RESUMO
Culture conditions were developed that permit efficient incorporation of [(32)P]phosphate into nucleic acids of baker's yeast. RNA sufficiently labeled for sequence determination was obtained in this way. Pure "denaturable" leucine acceptor transfer RNA (tRNA(Leu)(3)) was isolated for this purpose.
Assuntos
Ácidos Nucleicos/biossíntese , Fosfatos/metabolismo , RNA de Transferência/isolamento & purificação , Saccharomyces/metabolismo , Cromatografia DEAE-Celulose , Eletroforese Descontínua , Leucina/metabolismo , Métodos , Desnaturação de Ácido Nucleico , Isótopos de Fósforo , RNA de Transferência/análiseRESUMO
Conditions for laboratory growth of the thermophilic alga Cyanidium caldarium at elevated temperatures have been developed. Growth characteristics of the organisms are described.
RESUMO
The nucleotide sequence of " denaturable"leucine acceptor transfer RNA (tRNA(Leu)(3)) from baker's yeast was determined on (32)P-labeled material. The molecule is 85 nucleotides long and can be folded into the "cloverleaf" model for secondary structure. The basis on which the sequence was deduced from the products of complete enzymatic digestion, prior to its unambiguous determination, is presented.
Assuntos
Nucleotídeos/análise , RNA de Transferência/análise , Saccharomyces/metabolismo , Sequência de Bases , Cromatografia , Eletroforese , Escherichia coli , Código Genético , Leucina/metabolismo , Modelos Estruturais , Desnaturação de Ácido Nucleico , RibonucleasesRESUMO
A microsatellite-containing 359-bp restriction fragment, isolated from the rat Pigr gene (murine polymeric immunoglobulin receptor gene) 3'-untranslated region (3'-UTR) and inserted into 3'-UTR or 3' flanking positions in transcription units of supercoiled plasmids, attenuates luciferase reporter gene expression in orientation- and position-dependent ways following transient transfection of human 293 cells. The same fragment stimulates orientation-dependent gene expression in a 5' flanking position. Plasmid linearization abrogates both orientation- and position-dependent responses. Cell-free translation reveals that 5' and 3' flanking expression responses are proportional to increased and decreased luciferase mRNA levels, whereas 3'-UTR expression is associated with control mRNA levels. Hypersensitivity to nucleases S1 and P1, gel mobility differences between supercoiled plasmids carrying opposing microsatellite orientations, and anomalous melting profiles of this fragment are also observed. These results suggest that functional pleiotropy of this fragment depends on the DNA context of its purine-rich microsatellite strand and on DNA supercoiling. Intramolecular triplexes stabilized by supercoiling and secondary structures of purine repeat-rich mRNAs may also confer regulatory properties to similar genomic elements.
Assuntos
Regiões 3' não Traduzidas/genética , DNA/química , DNA/genética , Regulação da Expressão Gênica , Repetições de Microssatélites/genética , Conformação de Ácido Nucleico , Receptores de Imunoglobulina Polimérica/genética , Regiões 3' não Traduzidas/metabolismo , Animais , Sequência de Bases , Linhagem Celular , DNA Super-Helicoidal/química , DNA Super-Helicoidal/genética , DNA Super-Helicoidal/metabolismo , Elementos Facilitadores Genéticos/genética , Genes Reporter/genética , Humanos , Dados de Sequência Molecular , Desnaturação de Ácido Nucleico , Especificidade de Órgãos , Plasmídeos/química , Plasmídeos/genética , Plasmídeos/metabolismo , Biossíntese de Proteínas , Ratos , Reprodutibilidade dos Testes , Especificidade da Espécie , Termodinâmica , Transcrição Gênica/genéticaAssuntos
Conformação de Ácido Nucleico , Fotoquímica , Polinucleotídeos/efeitos da radiação , Raios Ultravioleta , Nucleotídeos de Adenina/efeitos da radiação , Bacteriófagos/efeitos da radiação , Ciclobutanos , Nucleotídeos de Citosina/efeitos da radiação , Desoxirribonucleotídeos/efeitos da radiação , Metilação , Nucleotídeos/efeitos da radiação , RNA/efeitos da radiação , RNA de Transferência/efeitos da radiação , RNA Viral/efeitos da radiação , Efeitos da Radiação , Ribonucleotídeos/efeitos da radiação , Ribossomos/efeitos da radiação , Tiouridina/efeitos da radiação , Timidina/efeitos da radiação , Nucleotídeos de Timina/efeitos da radiação , Vírus do Mosaico do Tabaco/efeitos da radiação , Nucleotídeos de Uracila/efeitos da radiaçãoAssuntos
