Detection of Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in swine and detection of DNA of these protozoa in tissues and sausages / Soroprevalência de Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii em suínos e detecção do DNA desses protozoários em tecidos e embutidos

Abstract The seroprevalence of Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was researched in swine raised in Santa Maria, RS, Brazil. Serum samples from 84 pigs from 31 farms were tested using indirect immunofluorescence assay (IFA) for both agents. Additionally, 53 samples of pork sausages and tissues destined for human consumption, including: salami, sausage, black pudding, heart, tongue, brain, and rib muscle, were submitted to PCR to detect DNA for each agent. The frequency of anti-Sarcocystis spp. antibodies was 36.9% (31/84), with titers ranging from 32 to 1024, and 25% (21/84) for anti-T. gondii antibodies, with titers ranging from 64 to 2048. Sarcocystis spp. and T. gondii DNA were detected in 67.9% (36/53) and 13.2% (7/53) of samples, respectively. The presence of antibodies and the detection of DNA from Sarcocystis spp., and T. gondii suggests that the pigs were infected and may serve as an important reservoir for both parasites. The infection by these protozoa in the swine population is relevant to public health due to their zoonotic potential.

Resumo A soroprevalência de Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi pesquisada em suínos criados em Santa Maria, RS, Brasil. Amostras de soro de 84 suínos de 31 fazendas foram testadas pela reação deimunofluorescência indireta (IFA) para ambos os agentes. Adicionalmente, 53 amostras de embutidos suínos e tecidos cárneos destinados ao consumo humano, incluindo: salame, linguiça, morcela, coração, língua, cérebro e músculo da costela foram submetidas à PCR para detecção de DNA para cada agente. A frequência de anticorpos anti-Sarcocystis spp. foi de 36,9% (31/84), com títulos variando de 32 a 1.024; e 25% (21/84) para anticorpos anti-T. gondii, com títulos variando de 64 a 2048. A presença de DNA de Sarcocystis spp. e T. gondii foi detectada em 67,9% (36/53) e 13,2% (7/53) das amostras avaliadas, respectivamente. A detecção de anticorpos e DNA de Sarcocystis spp. e T. gondii sugere que os suínos foram infectados e podem servir como um importante reservatório de ambos os parasitas. A circulação desses agentes na população suína é relevante para a saúde pública devido ao seu potencial zoonótico.

Measles, rubella, mumps and Toxoplasma gondii antibodies in saliva of vaccinated students of schools and universities in São Paulo City, Brazil

ABSTRACT Introduction: Vaccines are well-established public health interventions with major impacton the prevalence of infectious diseases, but outbreaks are occurring frequently due to pri-mary and secondary failures, despite high coverage. Surveillance of efficacy and duration ofinduced immunity is a difficult task as it requires invasive blood sampling in children andteenagers. Saliva can be an acceptable alternative source of IgG to assess vaccine efficacyand toxoplasmosis incidence. We investigated IgG response for measles, mumps, rubella,and T. gondii in saliva samples of vaccinated young people. Methods: Saliva was collected from 249 public schools students from São Paulo, Brazil, aged7 to 13 years old, during an interactive exhibition on hygiene. We used S. aureus proteinA solid phase capture assay for IgG reactive to biotinylated purified proteins. Paired salivaand serum (47) were tested from young adults with serum evidence of T. gondii infectionand from negative children less than 12 month old for standardization. Reproducibility wasgreater than 98% and sensitivity and specificity of the saliva assays were greater than 95%,as well as the concordance of paired saliva and serum samples. Results: Saliva from high school students showed a prevalence of 8.5% (95% CI: 5.0-11.9%)for anti T. gondii IgG; 96.8% (94.6-99%) of anti-measles IgG; 59.1% (53-65%) of anti-rubella IgG,and 57.5% (51.3-63.6%) of anti-mumps IgG. Discussion: The prevalence of antibodies against mumps and rubella after 6-8 years of vaccination was lower than against measles among students. The findings of this study demonstrate the feasibility of saliva sampling for follow-up of vaccine immune status in teenagers. This useful approach allows for IgG detection for vaccine control or epidemio- logical studies.

