Molecular detection of Leptospira spp. in small wild rodents from rural areas of São Paulo State, Brazil

ABSTRACT Background: Leptospirosis represents a One Health issue, affecting humans and animals. This study investigated pathogenic leptospires in small wild rodents in São Paulo, Brazil. Methods: Kidney samples from 164 rodents underwent qPCR testing, targeting pathogenic Leptospira spp. Results: Thirty-five animals (21.34%) tested positive, including five rodent species: Akodon montensis (2/21; 9.5%), Necromys lasiurus (1/4; 25%), Oligoryzomys nigripes (24/92; 26.1%), Oligoryzomys flavescens (5/26; 19.2%), and Sooretamys angouya (3/14; 21.4%). Botucatu municipality exhibited the highest prevalence, with 42.5% (20/47) of the animals testing positive. Conclusions: The presence of Leptospira spp. in wild rodents suggests they may be chronic carriers, contaminating the environment.

Vesicular stomatitis due to Indiana III (Alagoas/VSIV-3) is endemic in Brazilian state of Ceará / Estomatite vesicular causada pelo subtipo Indiana III (Alagoas/VVI-3) é endêmica no estado do Ceará, Brasil

ABSTRACT: Although Northeast Brazil is considered free of foot and mouth disease (FMD) with vaccination, several economic and health damages are still recorded due to the occurrence of vesicular syndromes that can be evaluated, such as Vesicular Stomatitis (VS). Therefore, this study aimed to confirm the occurrence of this disease and to determine the predominant viral serotype in suspected cases notified to the Official Veterinary Service of Ceará in 2013 performing official diagnostic protocols recommended by the World Organization for Animal Health. After clinical and epidemiological investigation in 46 farms, 32 probable cases of VS were considered with 78 sampled animals, 65 bovines and 13 equines. Serum (54) and epithelium (24) samples were collected. Six (14.6%) of 41 bovines and 8 (61.5%) of 13 equines described seroconversion to Indiana Vesiculovirus (IVV) by viral neutralization. The IVV was detected in 15 (62.5%) of 24 bovines epithelia using the indirect sandwich ELISA. Finally, positive epithelium underwent complement fixation test viral subtyping that identified the occurrence of Indiana III serotype (Alagoas/IVV-3) in 11 (73.3%) of 15 previous positives cattle. These were the first confirmed cases of VS in Ceará with an official diagnosis of IVV-3, confirming the endemic character attributed to the state through previous unofficial serological surveys. The presence of VS is a continuing diagnostic challenge, given the risk of possible incursions of FMD. Vesicular stomatitis is recurrent and is a worrying in this area free of foot and mouth disease with vaccination that bring damage to producers and a maximum alert to the Sanitary Defense Organs in the face of a probable case of vesicular syndrome.

RESUMO: Embora o Nordeste do Brasil seja considerado livre de Febre Aftosa (FA) com a vacinação, ainda são registrados vários prejuízos econômicos e sanitários devido à ocorrência de síndromes vesiculares que precisam ser adequadamente avaliadas, como Estomatite Vesicular (EV). Portanto, este estudo teve como objetivo confirmar a ocorrência desta doença e determinar o sorotipo viral predominante em casos suspeitos notificados ao Serviço Veterinário Oficial do Ceará no ano de 2013 realizando protocolos oficiais de diagnóstico recomendados pela Organização Mundial de Saúde Animal. Após investigação clínica e epidemiológica em 46 propriedades rurais, foram considerados 32 casos prováveis de propriedade foco de EV com 78 animais amostrados, sendo 65 bovinos e 13 equídeos. Amostras de soro (54) e epitélio (24) foram coletadas. Análises sorológicas de 6 (14,6%) de 41 bovinos e 8 (61,5%) de 13 equídeos apresentaram soroconversão ao Vesiculovírus Indiana (VVI) por neutralização viral. O VVI foi detectado em 15 (62,5%) de 24 epitélios bovinos usando ELISA indireto sanduíche. Por fim, amostras de epitélio positivas foram submetidas a subtipagem viral por fixação do complemento que identificou a ocorrência do sorotipo Indiana III (Alagoas/VVI-3) em 11 (73,3%) de bovinos. Estes foram os primeiros casos confirmados de EV no estado do Ceará com diagnóstico oficial de VVI-3 confirmando o caráter endêmico atribuído ao Estado por meio de levantamentos sorológicos não oficiais anteriores. A presença de EV é um desafio diagnóstico contínuo, dado o risco de possíveis incursões de FA. A Estomatite Vesicular é recorrente e preocupante nesta área livre de FA com vacinação pois, além de prejuízos aos produtores, traz um alerta máximo aos Órgãos de Defesa Sanitária diante de um caso provável de síndrome vesicular.

