RvD1 em pacientes com LCD se correlacionam positivamente com a Arginase I e TGF-. β, enquanto que inversamente com os níveis sistêmicos de TNF-α. Experimentos. adicionais in vitro utilizando macrófagos humanos revelaram que a RvD1 promove a. replicação intracelular da L. amazonensis por um mecanismo associado a indução da. enzima heme oxigenase-1. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a via de. produção da RvD1 pode servir como uma potencial estratégia terapêutica para os. pacientes com LCD.

INTRODUCTION: Diffuse Cutaneous Leishmaniasis (DCL) is a rare clinical manifestation caused by Leishmania amazonensis that is characterized by an inefficient parasite-specific cellular responses and heavily parasitized macrophages in skin lesions. Lipid mediators and their precursors play a crucial role during Leishmania infection. Previous works have shown that patients with cutaneous leishmaniasis exhibit a distinct in situ and systemic balance of this eicosanoids. Recently, pro-resolution lipid mediators have been shown to play critical role in dampening pathological inflammatory processes to reestablish homeostasis in a diverse range of experimental settings. Among these mediators, resolvins from D series have been described to exhibit potent antiinflammatory and immune-regulatory activities that include inhibition of leukocyte chemotaxis and blockage on the production of proinflammatory cytokines. However, whether resolvins play significant roles in establishment and persistence of Leishmania infection is currently unknown. AIM: We addressed this question by assessing circulating levels of resolvin D1 (RvD1) in tegumentary leishmaniasis patients presenting localized cutaneous leishmaniasis (LCL) or diffuse disease. RESULTS: We found that DCL patients have higher plasma levels of RvD1 when compared with LCL patients or endemic controls. In addition, the levels of this mediator were positively correlated with arginase-I and TGF-β and were negatively correlated with TNF-α levels. Additional in vitro experiments using primary human macrophages revealed that resolvin D1 promotes the intracellular L. amazonensis replication for a mechanism dependent on induction of heme oxygenase-1 enzyme. CONCLUSION: These results indicate that targeting RvD1 could serve as potential strategy for DCL patients.

Comparison of conventional, molecular, and immunohistochemical methods in diagnosis of typical and atypical cutaneous leishmaniasis.

CONTEXT: Localized cutaneous leishmaniasis (CL) typically presents as papules, crusted nodules, plaques, or noduloulcerative lesions. Atypical CL does not show these features or mimic malignant lesion. In atypical forms, CL may be overlooked because of its similarity to other dermal diseases. OBJECTIVE: To compare conventional, molecular, and immunohistochemical methods in the diagnosis of typical and atypical CL. DESIGN: The kinetoplast DNA, nested, polymerase chain reaction assay and immunohistochemical methods were compared and validated against conventional methods, including cytology and pathology, using 100 specimens of typical and atypical lesions of suspected CL. RESULTS: Compared with other methods, polymerase chain reaction of the kinetoplast DNA showed the highest sensitivity (typical positive, 100%, 67 of 67; atypical positive, 94%, 31 of 33) and specificity (100%), followed by immunohistochemistry (typical positive, 97%, 65 of 67, with 100% specificity; atypical positives, 94%, 31 of 33, with 100% specificity), and cytology (typical positive, 79%, 53 of 67, with 100% specificity; atypical positive, 58%, 19 of 33, with 100% specificity), followed by pathology (typical positive, 70%, 47 of 67, with 100% specificity; atypical positive, 42%, 14 of 33, with 100% specificity). In addition, polymerase chain reaction enabled identification of 98% (98 of 100) of the positive samples that included strains of Leishmania major (99% [99 of 100] cases) and Leishmania tropica (1% [1 of 100] cases). CONCLUSIONS: Because cytology is cheap and easy to perform with high sensitivity, it is the preferred, primary approach for typical CL, but cytology and pathology do not have sufficient sensitivity for diagnosis of atypical CL cases. Nested polymerase chain reaction and immunohistochemistry are sensitive tests for diagnosis of both typical and atypical CL and are recommended as complementary tests in suspected CL with negative conventional microscopy results.

Reporte de lesiones mucosas en leishmaniosis tegumentaria americana, en el litoral (Costa) Ecuatoriano / Report on mucous membrane lesions in American tegumentary leishmaniosis, in the Ecuadorian coastal region

En la región litoral o costa ecuatoriana existen 5 especies de Leishmania que afectan al ser humano, con un amplio espectro de lesiones cutáneas y linfáticas bien documentadas. Las lesiones en la mucosa rino-oro-faríngea y aún laríngea, no son reportadas con frecuencia. Se presentan cuatrocasos con esta afección, de origen indudable del litoral: 1) la lesión mucosa aparece luego de 25 años de la lesión dérmica; 2) las cicatrices de la piel en la cara y las lesiones de mucosa nasal, muy próximas; 3) Lesiones muy graves de todo el área, incluye laringe; 4) Lesión dérmica en pierna y lesión nasal al cabo de 7 años. Este reporte permite actualizar esta dolencia en el diagnóstico diferencial y ofrecer mejor tratamiento y pronóstico a los pacientes.