Determinação da frequência de anticorpos anti - T. gondii em caprinos e ovinos abatidos para o consumo humano na região metropolitana de Recife-PE / Determination of frequency of anti - T. gondii antibodies in goats and sheep abolished for human consumption in the metropolitan region of Recife – PE

Ovinos e caprinos são suscetíveis a infecções por Toxoplasma gondii e importantes na transmissão a humanos através do consumo de carnes crua ou mal passada. Objetivou-se pesquisar o T. gondii nos animais abatidos em abatedouro situado na região metropolitana do Recife-PE, identificando anticorpos anti - T. gondii, sob a metodologia da Imunofluorescência Indireta (RIFI). Analisou-se 93 amostras, 66 amostras de soro ovino e 27 amostras de soro caprino. Nas ovinas, obteve-se 60,6% (40/66) positivas, sendo 31,81% (21/66) para titulação de 1:64; 10,6% (7/66) para 1:128; 7,57% (5/66) para 1:256; 6,06% (4/66) para 1:512; 4,54% (3/66) para 1:1024. Nas caprinas, obteve-se 62,96% (17/27) positivas, sendo 37,03% (10/27) para titulação de 1:64; 14,81% (4/27) para 1:128; 7,4% (2/27) para 1:256 e 3,7% (1/27) para 1:512, sem positividade para 1:1024. Conclui-se que há uma frequência expressiva de IgG anti - T. gondii nos soros provenientes deste abatedouro, tornando-se questão de saúde pública.

Risk factors and anti-Toxoplasma gondii and Neospora caninum antibody occurrence in dogs in João Pessoa, Paraíba state, Northeastern Brazil / Fatores de risco e ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães de João Pessoa, Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to determine the occurrence of infections due to Toxoplasma gondii and Neospora caninum and corresponding risk factors among dogs attended at veterinary clinics in the city of João Pessoa, Paraíba, northeastern Brazil. Blood samples were collected from 384 dogs that were attended at 34 veterinary clinics between April 2015 and May 2016. These two agents were diagnosed through the indirect immunofluorescence reaction (IFAT). Among the 384 animals evaluated, 37 (9.6%) were positive for T. gondii, with titers ranging from 16 to 512. Six dogs (1.6%) were positive for N. caninum, with titers of 50 to 200. Access to the streets (OR = 4.60; 95% CI = 1.74-12.20) and environments close to forested areas (OR = 2.79; 95% CI = 1.32-5.93) were found to be risk factors for T. gondii infection. The dogs attended at veterinary clinics in João Pessoa are exposed to infections caused by T. gondii and N. caninum. Dog owners should avoid having access to the street or contact with forest environments.

Resumo O objetivo deste trabalho foi determinar a ocorrência e os fatores de risco das infecções por Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães atendidos em clínicas veterinárias da cidade de João Pessoa, Paraíba, Nordeste do Brasil. Foram colhidas 384 amostras de sangue cães procedentes de atendimento de 34 clínicas veterinárias, no período de abril de 2015 a maio de 2016. O diagnóstico para os dois agentes foi realizado pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Dos 384 animais avaliados 37 (9,6%) foram positivos para T. gondii com títulos variando de 16 a 512. Para N. caninum seis (1,6%) cães foram positivos com títulos de 50 a 200. Foram constatados como fatores de risco para T. gondii as variáveis acesso à rua (OR = 4,60; IC 95% = 1,74-12,20) e ambiente próximo a matas (OR= 2,79; IC 95% = 1,32-5,93). Os cães atendidos em clínicas veterinárias em João Pessoa estão expostos às infecções por T. gondii e N. caninum. Os proprietários devem evitar o acesso dos animais à rua ou o contato com ambientes florestais.

