RESUMO
Abstract Psoriasis is a chronic skin inflammation, characterized by impaired differentiation, hyperproliferation of keratinocytes involving pro-inflammatory factors interleukin (IL)-13/17A, tumor necrosis factor (TNF)-α, interferon (IFN)-γ. Among the integrin family, α5 is important for blood vessel formation, and ß4 for proliferation, differentiation of keratinocytes. To investigate the expression and regulation of integrin α5 and ß4 in psoriatic keratinocytes. Skin biopsies were obtained from 14 psoriatic patients and 12 normal volunteers. We compared the immunolocalization and regulation of α5 and ß4 between the psoriatic and normal ones, before and after incubation with MEK/ERK pathway inhibitor U0126 by immunohistochemistry and western blot separately. Immunohistochemistry showed psoriatic keratinocytes had higher α5 than normal ones. According to western blot, IL-17A and IL-13 increased normal keratinocytes' α5 and ß4 respectively, but psoriatic keratinocytes were the exact opposite. Incubated with U0126, normal keratinocytes' α5 was enhanced by the 5 cytokines ; while IL-13/17A, IFN-γ suppressed ß4. Psoriatic keratinocytes' α5 was increased by IL-13/17A, decreased by IFN-γ; but ß4 increased by IL-17A, IFN-γ. IL-13/17A, TNF-α, IFN-γ regulate α5 and ß4 through ERK pathway whether normal or psoriasis. The normal and psoriatic keratinocytes respond to the same cytokines differently
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Integrinas/análise , Queratinócitos/classificação , Pacientes/classificação , Psoríase/patologia , Western Blotting/instrumentação , Citocinas/agonistas , Interleucinas/análiseRESUMO
Abstract Introduction Obstrutive sleep apnea syndrome is characterized by repeated episodes of upper airway obstruction, associated with intermittent hypoxia and hypercapnia, and the main risk factor in childhood is adenotonsillar hypertrophy. The lymphocytes in these structures are responsible for local and systemic immune responses. Objective Verify the levels of the inflammatory markers, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-15, TNF-α, CRP and α1-GP, in the tonsils of children with and without obstructive sleep apnea syndrome. Methods This cross-sectional prospective study included 34 children with complains of snoring, difficulty breathing during sleep or recurrent tonsillitis. Patients underwent to a complete otorhinolaryngological examination, nasal endoscopy and polysomnography and were divided into two groups with 17 children each: obstructive sleep apnea syndrome group and control group. All underwent an adenotonsillectomy. Cytokines were measured in the collected tonsils (ELISA and Multiplex methods). Results Statistically significant increasing were observed between IL-8 and IL-10 cytokines of patients with obstructive sleep apnea when compared to the control group; also between c-reactive protein and α1-GP of the tonsils cortical region in children with obstructive sleep apnea syndrome when compared with the medullary region. There were no statistically significant differences for the remaining inflammatory mediators. Conclusion After the analysis of the levels of pro and anti-inflammatory markers (IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, Il-15, TNF-α, CRP, α1-GP) in the tonsils, we observed higher levels of markers IL-8 and IL-10 in pediatric patients with obstructive sleep apnea syndrome.
Resumo Introdução A síndrome da apneia obstrutiva do sono é caracterizada por episódios repetidos de obstrução das vias aéreas superiores, associados a hipóxia intermitente e hipercapnia, e o principal fator de risco na infância é a hipertrofia adenotonsilar. Os linfócitos nessas estruturas são responsáveis por respostas imunes locais e sistêmicas. Objetivo Dosar os marcadores inflamatórios, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-15, TNF-α, PCR e α1-GP, nas tonsilas de crianças com e sem síndrome da apneia obstrutiva do sono. Método Estudamos prospectivamente 34 crianças que se queixavam de ronco, dificuldade para respirar durante o sono ou tonsilites recorrentes. Os pacientes foram submetidos a exame otorrinolaringológico completo, endoscopia nasal e polissonografia e foram divididos em dois grupos com 17 crianças cada: síndrome de apneia obstrutiva do sono e controle. Todos foram submetidos à adenotonsilectomia. As citocinas foram medidas nas tonsilas coletadas (métodos ELISA e Multiplex). Resultados Com diferenças estatisticamente significantes, observou-se aumento das citocinas IL-8 e IL-10 em pacientes com apneia obstrutiva do sono em comparação ao grupo controle, assim como aumento dos níveis de proteína C reativa e de α1-GP na região cortical das tonsilas de crianças portadoras de síndrome da apneia obstrutiva do sono em comparação com a região medular. Não houve diferenças estatisticamente significantes para o restante dos mediadores inflamatórios. Conclusão Após a análise dos níveis de marcadores pró e anti-inflamatórios (IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, Il-15, TNF-α, PCR, α1-GP) nas tonsilas, observamos níveis mais altos de marcadores IL-8 e IL-10 em pacientes pediátricos com síndrome da apneia obstrutiva do sono.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Pré-Escolar , Criança , Tonsila Palatina/imunologia , Apneia Obstrutiva do Sono/imunologia , Tonsila Palatina/patologia , Tonsilectomia , Proteína C-Reativa/análise , Orosomucoide/análise , Biomarcadores , Estudos Transversais , Estudos Prospectivos , Citocinas/imunologia , Interleucinas/análise , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Inflamação/imunologiaRESUMO
Abstract Purpose To evaluate the effects of prednisolone against sodium diclofenac both with ciprofloxacin compared to artificial tears on the symptoms and signs of acute viral conjunctivitis. Methods Study included 37 patients diagnosed with acute conjunctivitis and distributed by three groups: A (1% prednisolone acetate + ciprofloxacin (0.3%); B (Sodium diclofenac (0.1%) + ciprofloxacin (0.3%) and C (artificial tears + ciprofloxacin (0.3%). Patients received medication 6/6 hours daily. Signs and symptoms (e.g. lacrimation, burning, photophobia, etc.) were scored at baseline and on the first, third, fifth and seventh days and in the end of treatment using a standardized questionnaire and slit lamp anterior segment examination. Results All three groups demonstrated an improvement in the signs and symptoms of conjunctivitis in their follow-up visits. There was no significant difference in symptom and sign scores between Group A and B and B and C in the study visits ( p >0.05). However, the comparison between groups A and C showed a clinical trend (p=0.05) on third evaluation suggesting better clinical action using the corticosteroids. Conclusion The prednisolone acetate was not superior to the use of sodium diclofenac or artificial tears in relieving the signs and symptoms of viral conjunctivitis.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Adulto Jovem , Prednisolona/análogos & derivados , Ciprofloxacina/administração & dosagem , Anti-Inflamatórios não Esteroides/administração & dosagem , Conjuntivite Viral/tratamento farmacológico , Diclofenaco/administração & dosagem , Corticosteroides/administração & dosagem , Soluções Oftálmicas/administração & dosagem , Prednisolona/administração & dosagem , Doença Aguda , Análise de Variância , Interleucinas/análise , Interferon gama , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Resultado do Tratamento , Óxido Nítrico Sintase/análise , Lubrificantes Oftálmicos/administração & dosagemRESUMO
Abstract Cytokines and chemokines have a fundamental role in the maintenance of inflammation and bone response, which culminate in the development of chronic periapical lesions. Regulatory (Treg) and Th17 cytokines play a key role in regulating the immune response involved in this process. The aim of this study was to investigate the role of Treg and Th17 cells in chronic inflammatory periapical disease, by comparing the expression of the immunoregulatory mediators TGF-β, IL-10, CCL4, and the proinflammatory IL-17 and CCL20 in the periapical tissue of teeth with pulp necrosis, with and without associated chronic lesions. Eighty-six periapical tissue samples were obtained from human teeth. The samples were divided into three groups: pulp necrosis with a periapical lesion (n=26); pulp necrosis without a periapical lesion (n=30), and control (n=30). All samples were submitted to histopathological analysis and cytokine and chemokine measurement through ELISA. Statistical analyses were done with Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests and Spearman correlation. The group with pulp necrosis and a periapical lesion showed a higher expression of CCL4 and TGF-β in comparison with pulp necrosis without a lesion. CCL20 was higher in the group with a periapical lesion when compared to the control. In all groups there was a weak positive correlation between IL-17/CCL20, IL-10/CCL4, and IL-17/TGF-β. Both types of cytokines, pro-inflammatory and immunoregulatory, occur simultaneously in periapical tissue. However, a rise in immunosuppressive cytokines and chemokines (CCL4 and TGF-β) in periapical lesions suggests a role of these cytokines in stable periapical disease.