Levantamento soroepidemiológico da leishmaniose tegumentar e doença de chagas em uma comunidade rural da região sul do Estado do Mato Grosso do Sul - Brasil / Seroepidemiological study of leishmaniasis and chagas disease in a rural community in the south of Mato Grosso do Sul ? Brazil

A leishmaniose e a doença de chagas são zoonoses causadas por parasitas do gênero Leishmania e Tripanossomatidae, respectivamente. Dados da Organização Mundial da Saúde estimam que, para a leishmaniose, aproximadamente 12 milhões de pessoas estão infectadas e 350 milhões delas residem em áreas de risco, e para chagas 16 a 18 milhões os indivíduos infectados, e de aproximadamente 80 milhões a população em risco de contaminação da América Latina. Assim, o presente trabalho teve como objetivo verificar o perfil sorológico de indivíduos residentes em comunidade rural no município de Eldorado ? MS ? Brasil no ano de 2007. Para a pesquisa, foi empregada a reação de Imunofluorescência Indireta (IFI) para leishmaniose e IFI e ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) para chagas em 73 amostras de soro humano. Os resultados obtidos demonstraram que não houve sorologia positiva nas amostras testadas. Portanto, é importante que trabalhos como este sejam realizados em áreas rurais, principalmente aquelas próximas à matas nativas e com populações oriundas de diferentes regiões do Brasil.

The leishmaniasis and the Chagas disease are zoonoses caused by Leishmania species and Tripanossomatidae respectively. Data from the World Health Organization estimate that, for leishmaniasis, about 12 million people are infected and 350 million of them live in risk areas, and for Chagas disease 16 million to 18 million infected individuals and about 80 million people at risk of contamination in Latin America. This study aimed to determine the serological profile of individuals that live in a rural community in Eldorado - MS - Brazil in 2007. In this research it was used the Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) for leishmania and IFA and ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) for Chagas disease in 73 human serum samples. The results showed no positive serology in the tested samples. It is important that these studies be conducted specifically in rural areas, especially those close to the native forests, and populations from different regions of Brazil.

Estudo da Leishmaniose Tegumentar na Terra Indígena Xakriabá: o parasito, os hospedeiros e os vetores

Neste trabalho foi realizado um estudo multidisciplinar sobre a leishmaniose tegumentar relacionado ao parasito, aos hospedeiros e aos vetores na Reserva Indígena Xakriabá, norte de Minas Gerais, Brasil. Uma amostra populacional das aldeias Imbaúbas I e II foi caracterizada para a identificação dos casos clínicos e assintomáticos. Os casos de LTA provenientes das outras aldeias da Reserva Xakriabá também foram identificados. Todos foram caracterizados quanto às variáveis demográficas, infecções passadas, presença de co-morbidades, características das lesões e aspectos relacionados ao tratamento. Além deste estudo com os humanos, foi desenvolvido um estudo para verificar a infecção por Leishmania em pequenos mamíferos silvestres e cães domésticos, estimando a proporção de infectados. As espécies de flebotomíneos vetores foram determinadas na área. Por fim, foi realizado um estudo sobre a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis proveniente de diferentes hospedeiros vertebrados. A prevalência da doença nas aldeias Imbaúbas foi estimada em 8,6%

A partir de 92 casos suspeitos foram detectados 87 casos de LTA em toda a Reserva. Destes, 72 foram confirmados por algum exame parasitológico e/ou PCR. A maioria dos pacientes (70,0%) eram portadores de lesões atípicas, somente 27,6% apresentaram úlceras típicas e 2 pacientes eram portadores tanto de úlcera típica quanto de lesões atípicas. Foram identificadas três espécies de Leishmania circulando entre os roedores, marsupiais e cães domésticos: L. braziliensis, L. infantum e L. guyanensis. Um total de 1327 espécimes de flebotomíneos foi obtido. As espécies mais capturadas foram Lutzomyia longipalpis (756 exemplares – 57%) e Lu. intermedia (297 exemplares – 22%). Cabe ressaltar que foi coletado um número considerável de fêmeas de Lu. intermedia (244), principal vetor de LTA causada por L. braziliensis em Minas Gerais. Foi verificada a presença, em número bastante reduzido (3 exemplares), de Lu. whitmani, espécie considerada vetora em importantes focos de LTA no Brasil. O estudo do polimorfismo genético de L. braziliensis mostrou que existem duas populações deste parasito circulando entre os hospedeiros vertebrados. Uma forte associação foi verificada entre as duas populações de L. braziliensis e o tipo de manifestação clínica. Os parasitos que apresentaram um perfil idêntico às cepas referência de L. braziliensis estavam relacionados a lesões do tipo úlcera típica, enquanto os parasitos que apresentaram perfil variante parecem induzir lesões atípicas. A chance de ter lesão típica é cerca de cinco vezes maior entre os pacientes portadores de parasitos com perfil idêntico a L. braziliensis

Desenvolvimento e avaliação comparativa de metodologias baseadas na PCR para o diagnóstico molecular e identificação específica de agentes etiológicos da leishmaniose tegumentar que circulam em áreas endêmicas brasileiras / Development and benchmarking of methodologies based on PCR for molecular diagnosis and identification of specific etiologic agents of cutaneous leishmaniasis circulating in Brazilian endemic areas