Vimentin and Anti Vimentin Antibodies in Chagas' Disease / Vimentina e Anticorpos Anti-Vimentina na Doença de Chagas

Abstract Background: Vimentin is a main structural protein of the cell, a component of intermediate cell filaments and immersed in cytoplasm. Vimentin is mimicked by some bacterial proteins and anti-vimentin antibodies occur in autoimmune cardiac disease, as rheumatic fever. In this work we studied vimentin distribution on LLC-MK2 cells infected with T. cruzi and anti-vimentin antibodies in sera from several clinical pictures of Chagas' disease or American Trypanosomiasis, in order to elucidate any vimentin involvement in the humoral response of this pathology. Objective: We standardized an indirect immunofluorescence assay (IFI) to determine sub cellular expression in either parasites and host cells, and ELISA to evaluate anti-vimentin antibodies in sera fron chagasic patients. Methods: We analyzed the distribution of vimentin in culture cells using indirect fluorescent assays, using as external controls anti-T. cruzi sera, derived from chronic infected patients for identification of the parasites in the same model. After infection and growth of T.cruzi amastigotes, those cells express larger amounts of vimentin, with heavy staining of cytoplasm outside the parasitophorous vacuole and some particle shadowing patterns, suggesting that vimentin are associated with cell cytoplasm. Anti-vimentin antibodies were present in most American trypanosomiasis samples, but notably, they are much more present in acute (76, 9%) or clinical defined syndromes, especially cardiac disease (87, 9%). Paradoxically, they were relatively infrequent in asymptomatic (25%) infected patients, which had a clearly positive serological reaction to parasite antigens, but had low frequency of anti-vimentin antibodies, similar to controls (2,5%). Conclusion: Our current data revealed that anti-vimentin antibodies induced during T. cruzi infection could be a marker of active disease in the host and its levels could also justify drug therapy in American Trypanosomiasis chronic infection, as a large group of asymptomatic patients would be submitted to treatment with frequent adverse reactions of the available drugs. Anti-vimentin antibodies could be a marker of cardiac muscle cell damage, appearing in American Trypanosomiasis patients during active muscle cell damage.

Resumo Fundamento: A Vimentina é uma proteína estrutural importante da célula, um componente dos filamentos celulares intermediários e imersa no citoplasma. Algumas proteínas bacterianas imitam a Vimentina e anticorpos anti-vimentina ocorrem em doenças cardíacas auto-imunes, como a febre reumática. Neste trabalho, estudamos a distribuição de vimentina em células LLC-MK2 infectadas com T. Cruzi e anticorpos anti-vimentina em soros de várias imagens clínicas da doença de Chagas ou tripanossomíases americanas, a fim de elucidar qualquer implicação da vimentina na resposta humoral desta patologia. Objetivo: padronizamos um teste de imunofluorescência indireta (IFI) para determinar a expressão subcelular em parasitas e células hospedeiras, e ELISA para testar anticorpos anti-vimentina em soros de pacientes chagásicos. Métodos: analisamos a distribuição de vimentina em células de cultura usando ensaios fluorescentes indiretos, utilizando como controles externos soros anti-T. Cruzi, derivados de pacientes com infecção crônica para a identificação de parasitas no mesmo modelo. Após a infecção e o crescimento de amastigotas de T. Cruzi, essas células expressam grandes quantidades de vimentina, com forte coloração do citoplasma fora da vacuola parasitófora e alguns padrões de sombreamento das partículas, sugerindo que a vimentina está associada ao citoplasma da célula. Os anticorpos anti-vimentina estavam presentes na maioria das amostras americanas de tripanossomíases, mas estão notavelmente mais presentes em síndromes agudas ou clinicamente definidas (76,9%), especialmente em doenças cardíacas (87,9%). Paradoxalmente, eram relativamente infrequentes em pacientes infectados assintomáticos (25%), que apresentavam uma reação sorológica claramente positiva aos antígenos parasitas, mas apresentavam baixa frequência de anticorpos anti-vimentina, semelhante aos controles (2,5%). Conclusão: Nossos dados atuais revelaram que os anticorpos anti-vimentina induzidos durante a infecção por T. Cruzi poderiam ser um marcador de doença ativa no hospedeiro e seus níveis também poderiam justificar o tratamento farmacológico em infecção crônica com tripanossomíase americana, uma vez que um grande grupo de pacientes assintomáticos seria submetido a tratamento com reações adversas frequentes aos medicamentos disponíveis. Os anticorpos anti-vimentina poderiam ser um marcador de danos nas células do músculo cardíaco, que aparece em pacientes com tripanossomíase americana durante o dano das células musculares ativas.

