Development of a molecular xenomonitoring protocol to assess filariasis transmission.

According to the World Health Organization, lymphatic filariasis (LF), a mosquito-borne neglected tropical disease (NTD), should be eliminated as a public health concern by the end of 2020. To this end, the goals of the Global Programme to Eliminate Lymphatic Filariasis (GPELF) include interrupting transmission through mass drug administration (MDA). After two decades, several countries have implemented MDA and are now ready to confirm whether transmission has been interrupted. The method for detecting the parasites in mosquito vectors known as xenomonitoring is a non-invasive tool for assessing the current transmission status of the filarial nematode Wuchereria bancrofti (which is responsible for 90% of cases) by their vectors. There are several methods available for detection of the worm in mosquito samples, such as dissection or polymerase chain reaction (PCR). However, most of these techniques still produce a considerable number of false-negative results. The present study describes a new duplex PCR protocol, which is an improvement on the traditional PCR methodology, enhanced by introducing the actin gene as an endogenous control gene. After adjusting the mosquito pool size, DNA extraction, and WbCx PCR duplex design, we achieved a reliable and sensitive molecular xenomonitoring protocol. This assay was able to eliminate 5% of false negative samples and detected less than one Wb larvae. This high sensitivity is particularly valuable after MDA, when prevalence declines. This new method could reduce the number of false-negative samples, which will enable us to improve our ability to generate accurate results and aid the monitoring strategies used by LF elimination programmes.

Detection of Wuchereria bancrofti in the city of São Luís, state of Maranhão, Brazil: New incursion or persisting problem?

BACKGROUND: The elimination of lymphatic filariasis (LF) from Brazil by 2020 was not accomplished; however, this goal can be achieved in the upcoming years with the assistance of specific strategies. The surveillance of LF can be performed using molecular xenomonitoring (MX), a noninvasive method used to infer the presence of the parasite in the human population. Herein, São Luís (state of Maranhão) was the first city to be investigated to identify whether LF transmission in Brazil has been interrupted and if there were any new incursions. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: Mosquitoes were collected by aspiration at 901 points distributed among 11 neighborhoods in São Luís with records of patients with microfilaremia. Pools of engorged or gravid Culex quinquefasciatus females were evaluated by WbCx duplex PCR with endogenous control for mosquitoes and target for W. bancrofti for determining the vector infection rate. Among the 10,428 collected mosquitoes, the most abundant species were C. quinquefasciatus (85%) and Aedes aegypti (12%). Significantly larger numbers of mosquitoes were collected from the neighborhoods of Areinha and Coreia (p<0.05). MX performed using PCR validated 705 pools of engorged or gravid females, fifteen of which were positive for Wuchereria bancrofti in two neighborhoods. CONCLUSIONS: The high density of engorged C. quinquefasciatus females per home, inadequate sanitation, and detection of W. bancrofti-infected mosquitoes in the city of São Luís represent a warning of the possible upsurge of LF, a disease that is still neglected; this underscores the need for the ostensive monitoring of LF in Brazil.

Xenomonitoramento molecular como ferramenta na vigilância após tratamento coletivo em Pernambuco e na verificação da transmissão da filariose linfática em São Luís - MA no período de 2015 a 2019

A filariose linfática é uma parasitose endêmica em várias regiões tropicais e subtropicais do mundo e no Brasil é causada pelo verme Wuchereria bancrofti, transmitido pelo mosquito Culex quinquefasciatus. A Organização Mundial de Saúde estabeleceu um Programa Global de Eliminação da Filariose Linfática (PGEFL) que tem como um dos pilares a eliminação da transmissão através do tratamento em massa da população humana com filaricidas. Nesse contexto, a Região Metropolitana do Recife (RMR) é a única área considerada endêmica no Brasil, e atualmente, está em fase de vigilância para verificar a interrupção do ciclo de transmissão ou a ressurgência de novos casos. O objetivo desse estudo foi avaliar por xenomonitoramento molecular (XM) o status da transmissão da filariose em municípios endêmicos da RMR e no município do São Luís (SL) - Maranhão para inquérito de avaliação da transmissão. Imagens de satélite e software de sistemas do ArcGIS 10.2 foram usados para marcar os pontos de coletas de mosquitos e foi desenvolvido um fluxograma de amostras para vigilância entomológica. Para análise dos dados utilizou-se o modelo Poolscreen que detecta a taxa de infecção vetorial (TIV). Um total de 20.833 fêmeas de C. quinquefasciatus foram avaliadas, sendo 3.929 em 11 áreas/SL e 16.904 em 15 áreas/RMR. Nos focos tratados da RMR a TIV foi nula (0%). Porém, áreas não tratadas da RMR, apresentaram TIV entre 0,08% e 2,34% em Nova Descoberta e Vila Popular, respectivamente. Assim como, em SL, onde obtivemos TIV de 0,13% e 0,98% nas amostras dos respectivos bairros Monte Castelo e Coreia de Baixo, demonstrando que há circulação de W. bancrofti nesses locais. Os resultados revelam que não há evidências de transmissão ativa de microfilárias nas áreas tratadas da RMR, diferente daquelas não tratadas e focos extintos, nas quais há necessidade de vigilância epidemiológica e entomológica para subsidiar o PGEFL. Sendo assim, o XM revelou-se um importante indicador da circulação de W. bancrofti em áreas sob investigação de transmissão, em razão de sua elevada sensibilidade para detectar o verme no mosquito vetor .