A leishmaniose é um complexo de doenças caracterizada não só pelo considerável pleomorfismo clínico, mas também pela variação epidemiológica, devido á notável diversidade de espécies de Leishmania e de vetores envolvidos no ciclo de transmissão e, quando aplicável, os seus grupos de reservatórios. O diagnóstico da infecção por Leishmania associado à identificação da espécie causal é importante para o prognóstico, definição de esquemas terapêuticos adequados e para vigilância epidemiológica da doença. Neste contexto, os métodos baseados na PCR tem sido os mais investigados e por isso muitos métodos tem sido descritos. O principal objetivo deste estudo foi estabelecer uma metodologia que apresentasse uma boa sensibilidade para ser utilizada no diagnóstico da leishmaniose cutânea e que fosse capaz de identificar o agente etiológico causal da infecção ao nível específico. Para isto, neste trabalho utilizamos diferentes metodologias baseadas na PCR que já foram empregadas em vários estudos enfocando o dianóstico molecular das leishmanioses: PCR kDNA, PCR ITS1 e PCR g6p. O limite de detecção, sensibilidade frente a amostras clínicas obtidas de pacientes com LC e a capacidade destas metodologias em discriminar entre as espécies relacionadas com a LC humana no Brasil foram avaliados. Além disso, considerando resultados anteriores do nosso grupo que indicaram que regiões do gene hsp70 poderiam ser utilizadas para o alcance deste objetivo, desenvolvemos metodologias de PCR direcionadas para a amplificação de fragmentos que correspondiam a distintas regiões do gene hsp70, com tamanho variando entre 230pb a 390pb. Considerando as quatro regiões que foram analisadas, escolhemos uma (aqui denominada de PCR hsp70C) por ter apresentado o melhor limite de detecção de DNA de Leishmania e que, através da PCR RFLP hsp70C, foi capaz de discriminar todas as espécies de Leishmania, patógenos humanos, que circulam no Brasil, quanco cepas de referência foram analisadas. A sensibilidade da PCR hsp70C empregando DNA extraído de tecido coletado de pacientes diagnosticados com leishmaniose foi avaliada, comparando com as demais metodologias mencionadas anteriormente; além disso, a capacidade da PCR-RFLP em identificar espécies de Leishmania foi validade empregando um painel de 70 cepas de Leishmania, representando as diferentes espécies e a distribuição geográfica destas, e também foi aplicada ao material clínico analisado. Foi possível concluir que a PCR kDNA é um método bastante sensível e por isso indicado para o diagnóstico molecular das leishmanioses, mas não permite a identificação de espéciesA PCR ITS1 apresenta boa sensibilidade para o diagnóstico das leishmanioses, mas a capacidade de identificação de algumas espécies de Leishmania que circulam nas Américas, através da PCR-RFLP, depende de metodologias mais complexasm dificultando seu uso em áreas de circulação de espécies como L. braziliensis e L. guyanensis, por exemplo. Finalmente, a PCR-RFLP hsp70C, direcionada para a amplificação de uma região do gene hsp70 de Leishmania, combina boa sensibilidade para detectar Leishmania diretamente em material clínico e a habilidade em identificar todas as espécies que circulam no Brasil, sendo útil principalmente em áreas onde existe a ocorrência de espécies de Leishmania em simpatria.

Acompanhamento Clínico e Terapêutico de Pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana na Terra Indígena Xakriabá, São João das Missões, Minas Gerais/Brasil, 2008 – 2010 / Clinical Monitoring and Patient Therapy with American cutaneous leishmaniasis in the Indian Land Xakriabá, St. John of the Missions, Minas Gerais / Brazil, 2008 - 2010

A comunidade indígena Xakriabá, localizada no município de São João das Missões, norte de Minas Gerais/Brasil, tem registrado casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) desde 2001. O presente estudo teve como objetivo descrever os casos identificados desde Junho de 2008 a setembro de 2010 , bem como acompanhar a evolução a evolução clínica dos casos até 12 meses após o fim do tratamento. Os casos suspeitos foram identificados em um levantamento da população e pelos agentes de saúde indígenas. Após a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, os pacientes foram entrevistados e avaliados clinicamente , e as informações foram registradas em questionários estruturados e pré- codificados. O diagnóstico foi confirmado por testes intradérmicos de reação(IDR) , exames parasitológicos ( exame direto , fragmento de biópsia ou aspirado cultura e técnicas moleculares ( PCR- RFLP) . Os diagnósticos confirmados foram aqueles que testou positivo para pelo menos um dos testes. Hematológica , testes bioquímicos e eletrocardiograma (ECG) foram realizados antes , durante e no final do tratamento com antimônio pentavalente meglumina . doses de 15 mg / kg / dia durante 20 dias (leishmaniose cutânea ) e 20 mg / kg / dia durante 30 dias (leishmaniose mucosa ) foram utilizados . Entre os 94 pacientes com lesões cutâneas avaliadas, 89 foram confirmados como LTA e 60 tratados e monitorados. os casos vieram de cinco áreas existentes , com maior ocorrência nas áreas conhecidas como" Brejo Mata Fome " (47,5% casos) e " Itapicuru " ( 43,8% dos casos). a distribuição dos casos foi semelhante entre os homens (51,7% ) e mulheres ( 48,3%) . idade dos pacientes variou de 1 a 72 anos, com a mediana de 18 anos...

