Primary endemic Cryptococcosis gattii by molecular type VGII in the state of Pará, Brazil.

In order to study the infectious agents causing human disseminated cryptococcosis in the state of Pará, North Brazil, 56 isolates of Cryptococcusspp. (54 isolated from cerebral spinal fluid and two from blood cultures) from 43 cases diagnosed between 2003-2007 were analysed. The species were determined through morphological and physiological tests and genotypes were determined by URA5-RFLP and PCR-fingerprinting (wild-type phage M13). The following species and genotypes were identified: Cryptococcus neoformans VNI (28/56, 50%), Cryptococcus gattii VGII (25/56, 44.64%) and C. gattii VGI (3/56, 5.26%). The genotype VNI occurred in 12 out of 14 HIV-positive adults, whereas the genotype VGII occurred in 11 out of 21 HIV-negative adults (p < 0.02, OR = 6.6 IC95% 0.98-56.0). All patients less than 12 years old were HIV negative and six cases were caused by the VGII genotype, one by the VGI and one by VNI. Therefore, endemic primary mycosis in HIV-negative individuals, including an unexpectedly high number of children, caused by the VGII genotype deserves further study and suggests the need for surveillance on cryptococcal infection in the state of Pará, Eastern Amazon.

Cryptococcus gattii molecular type VGII as agent of meningitis in a healthy child in Rio de Janeiro, Brazil- report of an autochthonous case / Cryptococcus gattii tipo molecular VGII como agente causador de meningoencefalite em criança saudável no Rio de Janeiro, Brasil: relato de um caso autóctone

Cryptococcus gattii é causa de meningoencefalite em hospedeiros imunocompetentes, ocorrendo endemicamente em regiões tropicais e subtropicais. Recentemente foi causador de surtos na Ilha de Vancouver e na Columbia Britânica (Canadá). Nesta região de clima temperado, o tipo VGII é predominante. Relatamos um caso de meningoencefalite pelo C.gattii tipo VGII acometendo criança previamente saudável autóctone do Rio de Janeiro, região não endêmica do Brasil. O agente foi identificado por testes bioquímicos e o tipo molecular determinado através de URA5-RFLP. O presente relato enfatiza a necessidade de vigilância clínica para a meningite criptocóccica primária em áreas não endêmicas.

Cryptococcus gattii molecular type VGII as agent of meningitis in a healthy child in Rio de Janeiro, Brazil: report of an autochthonous case.

Cryptococcus gattii causes meningoencephalitis in immunocompetent hosts, occurring endemically in some tropical and subtropical regions. Recently, this fungus was involved in an outbreak in Vancouver Island and British Columbia (Canada). In this temperate region, the VGII type is predominant. The paper describes an autochthonous case of meningoencephalitis by C. gattii VGII in a previously health child in Rio de Janeiro, considered nonendemic region of Brazil. The fungus was identified by biochemical tests and the molecular type was determined by URA5-RFLP. The present report highlights the need for clinical vigilance for primary cryptococcal meningitis in nonendemic areas.

A 25-kDa serine peptidase with keratinolytic activity secreted by Coccidioides immitis.

Coccidioides immitis is the causative agent of coccidioidomycosis, a systemic mycosis that attacks humans and a wide variety of animals. In the present study, we showed that the C. immitis mycelial form is able to release proteolytic enzyme into the extracellular environment. Under chemically defined growth conditions, mycelia secreted seven distinct polypeptides ranging from 15 to 65 kDa and an extracellular peptidase of 25 kDa. This enzyme had its activity fully inhibited by phenylmethylsulphonyl fluoride, a serine peptidase inhibitor. Conversely, metallo, cysteine, and aspartyl peptidase inhibitors did not alter the 25-kDa enzyme behavior. This extracellular serine peptidase was able to degrade keratin, a fibrous protein that composes human epidermis. Additionally, this peptidase cleaved different protein substrates, including gelatin, casein, hemoglobin, and albumin. Curiously, an 18-kDa serine peptidase activity was evidenced solely when casein was used as the co-polymerized protein substrate into the gel. The existence of different secreted peptidases could be advantageous for the adaptation of C. immitis to distinct environments during its complex life cycle.

Cryptococcus gattii molecular type VGII as agent of meningitis in a healthy child in Rio de Janeiro, Brazil: report of an autochthonous case / Cryptococcus gattii tipo molecular VGII como agente causador de meningoencefalite em criança saudável no Rio de Janeiro, Brasil: relato de um caso autóctone

Cryptococcus gattii causes meningoencephalitis in immunocompetent hosts, occurring endemically in some tropical and subtropical regions. Recently, this fungus was involved in an outbreak in Vancouver Island and British Columbia (Canada). In this temperate region, the VGII type is predominant. The paper describes an autochthonous case of meningoencephalitis by C. gattii VGII in a previously health child in Rio de Janeiro, considered nonendemic region of Brazil. The fungus was identified by biochemical tests and the molecular type was determined by URA5-RFLP. The present report highlights the need for clinical vigilance for primary cryptococcal meningitis in nonendemic areas.