Assuntos
Humanos , Adulto , Adulto Jovem , Periodontite Periapical/patologia , Fator de Crescimento Transformador beta/análise , Interleucinas/análise , Linfócitos T Reguladores/imunologia , Quimiocinas CC/análise , Células Th17/imunologia , Periodontite Periapical/imunologia , Valores de Referência , Estudos de Casos e Controles , Doença Crônica , Fator de Crescimento Transformador beta/imunologia , Interleucinas/imunologia , Estatísticas não Paramétricas , Necrose da Polpa Dentária/imunologia , Necrose da Polpa Dentária/patologia , Quimiocinas CC/imunologia , Pessoa de Meia-IdadeRESUMO
ABSTRACT Purpose: To compare the intravitreal concentrations of cellular mediators involved in neurodegeneration, inflammation, and angiogenesis in patients with proliferative diabetic retinopathy and other vitreoretinal diseases. Methods: A multiplex bead immunoassay was used to measure vitreous levels of pigment epithelium-derived factor, serum amyloid P, C-reactive protein, complement C4, alpha-1 antitrypsin, vascular endothelial growth factor, platelet-derived growth factor-AA, platelet-derived growth factor-BB, interleukin-6, interleukin-8, interleukin-10, tumor necrosis factor alpha and beta in patients undergoing 23-gauge vitrectomy for proliferative diabetic retinopathy and other diagnoses (control group). Results: We evaluated 55 patients, of whom 24 had proliferative diabetic retinopathy and 31 had other diagnoses including vitreous hemorrhage, retinal detachment, macular hole, and epiretinal membrane. Patients with proliferative diabetic retinopathy demonstrated increased levels of serum amyloid P (85.49 vs. 31.38 ng/mL); C-reactive protein (59.89 vs. 41.75 ng/mL), vascular endothelial growth factor (2,330.11 vs. 554.25 pg/mL; p<0.001), platelet-derived growth factor A (127.32 vs. 39.11 pg/mL), platelet-derived growth factor B (29.37 vs. 7.12 pg/mL), interleukin-6 (69.37 vs. 33.58 pg/mL), interleukin-8 (175.25 vs. 59.71 pg/mL), and interleukin-10 (3.70 vs. 1.88 pg/mL); all p<0.004 when compared with the control group. Levels of pigment epithelium-derived factor (30.06 vs. 27.48 ng/mL; p=0.295), complement C4 (570.78 vs. 366.24 ng/mL; p=0.069), and alpha-1-antitrypsin (359.27 vs. 522.44 ng/mL; p=0.264) were not significantly different between the groups. Intravitreal levels of tumor necrosis factor-alpha and tumor necrosis factor-beta were undetectable. Serum Amyloid P, C-reactive protein, platelet-derived growth factor A, platelet-derived growth factor B, interleukin-6, and interleukin-8 were correlated positively with vascular endothelial growth factor. Conclusions: Cellular mediators involved in neurodegeneration and inflammation demonstrated increased levels in the vitreous humor of patients with proliferative diabetic retinopathy and may be part of the pathogenesis of diabetic retinopathy.
RESUMO Objetivo: Comparar as concentrações intravítreas de mediadores celulares envolvidos na neurodegeneração, inflamação e angiogênese em pacientes com retinopatia diabética proliferativa e outras doenças vítreo-retinianas. Métodos: Um ensaio imunomagnético foi utilizado para medir os níveis vítreos do fator derivado do epitélio pigmentar, amilóide P sérico, proteína-C-reativa, complemento C4, e alfa-1-antitripsina, fator de crescimento do endotélio vascular, fator de crescimento derivado das plaquetas AA, fator de crescimento derivado das plaquetas BB, interleucina-6, interleucina-8, interleucina-10, fator de necrose tumoral alfa e beta em pacientes submetidos à vitrectomia 23-gauge para retinopatia diabética proliferativa ou outros diagnósticos (grupo controle). Resultados: Foram avaliados 55 pacientes, dos quais 24 tinham retinopatia diabética proliferativa e 31 tinham outros diagnósticos, incluindo hemorragia vítrea, descolamento de retina, buraco macular e membrana epirretiniana. Pacientes com retinopatia diabética proliferativa demonstraram níveis aumentados de amilóide P sérico (85,49 vs 31,38 ng/mL), proteína-C-reativa (59,89 vs 41,75 ng/mL), fator de crescimento do endotélio vascular (2.330,11 vs 554,25 pg/mL, p<0.001), fator de crescimento derivado das plaquetas-A: (127,32 vs 39,11 pg/mL), fator de crescimento derivado das plaquetas-B (29,37 vs 7,12 pg/mL), interleucina-6 (69,37 vs 33,58 pg/mL), interleucina-8 (175,25 vs 59,71 pg/mL) e interleucina-10 (3,70 vs 1,88 pg/mL), todos com p<0,004 quando comparados ao grupo controle. Níveis de fator derivado do epitélio pigmentar (30,06 vs 27,48 ng/mL; p=0,295), complemento C4 (570,78 vs 366,24 ng/mL; p=0,069), alfa-1 antitripsina (359,27 vs 522,44 ng/mL; p=0,264) não foram significativamente diferente entre os grupos. Níveis intravítreos de fator de necrose tumoral alfa e fator de necrose tumoral beta foram indetectáveis. O amilóide P sérico, a proteína C-reativa, o fator de crescimento derivado das plaquetas A e B, a interleucina-6 e a interleucina-8 correlacionaram-se positivamente com o fator de crescimento do endotélio vascular. Conclusões: Os medidores celulares envolvidos na neurodegeneração e inflamação demonstraram níveis aumentados no humor vítreo de pacientes com retinopatia diabética proliferativa e podem ser parte da patogênese da retinopatia diabética.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Degeneração Retiniana/patologia , Corpo Vítreo/patologia , Mediadores da Inflamação/análise , Retinopatia Diabética/patologia , Valores de Referência , Vitrectomia , Proteína C-Reativa/análise , Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas/análise , Componente Amiloide P Sérico/análise , Serpinas/análise , Estudos Transversais , Interleucinas/análise , Estatísticas não Paramétricas , Fator A de Crescimento do Endotélio Vascular/análise , Retinopatia Diabética/cirurgia , Proteínas do Olho/análise , Fatores de Crescimento Neural/análiseRESUMO
Abstract: IL-22 has been implicated in the pathogenesis of vitiligo. However, the role of aryl hydrocarbon receptor transcription factor that acts as a master regulator of IL-22-producing Th22 cells is not fully understood. The goal of this study was to investigate the expression pattern of aryl hydrocarbon receptor in peripheral blood mononuclear cells of patients with vitiligo and in normal controls. Transcript levels were determined by a reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction. Aryl hydrocarbon receptor mRNA expression was drastically increased in patients with vitiligo compared to healthy controls (P = 0.000). Th22 cells may contribute to abnormal immune responses underlying vitiligo.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Vitiligo/genética , Regulação para Cima/genética , Receptores de Hidrocarboneto Arílico/genética , Fatores de Transcrição Hélice-Alça-Hélice Básicos/genética , RNA Mensageiro/genética , Estudos de Casos e Controles , Expressão Gênica , Interleucinas/análise , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