os casos ocorreram predominantemente entre os trabalhadores rurais que ganham menos de um salário mínimo. maioria dos pacientes apresentava lesões atípicas (70,1%) e uma única lesão (60,7%) . o tempo entre o início da lesão e o diagnóstico variou de menos de um mês até 72 meses . Não houve contra-indicações para o uso de antimônio pentavalente . Sessenta pacientes foram tratados e, após o 20 º dia, 24 (40,0%)apresentavam lesões que foram completamente epitelizadas enquanto outros apresentaram os parcialmente cicatrizadas . Esses dois grupos foram comparados por características demográficas, co - infecções , número, tamanho , aparência e localização das lesões , tempo de início dos sintomas, infecções bacterianas, uso de medicamentos caseiros ou comerciais, tamanho de endurecimento, a descontinuidade do tratamento , resultados de testes de diagnóstico e genótipos de Leishmania braziliensis . Após 20 dias de tratamento , epitelização completa esteve associada a lesões parcialmente epitelizadas no primeiro exame clínico (OR = 6,5 ,IC 95 % = 2,0-21,7 ) e infecção bacteriana (OR = 0,1, IC 95 % = 0,0-0,7 ) . Uma avaliação realizada 90 dias após o final do tratamento indicou que 44 pacientes(73,3%) apresentaram lesões completamente epitelizadas. Quando estes pacientes foram comparados aos com lesões não- cicatrizadas houve uma associação entre afalha do tratamento e LTA anterior no passado (OR = 8,2, IC 95% = 1,5-46,3 ), usode medicação caseira (OR = 7,10 , IC 95 % = 1,6-71,9 ) e tempo de início dos sintomas superior a 8 meses ( OR = 6,3 , IC95% = 1,1-36,7 ) . Seis ( 10%) recidivas foram observados casos. Entre os 60 pacientes tratados, 35 não havia completado um ano de monitoramento, no momento da análise de dados. Esperamos que comeste estudo possa ampliar o conhecimento a respeito de LTA e contribuir para a melhoria do diagnóstico e tratamento da a doença na comunidade indígena Xakriabá...

Estudo da leishmaniose tegumentar na terra indígena Xakriabá: o parasito, os hospedeiros e os vetores / Study of cutaneous leishmaniasis in the Indigenous Xakriabá: the parasite, hosts and vectors

Neste trabalho foi realizado um estudo multidisciplinar sobre a leishmaniose tegumentar relacionado ao parasito, aos hospedeiros e aos vetores na Reserva Indígena Xakriabá, norte de Minas Gerais, Brasil. Uma amostra populacional das aldeias Imbaúbas I e II foi caracterizada para a identificação dos casos clínicos e assintomáticos. Os casos de LTA provenientes das outras aldeias da Reserva Xakriabá também foram identificados. Todos foram caracterizados quanto às variáveis demográficas, infecções passadas, presença de co-morbidades, características das lesões e aspectos relacionados ao tratamento. Além deste estudo com os humanos, foi desenvolvido um estudo para verificar a infecção por Leishmania em pequenos mamíferos silvestres e cães domésticos, estimando a proporção de infectados. As espécies de flebotomíneos vetores foram determinadas na área. Por fim, foi realizado um estudo sobre a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis proveniente de diferentes hospedeiros vertebrados. A prevalência da doença nas aldeias Imbaúbas foi estimada em 8,6%. A partir de 92 casos suspeitos foram detectados 87 casos de LTA em toda a Reserva. Destes, 72 foram confirmados por algum exame parasitológico e/ou PCR. A maioria dos pacientes (70,0%) eram portadores de lesões atípicas, somente 27,6% apresentaram úlceras típicas e 2 pacientes eram portadores tanto de úlcera típica quanto de lesões atípicas. Foram identificadas três espécies de Leishmania circulando entre os roedores, marsupiais e cães domésticos: L. braziliensis, L. infantum e L. guyanensis. Um total de 1327 espécimes de flebotomíneos foi obtido. As espécies mais capturadas foram Lutzomyia longipalpis (756 exemplares – 57%) e Lu. intermedia (297 exemplares – 22%). Cabe ressaltar que foi coletado um número considerável de fêmeas de Lu. intermedia (244), principal vetor de LTA causada por L. braziliensis em Minas Gerais. Foi verificada a presença, em número bastante reduzido (3 exemplares), de Lu. whitmani, espécie considerada vetora em importantes focos de LTA no Brasil. O estudo do polimorfismo genético de L. braziliensis mostrou que existem duas populações deste parasito circulando entre os hospedeiros vertebrados. Uma forte associação foi verificada entre as duas populações de L. braziliensis e o tipo de manifestação clínica. Os parasitos que apresentaram um perfil idêntico às cepas referência de L. braziliensis estavam relacionados a lesões do tipo úlcera típica, enquanto os parasitos que apresentaram perfil variante parecem induzir lesões atípicas. A chance de ter lesão típica é cerca de cinco vezes maior entre os pacientes portadores de parasitos com perfil idêntico a L. braziliensis.