Xenomonitoramento molecular para avaliação da infecção vetorial por Wuchereria bancrofti em áreas endêmicas de filariose linfática na Região Metropolitana do Recife/PE / Molecular xenomonitoring for the evaluation of vector infection rate by Wuchereria bancrofti in endemic areas for lymphatic filariasis in Metropolitan Region of Recife/PE

A filariose linfática (FL) ou bancroftiana é uma doença parasitária causada por Wuchereria bancrofti, um verme filarial transmitido no Brasil pelo mosquito Culex quinquefasciatus. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) esta doença afeta 120 milhões de pessoas em 58 países. Portanto, para enfrentar a FL, a OMS lançou um programa global para eliminá-la até 2020 e o Brasil tornou signatário dessa proposta criando o Plano Nacional de Eliminação da Filariose Linfática (PNEFL). Atualmente, a Região Metropolitana do Recife (RMR) é uma área de importante transmissibilidade e, assim, foi preconizado o Tratamento Coletivo (TC) da população com o medicamento Dietilcarbamazina (DEC) e o controle vetorial para reduzir a transmissão da doença. Como ferramenta complementar, desde a vigilância até a verificação da eliminação, o xenomonitoramento molecular (baseado na PCR para detecção de W. bancrofti em mosquitos) é um importante método não invasivo para monitorar indiretamente se a transmissão de larvas de W. bancrofti está ocorrendo na população humana. A fim de verificar a taxa de infecção vetorial no mosquito C. quinquefasciatus pela W. bancrofti foram coletadas 43.981 fêmeas do mosquito em doze localidades na RMR. Além disso, foi desenvolvido um novo protocolo (PCR duplex) para o diagnóstico de infecção vetorial e o número ideal de fêmeas por pools foi estabelecido. Os resultados mostraram que Linha do Tiro (Recife), uma área com alto índice de microfilaremia na população humana, apresentou status de transmissão durante o TC com uma taxa de infecção vetorial de 0,80%, diferente das outras localidades com transmissão reduzida não foram detectados pools positivos. Portanto, observa-se que onde o TC é conduzido a taxa de infecção vetorial tende a ser reduzida. O xenomonitoramento molecular é um indicador importante para avaliação da eficiência das estratégias do PGEFL implantado em áreas endêmicas, até que ocorra a certificação da interrupção do ciclo de transmissão da filariose

Xenomonitoramento molecular para avaliação da infecção vetorial por Wuchereria bancrofti em áreas endêmicas de filariose linfática na Região Metropolitana do Recife/PE / Molecular xenomonitoring for the evaluation of vector infection rate by Wuchereria bancrofti in endemic areas for lymphatic filariasis in Metropolitan Region of Recife/PE

A filariose linfática (FL) ou bancroftiana é uma doença parasitária causada por Wuchereria bancrofti, um verme filarial transmitido no Brasil pelo mosquito Culex quinquefasciatus. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) esta doença afeta 120 milhões de pessoas em 58 países. Portanto, para enfrentar a FL, a OMS lançou um programa global para eliminá-la até 2020 e o Brasil tornou signatário dessa proposta criando o Plano Nacional de Eliminação da Filariose Linfática (PNEFL). Atualmente, a Região Metropolitana do Recife (RMR) é uma área de importante transmissibilidade e, assim, foi preconizado o Tratamento Coletivo (TC) da população com o medicamento Dietilcarbamazina (DEC) e o controle vetorial para reduzir a transmissão da doença. Como ferramenta complementar, desde a vigilância até a verificação da eliminação, o xenomonitoramento molecular (baseado na PCR para detecção de W. bancrofti em mosquitos) é um importante método não invasivo para monitorar indiretamente se a transmissão de larvas de W. bancrofti está ocorrendo na população humana. A fim de verificar a taxa de infecção vetorial no mosquito C. quinquefasciatus pela W. bancrofti foram coletadas 43.981 fêmeas do mosquito em doze localidades na RMR. Além disso, foi desenvolvido um novo protocolo (PCR duplex) para o diagnóstico de infecção vetorial e o número ideal de fêmeas por pools foi estabelecido. Os resultados mostraram que Linha do Tiro (Recife), uma área com alto índice de microfilaremia na população humana, apresentou status de transmissão durante o TC com uma taxa de infecção vetorial de 0,80 por cento, diferente das outras localidades com transmissão reduzida não foram detectados pools positivos. Portanto, observa-se que onde o TC é conduzido a taxa de infecção vetorial tende a ser reduzida. O xenomonitoramento molecular é um indicador importante para avaliação da eficiência das estratégias do PGEFL implantado em áreas endêmicas, até que ocorra a certificação da interrupção do ciclo de transmissão da filariose.