Abstract: Background: Allergic contact dermatitis to ion nickel (Ni+2) is an inflammatory dermatosis, common in industrialized countries. It involves the activation of nickel-specific T-cells, followed by proliferation and induction of a mixed profile of both proinflammatory and regulatory cytokines, suggesting that several T-cell subtypes (helper - Th and cytotoxic - Tc) are involved. A broader understanding of the cytokine profile may lead to new therapeutic approaches. Objectives: This study aimed to analyze the cytokines TNF-α, INF-γ, IL-2, IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 and IL-23 using the immunohistochemistry technique in order to try to identify their prevalence in chronic and acute eczema of patients with allergic contact dermatitis to Ni+2. Methods: We performed an immunohistochemical study for eight cytokines in 20 patients with Ni+2 allergic contact dermatitis, biopsied at the site of chronic eczema, triggered by the patient's daily contact with Ni+2, and at the site of acute eczema caused by nickel sulfate, 48 hours after applying the contact test. Results: The stained samples showed positive results for the eight cytokines studied. TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-13 and IL-17 had a higher prevalence in chronic eczema, IL-2 and IL-23 in acute eczema, and IL-10 presented a similar prevalence in both acute and chronic eczema. However, these prevalences were statistically significant only for IL-4 and IL-13. Study Limitations: Small sample size. Conclusions: In chronic and acute eczema, we observed the presence of a mixed cytokine profile of the T cell subtypes (Th/Tc), suggesting that the responses are expressed at the same time.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Adulto Jovem , Citocinas/análise , Interleucinas/análise , Interferon gama/análise , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Dermatite Alérgica de Contato/imunologia , Níquel/efeitos adversos , Biópsia , Imuno-Histoquímica , Doença Aguda , Doença Crônica , Estudos Prospectivos , Citocinas/imunologia , Interleucinas/imunologia , Interferon gama/imunologia , Fator de Necrose Tumoral alfa/imunologia , Dermatite Alérgica de Contato/etiologia , Dermatite Alérgica de Contato/patologia , Níquel/imunologiaRESUMO
Objetivos: Determinar a presença de estresse oxidativo e inflamação no intestino de pacientes com doença celíaca. Método: Foi realizado estudo transversal que incluiu pacientes submetidos à endoscopia gastrointestinal. A população do estudo consistiu em 24 casos e 26 controles. Foram medidos os níveis duodenais de proteínas carboniladas, espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico, bem como catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD). Também foram determinados os níveis intestinais de interleucina (IL) 6, 10 e 8. A classificação de Marsh foi registrada e utilizada como parâmetro de gravidade da doença. Resultados: Tanto a IL-6 como a IL-10, mas não a IL8, aumentaram nos pacientes com doença celíaca quando comparados com indivíduos saudáveis. Os parâmetros de dano oxidativo foram aumentados,enquanto que as defesas antioxidantes foram reduzidas em nossa amostra. Os níveis de IL6 ea atividade do SOD foram relacionados com a pontuação de Marsh. Conclusões: Diferentes marcadores de inflamação e estresse oxidativo estão alterados no intestino de pacientes com doença celíaca, e alguns deles estão relacionados à gravidade da doença.(AU)
Objectives: Determine the presence of oxidative stress and inflammation in the gut of patients with celiac disease. Methods: Transversal study that included patients undergoing upper gastrointestinal endoscopy was performed. The study population consisted 24 cases and 26 controls. The duodenal levels of protein carbonyls, thiobarbituric acid reactive species, as well as catalase, superoxide dismutase (SOD) activities were measured. Gut levels of interleukin (IL) 6, 10 and 8 were also determined.The Marsh classification was recorded and used as a parameter of disease severity. Results: Both IL-6 and IL-10, but not IL8, were increased in celiac disease patients when compared to healthy individuals. Oxidative damage parameters were increased while antioxidant defenses were decreased in our sample. Both IL6 levels and SOD activity were related to Marsh score. Conclusions: Different markers of inflammation and oxidative stress are altered in the gut of celiac disease patients, and some of them are related to disease severity.(AU)
Assuntos
Humanos , Doenças Inflamatórias Intestinais , Doença Celíaca/patologia , Estresse Oxidativo , Superóxido Dismutase/análise , Catalase/análise , Estudos Transversais/instrumentação , Endoscopia Gastrointestinal/instrumentação , Interleucinas/análise , Substâncias Reativas com Ácido Tiobarbitúrico/análise , Carbonilação ProteicaRESUMO
Abstract The aim of this longitudinal prospective study was to evaluate the effects of periodontal treatment on the clinical, microbiological and immunological periodontal parameters, and on the systemic activity (ESSDAI) and subjective (ESSPRI) indexes in patients with primary Sjögren’s Syndrome (pSS). Twenty-eight female patients were divided into four groups: pSS patients with or without chronic periodontitis (SCP, SC, respectively), and systemically healthy patients with or without chronic periodontitis (CP, C, respectively). Periodontal clinical examination and immunological and microbiological sample collection were performed at baseline, 30 and 90 days after nonsurgical periodontal treatment (NSPT). Levels of interleukin IL-1β, IL-8 and IL-10 in saliva and gingival crevicular fluid (GCF) were evaluated by ELISA, as well as the expression of Porphyromonas gingivalis (Pg), Aggregatibacter actinomycetemcomitans, (Aa) Tannerella forsythia (Tf), and Treponema denticola (Td), by qPCR. Systemic activity and pSS symptoms were evaluated by ESSDAI and ESSPRI. NSPT resulted in improved periodontal clinical parameters in both SCP and CP groups (p>0.05). Pg, Aa, and Tf levels decreased after NSPT only in CP patients (p<0.05). Significantly greater levels of IL-10 in GCF were verified in both SCP and CP groups (p<0.05). SCP patients showed increased salivary flow rates and decreased ESSPRI scores after NSPT. In conclusion, NSPT in pSS patients resulted in improved clinical and immunological parameters, with no significant effects on microbiological status. pSS patients also showed increased salivary flow and lower ESSPRI scores after therapy. Therefore, it can be suggested that NSPT may improve the quality of life of pSS patients.
