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Protein Expr Purif ; 152: 84-91, 2018 12.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-30041031

RESUMO

Protein purification is essential in the study of protein structure and function, and the development of novel therapeutics. Many studies require purifying multiple proteins at once, increasing the demand for improved purification methods. We hypothesized that multiple chromatography columns could be interfaced with a multi-well collection plate for rapid and convenient protein purification without the need of expensive instrumentation. As such, we developed a multi-column plate adapter (MCPA), which provides an economical yet versatile and time efficient, high-throughput protein purification system. The MCPA system simultaneously purified milligrams of different proteins under gravity or under vacuum for faster purification. The MCPA handles up to twenty-four 12 mL columns and multiple MCPA's in sequence allow milligram-scale purification of 96 different samples with relative ease. We also used the MCPA system for large scale affinity purification of four proteins, providing sufficient yields and purity for protein crystallization and biophysical characterization. The MCPA system is ideal for optimizing resin type and volume or any other purification parameter by customizing individual columns during the same purification. The high-throughput and versatile nature of this system should prove to be useful in obtaining adequate amounts of protein for subsequent analyses in any laboratory setting.


Assuntos
Cromatografia de Afinidade/instrumentação , Ensaios de Triagem em Larga Escala/instrumentação , Proteínas dos Microfilamentos/isolamento & purificação , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/isolamento & purificação , Saccharomyces cerevisiae/química , Cromatografia de Afinidade/economia , Cromatografia de Afinidade/métodos , Clonagem Molecular , Escherichia coli/genética , Escherichia coli/metabolismo , Expressão Gênica , Vetores Genéticos/química , Vetores Genéticos/metabolismo , Ensaios de Triagem em Larga Escala/economia , Ensaios de Triagem em Larga Escala/métodos , Humanos , Proteínas dos Microfilamentos/genética , Proteínas dos Microfilamentos/metabolismo , Mutação , Pressão , Domínios Proteicos , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/isolamento & purificação , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Saccharomyces cerevisiae/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/metabolismo , Vácuo
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