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1.
Methods Mol Biol ; 1302: 187-206, 2015.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-25981256

RESUMO

The multiplex SNaPshot and the capillary electrophoresis-single-strand conformation polymorphism (CE-SSCP) procedures are here used for rapid and high-throughput description of the molecular variability of viral populations. Both approaches are based on (1) standard amplification of genomic sequence(s), (2) labeled primers or labeled single-stranded DNA, and (3) migration of fluorescent-labeled molecules in capillary electrophoresis system. The SNaPshot technology was used to describe the diversity of 20 targeted single nucleotide polymorphisms (SNPs) selected from alignment of viral genomic sequences retrieved from public database. The CE-SSCP procedure was applied to identify the polymorphisms of two small (<500 bases in length) genomic regions of viral genomes. The different steps of SNaPshot and CE-SSCP setup procedures are presented using Potato virus Y (PVY, Potyvirus) and Plum pox virus (PPV, Potyvirus) RNA viruses as molecular targets, respectively.


Assuntos
DNA Viral/análise , Eletroforese Capilar/métodos , Polimorfismo de Nucleotídeo Único/genética , Polimorfismo Conformacional de Fita Simples/genética , Potyvirus/classificação , Potyvirus/genética , Análise de Sequência de DNA/métodos , Análise Custo-Benefício , Primers do DNA/química , DNA de Cadeia Simples/genética , DNA Viral/genética , Eletroforese Capilar/economia , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Análise de Sequência de DNA/economia
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