Assuntos
Humanos , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Adulto Jovem , Síndrome de Sjogren/complicações , Periodontite Crônica/etiologia , Periodontite Crônica/terapia , Saliva/química , Salivação/fisiologia , Taxa Secretória , Fatores de Tempo , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Síndrome de Sjogren/fisiopatologia , Estudos de Casos e Controles , Reação em Cadeia da Polimerase , Estudos Prospectivos , Estudos Longitudinais , Líquido do Sulco Gengival , Interleucinas/análise , Resultado do Tratamento , Periodontite Crônica/fisiopatologia , Periodontite Crônica/microbiologia , Carga BacterianaRESUMO
ABSTRACT Objective: To evaluate growth factors and cytokines in samples of platelet-rich plasma obtained by three different centrifugation methods. Methods: Peripheral blood of six individuals with no hematological diseases, aged 18 to 68 years, was drawn to obtain platelet-rich plasma, using the open method and commercial columns by Medtronic and Biomet. The products obtained with the different types of centrifugation were submitted to laboratory analysis, including pro-inflammatory cytokines and chemokines by flow cytometry assays, the concentration of fibroblast growth factors-2 (FGF-2) and transforming growth factor-beta1 (TGF-β1). Results: The diverse separation methods generated systematically different profiles regarding number of platelets and leukocytes. The Medtronic system yielded a product with the highest concentration of platelets, and the open method, with the lowest concentration of platelets. The results of cytokine analysis showed that the different types of centrifugation yielded products with high concentrations of interleukin 8, interleukin 1β. The open system resulted in a product with high levels of interleukin 6. Other cytokines and chemokines measured were similar between systems. The product obtained with the open method showed higher levels of TGF-β1 in relation to other systems and low FGF-2 levels. Conclusion: The formed elements, growth factors and cytokines in samples of platelet-rich plasma varied according to the centrifugation technique used.
RESUMO Objetivo: Avaliar fatores de crescimento e citocinas em amostras de plasma rico em plaquetas obtidas por três diferentes métodos de centrifugação. Métodos: Foi coletado sangue periférico de seis indivíduos, sem doença hematológica, com idades entre 18 e 68 anos, para obtenção de plasma rico em plaquetas, utilizando o método aberto e sistemas comerciais das empresas Medtronic e Biomet. Os produtos obtidos com os diferentes tipos de centrifugação foram submetidos às análises laboratoriais, incluindo citocinas próinflamatórias e quimiocinas, por meio de ensaios de citometria de fluxo, concentração do fator de crescimento fibroblástico-2 (FGF-2) e fator de crescimento transformador-beta1 (TGF-β1). Resultados: As diferentes centrifugações geraram perfis sistematicamente diferentes referentes ao número de plaquetas e de leucócitos. O sistema da Medtronic originou produto com a maior concentração de plaquetas, e o método aberto com a menor concentração de plaquetas. Os resultados da análise de citocinas demonstraram que os diferentes tipos de centrifugação originaram produtos com elevadas concentrações de interleucina 8 e interleucina 1β. O sistema aberto resultou em produto com elevados níveis de interleucina 6. As demais citocinas e quimiocinas mensuradas foram similares entre os sistemas. O produto obtido com o método aberto apresentou níveis superiores de TGF-β1 em relação aos demais sistemas e reduzidos níveis de FGF-2. Conclusão: Os elementos figurados, fatores de crescimento e citocinas, em amostras de plasma rico em plaquetas, variaram conforme a técnica de centrifugação utilizada.
Assuntos
Humanos , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Adulto Jovem , Citocinas/análise , Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intercelular/análise , Plasma Rico em Plaquetas/química , Centrifugação/métodos , Citocinas/sangue , Interleucinas/análise , Interleucinas/sangue , Quimiocinas/análise , Quimiocinas/sangue , Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intercelular/sangue , Lesões do Manguito Rotador/cirurgiaRESUMO
Abstract Introduction: Primary graft dysfunction is a major cause of mortality after heart transplantation. Objective: To evaluate correlations between donor-related clinical/biochemical markers and the occurrence of primary graft dysfunction/clinical outcomes of recipients within 30 days of transplant. Methods: The prospective study involved 43 donor/recipient pairs. Data collected from donors included demographic and echocardiographic information, noradrenaline administration rates and concentrations of soluble tumor necrosis factor receptors (sTNFR1 and sTNFR2), interleukins (IL-6 and IL-10), monocyte chemoattractant protein-1, C-reactive protein and cardiac troponin I. Data collected from recipients included operating, cardiopulmonary bypass, intensive care unit and hospitalization times, inotrope administration and left/right ventricular function through echocardiography. Results: Recipients who developed moderate/severe left ventricular dysfunction had received organs from significantly older donors (P =0.020). Recipients from donors who required moderate/high doses of noradrenaline (>0.23 µg/kg/min) around harvesting time exhibited lower post-transplant ventricular ejection fractions (P =0.002) and required longer CPB times (P =0.039). Significantly higher concentrations of sTNFR1 (P =0.014) and sTNFR2 (P =0.030) in donors were associated with reduced intensive care unit times (≤5 days) in recipients, while higher donor IL-6 (P =0.029) and IL-10 (P =0.037) levels were correlated with reduced hospitalization times (≤25 days) in recipients. Recipients who required moderate/high levels of noradrenaline for weaning off cardiopulmonary bypass were associated with lower donor concentrations of sTNFR2 (P =0.028) and IL-6 (P =0.001). Conclusion: High levels of sTNFR1, sTNFR2, IL-6 and IL-10 in donors were associated with enhanced evolution in recipients. Allografts from older donors, or from those treated with noradrenaline doses >0.23 µg/kg/min, were more frequently affected by primary graft dysfunction within 30 days of surgery.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Doadores de Tecidos , Norepinefrina/administração & dosagem , Transplante de Coração/normas , Disfunção Primária do Enxerto/sangue , Período Pós-Operatório , Biomarcadores/sangue , Norepinefrina/efeitos adversos , Estudos Prospectivos , Fatores Etários , Transplante de Coração/mortalidade , Interleucinas/análise , Receptores do Fator de Necrose Tumoral/análise , Seleção do Doador/normas , Disfunção Primária do Enxerto/etiologia , Aloenxertos/fisiopatologiaRESUMO
ABSTRACT Sesquiterpene lactones (SLs) are the active constituents of a variety of medicinal plants used in traditional medicine for the treatment of inflammatory diseases and other ailments. Objective In this study, we evaluated whether budlein A modulates the activation of innate and adaptive immune cells such as neutrophils and lymphocytes. Material and Methods Our research group has investigated several plant species and several compounds have been isolated, identified, and their medical potential evaluated. Budlein A is a SL isolated from the species Aldama buddlejiformis and A. robusta (Asteraceae) and shows anti-inflammatory and anti-nociceptive activities. Advances in understanding how plant-derived substances modulate the activation of innate and adaptive immune cells have led to the development of new therapies for human diseases. Results Budlein A inhibited MPO activity, IL-6, CXCL8, IL-10, and IL-12 production and induces neutrophil apoptosis. In contrast, budlein A inhibited lymphocyte proliferation and IL-2, IL-10, TGF-β, and IFN-γ production, but it did not lead to cell death. Conclusions Collectively, our results indicate that budlein A shows distinct immunomodulatory effects on immune cells.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Sesquiterpenos/farmacologia , Linfócitos T/efeitos dos fármacos , Lactonas/farmacologia , Anti-Inflamatórios/farmacologia , Neutrófilos/efeitos dos fármacos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Fatores de Crescimento Transformadores/análise , Fatores de Crescimento Transformadores/efeitos dos fármacos , Células Cultivadas , Reprodutibilidade dos Testes , Análise de Variância , Interleucina-8/análise , Interleucina-8/efeitos dos fármacos , Interleucinas/análise , Apoptose/efeitos dos fármacos , Peroxidase/análise , Peroxidase/efeitos dos fármacos , Asteraceae/química , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Citometria de FluxoRESUMO
