Enzyme production by Candida albicans and Candida dubliniensis in periodontal HIV-positive patients receiving and not receiving antiretroviral therapy / Producción enzimática de Candida albicans y Candida dubliniensis de pacientes con periodontitis VIH+ con y sin tratamiento antirretroviral

ABSTRACT

ABSTRACT Candida dubliniensis (Cd) and Candida albicans (Ca) are the most frequently isolated yeasts in HIV+ patients. Some of the enzymes produced by these yeasts are considered virulence factors since they contribute to pathogenicity of Candida spp. The aim of the present study was to compare production of enzymes such as phospholipase (Ph), proteinase (P), and hemolysin (H) by Cd and Ca strains isolated from periodontal HIV-positive patients receiving and not receiving highly active antiretroviral therapy (HAART). Subgingival biofilm samples were obtained using paper points, and a sample of oral mucosa was taken using a swab. Phenotypic and molecular methods were used to isolate 39 strains of Candida, including 25 strains of Cd and 14 strains of Ca, obtained from 33 periodontal pocket samples and 6 oral mucosa samples collected from 15 HIV+ patients (8 receiving and 7 not receiving HAART). Malt egg-yolk agar, albumin agar and blood agar were used to evaluate pH, P and H production respectively. The strains were inoculated in duplicate and incubated at 37 ºC. Colony and halo diameters were measured. A greater proportion of Ca was observed in patients not receiving HAART, and a higher proportion of Cd was observed in those under HAART, Chi2 p< 0.001. Phospholipase production was observed in 92.9% percent of isolated Ca strains but in none of the isolated Cd strains. Proteinase production was high in Ca and Cd strains isolated from patients not receiving HAART. Hemolysin production was observed in all the studied strains, though it was significantly higher (p=0.04) in Ca and Cd strains isolated from patients not receiving HAART. To sum up, the proportion of Candida dubliniensis strains was highest in the subgingival biofilm of patients receiving HAART, and Cd strains were found to express fewer virulence factors than Ca strains.

RESUMEN

RESUMEN Las levaduras más aisladas en pacientes VIH+ son Candida dubliniensis (Cd) y Candida albicans (Ca). Algunas de sus enzimas constituyen factores de virulencia ya que favorecen la diseminación tisular. El objetivo fue comparar la producción de enzimas como fosfolipasa (F), proteinasa (P) y hemolisina (H) en cepas de Cd y Ca aisladas de pacientes VIH+ tratados y no tratados con antirretrovirales (TARGA). Se realizó la toma del biofilm de placa subgingival con conos de papel y la muestra de la mucosa bucal con hisopo. Se aislaron y tipificaron por métodos fenotípicos y moleculares 39 cepas: 25 de Cd y 14 Ca, obtenidas 33 de bolsas periodontales y 6 de mucosa bucal de 15 pacientes VIH+ (8 con y 7 sin tratamiento). Se utilizó agar malta con yema de huevo, agar albúmina y agar sangre para demostrar la producción de F, P y H, respectivamente. Se inocularon por duplicado e incubaron a 37°C. Se midieron los diámetros de las colonias y los de hidrólisis alrededor de las mismas. Se observó mayor proporción de Ca en los pacientes sin tratamiento y mayor proporción de Cd en los con tratamiento; Chi2 p< 0.001. El 92,9% de las Ca estudiadas, fueron productoras de fosfolipasa. En tanto que ninguna Cd produjo la enzima. En cuanto a la producción de proteinasa se observa una alta producción tanto en las cepas de Ca, como en las Cd aisladas en los pacientes no tratados. Todas las cepas estudiadas produjeron hemolisina, observándose una diferencia estadísticamente significativa (p=0,04) en ambas especies a favor de la alta producción de la enzima en las cepas obtenidas de pacientes no tratados. Podemos concluir que en el biofilm subgingival, en los pacientes bajo TARGA, se aíslan mayor proporción de Candida dubliniensis las cuales expresan menos factores de virulencia.