Anti-Toxoplasma gondii antibodies in beef cattle slaughtered in the metropolitan region of Belém, Brazilian Amazon / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii em bovinos de corte abatidos na região metropolitana de Belém, Amazônia brasileira

Abstract The relevance of consuming raw or undercooked beef in the transmission of toxoplasmosis is unclear due to the high resistance of cattle to infection. However, this possibility needs to be considered in endemic areas, such as the Amazon, where the consumption of beef is frequent. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies in beef cattle slaughtered in the metropolitan region of Belem, Pará state, Brazil. Blood samples were collected from 500 animals of both genders in a licensed slaughterhouse in Belém. Anti-T. gondii IgG antibodies were detected by an indirect immunofluorescence assay (IFA) with a cut-off titer of 1:64. Anti-T. gondii antibodies were found in 203 animals (40.6%), with a titer of 64 in 112 animals (55.2%), 128 in 68 animals (33.5%), 256 in 15 animals (7.4%), 512 in 5 animals (2.5%), and 1,024 in 3 animals (1.4%). No significant difference was observed between males and females (p > 0.05). The high frequency of anti-T. gondii antibodies observed in beef cattle slaughtered in Belém indicates that the meat of these animals may be an important source of infection for humans and carnivorous domestic animals when inadequately cooked beef is consumed.

Resumo A importância do consumo de carne bovina crua ou mal passada na transmissão da toxoplasmose ainda é pouco definida, devido à alta resistência desses animais à infecção. Contudo, em áreas endêmicas, como da Amazônia, onde o consumo de carne bovina é frequente, essa possibilidade precisa ser considerada. O objetivo do presente estudo foi determinar a frequência de anticorpos IgG anti-T. gondii em bovinos de corte abatidos na região metropolitana de Belém, Estado do Pará. Foram coletadas amostras de sangue de 500 animais, de ambos os sexos, em um abatedouro oficial do município de Belém. A detecção de anticorpos IgG anti-T. gondii foi realizada pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:64. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 203 animais (40,6%), com títulos de 64 em 112 animais (55,2%); 128 em 68 (33,5%); 256 em 15 (7,4%); 512 em 05 (2,5%); e 1.024 em 03 (1.4%). Não foi observada diferença estatisticamente significativa entre machos e fêmeas (p > 0,05). A alta frequência de anticorpos anti-T. gondii, observada nos bovinos de corte abatidos em Belém, indica que a carne desses animais pode ser importante fonte de infecção para humanos e animais domésticos carnívoros, caso venha a ser consumida de forma inadequada.

Antibodies against Apicomplexa protozoa and absence sarcocysts in heart tissues from horses in southern Brazil / Anticorpos contra protozoários do filo Apicomplexa e ausência de sarcocistos no miocárdio de equinos no sul do Brasil

Abstract Sarcocystis spp., Neospora spp., and Toxoplasma gondii are Apicomplexa protozoa that can infect horses. This study aimed to investigate the occurrence of antibodies against Sarcocystis spp., Neospora spp., and T. gondii in horses slaughtered in southern Brazil. The presence of histological lesions, tissue cysts, and Sarcocystis spp. DNA in the hearts of these horses was also investigated. A total of 197 paired serum and heart samples were evaluated by serology and direct microscopic examination; 50 of these samples were subjected to histopathological and PCR analyses. Antibodies against at least one of the protozoa were detected in 146 (74.1%) of the serum samples. The frequencies of positive serology were: 36% (71/197) against Sarcocystis spp., 39.1% (77/197) against Neospora spp., and 47.2% (93/197) against T. gondii. No cysts, Sarcocystis spp. DNA, or histopathological lesions were observed in myocardial tissue samples. The frequencies of antibody seropositivity against Sarcocystis spp., Neospora spp., and T. gondii showed that horses are frequently infected by these parasites in southern Brazil. The absence of sarcocysts in horse tissues is compatible with their role as aberrant/accidental hosts in the life cycle of Sarcocystis spp..