Imunocitoquímica e imunohistoquímica para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar / Immunocytochemistry and immunohistochemistry for laboratorial diagnosis of cutaneous leishmaniasis

0 aumento significativo do número de casos notificados da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e a expansão geográfica da endemia tem motivado o desenvolvimento de novas tecnologias para auxiliar no diagnóstico das leishmanioses, visando minimizar as restrições apresentadas pelos testes diagnósticos disponíveis nos serviços de saúde. 0 presente trabalho empregou imunocitoquimica e imunohistoquímica (ICQ/IHQ) como métodos diagnósticos laboratoriais para LTA. Amostras de culturas de Leishmania in vitro e cortes histológicos de lesões em animais infectados experimentalmente foram submetidos a ICQ/IHQ, utilizando anticorpos policlonais desenvolvidos para este estudo e o complexo avidina-biotina modificado (Ultra Streptavidin®). Em comparação com outras técnicas empregadas para o diagnóstico da LTA, nos casos avaliados, a IHQ apresentou resultados semelhantes aos da histopatologia com coloração HE, com sensibilidade de 33,3% para formas amastigotas. Quando considerada a presenva de antígenos de Leishmania no padrão celular, a IHQ apresentou uma sensibilidade de 83,3%, significativamente maior que na histopatologia e compatível com metodos padrão ouro de cultura e PCR. As metodologias de ICQ/IHQ desenvolvidas neste trabalho foram capazes de demonstrar em biópsias de lesões, a presença de formas amastigotas e antígenos de Leishmania, oferecendo contribuição adicional ao diagnóstico da LTA, sendo de facil aplicação e podendo ser utilizada no sistema público de saúde.

The significant increase in cutaneous leishmaniasis (CL) notified cases and the geographic expansion of this endemy has motivated the development of new techniques to help in leishmaniasis diagnosis, seeking the minimization of the restrictions imposed by the diagnostic tests available at the health services. The current study applied immunocytochemistry and immunohystochemistry methods (ICC/IHC) for laboratory diagnosis of CL. Imprints and histological sections from tissue infected with Leishmania were submitted to ICC/IHC methods using polyclonal antibodies developed for this study and a modified avidin-biotin complex (Ultra Streptavidin®). The samples also were submitted for routinely stained hematoxylin and eosin (H&E) specimens and gold standard methods (culture and PCR). Compared with other useful techniques for the CL diagnosis, ICC/IHC showed the same sensitivity results (33%) as H&E stain for amastigotes recognition. When the presence of Leishmania antigens was evaluated, ICC/IHC presented 83,3% sensitivity, i.e., higher than that detected by histopathology and equivalent with gold standard methods (culture and PCR). The ICC/IHC techniques developed in the current study were able to recognize amastigote forms and also Leishmania antigens in lesion biopsies, offering an additional help to CL diagnosis and it can be easily applied in the public health system.

Aspecto clínico evolutivo e anatomopatológico da leishmaniose recidiva cútis (LRC) em pacientes procedentes da região do vale do Jequiriçá, Bahia / Clinical aspect of evolution and pathology of leishmaniasis relapse cutis (LRC) in patients from the region Jequiriçá Valley, Bahia

Algumas formas clínicas da leishmaniose tegumentar (LT) são conhecidas pela sua refratariedade ao tratamento e/ou pela raridade de apresentação. Há a tendência de se considerar a LRC uma variante a leishmaniose tegumentar, uma forma de cicatrização peculiar (surge após cicatriz de leishmaniose prévia) que denota refratariedade ao tratamento, e não uma forma clínica da doença. Este trabalho foi descrito diante da raridade da manifestação dessa forma evolutiva de LT e da grande casuística de LRC nesta população estudada. Analisar as características clínicas, epidemiológicas, histológicas e terapêuticas dos pacientes com LRC procedentes da região do Vale de Jiquiriçá, Bahia. O estudo foi realizado no Município de Jiquiriçá, pertencente à região Sudoeste da Bahia, considerada endêmica para leishmaniose tegumentar (LT). Realizou-se um estudo descritivo retrospectivo e prospectivo e o tempo total de análise foi de 10 anos, tendo inicio em 2001. Na primeira fase do estudo, todos os 840 prontuários de pacientes ativos ou inativos foram analisados para se detectar casos onde a descrição clínico–evolutiva da lesão fosse compatível com LRC. Na segunda fase, os pacientes previamente diagnosticados e os que surgiram durante o acompanhamento totalizaram os 43 (5,1% dos casos de LT) pacientes de LRC desta casuística que foram analisados por 02 anos da seguinte forma: visita por médicos infectologistas e dermatologista mensalmente, com avaliação fotográfica e preenchimento de questionário padrão; exames diagnósticos como IDRM, histopatológico e exames laboratoriais; além de acompanhamento clínico do tratamento instituído avaliando-se efeitos colaterais das drogas e critérios de cura. Os esquemas terapêuticos propostos foram ao acaso e de acordo com ensaios terapêuticos, em paralelo, que os mesmos pacientes participaram. A análise da série de 43 casos de pacientes portadores de LRC provenientes do Vale do Jiquiriçá revelou uma população de adultos jovens sendo 25% destes na faixa etária de 21-30 anos, lavradores (58%), portadores de lesões únicas ( > 75%) e de tamanho mediano em sua maioria (de 1 a 6 cm), predominantemente no segmento superior (cabeça e tronco), com 74% de prevalência. A maioria da população foi feminina, com 51,1% dos casos. Todos evoluíram com refratariedade ao tratamento (média de 8,5 meses de acompanhamento) com posterior cura clínica (82%). As melhores respostas foram obtidas com os esquemas de Glucatime + Pentoxifilina, com 4,1 meses de tratamento e Glucantime +Azitromicina + Pentoxifilina com 5,1 meses. Os pacientes apresentam histopatologia diferente da literatura, sem granulomas bem formados e com achado de Leishmanias em alguns casos. Em relação à apresentação clínica, as lesões apresentavam tubérculos ou placas ao redor das cicatrizes prévias, ao invés de pápulas como consta na literatura. Trata-se da maior casuística do Brasil. Trata-se de um estudo descritivo retrospectivo e prospectivo com avaliações de aspectos clínico-evolutivos, histopatológicos, epidemiológicos e terapêuticos de 43 pacientes portadores de LRC, que demonstrou uma população feminina, jovem, composta por lavradores e com lesões únicas no segmento superior do corpo. Os indivíduos evoluíram com refratariedade ao tratamento, apesar cura clínica final.