ABSTRACT CONTEXT AND OBJECTIVE: Bacterial vaginosis occurs frequently in pregnancy and increases susceptibility to sexually transmitted infections (STI). Considering that adolescents are disproportionally affected by STI, the aim of this study was to evaluate the cervicovaginal levels of interleukin (IL)-1 beta, IL-6, IL-8 and bacterial sialidase in pregnant adolescents with bacterial vaginosis. DESIGN AND SETTING: Cross-sectional study at mother and child referral units in Belém, Pará, Brazil. METHODS: Vaginal samples from 168 pregnant adolescents enrolled were tested for trichomoniasis and candidiasis. Their vaginal microbiota was classified according to the Nugent criteria (1991) as normal, intermediate or bacterial vaginosis. Cervical infection due to Chlamydia trachomatisand Neisseria gonorrhoeae was also assessed. Cytokine and sialidase levels were measured, respectively, using enzyme-linked immunosorbent assays and MUAN conversion in cervicovaginal lavages. Forty-eight adolescents (28.6%) were excluded because they tested positive for some of the infections investigated. The remaining 120 adolescents were grouped according to vaginal flora type: normal (n = 68) or bacterial vaginosis (n = 52). Their cytokine and sialidase levels were compared between the groups using the Mann-Whitney test (P < 0.05). RESULTS: The pregnant adolescents with bacterial vaginosis had higher levels of IL-1 beta, IL-6 and IL-8 (P < 0.05). Sialidase was solely detected in 35 adolescents (67.2%) with bacterial vaginosis. CONCLUSIONS: Not only IL-1 beta and sialidase levels, but also IL-6 and IL-8 levels are higher in pregnant adolescents with bacterial vaginosis, thus indicating that this condition elicits a more pronounced inflammatory response in this population, which potentially increases vulnerability to STI acquisition.
RESUMO CONTEXTO E OBJETIVO: A vaginose bacteriana é uma condição, comum em gestantes, que aumenta a susceptibilidade a infecções sexualmente transmissíveis (IST). Considerando que adolescentes são desproporcionalmente afetadas por IST, o objetivo deste estudo foi avaliar os níveis cervicovaginais de interleucina (IL)-1 beta, IL-6, IL-8 e sialidases bacterianas em gestantes adolescentes com vaginose bacteriana. DESENHO DO ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal em Unidade de Referência Materno Infantil (UREMIA), Belém, Pará, Brasil. MÉTODOS: Amostras vaginais das 168 gestantes adolescentes incluídas foram testadas para tricomoníase e candidíase e a microbiota vaginal foi classificada em normal, intermediária e vaginose bacteriana, segundo os critérios de Nugent (1991). Infecções cervicais por Chlamydia trachomatis eNeisseria gonorrhoeae também foram avaliadas. Os níveis de citocinas e sialidades foram quantificados, respectivamente, por método imunoenzimático e pela conversão do MUAN nos lavados cervicovaginais. Foram excluídas 48 (28,6%) adolescentes positivas para alguma das infecções investigadas. As 120 gestantes remanescentes foram agrupadas de acordo com o padrão de flora vaginal em: normal (n = 68) e vaginose bacteriana (n = 52). Níveis de citocinas e sialidases foram comparados pelo teste de Mann-Whitney, P < 0,05. RESULTADOS: As gestantes adolescentes com vaginose bacteriana entre os grupos apresentaram níveis aumentados de IL-1 beta, IL-6 and IL-8 (P < 0,05). Sialidases foram exclusivamente detectadas em 35 (67,2%) adolescentes com vaginose bacteriana. CONCLUSÕES: Não apenas a IL-1 beta e as sialidases estão aumentadas em gestantes adolescentes com vaginose bacteriana, mas também IL-6 e IL-8, indicando resposta inflamatória mais pronunciada dessa alteração de microbiota nesta população, potencializando a vulnerabilidade à aquisição de IST.
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Adolescente , Feminino , Humanos , Gravidez , Adulto Jovem , Interleucinas/análise , Neuraminidase/análise , Vaginose Bacteriana/patologia , Colo do Útero/microbiologia , Estudos Transversais , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Interleucina-1/análise , /análise , /análise , Medição de Risco , Fatores de Risco , Doenças Bacterianas Sexualmente Transmissíveis/microbiologia , Fatores Socioeconômicos , Estatísticas não Paramétricas , Vagina/microbiologiaRESUMO
PURPOSE: To evaluate the level of cytokines and keratinocyte growth factor (KGF) or Fibroblast Growth Factor 7 (FGF-7) in the culture medium of cultured human dermal fibroblasts from patients with large burn in comparison to small burn. METHODS: Fibroblasts of 10 patients (four large burns, four small burns and two controls) were initiated by the enzymatic method using collagenase. Cytokines and KGF in the supernatant of the culture medium was measured by, respectively, flow cytometry using Cytometric Bead Array Human Inflammation kit (CBA, BD Biosciences, USA) and the enzyme immunoassay method using the Quantikine (r) Human KGF. The experiments were performed in triplicate. RESULTS: The expression of IL-12 protein in patients with large burns showed a tendency to increase. IL- 6, IL- 10, and IL- 1beta were observed no difference. For IL - 8, TNF - alpha and KGF was observed a significant difference between the expression in large and small burned patient. CONCLUSION: That IL-8, TNF-alpha and KGF showed higher expression in cultured fibroblasts of large burned patients. .
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Adulto , Feminino , Humanos , Masculino , Queimaduras/metabolismo , Meios de Cultura/química , /análise , Fibroblastos/metabolismo , Interleucinas/análise , Pele/lesões , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Queimaduras/patologia , Células Cultivadas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Citometria de Fluxo , /metabolismo , Interleucinas/metabolismo , Pele/patologia , Fatores de Tempo , Fator de Necrose Tumoral alfa/metabolismoRESUMO
A lipoaspiração permanece como um dos procedimentos mais realizados pelos cirurgiões plásticos (1-3). O aumento da segurança no ambiente cirúrgico, o refinamento da técnica e a satisfação das pacientes contribuem para a popularidade desta intervenção idealizada por Ilouz, em 1979 (4). Tem-se observado, ainda, tanto no ambiente médico quanto na mídia, uma crescente preocupação não apenas com a nova forma dos pacientes, mas também com a segurança. O tecido adiposo atua como um verdadeiro órgão endócrino e é o principal depósito de triglicerídeos, que têm uma relação clássica com doença aterosclerótica e resistência insulínica (6, 7). Estudos recentes ligaram ainda o metabolismo lipídico dos adipócitos à manutenção de um estado inflamatório sistêmico de baixo grau, através de vários mediadores (8-10). Há evidências científicas (11) que mostram o aumento do percentual de obesos em nosso país e uma importante taxa de pessoas, com sobrepeso. Este estudo também relaciona a prevalência de diabetes e de hipertensão. A clássica inter-relação entre a quantidade de gordura corporal e as chamadas doenças metabólicas tem suscitado a investigação dos elementos envolvidos neste processo e de tratamentos para o controle dos mesmos. A descoberta da leptina na década de 1990 (12) chamou a atenção para a propriedade reguladora do tecido adiposo. Estudos posteriores (5, 13) relacionaram ainda a síntese de outros fatores. Decidimos fazer uma revisão da literatura para esclarecer o estágio atual das pesquisas, tentando ordená-las de forma didática para melhor compreensão e auxílio para uma conduta mais segura e eficiente nos pacientes submetidos à lipoaspiração.
