Caracterização da expressão e função da trombospondina 2 no câncer de próstata

RESUMO

A trombospondina 2 (TSP2) é uma glicoproteína secretada na matrizextracelular envolvida com inibição de crescimento e angiogênese tumorais.Sua expressão em tumores é bastante controversa, dependendo do tipo tumoral. A caracterização do nível de expressão e da função de TSP2 ainda não foi realizadano câncer de próstata (CaP). Os objetivos deste trabalho são caracterizar o perfil deexpressão de TSP2 no CaP e sua potencial aplicação no diagnóstico diferencialentre CaP e hiperplasia prostática benigna (HPB), além de investigar sua funçãono CaP. Para tanto, o nível de expressão do transcrito TSP2 foi analisado por PCRquantitativo em tempo real, em amostras teciduais de CaP e HPB e em linhagensprostáticas tumorais e não tumorais. A expressão da proteína TSP2 foi avaliada por imunohistoquímica em microarranjo de tecidos contendo amostras de CaP e HPB e utilizando um sistema semi-automático de análise de imagem celular. Linhagens celulares de CaP (PC3 e DU145) foram tratadas com a proteína recombinante de TSP2 (recTSP2) (50 µg/mL), sendo realizadas análises de viabilidade e de ciclo celular, além de análise fosfo-proteômica na linhagem PC3 tratada com recTSP2, através de um arranjo contendo anticorpos para 46 proteínas fosforiladas. Observamos que o transcrito TSP2 apresentou menores níveis de expressão em amostras teciduais e linhagens de CaP, em comparação com amostras teciduaisde HPB e linhagem não tumoral prostática (p<0,01). Em análise de curva ROC(Receiving Operating Curve), o transcrito TSP2 mostrou-se mais eficiente nadistinção entre CaP e HPB (p<0,01) do que os níveis séricos de PSA (p=0,299). Aexpressão da proteína TSP2 foi observada no citoplasma das células doscompartimentos estromais e epiteliais de CaP e HPB. Notadamente, o escore damarcação estromal de TSP2 nos tecidos de CaP apresentou-se significativamentemenor do que em HPB (p<0,01), enquanto o padrão de marcação epitelial mostrouse similar entre as duas doença...

ABSTRACT

Thrombospondin 2 (TSP2) is a glycoprotein that is secreted in theextracellular matrix and is related to tumor growth and angiogenesis inhibition.However, its expression in tumors is quite controversial, depending on the tumortype. Despite the characterization of TSP2 expression level and function has beenshown for some tumors types, a detailed characterization in prostate cancer (PCa)has not been performed. This study aims to characterize TSP2 expression profile inPCa and its potential application in the differential diagnosis between PCa andbenign prostatic hyperplasia (BPH), and to characterize TSP2 possible functions inPCa. TSP2 transcript expression levels were analyzed by real-time quantitative PCR in PCa and BPH tissue samples and tumor and non tumor prostate cell lines. Protein expression was evaluated in tissue microarray assay containing PCa and BPH tissue samples, by immunohistochemistry with an anti-TSP2 antibody, and using a semiautomatedimage analysis system. To investigate the functional role of TSP2 in PCa,PCa cell lines (DU145 and PC3) were treated with TSP2 recombinant protein(recTSP2) (50 µg/mL). Cell viability and cell cycle analysis were performed. Therewas also performed phospho-proteomic analysis in PC3 cells treated with recTSP2through an array containing antibodies to 46 phosphorylated proteins. Our resultsshowed that TSP2 transcript expression was down regulated in PCa tissue samplesand cell lines, as compared to BPH tissue samples and non-tumor prostate cell line(p <0.01). ROC (Receiving Operating Curve) analyses showed that TSP2 transcript expression level was more efficient in distinguishing between PCa and BPH groups (p <0.01) than serum PSA (p = 0.299). TSP2 protein expression was observed in thecytoplasm of cells of epithelial and stromal compartments of PCa and BPH.Notably, TSP2 stromal staining score was significantly lower in PCa than in BPH (p<0.01), whereas the epithelial...