Survey of euthanasia methods used in neotropical chiropterans in São Paulo State, Brazil: critical analyses and proposal for standardization of bat euthanasia methods / evantamento dos métodos de eutanásia utilizados em quirópteros neotropicais no estado de São Paulo, Brasil: análise crítica e proposta de padronização de métodos de eutanásia em morcegos

Zoonotic Surveillance Divisions (ZSDs) rescue and euthanize bats in contact with humans. The euthanasia procedure should be conducted safely for the animal and caretaker and minimal stress for the animal is important. The objectives of this study were: i. evaluate the methods of euthanasia used by ZSDs in the State of São Paulo; ii. compare the methods with national and international guidelines for animal euthanasia practices; iii. assess the methodologies considering taxonomy and eating habits of the main bat species, and iv. propose standardization of euthanasia procedures. Sixty-five ZSDs locations received an online questionnaire or were contacted by telephone and 33 ZSDs (50.8%) responded and are distributed in 11 mesoregions in the state to remain anonymous. The euthanasia methods were divided into chemical (injectable or inhalation), physical, or mixed methods. Bat specimens (n = 550) were identified and classified to evaluate the main genera found in the state. The location of the ZSD, species, eating habits, and the method of euthanasia used were analyzed. The specimens by bat families were Molossidae (n = 340), Phyllostomidae (n = 171), and Vespertilionidae (n = 39). Chemical methods were used in 25 ZSDs (75.75%), physical in 5 (15.15%), and mixed in 3 (9.09%). There is no uniformity or standardization in bat euthanasia methods used by ZSDs, although most are based on acceptable chemical methods. It was proposed an algorithm to assist the veterinarian in choosing the method of euthanasia for bats that will allow standardizing euthanasia procedures for this species, considering physiological differences, and respecting technical, bioethical, and animal welfare guidelines.(AU)

As Divisões de Vigilância de Zoonoses (DVZs) coletam e eutanasiam morcegos que tiveram contato com humanos. O procedimento de eutanásia precisa ocorrer de modo seguro para o animal e para o manipulador, sendo importante garantir o mínimo de estresse ao animal. Os objetivos deste estudo foram: i. avaliar os métodos de eutanásia praticados nas DVZ do estado de São Paulo; ii. comparar esses métodos com os guias nacionais e internacionais de práticas de eutanásia animal; iii. avaliar as metodologias aplicadas considerando a taxonomia e os hábitos alimentares das principais espécies de ocorrência de morcegos; e iv. propor a padronização dos procedimentos de eutanásia. Sessenta e cinco DVZs receberam o questionário online ou foram contatadas por telefone, dessas, trinta e três DVZs (50,8%) que responderam ao questionário foram incluídas no estudo e distribuídas em 11 mesorregiões para garantir anonimato. Os métodos de eutanásia reportados foram divididos em métodos químicos (injetáveis; inalatórios), físicos ou mistos. Os espécimes de morcegos (n = 550) foram identificados e classificados para avaliar os principais gêneros encontrados no estado. A localização da DVZ, as espécies, os hábitos alimentares e o método de eutanásia utilizado foram analisados. Os espécimes por família de espécies de morcegos foram Molossidae (n = 340), Phyllostomidae (n = 171) e Vespertilionidae (n = 39). Métodos químicos foram utilizados em 25 DVZs (75,75%), físicos em 5 (15,15%) e mistos em 3 (9,09%). Não há uniformidade ou padronização nos métodos de eutanásia de morcegos, embora a maioria seja baseada em métodos químicos aceitáveis. É proposto um algoritmo para auxiliar o veterinário na escolha do método de eutanásia, que permite a padronização desses procedimentos para os morcegos, considerando as diferenças fisiológicas e respeitando as diretrizes técnicas, bioéticas e de bem-estar animal.(AU)

Rabia transmitdaa por murciélagos enBBrasil / Rabies Transmitted by Bats in Brazil

Frente al desafío que la rabia representa para la industria pecuaria y la salud pública en América Latina, el presente artículo tiene como objetivo hacer una revisión de literatura amplia y crítica sobre la epidemiología de la rabia transmitida por murciélagos en Brasil. El tema es abordado inicialmente desde una perspectiva histórica hasta la caracterización molecular de aislamientos del virus, para finalmente contrastar con la situación de otros países de las Américas. La información referente a Brasil es presentada de manera separada debido a la gran abundancia de especies de murciélagos de diversos hábitos alimenticios, implicadas en la transmisión del virus de la rabia y las complejas relaciones entre los ciclos epidemiológicos revelados por estudios de tipificación antigénica y análisis filogenético, lo cual ha permitido reconocer con más nitidez, la importancia de los quirópteros como reservorios y transmisores de esta enfermedad. Este nuevo escenario epidemiológico exige reexaminar las medidas de control aplicadas hasta el momento, desde un abordaje multidisciplinar, así como cooperación intersectorial y participación por parte de la comunidad.