Liposuction is one of the most frequently performed procedures by plastic surgeons. The increased safety associated with the surgical settings, technical refinements, and level of patient satisfaction have contributed to the popularity gained by this intervention since it was first introduced by Ilouz in 1979 (4). Moreover, among medical communities and the media, concerns have risen regarding not only the drastic changes in patients' appearance but also the safety of the procedure. Fat tissue is known to act as a legitimate endocrine organ (5), being the primary depository for triglycerides, which classically relate to atherosclerosis and insulin resistance (6, 7). Recent work has linked lipid metabolism in adipocytes to the maintenance of low levels of systemic inflammation through a series of mediators (8-10). Scientific evidence (11) revealed an increase in the percentage of obese people in our country, as well as a considerable proportion of overweight people. This study also investigates the relationship between the prevalence of diabetes and hypertension. The classic association between body mass index and common metabolic diseases has led to investigations focused on several factors involved in this relationship, along with research work directed at the treatments available. The discovery of leptin in the 1990s (12) highlights the regulatory properties of the adipose tissue, whereas recent studies (5, 13) have established a link with the synthesis of other factors. In this study, we aimed to perform a review of literatures that discuss the current state-of-the-art of scientific research, in which we organized published works in a didactic manner in order to facilitate better understanding, and promote the safety and efficacy of liposuction.
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Humanos , História do Século XXI , Cirurgia Plástica , Triglicerídeos , Lipectomia , Tecido Adiposo , Colesterol , Fatores de Risco , Interleucinas , Fator de Necrose Tumoral alfa , Revisão , Leptina , Estudo de Avaliação , Diabetes Mellitus , Hipertensão , Cirurgia Plástica/métodos , Triglicerídeos/análise , Triglicerídeos/metabolismo , Lipectomia/métodos , Lipectomia/estatística & dados numéricos , Tecido Adiposo/metabolismo , Tecido Adiposo/patologia , Colesterol/metabolismo , Interleucinas/análise , Interleucinas/metabolismo , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Fator de Necrose Tumoral alfa/metabolismo , Leptina/metabolismo , Diabetes Mellitus/prevenção & controle , Hipertensão/prevenção & controleRESUMO
PURPOSE: To evaluate the effect of corticosteroids on intestinal and liver interleukin profile in an experimental model of gastroschisis in fetal rats. METHODS: Sprague-Dawley rats at 19.5 days of gestation had its fetuses operated for the creation of gastroschisis. Two groups of fetuses were studied with and without maternal administration of dexamethasone. Each group was composed of fetuses who underwent gastroschisis (G), control fetuses without manipulation (C) and sham fetuses (S). A dosage of the following interleukins was carried out in fetal intestinal and liver tissues: IL-1, IL-6, IL-10, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interferon-gamma (IFN-γ). The differences between the groups and subgroups were tested by ANOVA with Tukey post-test, with significant values of p<0.05. RESULTS: Dexamethasone led to an increase in intestinal and liver IL-6 (p<0.05) and a decrease in intestinal TNF-α (p<0.001) in fetuses with gastroschisis. CONCLUSION: Corticosteroids had an effect on the intestinal interleukin profile and a small effect on the liver interleukin profile due to immunological immaturity of the fetus, and also of fetuses with gastroschisis. The steroid action may not be exclusively anti-inflammatory, but also pro-inflammatory, varying with time of pregnancy.
OBJETIVO: Avaliar a ação do corticosteroide no perfil de interleucinas intestinais e hepáticas no modelo experimental de gastrosquise em fetos de ratos. MÉTODOS: Ratas Sprague-Dawley com 19,5 dias de gestação tiveram fetos operados para criação de gastrosquise. Dois grupos de fetos foram estudados: com e sem administração materna de dexametasona. Cada grupo foi composto por fetos submetidos a gastrosquise (G), fetos controles sem manipulação (C) e fetos sham (S). Realizou-se a dosagem das seguintes interleucinas no tecido intestinal e hepático fetal: IL-1, IL-6, IL-10, fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α) e interferon-gama (IFN-γ). As diferenças entre os grupos e subgrupos foram testadas pelo teste de ANOVA com pós-teste de Tukey, com valores significativos de p<0,05. RESULTADOS: A dexametasona levou a um aumento da IL-6 intestinal e hepática (p<0,05) e a uma diminuição do TNF-α intestinal (p<0,001) em fetos com gastrosquise. CONCLUSÃO: O corticosteróide apresentou efeito sobre o perfil de IL intestinal e pouco na hepática, devido a imaturidade imunológica dos fetos e também dos fetos com gastrosquise a ação do esteróide pode não ser exclusivamente anti-inflamatória, mas também pró inflamatória.
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Animais , Feminino , Gravidez , Ratos , Citocinas/análise , Dexametasona/farmacologia , Gastrosquise/tratamento farmacológico , Glucocorticoides/farmacologia , Intestinos/efeitos dos fármacos , Fígado/efeitos dos fármacos , Citocinas/metabolismo , Modelos Animais de Doenças , Gastrosquise/embriologia , Gastrosquise/metabolismo , Interferon gama/análise , Interferon gama/metabolismo , Interleucinas/análise , Interleucinas/metabolismo , Intestinos/metabolismo , Fígado/metabolismo , Ratos Sprague-Dawley , Fator de Necrose Tumoral alfa/análise , Fator de Necrose Tumoral alfa/metabolismoRESUMO
JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: Alguns estudos demonstraram que a cetamina inibe a produção de citocinas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito analgésico preemptivo e citocinas plasmáticas (IL-6, TNF-α e IL-10) de S(+)-cetamina por via peridural em histerectomia. MÉTODO: Foi realizado estudo duplo-encoberto em 29 pacientes. Pacientes do Grupo 1 receberam 13 mL de bupivacaína a 0,25 por cento com 25 mg de S(+)-cetamina 30 minutos antes da incisão cirúrgica, e 15 mL de solução salina fisiológica, 30 minutos após, por via peridural. Pacientes do Grupo 2 receberam 15 mL de salina 30 minutos antes da incisão cirúrgica, seguido por 13 mL de bupivacaína 0,25 por cento, mais 25 mg de S (+)-cetamina 30 minutos após. A analgesia pós-operatória foi feita com bupivacaína e fentanil por via peridural. Quando necessário, foi utilizado 1 g de dipirona. Foram avaliados: concentração de citocinas, intensidade da dor, o tempo da primeira solicitação de analgésico e a quantidade total de analgésico utilizado. RESULTADOS: O tempo para a primeira solicitação de analgésico foi de 61,5 minutos no Grupo 1 e 69,0 no Grupo 2, sem diferença entre os grupos. Não houve diferença entre os grupos para a dose total de fentanil usada no Grupo 1 (221,4 µg) e Grupo 2 (223,3 µg). Foi obtido efeito analgésico semelhante nos grupos, exceto em T12 (Grupo 1 = 2,4 ± 3,2; Grupo 2 = 5,5 ± 3,4). Não foi observada diferença entre os grupos na concentração de citocinas. CONCLUSÕES: A injeção de 25 mg de S(+)-cetamina por via peridural antes da incisão reduziu a intensidade da dor apenas 12 horas após a incisão cirúrgica e não alterou a concentração de citocinas.