Resumo Sarcocystis spp., Neospora spp. e Toxoplasma gondii são protozoários que pertencem ao filo Apicomplexa e que podem afetar equinos. O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de anticorpos contra Sarcocystis spp., Neospora spp. e T. gondii. A presença de lesões histológicas, cistos teciduais e DNA de Sarcocystis spp. no miocárdio de equinos abatidos no sul do Brasil também foi investigado. Um total de 197 amostras de soro juntamente com as respectivas amostras de coração, foram avaliadas por sorologia e exame microscópico direto. Destas amostras, 50 foram selecionadas e submetidas a análise histopatológica e PCR. Anticorpos contra pelo menos um dos protozoários foi detectado em 146 (74,1%) das amostras de soro. As frequências de sorologia positiva foram: 36% (71/197) para Sarcocystis spp., 39,1% (77/197) para Neospora spp. e 47,2% (93/197) para T. gondii. Não foram encontradas lesões histopatológicas, cistos e DNA de Sarcocystis spp. nas amostras de miocárdio dos equinos. As frequências de soropositividade para Sarcocystis spp., Neospora spp. e T. gondii mostra que os equinos podem ser frequentemente infectados por estes parasitas no sul do Brasil. A ausência de sarcocistose no coração dos equinos é compatível com seu papel como hospedeiro errático/acidental no ciclo de vida deste protozoário.

Rural area of the Brazilian Pantanal wetlands associated with the occurrence of anti-Leishmania spp. antibodies in dogs / Área rural do Pantanal brasileiro associada à ocorrência de anticorpos anti-Leishmania spp. em cães

An evaluation was made of the presence of anti-Leishmania infantum chagasi antibodies in domestic dogs from the urban and rural areas of Brazil's Pantanal wetland region using serological techniques. A total of 429 dogs were sampled in three areas of the Pantanal biome, including the municipalities of Poconé, Santo Antônio de Leverger, and Barão de Melgaço, in the state of Mato Grosso, and in the municipality of Corumbá, in the state of Mato Grosso do Sul. The immunofluorescence assay (IFA) was used to detect antibodies (cut-off point 40) using Leishmania infantum chagasi antigen. Because of the possibility of cross-reactivity between species of the genus Leishmania, samples that were positive in the IFA against L. infantum chagasi were also tested by IFA in the same conditions, using L. amazonensis and L. braziliensis antigens. IFA-positive samples to L. infantum chagasi were also evaluated using Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results showed the presence of antibodies against L. infantum chagasi in 23 (5.36%; 95% CI: 3.50%-8.05%) dogs and at least one seroreactive dog was found in each of the municipalities evaluated in this study. Antibody titers ranged from 40 to 5,120, and all IFA positive samples were positive in the ELISA. Among the 23 positive dogs, nine were also were seroreactive for L. amazonensis and L. braziliensis antigens. The occurrence of anti- L. infantum chagasi antibodies in dogs was higher in rural areas (7.06%) than in urban areas (2.50%) (P < 0.05). Based on this study, we concluded that dogs from rural areas of the Pantanal wetlands were in contact with Leishmania species, which is relevant information given their importance to public health.(AU)