Seroprevalence of Corynebacterium pseudotuberculosis and Toxoplasma gondii in sheep in semi-arid region of Ceará state / Soroprevalência de Corynebacterium pseudotuberculosis de Toxoplasma gondii em ovinos de região semi-árida do estado do Ceará

ABSTRACT: The present study was conducted to investigate in 20 extensive sheep farms for the seroprevalence of Corynebacterium pseudotuberculosis (n=402) and Toxoplasma gondii (n=228). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used for the detection of antibodies to C. pseudotuberculosis/T. gondii. It was observed that C. pseudotuberculosis showed the highest prevalence in the region (34.07%) with statistically significant presence (p<0.05) in ewes. Antibodies to T. gondii was reported in 14.91% of the animals studied. About C. pseudotuberculosis/T. gondii coinfection the categories of rams showed significant (p<0.05) differences, suggesting that this gender could perpetuate the diseases in the flocks. It was concluded that the knowledge about the diseases in the region under study would facilitate the execution of prophylactic measures, especially against the diseases that pose risks to the public health and cause damages to the producer.

RESUMO: O presente estudo foi conduzido para investigar a soroprevalência em 20 fazendas de criação extensiva de ovinos quanto à presença de anticorpos para Corynebacterium pseudotuberculosis (n=402) e Toxoplasma gondii (n=228). Ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA) foi utilizado para a detecção de anticorpos contra C. pseudotuberculosis/T. gondii. Observou-se que C. pseudotuberculosis apresentou a maior prevalência na região (34,07%), com presença estatisticamente significante (p <0,05) nas categorias de ovelha. Anticorpos contra T. gondii foram encontrados em 14,91% dos animais estudados. Sobre a coinfecção de C. pseudotuberculosis/T. gondii, as categorias carneiro apresentaram diferenças significativas (p <0,05), sugerindo que esse gênero poderia perpetuar as doenças nos rebanhos. Concluiu-se que o conhecimento sobre as doenças na região em estudo facilitaria a execução de medidas profiláticas, principalmente contra as doenças que apresentam riscos à saúde pública e causam danos ao produtor.

Serological and molecular investigation of Leishmania spp. infection in cats from an area endemic for canine and human leishmaniasis in Northeast Brazil / Investigação sorológica e molecular da infecção por Leishmania spp. em gatos provenientes de uma área endêmica para leishmaniose canina e humana no nordeste brasileiro

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of Leishmania spp. antibodies, and its association with feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV), in domestic cats from an area endemic for canine and human leishmaniasis in Rio Grande do Norte State, Brazil. Ninety-one cats were subjected to a complete clinical exam, and blood samples were collected. An epidemiological questionnaire was used to investigate the risk factors. IgG anti-Leishmania spp. antibodies were detected by immunofluorescence antibody test (IFAT), with a cut-off value of 1:40. Polymerase chain reaction (PCR) was performed to detect genetic material of Leishmania spp. in the blood samples. The presence of antibodies against FIV and antigens of FeLV was evaluated using an immunochromatographic test. Seropositivity for Leishmania spp., FIV, and FeLV was observed in 14/91 (15.38%), 26/91 (28.57%), and 3/91 (3.29%) cats, respectively. All samples gave negative results on PCR analysis. Based on these data, no significant statistical association was observed between seropositivity for Leishmania spp., and sex, age, presence of clinical signs, evaluated risk factors, and positivity for retroviruses. These findings demonstrated for the first time that cats from Mossoró, Rio Grande do Norte, are being exposed to this zoonosis and might be part of the epidemiological chain of transmission of visceral leishmaniasis.