BACKGROUND AND OBJECTIVES: Some studies showed that ketamine inhibits the production of cytokines. The objective of this study was to evaluate the preemptive analgesic effect of epidural S(+)-ketamine in hysterectomy and plasmatic cytokines (IL-6, TNF-α and IL-10). METHOD: A double-blinded study with 29 patients was conducted. Patients in Group 1 received 13 mL of 0.25 percent bupivacaine with 25 mg of S(+)ketamine 30 minutes before surgical incision and 15 mL of saline solution via the epidural route 30 minutes after. Patients in Group 2 received 15 mL of saline solution 30 minutes before the surgical incision, followed by 13 mL of 0.25 percent bupivacaine with 25 mg of S(+)-ketamine 30 minutes after. Postoperative analgesia was made with epidural bupivacaine and fentanyl. Dipyrone 1 g was used whenever required. The following paramenters were evaluated: concentration of cytokines, intensity of pain, time of first request of analgesic and total quantity of analgesic used. RESULTS: Time for the first request for analgesics was 61.5 minutes in Group 1 and 69.0 in Group 2, without difference between these groups. There was no difference for total dose of fentanyl used in Group 1 (221.4 µg) and Group 2 (223.3 µg). A similar analgesic effect was obtained in both groups, except in T12 (Group 1 = 2.4 ± 3.2; Group 2 = 5.5 ± 3.4). No differences in concentration of cytokines were observed. CONCLUSIONS: The epidural injection of 25 mg S(+)-ketamine before incision reduced the pain intensity only 12 hours after surgical incision and did not alter concentration of cytokines.
JUSTIFICATIVA Y OBJETIVOS: Algunos estudios han demostrado que la cetamina inhibe la producción de citocinas. El objetivo de este estudio, fue evaluar el efecto analgésico de prevención y citocinas plasmáticas (IL-6, TNF-α y IL-10) de S(+)-cetamina por vía epidural en la histerectomía. MÉTODO: Fue realizado un estudio doble ciego en 29 pacientes. Pacientes del Grupo 1 recibieron 13 mL de bupivacaína al 0,25 por ciento con 25 mg de S(+)-cetamina 30 minutos antes de la incisión quirúrgica, y 15 mL de solución salina fisiológica 30 minutos después de la incisión por vía epidural. Pacientes del Grupo 2, recibieron 15 mL de salina 30 minutos antes de la incisión quirúrgica, seguido de 13 mL de bupivacaína al 0,25 por ciento, más 25 mg de S (+)-cetamina 30 minutos después. La analgesia postoperatoria se realizó con bupivacaína y fentanil por vía epidural. Cuando fue necesario, se usó 1 g de dipirona. Se evaluaron: la concentración de citocinas, la intensidad del dolor, el tiempo de la primera solicitación del analgésico, y la cantidad total de analgésico utilizado. RESULTADOS: El tiempo para la primera solicitación de analgésico fue de 61,5 minutos en el Grupo 1 y 69,0 en el Grupo 2, sin haber diferencias entre los grupos. No hubo diferencias entre los grupos para la dosis total de fentanil usada en el Grupo 1 (221,4 µg) y en el Grupo 2 (223,3 µg). Se obtuvo un efecto analgésico parecido en los grupos, con excepción en T12 (Grupo 1 = 2,4 ± 3,2; Grupo 2 = 5,5 ± 3,4). No fue observada diferencia entre los grupos en la concentración de citocinas. CONCLUSIONES: La inyección de 25 mg de S(+)-cetamina por vía epidural antes de la incisión, redujo la intensidad del dolor solamente 12 horas después de la incisión quirúrgica y no alteró la concentración de citocinas.
Assuntos
Humanos , Feminino , Adulto , Citocinas/análise , Citocinas/farmacologia , Interleucinas/análise , Ketamina/farmacologia , Medição da Dor , Anestesia por Condução , HisterectomiaRESUMO
A interleucina 10 (IL-10) é uma importante citocina anti-inflamatória e imunossupressora que é produzida por uma variedade de células do sistema imune, incluindo linfócitos T e B, células monocíticas, células Natural Killer, células dendríticas, eosinófilos e neutrófilos. O receptor de IL-10 é composto por duas cadeias polipeptídicas denominadas IL-10R1 e IL-10R2. A cadeia IL-10R1 exibe alta afinidade por IL-10 e é responsável pela ligação inicial com a citocina. Depois da ligação entre a IL-10 e a cadeia IL-10R1, a cadeia IL-10R2 se junta ao complexo protéico formado e é realizada a sinalização para o citoplasma da célula alvo. Existem evidências de que a IL-10 participa na susceptibilidade de seres humanos e cães a leishmaniose visceral. Além disso, a imunização de animais com antígenos e o bloqueio concomitante da sinalização por IL-10 pode favorecer a indução de respostas imunes celulares (Th1), úteis no combate a infecções por patógenos intracelulares.OBJETIVO: O objetivo do presente projeto foi produzir o receptor solúvel de IL-10 (domínio extracitoplasmático da cadeia IL-10R1, com atividade antagonista) recombinante (rcasIL-10R1), visando estudos futuros de imunomodulação em cães. METODOLOGIA: Para isso, foram realizadas as seguintes etapas: 1) obtenção de uma construção de DNA codificante de rcasIL-10R1 em um cromossoma artificial de baculovírus desprovido dos genes da catepsina e chitinase, 2) transfecção de células de insetos, obtenção de partículas virais e titulação viral (P1), 3) amplificação e titulação viral (P2), 4) ensaio de otimização para expressão da proteína recombinante em células High five; 5) produção da proteína recombinante em celulas High five e purificação por cromatografia de afinidade e 6) avaliação da capacidade de rcasIL-10R1 bloquear a sinalização de IL-10, utilizando-se células MC/9. RESULTADOS: A julgar pelo sequenciamento de DNA do inserto na construção plasmídeal carreadora (pFastBac1-GP64-casIL-10R1) e da amplificação por PCR do segmento de DNA contendo o inserto no cromossoma artificial do baculovírus, a obtenção de baculovírus recombinante codificando casIL-10R1 foi realizada com sucesso. O ensaio de otimização da produção da rcasIL-10R1 realizado com células de inseto da linhagem High Five mostrou as melhores condições para foram multiplicidade de infecção (MOI) 5 e tempo de infecção (TOI) de 72h. A proteína recombinante produzida e purificada mostrou uma banda principal de 42 kDa pela análise por eletroforese em gel de poliacrilamida e o rendimento foi de 2,8 mg por litro de cultura. O ensaio realizado com células MC/9 cultivadas na presença de IL-4 e IL-10 com ou sem rcasIL-10R1 mostrou que a proteína recombinante produzida inibiu parcialmente a proliferação das células, sugerindo o bloqueio da sinalização através de IL-10. CONCLUSÕES: Portanto, no presente trabalho rcasIL-10R1 com capacidade de bloquear a sinalização por IL-10 foi produzido com sucesso, abrindo a perspectiva de futuros estudos de imunomodulação em cães.