Neste trabalho foi realizada uma avaliação sobre a presença de anticorpos anti-Leishmania infantum chagasi em cães domésticos das áreas urbanas e rurais da região do Pantanal brasileiro usando técnicas sorológicas. Um total de 429 cães foram amostrados em três áreas do bioma do Pantanal, incluindo os municípios de Poconé, Santo Antônio de Leverger e Barão de Melgaço, em Mato Grosso, e o município de Corumbá, em Mato Grosso do Sul. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) foi utilizada para detectar anticorpos (ponto de corte de 40) de Leishmania infantum chagasi como antígeno. Devido à possibilidade de reação cruzada entre as espécies do gênero Leishmania, as amostras positivas na RIFI para L. infantum chagasi foram também avaliadas na RIFI utilizando L. amazonensis e L. braziliensis como antígenos. As amostras positivas na RIFI para L. infantum chagasi foram avaliadas utilizando o ensaio de imunoadsorção ligado à enzima (ELISA). Os resultados mostraram a presença de anticorpos contra L. infantum chagasi em 23 (5,36%; IC 95%: 3,50% -8,05%) cães e pelo menos um cão soro-reativo foi encontrado em todos os municípios avaliados neste estudo. Os títulos de anticorpos variaram de 40 a 5.120 e todas as amostras positivas na RIFI foram positivas no ELISA. Entre os 23 cães positivos, nove também reagiram para L. amazonensis e L. braziliensis. A ocorrência de anticorpos anti-L. infantum chagasi em cães foi maior nas áreas rurais (7,06%) do que nas áreas urbanas (2,50%) (P < 0,05). Com base neste estudo, concluímos que cães de áreas rurais do Pantanal tiveram contato com espécies de Leishmania, o que é uma informação relevante, dada a sua importância para a saúde pública.(AU)

Evaluation of the Western blotting method for the diagnosis of congenital toxoplasmosis / Avaliação do método Western Blotting para diagnóstico de toxoplasmose congênita

Abstract Objective: To evaluate the Western blotting method for the detection of IgG anti-Toxoplasma gondii (T. gondii) (IgG-WB) in the serum of children with suspected congenital toxoplasmosis. Methods: We accompanied 47 mothers with acquired toxoplasmosis in pregnancy and their children, between June of 2011 and June of 2014. The IgG-WB was done in house and the test was considered positive if the child had antibodies that recognized at least one band on IgG blots different from the mother's or with greater intensity than the corresponding maternal band, during the first three months of life. Results: 15 children (15.1%) met the criteria for congenital toxoplasmosis and 32 (32.3%) had the diagnosis excluded. The symptoms were observed in 12 (80.0%) children and the most frequent were cerebral calcification in 9 (60.0%), chorioretinitis in 8 (53.3%), and hydrocephalus in 4 (26.6%). IgM antibodies anti-T. gondii detected by chemiluminescence (CL) were found in 6 (40.0%) children and the polymerase chain reaction (PCR) for detection of T. gondii DNA was positive in 5 of 7 performed (71.4%). The sensitivity of IgG-WB was of 60.0% [95% confidence interval (CI) 32.3-83.7%] and specificity 43.7% (95% CI 26.7-62.3%). The sensitivity of IgG-WB increased to 76.0 and 89.1% when associated to the research of IgM anti-T. gondii or PCR, respectively. Conclusions: The IgG-WB showed greater sensitivity than the detection of IgM anti-T. gondii; therefore, it can be used for the diagnosis of congenital toxoplasmosis in association with other congenital infection markers.

Resumo Objetivo: Avaliar o método Western Blotting para detecção de IgG anti-Toxoplasma gondii (T. gondii) (IgG-WB) no soro de crianças com suspeita de toxoplasmose congênita. Métodos: Acompanhamos 47 mães com toxoplasmose adquirida na gravidez e seus filhos, entre junho de 2011 e junho de 2014. O IgG-WB foi feito internamente e o teste foi considerado positivo quando a criança apresentava anticorpos que reconheciam pelo menos uma banda nas manchas de IgG diferente das bandas da mãe ou com maior intensidade do que a banda materna correspondente, durante os primeiros 3 meses de vida. Resultados: Atenderam aos critérios para diagnóstico de toxoplasmose congênita 15 crianças (15,1%) e 32 (32,3%) tiveram o diagnóstico excluído. Os sintomas foram observados em 12 crianças (80%) e os mais frequentes foram calcificação cerebral em nove (60%), coriorretinite em oito (53,3%) e hidrocefalia em quatro (26,6%). Os anticorpos IgM anti-T. gondii detectados por quimiluminescência (QL) foram encontrados em seis crianças (40%) e a reação em cadeia da polimerase (RCP) para detecção do DNA de T. gondii foi positiva em cinco de sete reações (71,4%). A sensibilidade do IgG-WB foi de 60% [intervalo de confiança (IC) de 95%, 32,3 a 83,7%] e a especificidade foi de 43,7% (IC de 95%, 26,7 a 62,3%). A sensibilidade do IgG-WB aumentou para 76 e 89,1% quando relacionada à pesquisa de IgM anti-T. gondii ou à RCP, respectivamente. Conclusões: O IgG-WB mostrou maior sensibilidade do que a detecção de IgM anti-T. gondii; portanto, pode ser usado para o diagnóstico de toxoplasmose congênita em associação com outros marcadores de infecção congênita.