Resumo O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de anticorpos contra Leishmania spp., e sua associação com o vírus da imunodeficiência felina (FIV) e o vírus da leucemia felina (FeLV), em felinos domésticos provenientes de uma área endêmica no estado do Rio Grande do Norte, para a leishmaniose visceral canina e humana. Noventa e um gatos foram submetidos a exame clínico completo e amostras de sangue foram coletadas. Um questionário epidemiológico foi feito para investigar fatores de risco. Anticorpos IgG anti-Leishmania spp. foram identificados por meio da imunofluorescência indireta (RIFI), adotando-se como ponto de corte a diluição de 1:40. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi executada visando detectar o material genético de Leishmania spp. a partir de amostras de sangue total. Para avaliar a presença de anticorpos contra o FIV e antígenos do FeLV foi utilizado um teste imunocromatográfico. Observou-se soropositividade em 14/91 (15,38%), 26/91 (28,57%) e 3/91 (3,29%) animais para Leishmania spp., FIV e FeLV, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Baseado nestes dados, não foi observada nenhuma associação estatística significativa entre a soropositividade para Leishmania spp. e gênero, idade, presença de sinais clínicos, fatores de risco avaliados e positividade para as retroviroses. Esses achados demonstram pela primeira vez que felinos da cidade Mossoró, Rio Grande do Norte, estão sendo expostos a esta zoonose, sugerindo que os mesmos podem estar participando da cadeia epidemiológica de transmissão da leishmaniose visceral.

Ticks infesting wild small rodents in three areas of the state of São Paulo, Brazil / Carrapatos infestando pequenos roedores silvestres em três municípios do estado de São Paulo, Brasil

ABSTRACT: From May to September 2011, a total of 138 wild rodents of the Cricetidae family were collected in the cities of Anhembi, Bofete and Torre de Pedra, in São Paulo State. All animals were examined for the presence of ticks, which were collected and identified at species level in the laboratory by morphological examination (for adults, nymphs and larvae) and molecular biology, by sequencing of a fragment of the 16S mitochondrial rDNA (for larvae). A total of 47 ticks (21 larvae and 26 nymphs) were collected from rodents, identified as 21 larvae and 23 nymphs of Amblyomma ovale (collected on Oligoryzomys nigripes, Oligoryzomys flavescens, Sooretamys agouya and Nectomys squamipes), two nymphs of Ixodes schulzei (O. nigripes and O. flavescens) and an Amblyomma sculptum nymph in S. agouya. The overall prevalence of parasitism by A. ovale was 4.3% for larvae, and 10.1% for nymphs. The mean intensity of parasitism was 3.5 larvae/parasitized animal, and 1.6 nymphs/parasitized animal. One O. nigripes was found parasitized by both larva and nymph of A. ovale, and another O. nigripes was parasitized simultaneously by an I. schulzei nymph and five A. ovale nymphs. This research reports the following unpublished records: A. ovale on O. flavescens, O. nigripes and S. agouya; A. sculptum on S. agouya; and I. schulzei on O. flavescens and O. nigripes.

RESUMO: De maio a setembro de 2011, um total de 138 roedores silvestres da família Cricetidae foram coletados nos municípios de Anhembi, Bofete e Torre de Pedra, no estado de São Paulo. Todos os animais foram examinados quanto à presença de carrapatos, os quais foram coletados e identificados ao nível de espécie em laboratório, através de análises morfológicas (para adultos, ninfas e larvas) e por biologia molecular para confirmar estas análises, através do sequenciamento de um fragmento do gene 16S rDNA mitocondrial (para uma parte das larvas). Um total de 47 carrapatos (21 larvas e 26 ninfas) foi coletado dos roedores, sendo identificados como 21 larvas e 23 ninfas de Amblyomma ovale (coletados sobre Oligoryzomys nigripes, Oligoryzomys flavescens, Sooretamys agouya e Nectomys squamipes), duas ninfas de Ixodes schulzei (em O. nigripes e O. flavescens) e uma ninfa de Amblyomma sculptum em S. agouya. A prevalência geral de parasitismo por A. ovale foi de 4,3% e de 10,1% para larvas e ninfas, respectivamente. As intensidades médias de parasitismo foram de 3,5 larvas/animal parasitado e de 1,6 ninfas/animal parasitado. Um O. nigripes foi encontrado parasitado simultaneamente por larva e ninfa de A. ovale, e outro O. nigripes estava parasitado simultaneamente por uma ninfa de I. schulzei e cinco ninfas de A. ovale. O presente trabalho reporta os seguintes registros inéditos: A. ovale em O. flavescens, O. nigripes e S. agouya; A. sculptum em S. agouya; e I. schulzei em O. flavescens e O. nigripes.