Acompanhamento Clínico e Terapêutico de Pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana na Terra Indígena Xakriabá, São João das Missões, Minas Gerais/Brasil, 2008 – 2010

A comunidade indígena Xakriabá, localizada no município de São João das Missões, norte de Minas Gerais/Brasil, tem registrado casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) desde 2001. O presente estudo teve como objetivo descrever os casos identificados desde Junho de 2008 a setembro de 2010 , bem como acompanhar a evolução a evolução clínica dos casos até 12 meses após o fim do tratamento. Os casos suspeitos foram identificados em um levantamento da população e pelos agentes de saúde indígenas. Após a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, os pacientes foram entrevistados e avaliados clinicamente , e as informações foram registradas em questionários estruturados e pré- codificados. O diagnóstico foi confirmado por testes intradérmicos de reação(IDR) , exames parasitológicos ( exame direto , fragmento de biópsia ou aspirado cultura e técnicas moleculares ( PCR- RFLP) . Os diagnósticos confirmados foram aqueles que testou positivo para pelo menos um dos testes. Hematológica , testes bioquímicos e eletrocardiograma (ECG) foram realizados antes , durante e no final do tratamento com antimônio pentavalente meglumina . doses de 15 mg / kg / dia durante 20 dias (leishmaniose cutânea ) e 20 mg / kg / dia durante 30 dias (leishmaniose mucosa ) foram utilizados . Entre os 94 pacientes com lesões cutâneas avaliadas, 89 foram confirmados como LTA e 60 tratados e monitorados. os casos vieram de cinco áreas existentes , com maior ocorrência nas áreas conhecidas como" Brejo Mata Fome " (47,5% casos) e " Itapicuru " ( 43,8% dos casos). a distribuição dos casos foi semelhante entre os homens (51,7% ) e mulheres ( 48,3%) . idade dos pacientes variou de 1 a 72 anos, com a mediana de 18 anos.

os casos ocorreram predominantemente entre os trabalhadores rurais que ganham menos de um salário mínimo. maioria dos pacientes apresentava lesões atípicas (70,1%) e uma única lesão (60,7%) . o tempo entre o início da lesão e o diagnóstico variou de menos de um mês até 72 meses . Não houve contra-indicações para o uso de antimônio pentavalente . Sessenta pacientes foram tratados e, após o 20 º dia, 24 (40,0%)apresentavam lesões que foram completamente epitelizadas enquanto outros apresentaram os parcialmente cicatrizadas . Esses dois grupos foram comparados por características demográficas, co - infecções , número, tamanho , aparência e localização das lesões , tempo de início dos sintomas, infecções bacterianas, uso de medicamentos caseiros ou comerciais, tamanho de endurecimento, a descontinuidade do tratamento , resultados de testes de diagnóstico e genótipos de Leishmania braziliensis . Após 20 dias de tratamento , epitelização completa esteve associada a lesões parcialmente epitelizadas no primeiro exame clínico (OR = 6,5 ,IC 95 % = 2,0-21,7 ) e infecção bacteriana (OR = 0,1, IC 95 % = 0,0-0,7 ) . Uma avaliação realizada 90 dias após o final do tratamento indicou que 44 pacientes(73,3%) apresentaram lesões completamente epitelizadas. Quando estes pacientes foram comparados aos com lesões não- cicatrizadas houve uma associação entre afalha do tratamento e LTA anterior no passado (OR = 8,2, IC 95% = 1,5-46,3 ), usode medicação caseira (OR = 7,10 , IC 95 % = 1,6-71,9 ) e tempo de início dos sintomas superior a 8 meses ( OR = 6,3 , IC95% = 1,1-36,7 ) . Seis ( 10%) recidivas foram observados casos. Entre os 60 pacientes tratados, 35 não havia completado um ano de monitoramento, no momento da análise de dados. Esperamos que comeste estudo possa ampliar o conhecimento a respeito de LTA e contribuir para a melhoria do diagnóstico e tratamento da a doença na comunidade indígena Xakriabá.