INTRODUCTION: Interleukin 10 (IL-10) is an important anti-inflammatory and immunosuppressive cytokine which is produced by a variety of immune cells, including T and B lymphocytes, monocytes, natural killer and dendritic cells, eosinophils and neutrophils. The IL-10 receptor is composed of two polypeptide chains called IL-10R1 and IL-10R2. IL-10R1 chain exhibits high affinity for IL-10 and is responsible for initial binding to the cytokine. After IL-10 binding to IL-10R1, IL-10R2 joins the protein complex formed and signaling to the cytoplasm of the target cell. There is evidence that IL-10 participates in the susceptibility of human and dog visceral leishmaniasis. Furthermore, immunization of animals with antigens and concomitant blockade of signaling by IL-10 may promote the induction of cellular immune responses (Th1), useful in combating infections caused by intracellular pathogens. OBJECTIVE: The objective of this project was to produce recombinant soluble receptor IL 10 (extracytoplasmic domain of IL-10R1 chain, with antagonist activity) (rcasIL10R1), aiming future studies of immunomodulation in dogs. METHODOLOGY: For this, the following steps were carried out: 1) obtaining a DNA construction encoding casIL-10R1 in an artificial chromosome baculovirus knockout of the cathepsin and chitinase genes, 2) insect cell transfection, obtaining viral particles and viral titration (P1) 3) amplification and viral titration (P2), 4) optimization assay for the recombinant protein production in High Five cells; 5) production of recombinant protein and purification and by affinity chromatography and 6) evaluation of rcasIL-10R1 ability to block IL-10 signaling, using MC / 9 cells. RESULTS: The results of DNA sequencing of shuttle plasmid construction (pFastBac1GP64-casIL-10R1) and PCR of the artificial chromosome baculovírus containing casIL-10R1 insert showed that recombinant baculovirus was successfully obtained. The rcasIL-10R1 expression optimization assay in High Five cells showed that the best conditions were multiplicity of infection (MOI) 5 and time of infection (TOI) 72 h. The recombinant protein produced and purified displayed a major band of 42 kDa by polyacrylamide gel electrophoresis and the yield was 2.8 mg per liter of culture. MC/9 cells cultured in presence of IL-4 and IL-10 proliferated less intensely when rcasIL-10R1 was added, suggesting that rcasIL-10R1 blocked IL-10 signaling...
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Animais , Interleucinas/análise , Interleucinas/imunologia , Interleucinas/provisão & distribuição , Interleucinas/química , Interleucinas/sangue , Interleucinas/síntese químicaRESUMO
American tegumentary leishmaniasis presents as two major clinical forms: localized cutaneous leishmaniasis (LCL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The immune response in leishmaniasis is efficiently evaluated by the response to Leishmania antigen through the Montenegro skin test (MST). Both LCL and MCL present positive response to MST, indicating that the patients present cell-mediated immunity against the parasite - Leishmania. In spite of the presence of immunity in MCL, this is not sufficient to stop disease progression and prevent resistance to treatment. In this study we demonstrated interleukin (IL) 2, 4, 5 and interferon (IFN) gamma expression in biopsies of MST of ten patients with American tegumentary leishmaniasis. The obtained results were compared between LCL (n = 5) and MCL (n = 5) patients. The MST of MCL patients displayed a higher expression of IL-2, IL-4 and IL-5, in comparison to LCL. There was no significant difference in IFN-gamma expression between groups. The obtained results suggest the role of IL-4 and IL-5 in the maintenance of the immunopathogenic mechanism of the destructive lesions that characterize MCL.
A leishmaniose tegumentar americana apresenta duas formas clínicas mais comuns: a leishmaniose cutânea localizada e a leishmaniose cutâneo-mucosa. A imunidade da leishmaniose é avaliada pela resposta ao antígeno Leishmania através da Intradermorreação de Montenegro. Estas duas formas apresentam resposta positiva, indicando que o paciente apresenta imunidade celular contra o parasita Leishmania. Apesar da presença da imunidade celular na leishmaniose cutâneo-mucosa, esta não é suficiente para barrar a progressão da doença e a resistência ao tratamento. Neste estudo, detectamos quatro citocinas por imunohistoquímica, IL-2, IL-4, IL-5 e IFN-gama nas biópsias da intradermorreação de Montenegro de pacientes com leishmaniose tegumentar americana (n = 10), cinco com leishmaniose cutânea e cinco com cutâneo-mucosa. Os resultados mostraram uma alta expressão significativa de IL-2, IL-4, IL-5 na leishmaniose cutâneo-mucosa comparada com a leishmaniose cutânea localizada, mas sem diferença significante na expressão do IFN-γ entre os grupos. Estes resultados sugerem a importância da participação da citocina IL-4 e IL-5 na manutenção do mecanismo imunopatogênico das lesões destrutivas da forma cutâneo-mucosa.
Assuntos
Adulto , Idoso de 80 Anos ou mais , Animais , Feminino , Humanos , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Interferon gama/análise , Interleucinas/análise , Leishmaniose Cutânea/imunologia , Imuno-Histoquímica , Testes Intradérmicos , Leishmaniose Mucocutânea/imunologia , Adulto JovemRESUMO
A proteína C reativa de alta sensibilidade vem sendo proposta como um biomarcador de desfechos cardiovasculares desde a década passada, quando foram descritos os primeiros estudos observacionais sugerindo um promissor valor preditivo, tanto para desfechos coronários como para acidente vascular cerebral isquêmico. Em paralelo, cresceram as evidencias de que a aterosclerose, o substrato comum dessas doenças cardiovasculares, seja um contínuo processo inflamatório vascular. Dessa forma, a busca por biomarcadores inflamatórios tornou-se foco de grande interesse, determinando a realização de importantes estudos clínicos e experimentais. Nois dois últimos anos, o papel da proteína C-reativa foi mais firmemente estabelecido com base no estudo JUPITER e em meta-análise para desfechos cardiovasculares e mortalidade total. De fato, a utilização de uma estatina efetiva nesses pacientes com valores relativamente normais de colesterol de lipoproteínas de baixa densidade (LDL-colesterol), mas com níveis elevados de proteína C-reativa de alta sensibilidade...
Highly-sensitive C-reactive protein has been proposed as a marker of cardiovascular events since the last decade, when the first observational studies showed its promising predictive value for both coronary events and ischemic stroke. Meanwhile, there has been increasing evidences that atherosclerosis, the common aspect of these cardiovascular diseases, is a continuous inflammatory process. Therefore, the search for inflammatory biomarkers has become an important focus of interest, leading to the conduction of important clinical and experimental investigations. In the last two years, the role of C-reactive protein was firmly established on basis of the JUPITER trial and in recent meta-analysis for cardiovascular events and total mortality. In fact, the use of effective statin on patients with relatively normal low-density lipoprotein cholesterol levels (LDL-cholesterol), but with high levels of C-reactive protein was associated with a substantial decrease in cardiovascular events...