Atypical mannheimiosis in captive rheas (Rhea americana) / Mannheimiose atípica em emas (Rhea americana) cativas

Mannheimia haemolytica (MH) is a major cause of respiratory disease in bovine complex (BRDC) that causes great economic losses. To this day, there are no reports of birds affected by this bacterium. The present report describes an atypical outbreak of mannheimiosis in captive rheas (Rhea americana).(AU)

Mannheimia haemolytica (MH) é uma das principais causas da doença do complexo respiratório dos bovinos (DCRB) que causa grandes perdas econômicas. Até os dias atuais, não há relato de aves acometidas por tal bactéria. Relata-se um surto atípico de mannheimiose em emas em cativeiro (Rhea americana).(AU)

Evaluation of short-interfering RNAs treatment in experimental rabies due to wild-type virus

ABSTRACTWe have evaluated the efficacy of short-interfering RNAs targeting the nucleoprotein gene and also the brain immune response in treated and non-treated infected mice. Mice were inoculated with wild-type virus, classified as dog (hv2) or vampire bat (hv3) variants and both groups were treated or leaved as controls. No difference was observed in the lethality rate between treated and non-treated groups, although clinical evaluation of hv2 infected mice showed differences in the severity of clinical disease (p = 0.0006). Evaluation of brain immune response 5 days post-inoculation in treated hv2 group showed no difference among the analyzed genes, whereas after 10 days post-inoculation there was increased expression of 2',5'-oligoadenylate synthetase 1, tumor necrosis factor alpha, interleukin 12, interferon gamma, and C-X-C motif chemokine 10 associated with higher expression of Ngene in the same period (p < 0.0001). In hv2 non-treated group only higher interferon beta expression was found at day 5. The observed differences in results of the immune response genes between treated and non-treated groups is not promising as they had neither impact on mortality nor even a reduction in the expression of N gene in siRNA treated animals. This finding suggests that the use of pre-designed siRNA alone may not be useful in rabies treatment.

Fluorescent antibody test, quantitative polymerase chain reaction pattern and clinical aspects of rabies virus strains isolated from main reservoirs in Brazil

ABSTRACTRabies virus (RABV) isolated from different mammals seems to have unique characteristics that influence the outcome of infection. RABV circulates in nature and is maintained by reservoirs that are responsible for the persistence of the disease for almost 4000 years. Considering the different pattern of pathogenicity of RABV strains in naturally and experimentally infected animals, the aim of this study was to analyze the characteristics of RABV variants isolated from the main Brazilian reservoirs, being related to a dog (variant 2),Desmodus rotundus (variant 3), crab eating fox, marmoset, and Myotis spp. Viral replication in brain tissue of experimentally infected mouse was evaluated by two laboratory techniques and the results were compared to clinical evolution from five RABV variants. The presence of the RABV was investigated in brain samples by fluorescent antibody test (FAT) and real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) for quantification of rabies virus nucleoprotein gene (N gene). Virus replication is not correlated with clinical signs and evolution. The pattern of FAT is associated with RABV replication levels. Virus isolates from crab eating fox and marmoset had a longer evolution period and higher survival rate suggesting that the evolution period may contribute to the outcome. RABV virus variants had independent characteristics that determine the clinical evolution and survival of the infected mice.

Tratamento conservativo e cirúrgico em 22 ruminantes com fraturas em membros / Conservative and surgical treatment in 22 ruminants with limb fractures

O objetivo do presente trabalho foi relatar os principais locais de fraturas em membros de 22 ruminantes e determinar a eficiência dos tratamentos utilizados. Foram incluídos no estudo oito caprinos, oito ovinos e seis bovinos Em casos de fraturas distais, o tratamento conservativo com imobilização foi o método de eleição. Em casos de fraturas proximais e fraturas expostas de metatarso ou metacarpo, os ruminantes foram tratados cirurgicamente. Observou-se maior frequência de fraturas envolvendo o metacarpo ou metatarso (54,5%), seguido por fraturas de tíbia (22,7%), fêmur (9%) e casos isolados de fraturas de falange medial, úmero, rádio e ulna (4,5% cada). O índice de recuperação total alcançou 95,4%. A imobilização com gesso associada à tala de Thomas, ou apenas com talas de madeira em animais jovens, foi eficiente na redução de fraturas de metacarpo, metatarso, tíbia, úmero e rádio nos ruminantes tratados. Enquanto no caso de fratura de falange medial, a imobilização com uso apenas de gesso foi suficiente para proporcionar reparação óssea adequada. A fixação esquelética externa ou interna deve ser considerada uma opção no tratamento de fraturas metacárpicas, metatársicas, tibiais e femorais em ruminantes, principalmente quando o animal for de baixo peso corporal.(AU)