Estudo da variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis Vianna, 1911 de diferentes regiões do Brasil / Study of genetic variability of Leishmania (Viannia) braziliensis Vianna, 1911 from different regions of Brazil

Leishmania (Viannia) braziliensis é a espécie mais prevalente nos casos humanos da leishmaniose tegumentar nas Américas. Polimorfismo genético têm sido encontrado em populações naturais de diferentes espécies de Leishmania, o que explicaria a adaptação destes parasitos às mudanças observadas nas condições ambientais. Neste estudo utilizou-se um painel significativo de isolados L. braziliensis de focos de LTA de diferentes regiões geográficas e biomas do Brasil. Os polimorfismos do DNA genômico foram analisados utilizando-se diferentes marcadores genéticos, comparou-se a variabilidade genética intra-específica das amostras e determinou-se as relações fenéticas entre elas. Na eletroforese de isoenzimas (MLEE), a maioria das amostras (87,3%) apresentou o perfil de migração idêntico ao da cepa padrão de L. braziliensis (M2903); 8 amostras (10,2%) apresentaram apenas um eletromorfo diferente para a enzima IDHNADP. Duas amostras (2,6%) apresentaram o perfil mais heterogêneo, com padrões diferentes de L. braziliensis para 3 enzimas (G6PDH, IDHNADP e MDH). Estas amostras foram designadas como variantes. Para o RAPD-PCR com o iniciador M1340F pode-se observar que o conjunto dos isolados formaram claramente dois grandes clusters, pela análise com o programa NTSYS, refletindo a diversidade genética entre as amostras de L. braziliensis testadas. A análise dos perfis gerados pela SSR-PCR evidenciou que os iniciadores CARY e K7 foram capazes de mostrar variabilidade intra-específica. Observou-se que com o iniciador CARY, as amostras agruparam-se em um clustrer, incluindo a cepa de referência de L. braziliensis. Por outro lado, com o iniciador K7 observou-se a formação de dois clusters.

Uma árvore consenso foi gerada por parcimônia com os dados concatenados dos três marcadores utilizados (M1340F, CARY e K7) e observou-se a formação de dois clusters onde a maioria das amostras do bioma Amazônia /região Norte (58%) e região Nordeste (62%) estão juntas em um grupo e o bioma Cerrado /região Centro-Oeste (100%), Cerrado e Mata Atlântica (67%) e a região Sul (80%) estão em outro grupo, o que concorda com a análise feita pelo método de distância genética. Foram encontrados dois perfis para ITS1- HAEIII e após a análise dos géis foram identificados três perfis para hsp70-BstUI. Observou-se que o índice de similaridade médio entre as amostras para os testes de isoenzimas, RAPD-PCR com o iniciador M1340, SSR-PCR com o iniciador CARYe K7 foi de aproximadamente 70%, demonstrando a existência de variabilidade de L. braziliensis confirmada através das diferentes técnicas utilizadas. Combinando os resultados da análise por biomas e por região, podemos dizer que a maioria das amostras do bioma Amazonas, região Norte e bioma Caatinga estão sempre agrupadas em um mesmo clustere o bioma Cerrado, região centro-oeste em outro cluster. Este estudo refletiu a diversidade genética existente em L. braziliensis sugerindo a possibilidade de uma associação entre variabilidade e origem geográfica

Estudo da variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis Vianna, 1911 de diferentes regiões do Brasil

Leishmania (Viannia) braziliensis é a espécie mais prevalente nos casos humanos da leishmaniose tegumentar nas Américas. Polimorfismo genético têm sido encontrado em populações naturais de diferentes espécies de Leishmania, o que explicaria a adaptação destes parasitos às mudanças observadas nas condições ambientais. Neste estudo utilizou-se um painel significativo de isolados L. braziliensis de focos de LTA de diferentes regiões geográficas e biomas do Brasil. Os polimorfismos do DNA genômico foram analisados utilizando-se diferentes marcadores genéticos, comparou-se a variabilidade genética intra-específica das amostras e determinou-se as relações fenéticas entre elas. Na eletroforese de isoenzimas (MLEE), a maioria das amostras (87,3%) apresentou o perfil de migração idêntico ao da cepa padrão de L. braziliensis (M2903); 8 amostras (10,2%) apresentaram apenas um eletromorfo diferente para a enzima IDHNADP. Duas amostras (2,6%) apresentaram o perfil mais heterogêneo, com padrões diferentes de L. braziliensis para 3 enzimas (G6PDH, IDHNADP e MDH). Estas amostras foram designadas como variantes. Para o RAPD-PCR com o iniciador M1340F pode-se observar que o conjunto dos isolados formaram claramente dois grandes clusters, pela análise com o programa NTSYS, refletindo a diversidade genética entre as amostras de L. braziliensis testadas. A análise dos perfis gerados pela SSR-PCR evidenciou que os iniciadores CARY e K7 foram capazes de mostrar variabilidade intra-específica. Observou-se que com o iniciador CARY, as amostras agruparam-se em um clustrer, incluindo a cepa de referência de L. braziliensis. Por outro lado, com o iniciador K7 observou-se a formação de dois clusters.