Considering that rabies represents a challenge for the livestock industry and public health in Latin America, this article is intended to do a comprehensive and critical literature review on the epidemiology of rabies transmitted by bats in Brazil. The subject is addressed from a historical perspective to molecular characterization of rabies virus isolates and finally making a contrast with other countries of the Americas. Information concerning Brazil is presented separately because of the abundance of bats species with different feeding habits, involved in the transmission of rabies virus and the complex relationships between epidemiological cycles in this country, which have been disclosed by antigenic typing and phylogenetic analysis. This has allowed to recognize more clearly the importance of bats as reservoirs and transmitters of this disease. This new epidemiological scenario requires reappraising current control measures, using a multidisciplinary approach, intersectoral cooperation and community participation.

Murciélagos hematófagos como reservorios de la rabia / Hematophagous bats as reservoirs of rabies

La rabia continua siendo un desafío para las autoridades de salud pública y una limitante para la industria ganadera en América Latina. Caninos silvestres y domésticos, así como murciélagos hematófagos son las principales especies transmisoras y reservorios de la enfermedad. Actualmente, se observa variaciones en el perfil epidemiológico de la rabia, donde la especie de murciélago hematófago Desmodus rotundus se constituye en la principal especie transmisora. A lo largo del tiempo se ha acumulado conocimiento sobre la ecología, biología y comportamiento de esta especie y sobre la historia natural de la rabia, lo cual debe conducir a una continua evolución de los métodos de control poblacional de D. rotundus, prevención y técnicas de diagnóstico. Aún se desconoce la relación ecológica de esta especie con otras hematófagas y no hematófagas, y queda mucho por mejorar en los sistemas de notificación y vigilancia epidemiológica, así como crear una mayor conciencia entre los ganaderos ante el tema. La comprensión del impacto que las modificaciones ambientales inducidas por el hombre ejercen sobre la dinámica de infección del virus de la rabia en los murciélagos debe ser motivo de investigaciones posteriores. Esto requerirá la combinación de estudios de campo con modelos matemáticos y nuevas herramientas diagnósticas. La presente revisión pretende presentar los aspectos más relevantes sobre el rol de los murciélagos hematófagos como reservorios y transmisores del virus de la rabia.

Rabies continues to be a challenge for public health authorities and a constraint to the livestock industry in Latin America. Wild and domestic canines and vampire bats are the main transmitter species and reservoirs of the disease. Currently, variations observed in the epidemiological profile of rabies, where the species of hematophagous bat Desmodus rotundus constitutes the main transmitting species. Over the years, knowledge has accumulated about the ecology, biology and behavior of this species and the natural history of rabies, which should lead to continuous development of methods of population control of d. Rotundus as well as prevention and diagnostic tools for rabies. Ecological relationships of this species with other hematophagous and non-hematophagous bats is unknown, and there is much room for improvement in reporting systems and surveillance, as well as creating greater awareness among the farming community. Understanding the impact of human-induced environmental changes on the rabies virus in bats should be cause for further investigation. This will require a combination of field studies with mathematical models and new diagnostic tools. This review aims to present the most relevant issues on the role of hematophagous bats as reservoirs and transmitters of the rabies virus.

Antigenic and genetic characterization of the first rabies virus isolated from the bat Eumops perotis in Brazil

Although the main transmitters of rabies in Brazil are dogs and vampire bats, the role of other species such as insectivorous and frugivorous bats deserves special attention, as the rabies virus has been isolated from 36 bat species. This study describes the first isolation of the rabies virus from the insectivorous bat Eumops perotis. The infected animal was found in the city of Ribeirão Preto, São Paulo. The virus was identified by immunofluorescence antibody test (FAT) in central nervous system (CNS) samples, and the isolation was carried out in N2A cell culture and adult mice. The sample was submitted to antigenic typing using a panel of monoclonal antibodies (CDC/Atlanta/USA). The DNA sequence of the nucleoprotein gene located between nucleotides 102 and 1385 was aligned with homologous sequences from GenBank using the CLUSTAL/W method, and the alignment was used to build a neighbor-joining distance-based phylogenetic tree with the K-2-P model. CNS was negative by FAT, and only one mouse died after inoculation with a suspension from the bat's CNS. Antigenic typing gave a result that was not compatible with the patterns defined by the panel. Phylogenetic analysis showed that the virus isolated segregated into the same cluster related to other viruses isolated from insectivorous bats belonging to genus Nyctinomops ssp. (98.8 percent nucleotide identity with each other).

