RESUMO
Corynebacterium pseudotuberculosis is the aetiological agent of caseous lymphadenitis (CLA), a debilitating disease of sheep and goats. Accurate diagnosis of CLA primarily relies on microbiological examination, followed by biochemical identification of isolates. In an effort to facilitate C. pseudotuberculosis detection, a multiplex PCR (mPCR) assay was developed targeting three genes of this bacterium: the 16S rRNA gene, rpoB and pld. This method allowed efficient identification of 40 isolates of this bacterium that had been identified previously by biochemical testing. Analysis of taxonomically related species did not generate the C. pseudotuberculosis mPCR amplification profile, thereby demonstrating the assay's specificity. As little as 1 pg of C. pseudotuberculosis genomic DNA was detected by this mPCR assay, demonstrating the sensitivity of the method. The detection limit in clinical samples was estimated to be 10(3) c.f.u. C. pseudotuberculosis could be detected directly in pus samples from infected sheep and goats (n=56) with a high diagnostic sensitivity (94.6 %). The developed assay significantly improves rapid C. pseudotuberculosis detection and could supersede bacteriological culture for microbiological and epidemiological diagnosis of CLA.
Assuntos
Corynebacterium pseudotuberculosis/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Animais , Sequência de Bases , Infecções por Corynebacterium/microbiologia , Infecções por Corynebacterium/veterinária , Doenças das Cabras/microbiologia , Cabras/microbiologia , Linfonodos/patologia , Dados de Sequência Molecular , RNA Bacteriano , Sensibilidade e Especificidade , Ovinos , Doenças dos Ovinos/microbiologia , Especificidade da Espécie , Supuração/microbiologiaRESUMO
Tuberculosis is an infectious, chronic, and worldwide disease. It has been known since the beginning of humanity and still negatively influences public health and livestock, especially, in Brazil, in the northeast. Etiologic agents are the mycobacteria of the Mycobacterium tuberculosis complex, which is the most important in mammals' involvement. The state of Bahia has 68.7% of its territory located in the semiarid region and holds the largest goat herd in the country. Goat breeding is a social and economic activity that adds value to this region. Up to the present, data on goat tuberculosis is unknown in this state. Thus, this study seeks data on tuberculosis prevalence in goats in a semiarid region of Bahia by using the comparative tuberculin test and multiplex polymerase chain reaction (PCR). A total of 600 adult animals of both sexes were evaluated. A prevalence of 0.33% (2/600) and 33.33% (1/3) properties were found for positive animals. Each assessed property had a questionnaire to analyze the epidemiological data management and relevant aspects for the disease occurrence. To confirm the positive tuberculin test results, PCR was used to detect and identify the pathogenic mycobacteria involved in the infection. It is concluded that most of the properties performing goat breeding in the region show low technification levels and promote farming between different species. Low prevalence of the disease alerts preventive measures to avoid major proportion situations that could influence the goat breeding in the state.
Assuntos
Animais , Tuberculina , Tuberculose/diagnóstico , Cabras/microbiologia , Teste Tuberculínico/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterináriaRESUMO
Corynebacterium pseudotuberculosis é um cocobacilo gram-positivo, patógeno intracelular facultativo de macrófagos, filogeneticamente relacionado com o Mycobacterium tuberculosis. É amplamente distribuído em algumas espécies de animais, causando a linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. A linfadenite caseosa, de ocorrência mundial, é uma doença infecciosa crônica cuja transmissão se dá principalmente através da pele. No presente experimento, foram estudados aspectos do reconhecimento antigênico, pela resposta humoral, em caprinos criados em regime extensivo, naturalmente infectados ou imunizados com uma vacina viva (cepa 1002), atenuada, desenvolvida pela Empresa Baiana de Desenvolvimento Agrícola (EBDA). As amostras de soros dos animais imunizados e de controle, coletadas mensalmente por um período de doze meses, foram analisadas pelo ensaio imunoenzimático ELISA e pelo Western blotting, utilizando-se como antígenos o extrato bacteriano contendo exotoxina e sonicado bacteriano de uma cepa selvagem e da cepa 1002. A análise através do Western blotting revelou que o padrão de antígenos reconhecidos pelos anticorpos séricos de animais imunizados, sem raça definida (SRD) ou de duas raças puras, bem como animais SRD naturalmente infectados, é semelhante, verificando-se bandas protéicas com pesos moleculares entre 20 e 94 kDa. Esta análise possibilitou observar-se que diferentes proteínas são reconhecidas ao longo da imunização.
Assuntos
Animais , Western Blotting , Corynebacterium pseudotuberculosis/isolamento & purificação , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Tuberculose dos Linfonodos/etiologiaRESUMO
Diferentes técnicas para isolar e descrever antígenos das frações secretadas de superfície e somáticas deCorynebacterium pseudotuberculosis foram estudadas por SDS-PAGE e imunoblot, utilizando-se pool de soros de cabras naturalmente infectadas. Os antígenos secretados foram obtidos do sobrenadante de cultura da bactéria cultivada em meio quimicamente definido ou em meio BHI (Brain Heart Infusion). A fração de superfície foi obtida por tratamento com NaCl 1M, e as frações somßticas foram obtidas por vários procedimentos (detergentes e ultra-som). Pela coloração por Coomassie blue, foram detectadas 20 bandas na fração secretada, 35 bandas no extrato de superfície e entre 40 e 50 bandas, a depender do processo de extração, na fração somßtica. Entre todas as frações estudadas, foram detectadas 16 proteínas imunorreativas. As bandas com pesos moleculares de 125, 108, 75, 68, 41, 40, 31 e 24 kDa foram reconhecidas commaior intensidade e todas elas foram encontradas na fração secretada. A utilização do meio quimicamente definido permitiu revelar, na fração secretada de C. pseudotuberculosis, a presença de proteínas de alto pesomolecular que não tinham sido previamente descritas.