Cryptococcus gattii é causa de meningoencefalite em hospedeiros imunocompetentes, ocorrendo endemicamente em regiões tropicais e subtropicais. Recentemente foi causador de surtos na Ilha de Vancouver e na Columbia Britânica (Canadá). Nesta região de clima temperado, o tipo VGII é predominante. Relatamos um caso de meningoencefalite pelo C.gattii tipo VGII acometendo criança previamente saudável autóctone do Rio de Janeiro, região não endêmica do Brasil. O agente foi identificado por testes bioquímicos e o tipo molecular determinado através de URA5-RFLP. O presente relato enfatiza a necessidade de vigilância clínica para a meningite criptocóccica primária em áreas não endêmicas.

Primary endemic Cryptococcosis gattii by molecular type VGII in the state of Pará, Brazil

In order to study the infectious agents causing human disseminated cryptococcosis in the state of Pará, North Brazil, 56 isolates of Cryptococcusspp. (54 isolated from cerebral spinal fluid and two from blood cultures) from 43 cases diagnosed between 2003-2007 were analysed. The species were determined through morphological and physiological tests and genotypes were determined by URA5-RFLP and PCR-fingerprinting (wild-type phage M13). The following species and genotypes were identified: Cryptococcus neoformans VNI (28/56, 50 percent), Cryptococcus gattii VGII (25/56, 44.64 percent) and C. gattii VGI (3/56, 5.26 percent). The genotype VNI occurred in 12 out of 14 HIV-positive adults, whereas the genotype VGII occurred in 11 out of 21 HIV-negative adults (p < 0.02, OR = 6.6 IC95 percent 0.98-56.0). All patients less than 12 years old were HIV negative and six cases were caused by the VGII genotype, one by the VGI and one by VNI. Therefore, endemic primary mycosis in HIV-negative individuals, including an unexpectedly high number of children, caused by the VGII genotype deserves further study and suggests the need for surveillance on cryptococcal infection in the state of Pará, Eastern Amazon.

Autenticação molecular de 65 isolados clínicos e ambientais de Coccidioides spp. e seqüenciamento do gene CSA

Coccidioidomicose é micose sistêmica causada pelos fungos dimórficos Coccidioides immitis e C. posadasii , adquirida através de inalação de artroconídios infectantes. Em parasitismo, expressa forma característica em esférula, repleta de endósporos. Em saprofitismo e em cultivo as colônias possuem aspecto macroscópico algodoado, de cor branca a marrom-claro, e microscopicamente apresentam hifas hialinas, septadas e ramificadas com esp aços interseptais cheios de citoplasma alternados com áreas interseptais vazias, formando artroconídios intercalares, unidades infectantes facilmente aerossolizáveis. O semi-árido brasileiro foi recentemente incluído como área endêmica de coccidioidomicose. Por ser altamente infectante, é importante implantar uma técnica de identificação molecular de Coccidioides spp., para minimizar os riscos de manipulação do operador. Ta mbém é importante conhecer a dinâmica do fungo no Brasil através de um estudo de vari abilidade molecular. Este estudo objetivou identificar os isolados suspeitos por meio de marcador molecular específico (gene CSA) que reconhece o gênero, e analisar a variabilidade molecular de linhagens brasileiras de Coccidioides spp. através de sequenciamento A extração de ADN foi realizada de 65 linhagens (58 do Piauí, Brasil; seis dos Es tados Unidos da América (EUA) e uma da Argentina), mantidas em Coleção de Cultura conforme técnica previamente descrita (Burt et al, 1995). Para a identificação do gênero foi utilizado um par de primers específicos (Ci 1 \2013 5 \0301 AAG TTC TCA CTC CTC AGC GCT ATC G 3 \0301 e Ci 2 \2013 5 \0301 ACA TTA AGG TTC CTC CCC TTC AAC C 3 \0301) que se anela ao gene CSA . Para a tipagem molecular, foi realizada Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) com os primers específicos de 57 linhagens. Após es ta etapa, o produto amplificado foi purificado com kit de purificação e posteri ormente seqüenciado na Plataforma de Seqüenciamento de ADN PDTIS/FIOCRUZ. Como resultado, obtivemos 100% de positividade na identificação das linhagens estudadas e em nenhuma das linhagens controle foi detectada a banda, demonstr ando que o método foi 100% específico e sensível. No seqüenciamento do gene CSA , realizado de 57 linhagens, 56 foram caracterizadas como Coccidioides posadasii e uma linhagem, proveniente dos EUA, foi caracterizada como Coccidioides immitis