Xenomonitoramento molecular para avaliação da infecção vetorial por Wuchereria bancrofti em áreas endêmicas de filariose linfática na Região Metropolitana do Recife/PE / Molecular xenomonitoring for the evaluation of vector infection rate by Wuchereria bancrofti in endemic areas for lymphatic filariasis in Metropolitan Region of Recife/PE

A filariose linfática (FL) ou bancroftiana é uma doença parasitária causada por Wuchereria bancrofti, um verme filarial transmitido no Brasil pelo mosquito Culex quinquefasciatus. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) esta doença afeta 120 milhões de pessoas em 58 países. Portanto, para enfrentar a FL, a OMS lançou um programa global para eliminá-la até 2020 e o Brasil tornou signatário dessa proposta criando o Plano Nacional de Eliminação da Filariose Linfática (PNEFL). Atualmente, a Região Metropolitana do Recife (RMR) é uma área de importante transmissibilidade e, assim, foi preconizado o Tratamento Coletivo (TC) da população com o medicamento Dietilcarbamazina (DEC) e o controle vetorial para reduzir a transmissão da doença. Como ferramenta complementar, desde a vigilância até a verificação da eliminação, o xenomonitoramento molecular (baseado na PCR para detecção de W. bancrofti em mosquitos) é um importante método não invasivo para monitorar indiretamente se a transmissão de larvas de W. bancrofti está ocorrendo na população humana. A fim de verificar a taxa de infecção vetorial no mosquito C. quinquefasciatus pela W. bancrofti foram coletadas 43.981 fêmeas do mosquito em doze localidades na RMR. Além disso, foi desenvolvido um novo protocolo (PCR duplex) para o diagnóstico de infecção vetorial e o número ideal de fêmeas por pools foi estabelecido. Os resultados mostraram que Linha do Tiro (Recife), uma área com alto índice de microfilaremia na população humana, apresentou status de transmissão durante o TC com uma taxa de infecção vetorial de 0,80 por cento, diferente das outras localidades com transmissão reduzida não foram detectados pools positivos. Portanto, observa-se que onde o TC é conduzido a taxa de infecção vetorial tende a ser reduzida. O xenomonitoramento molecular é um indicador importante para avaliação da eficiência das estratégias do PGEFL implantado em áreas endêmicas, até que ocorra a certificação da interrupção do ciclo de transmissão da filariose (AU)

Xenomonitoramento molecular para avaliação da infecção vetorial por Wuchereria bancrofti em áreas endêmicas de filariose linfática na Região Metropolitana do Recife/PE / Molecular xenomonitoring for the evaluation of vector infection rate by Wuchereria bancrofti in endemic areas for lymphatic filariasis in Metropolitan Region of Recife/PE

A filariose linfática (FL) ou bancroftiana é uma doença parasitária causada por Wuchereria bancrofti, um verme filarial transmitido no Brasil pelo mosquito Culex quinquefasciatus. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) esta doença afeta 120 milhões de pessoas em 58 países. Portanto, para enfrentar a FL, a OMS lançou um programa global para eliminá-la até 2020 e o Brasil tornou signatário dessa proposta criando o Plano Nacional de Eliminação da Filariose Linfática (PNEFL). Atualmente, a Região Metropolitana do Recife (RMR) é uma área de importante transmissibilidade e, assim, foi preconizado o Tratamento Coletivo (TC) da população com o medicamento Dietilcarbamazina (DEC) e o controle vetorial para reduzir a transmissão da doença. Como ferramenta complementar, desde a vigilância até a verificação da eliminação, o xenomonitoramento molecular (baseado na PCR para detecção de W. bancrofti em mosquitos) é um importante método não invasivo para monitorar indiretamente se a transmissão de larvas de W. bancrofti está ocorrendo na população humana. A fim de verificar a taxa de infecção vetorial no mosquito C. quinquefasciatus pela W. bancrofti foram coletadas 43.981 fêmeas do mosquito em doze localidades na RMR. Além disso, foi desenvolvido um novo protocolo (PCR duplex) para o diagnóstico de infecção vetorial e o número ideal de fêmeas por pools foi estabelecido. Os resultados mostraram que Linha do Tiro (Recife), uma área com alto índice de microfilaremia na população humana, apresentou status de transmissão durante o TC com uma taxa de infecção vetorial de 0,80 por cento, diferente das outras localidades com transmissão reduzida não foram detectados pools positivos. Portanto, observa-se que onde o TC é conduzido a taxa de infecção vetorial tende a ser reduzida. O xenomonitoramento molecular é um indicador importante para avaliação da eficiência das estratégias do PGEFL implantado em áreas endêmicas, até que ocorra a certificação da interrupção do ciclo de transmissão da filariose (AU)