Intra-uterine exposure of horses to Sarcocystis spp. antigens / Exposição intrauterina ao Sarcocystis spp. em equinos

The aim of this study was to examine the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens, determining the number of foals with detectable concentrations of antibodies against these agents in the serum, before colostrum ingestion and collect data about exposure of horses to the parasite. Serum samples were collected from 195 thoroughbred mares and their newborns in two farms from southern Brazil. Parasite specific antibody responses to Sarcocystis antigens were detected using the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunoblot analysis. In 84.1% (159/189) of the pregnant mares and in 7.4% (14/189) of foals we detected antibodies anti-Sarcocystis spp. by IFAT. All samples seropositive from foals were also positive in their respective mares. Serum samples of seropositive foals by IFAT, showed no reactivity on the immunoblot, having as antigens S. neurona merozoites. In conclusion, the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens in horses was demonstrated, with occurrence not only in mares, but also in their foals, before colostrum ingestion these occurrences were reduced.

O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição intrauterina ao Sarcocystis spp., para determinar o número de potros que possuem concentrações detectáveis de anticorpos contra esses agentes no soro, antes da ingestão do colostro, por meio da coleta de dados sobre a exposição a esses protozoários nos equinos. Amostras de soro foram coletadas de 195 éguas puro-sangue e seus respectivos potros recém-nascidos, em duas fazendas localizadas na região Sul do Brasil. Os testes utilizados na detecção de anticorpos específicos para o Sarcocystis foram a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e análise por meio de immunoblot. Pela RIFI, em 84,1% (159/189) das éguas e em 7,4% (14/189) dos potros foram detectados anticorpos anti-Sarcocystis spp. Todas as amostras soropositivas dos potros também foram positivas para suas respectivas mães. As amostras de soro dos potros soropositivos na RIFI, não apresentaram reatividade no immunoblot, tendo como antígenos merozoítos de S. neurona. Em conclusão, foi demonstrada a exposição intrauterina de Sarcocystis spp. em equinos, com ocorrência em éguas, porém, em seus respectivos potros, antes da ingestão de colostro a ocorrência foi reduzida.

Application of different techniques to detect Toxoplasma gondii in slaughtered sheep for human consumption / Utilização de diferentes técnicas para detecção de Toxoplasma gondii em ovinos abatidos para consumo humano

Abstract The aim of this study was to investigate occurrence of Toxoplasma gondii in sheep slaughtered in the state of Alagoas, Brazil, by means of different diagnosis techniques. Serum samples and tissues from 100 slaughtered sheep were used. To detect antibodies, the indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) was used, and tissues from seropositive animals (cut-off ≥1:64) were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) and immunohistochemistry (IHC). To assess the concordance between the direct techniques, the kappa test was used. In the IFAT, it was observed that 14% (14/100) of the ovine samples were serum-positive. In the PCR, 21.43% (3/14) of the animals were positive and in IHC, it was observed that 7.14% (1/14) were positively stained for T. gondii in cerebral tissue. Histopathologically, the predominant finding was the presence of mononuclear cell infiltrate in the heart and a perivascular cuff in the cerebrum and cerebellum. The concordance between the direct diagnosis techniques was moderate (k=0.44). Thus, it is important to use different direct techniques in diagnosing toxoplasmosis in naturally infected sheep.

