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Nucleic Acids Res ; 31(16): e89, 2003 Aug 15.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-12907741

RESUMO

Recent developments of single molecule detection techniques and in particular the introduction of fluorescence correlation spectroscopy (FCS) led to a number of important applications in biological research. We present a unique approach for the gene expression analysis using dual-color cross-correlation. The expression assay is based on gene-specific hybridization of two dye-labeled DNA probes to a selected target gene. The counting of the dual-labeled molecules within the solution allows the quantification of the expressed gene copies in absolute numbers. As detection and analysis by FCS can be performed at the level of single molecules, there is no need for any type of amplification. We describe the gene expression assay and present data demonstrating the capacity of this novel technology. In order to prove the gene specificity, we performed experiments with gene-depleted total cDNA. The biological application was demonstrated by quantifying selected high, medium and low abundant genes in cDNA prepared from HL-60 cells.


Assuntos
DNA Complementar/metabolismo , Expressão Gênica , Espectrometria de Fluorescência/métodos , Actinas/genética , Algoritmos , Carbocianinas/química , DNA Complementar/química , DNA Complementar/genética , Proteínas de Ligação a DNA/genética , Corantes Fluorescentes/química , Células HL-60 , Humanos , Células K562 , NF-kappa B/genética , Sondas de Oligonucleotídeos/química , Sondas de Oligonucleotídeos/genética , Fator 1 de Elongação de Peptídeos/genética , Fosfoglicerato Quinase/genética , Rodaminas/química , Proteínas Ribossômicas/genética , Sensibilidade e Especificidade , Espectrometria de Fluorescência/instrumentação , Fator de Transcrição RelA , Tubulina (Proteína)/genética , Proteínas rab1 de Ligação ao GTP/genética
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