No Brasil, embora os principais transmissores da raiva sejam cães e morcegos hematófagos, o papel de outras espécies, tais como morcegos insetívoros e frugívoros, merece atenção especial, uma vez que o vírus da raiva já foi isolado em 36 espécies de morcegos. Este estudo descreve o primeiro isolamento do vírus da raiva em um morcego insetívoro Eumops perotis. O animal infectado foi encontrado na cidade de Ribeirão Preto, São Paulo. O vírus foi identificado pelo teste de imunofluorescência direta (IFD) em amostras de sistema nervoso central (SNC), e o isolamento foi realizado em cultura de células N2A e em camundongos adultos. A amostra foi submetida à tipificação antigênica, utilizando um painel de oito anticorpos monoclonais (CDC/Atlanta/USA). A seqüência de DNA do gene da nucleoproteína, localizada entre os nucleotídeos 102 a 1385, foi alinhada com seqüências homólogas presentes no GenBank, usando o método CLUSTAL/W e o alinhamento foi utilizado para a construção da árvore filogenética de distância "neighbor-joining" com o modelo K-2-P. O SNC testado foi negativo por IFD, e somente um camundongo morreu após inoculação com a suspensão do SNC do morcego. A tipificação antigênica apresentou resultado não-compatível com os padrões definidos pelo painel. A análise filogenética mostrou que o vírus isolado segregou no mesmo grupo relacionado com outros vírus isolados de morcegos insetívoros, gênero Nyctinomops ssp. (98,8 por cento de identidade de nucleotídeos entre elas).

Vírus da raiva em quirópteros naturalmente infectados no Estado de São Paulo, Brasil / Rabies virus in naturally infected bats in the State of São Paulo, Southeastern Brazil

OBJETIVO: Identificar as espécies de morcegos envolvidas na manutenção do ciclo da raiva, verificar a distribuição do vírus da raiva em tecidos e órgãos de morcegos e os períodos de mortalidade dos camundongos inoculados. MÉTODOS: A positividade para o vírus da raiva foi avaliada por imunofluorescência direta em morcegos de municípios do Estado de São Paulo, de abril de 2002 a novembro de 2003. A distribuição do vírus nos morcegos foi avaliada pela inoculação de camundongos e infecção de células N2A, com suspensões a 20 por cento preparadas a partir de fragmentos de diversos órgãos e tecidos, além de cérebro e glândula salivar. A mortalidade dos camundongos foi observada diariamente, após inoculação intracerebral. RESULTADOS: Dos 4.393 morcegos pesquisados, 1,9 por cento foram positivos para o vírus da raiva, pertencentes a dez gêneros, com predomínio de insetívoros. A média do período máximo de mortalidade dos camundongos pós-inoculação a partir de cérebros e glândulas salivares de morcegos hematófagos foi de 15,33±2,08 dias e 11,33±2,30 dias; insetívoros, 16,45±4,48 dias e 18,91±6,12 dias; e frugívoros, 12,60±2,13 dias e 15,67±4,82 dias, respectivamente. CONCLUSÕES: As espécies infectadas com o vírus da raiva foram: Artibeus lituratus, Artibeus sp., Myotis nigricans, Myotis sp., Eptesicus sp., Lasiurus ega, Lasiurus cinereus, Nyctinomops laticaudatus, Tadarida brasiliensis, Histiotus velatus, Molossus rufus, Eumops sp. e Desmodus rotundus. A pesquisa de vírus em diferentes tecidos e órgãos mostrou-se que os mais apropriados para o isolamento foram cérebro e glândulas salivares.

OBJECTIVE: To identify the species of bats involved in maintaining the rabies cycle; to investigate the distribution of the rabies virus in the tissues and organs of bats and the time taken for mortality among inoculated mice. METHODS: From April 2002 to November 2003, bats from municipalities in the State of São Paulo were screened for the presence of the rabies virus, by means of direct immunofluorescence. The virus distribution in the bats was evaluated by inoculating mice and N2A cells with 20 percent suspensions prepared from fragments of different organs and tissues, plus the brain and salivary glands. The time taken for mortality among the mice was monitored daily, following intracerebral inoculation. RESULTS: Out of the 4,395 bats received, 1.9 percent were found positive for the rabies virus. They belonged to ten genera, with predominance of insectivores. The maximum mean times taken for mortality among the mice following inoculation with brain and salivary gland material were 15.33±2.08 days and 11.33±2.30 days for vampire bats, 16.45±4.48 days and 18.91±6.12 days for insectivorous bats, and 12.60±2.13 days and 15.67±4.82 days for frugivorous bats, respectively. CONCLUSIONS: The species infected with the rabies virus were: Artibeus lituratus, Artibeus sp., Myotis nigricans, Myotis sp., Eptesicus sp., Lasiurus ega, Lasiurus cinereus, Nyctinomops laticaudatus, Tadarida brasiliensis, Histiotus velatus, Molossus rufus, Eumops sp. and Desmodus rotundus. Virus investigation in the different tissues and organs showed that the brain and salivary glands were the most suitable sites for virus isolation.