RNA , Sequência de Bases , Sítios de Ligação , Escherichia coli , Código Genético , Temperatura Alta , Matemática , Modelos Moleculares , Conformação de Ácido Nucleico , Oligonucleotídeos , Concentração Osmolar , Polinucleotídeos , Purinas , Pirimidinas , RNA/metabolismo , RNA Bacteriano , RNA de Transferência , Sódio , Espectrofotometria UltravioletaAssuntos
Polinucleotídeos/efeitos da radiação , Raios Ultravioleta , Dicroísmo Circular , Ciclobutanos , Estabilidade de Medicamentos , Cinética , Conformação Molecular , Concentração Osmolar , Fotoquímica , Poli A-U/efeitos da radiação , Poli U/efeitos da radiação , Efeitos da Radiação , Sódio , Espectrofotometria , Nucleotídeos de Uracila , Uridina , ÁguaAssuntos
Nucleotídeos de Adenina , Polinucleotídeos , Nucleotídeos de Uracila , Fenômenos Químicos , Química , Cinética , Sódio , EspectrofotometriaRESUMO
A significant level of correction of the mutation responsible for sickle cell anemia has been achieved in monkey COS-7 cells on a plasmid containing a beta-globin gene fragment. The plasmid was treated in vitro with a nucleic acid 'third strand' bearing a terminal photoreactive psoralen moiety that binds immediately adjacent to the mutant base pair. Following covalent attachment of the psoralen by monoadduct or diadduct formation to the mutant T-residue on the coding strand, the treated plasmid was transfected into the cells, which were then incubated for 48 h to allow the cellular DNA repair mechanisms to remove the photoadducts. Upon re-isolation and amplification of the transfected plasmid, sickle cell mutation correction, as determined by sequence analysis of both complementary strands, was established in a full 1%. This result encourages extension of the approach to correct the mutation directly on the chromosome.
Assuntos
Anemia Falciforme/terapia , Furocumarinas/genética , Terapia Genética/métodos , Globinas/genética , Plasmídeos/farmacologia , Transfecção/métodos , Anemia Falciforme/sangue , Animais , Células COS , Linhagem Celular , Chlorocebus aethiops , Adutos de DNA , Reparo do DNA , Engenharia Genética , Humanos , Mutação PuntualRESUMO
On the basis of chemical considerations and model building, the Watson-Crick concept of complementary base pairing is extended to a wider range of DNA pairs that A-T and G-C (including A-C, G-T, A-A, G-G and G-A) by invoking imino or enol tautomers (or protonated species) and synisomers. The virtual absence of these additional base pairs from DNA is explained in terms of the low frequency with which these unfavoured forms occur and the two-step mechanism of DNA synthesis, whereby residues are first incorporated by the DNA polymerase and then checked. This base-pairing hypothesis is used to explain the origin, nature and level of spontaneous substitution mutations, their enhancement by base analogues, and the unique effects of certain mutator alleles.
Assuntos
DNA , Modelos Biológicos , Mutação , 2-Aminopurina/metabolismo , Bromodesoxiuridina/metabolismo , Fenômenos Químicos , Química , DNA Nucleotidiltransferases/metabolismo , Replicação do DNA , Exonucleases/metabolismo , Ligação de Hidrogênio , Moldes GenéticosRESUMO
Base pairing in codon-anticodon interaction has been investigated in order to understand the basis on which particular base pairs have been selected for or against participation at the wobble position and the basis for codon-anticodon infidelity.
Assuntos
Anticódon , Códon , Biossíntese de Proteínas , RNA Mensageiro , RNA de Transferência , Adenina , Ligação de Hidrogênio , Inosina , Modelos Biológicos , Conformação Molecular , Conformação de Ácido Nucleico , Ribossomos/metabolismo , ÁguaRESUMO
Characteristic fluorescence excitation and emission is induced by either acetone-sensitized 313 nm irradiation of mixtures of 8-bromoadenosine and adenosine or 254 nm irradiation of oligo- and polynucleotides containing adenine neighbors. The acetone-sensitized reaction involves cleavage of bromine from 8-bromoadenosine with activation of C-8, leading to formation of an 8,8-adenosine dehydrodimer. Comparable fluorescence properties arise in the unsensitized photoreaction of dApdA, pdApdA, ApA, poly(dA), poly(A), poly(dA.dT), and poly(dA.U). The previously unidentified adenine ultraviolet photoproduct described by Porschke has been isolated as several variants from solutions of pdApdA and poly(dA) irradiated at 254 nm. Based upon fluorescence spectra and mass spectra, these variants are shown to contain the 8,8-adenine dehydrodimer moiety.