Uma árvore consenso foi gerada por parcimônia com os dados concatenados dos três marcadores utilizados (M1340F, CARY e K7) e observou-se a formação de dois clusters onde a maioria das amostras do bioma Amazônia /região Norte (58%) e região Nordeste (62%) estão juntas em um grupo e o bioma Cerrado /região Centro-Oeste (100%), Cerrado e Mata Atlântica (67%) e a região Sul (80%) estão em outro grupo, o que concorda com a análise feita pelo método de distância genética. Foram encontrados dois perfis para ITS1- HAEIII e após a análise dos géis foram identificados três perfis para hsp70-BstUI. Observou-se que o índice de similaridade médio entre as amostras para os testes de isoenzimas, RAPD-PCR com o iniciador M1340, SSR-PCR com o iniciador CARYe K7 foi de aproximadamente 70%, demonstrando a existência de variabilidade de L. braziliensis confirmada através das diferentes técnicas utilizadas. Combinando os resultados da análise por biomas e por região, podemos dizer que a maioria das amostras do bioma Amazonas, região Norte e bioma Caatinga estão sempre agrupadas em um mesmo clustere o bioma Cerrado, região centro-oeste em outro cluster. Este estudo refletiu a diversidade genética existente em L. braziliensis sugerindo a possibilidade de uma associação entre variabilidade e origem geográfica

Diffuse cutaneous leishmaniasis in HIV.

Cutaneous leishmaniasis is caused by the intracellular protozoan parasite belonging to the genus leishmania and is characterized by a myriad of clinical lesions including papules, nodules, and ulcers. Diffuse cutaneous forms of leishmaniasis are rare. We report a rare case from South India of diffuse cutaneous leishmaniasis masquerading as lepromatous leprosy in the context of HIV infection.

Molecular diagnosis of leishmaniosis in the Paraná state of southern Brazil.

The objective of the present study was to establish a polymerase chain reaction (PCR) technique for the diagnosis of cutaneous and mucocutaneous leishmaniosis from autochthonous cases in the state of Paraná in southern Brazil as well as imported cases. We sought to determine its utility and accuracy compared with smears and present culture methods. To standardize PCR samples, skin and mucosal punch biopsies from human lesions were performed on patients living in different regions of the Paraná state (76 cases) and other endemic areas of Brazil and Argentina (7 cases). For PCR standardization, two pairs of primers (MP1L/MP3H and B1/B2) were utilized for amplification of the conserved sequences in the minicircle of kinetoplast DNA (kDNA) for the Leishmania braziliensis complex. Two other primer pairs (b1/b2 and a1/a2) were species-specific for L. (V.) braziliensis and L. (V.) amazonensis, respectively. After differential diagnosis, eight patients had clinical diagnosis of the cutaneous ulcer changed to others pathologies such as syphilis, baso-cellular carcinoma, varicose ulcer, ecthyma and paracoccidioidomycosis. Of the 75 patients with cutaneous (CL) and mucocutaneous (MCL) lesions who provided samples, 47 (46 CL + 1 MCL) were diagnosed with leishmaniosis by smear and 57 (52 LC + 5 MCL) were diagnosed by culture methods. In contrast, our PCR technique presented higher accuracy when compared to the direct examination and culture of parasites. PCR is applicable both for CL where all 61 lesions were diagnosed, and MCL where 12 of 14 lesions were diagnosed. This molecular biology technique is also a faster and more specific diagnostic method compared with present parasitological procedures.

Diffuse cutaneous leishmaniasis: co-infection with human immunodeficiency virus (HIV).

Cutaneous leishmaniasis is a disease caused by intracellular protozoal parasites belonging to the genus Leishmania. Immune suppression caused by HIV infection is an important factor for atypical presentation and widespread progression of cutaneous leishmaniasis. Diffuse (disseminated) cutaneous leishmaniasis and HIV co-infection is emerging as an extremely serious new disease. A 38-year-old HIV-positive man presented with a 12-month history of a progressive papule and nodular eruptions on face and extremities with infiltrations of nasal and oral mucosa. We report the case due to its atypical, widespread muco-cutaneous presentation masquerading as lepromatous leprosy.

Diffuse cutaneous leishmaniasis in an HIV-positive patient in western Africa.

A 36-year-old HIV1-positive woman presented with a 6-month history of a progressive papular and nodular eruption of the face and subsequent extensive spread to the rest of the skin. The diagnosis of diffuse cutaneous leishmaniasis was established by direct examination and skin biopsy. This atypical form had a dramatic improvement after a 21-day treatment with meglumine antimoniate. This clinical form may be confused with other endemic diseases in western Africa, especially leprosy.