The aim of the present study was to report the main locations of limb fractures in 22 ruminants and to determine the efficiency of the treatment choices. Eight goats, eight sheep and six cattle were included. In cases of distal fractures, the conservative treatment with immobilization was the method of choice. In cases of proximal, exposed metatarsal or metacarpal fractures, the ruminants were treated surgically. The higher frequency of fractures involved the metacarpal or metatarsal (54.5%) followed by fractures of the tibia (22.7%), femur (9%) and isolated cases of medial phalanx, humerus, radius and ulna fractures (4.5% each). Total recovery rate reached 95.4%. Immobilization with plaster associated with Thomas splint, or just with wooden splints in young animals, was efficient in reducing fractures of metacarpal, metatarsal, tibia, humerus, and radio in the treated ruminants. In the case of medial phalanx fracture, immobilization using only plaster was sufficient to provide adequate bone repair. The internal or external skeletal fixation should be considered an option in the treatment of metacarpal, metatarsal, tibial and femoral fractures in ruminants, especially in low body weight animals.(AU)

Rapid serum agglutination and agar gel immunodiffusion tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis / Teste de soro aglutinação rápida e do teste de imunodifusão em gel de ágar associados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis

The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.

Pesquisa de anticorpos anti PGL-I através de ELISA em tatus selvagens do Brasil / Research regarding anti-PGL-I antibodies by ELISA in wild armadillos from Brazil

Tatus têm sido envolvidos na transmissão da hanseníase e considerados como fonte de Mycobacterium leprae em muitas publicações. Médicos de partes dos EUA consideram o contato com tatus um fator de risco para hanseníase. Entretanto, há um desafio associado ao papel do tatu na perpetuação da hanseníase no Continente Americano. Foi pesquisada a presença de anticorpos anti-PGL-I em tatus selvagens de áreas endêmicas em hanseníase do Estado do Espírito Santo, Brasil, através de ELISA realizado em amostras de soro de 47 animais. Elisa positivo foi encontrado em 5 (10.6%) tatus. Tatus infectados podem ter algum papel na transmissão da hanseníase disseminando bacilos no meio ambiente, talvez tornando mais difícil a interrupção da cadeia de transmissão e redução do número de casos novos de hanseníase. A técnica de ELISA é um eficiente método para investigação soroepidemiológica da presença do Mycobacterium leprae em tatus.

Armadillos have been involved in leprosy transmission and are considered a source of Mycobacterium leprae in numerous reports. Clinicians from certain areas of the USA consider contact with armadillos a risk factor for leprosy. However, there is a challenge associated with the role of wild armadillos perpetuating human leprosy in the American Continent. The presence of anti-PGL-I antibodies was investigated in wild nine-banded armadillos from leprosy-endemic areas in State of Espirito Santo, Brazil, by ELISA performed on serum samples from 47 armadillos. Positive ELISA was obtained from 5 (10.6%) armadillos. Infected armadillos may play some role in leprosy transmission, disseminating bacilli in the environment, perhaps making it more difficult to interrupt transmission and reduce the number of new leprosy cases. ELISA is an efficient tool for seroepidemiological investigations of Mycobacterium leprae in armadillos.

Detection of Mycobacterium leprae infection in wild nine-banded armadillos (Dasypus novemcinctus) using the rapid ML Flow test

Mycobaterium leprae infection was investigated in armadillos from the State of Espírito Santo, Brazil. The ML Flow test was performed on 37 nine-banded armadillos and positive results were found in 11 (29.7 percent). The ML Flow test may be used to identify possible sources of Mycobaterium leprae among wild armadillos.

Tem sido pesquisado infecção pelo Mycobaterium leprae em tatus provenientes do estado do Espírito Santo-Brasil. O teste rápido ML Flow, foi realizado em 37 tatus selvagens, tendo sido positivo em 11 (29,7 por cento). O teste de ML Flow pode ser utilizado para identificar possíveis fontes de Mycobaterium leprae em tatus selvagens.