Resumo O objetivo deste estudo foi pesquisar a ocorrência de Toxoplasma gondii em ovinos abatidos no Estado de Alagoas, Brasil por meio de diferentes técnicas de diagnóstico. Foram utilizadas amostras de soros e tecidos de 100 ovinos abatidos. Para a pesquisa de anticorpos foi utilizada a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), e os tecidos dos animais soropositivos (ponto de corte ≥1:64) foram submetidos às técnicas de Reação de Cadeia da Polimerase (PCR) e Imunohistoquímica (IHQ). Para o estudo da concordância entre as técnicas diretas foi empregado o teste Kappa. Na RIFI, 14% (14/100) das amostras foram soro-positivas. Na PCR, 21,43% (3/14) dos animais foram positivos e, na IHC, 7,14% (1/14) apresentaram marcação positiva para T. gondii no tecido cerebral. Na histopatologia, o achado predominante foi o infiltrado celular mononuclear no coração e manguito perivascular no cérebro e cerebelo. A concordância entre as técnicas diretas de diagnóstico foi moderada (K= 0,44). Desse modo, é importante utilizar diferentes técnicas diretas no diagnóstico da toxoplasmose em ovinos naturalmente infectados.

Investigação de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis cruzi em equinos / Investigation of antibodies against Sarcocystis neurona and Sarcocystis cruzi in equines

Sarcocystis neurona is the primary agent for Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM), important neurological disease characterized by behavior or muscular changes, that impairs animal performance and husbandry. Sarcocystis cruzi is a pathogen related to myositis in cattle. Although related the life cycles of the parasites are distinct. S. neurona has opossums (Didelphis spp.) and S. cruzi, dogs as definitive hosts. However, S. neurona and S. cruzi may undergo cross-reactivity in serological tests, interfering on results of EPM ante-mortem diagnostic tests. In the present study, serology of 189 mares was performed by indirect immunofluorescence antibody test, using antigens of S. neurona and S. cruzi in order to assess the exposure degree of animals to antigens. Analyzing the results, it was observed that most of the animals (84.13%) reacted with at least one protozoal species and the number of animals which showed antibodies against S. cruzi was greater than S. neurona (80.42% and 33.86%, respectively) and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species.(AU)

Especificidad de la prueba intradérmica de Montenegro en pacientes infectados por Trypanosoma cruzi procedentes de diferentes regiones del Perú / Specificity of the intradermal Montenegro test in patients infected by Trypanosoma cruzi from different regions of Peru

Con el objetivo de evaluar la especificidad de la leishmanina en pacientes con enfermedad de Chagas, sin antecedente clínico de leishmaniosis, actual o antigua. Una muestra de 102 personas infectadas por Trypanosoma cruzi (14 casos agudos con diagnóstico parasitológico y 88 casos crónicos a través de la demostración de anticuerpos IgG por ELISA e inmunofluorescencia indirecta (IFI) fueron evaluados con leishmanina, antígeno soluble que contenia Leishmania (Viannia) peruviana a la concentración de 25-30 ug/mL. Solo cinco personas presentaron reacción de hipersensibilidad cutánea a la aplicación del antígeno a las 48-72 h. La leishmanina evaluada fue negativa en 97 personas infectadas con T. cruzi, con lo cual se alcanzó una especificidad del 95,1%. En conclusión, la prueba intradérmica de Montenegro es una herramienta diagnóstica simple y eficaz, que además podría ser utilizada para discriminar infecciones por Leishmania o T. cruzi, en áreas geográficas del Perú donde ambos parásitos están presentes.

In order to assess the specificity of the leishmanin skin test in Chagas disease patients without clinical history of leishmaniasis, present or former. A sample of 102 persons infected with Trypanosoma cruzi (14 acute cases with parasitological diagnosis and 88 chronic cases) through the demonstration of IgG antibodies by ELISA and indirect immunofluorescence (IIF) were evaluated with leishmanin soluble antigen which contained Leishmania (Viannia) peruviana concentration of 25-30 ug/mL. Only five people showed cutaneous hypersensitivity reaction to the application of the antigen between hours 48 and 72. The Leishmanin skin test evaluated was negative in 97 people infected with T. cruzi, thus specificity of 95.1% was achieved. In conclusion, the intradermal Montenegro test is a simple and effective diagnostic tool that also could be used to discriminate infections by Leishmania or T. cruzi, in Peruvian geographic areas where both parasites are present.

The performance of four molecular methods for the laboratory diagnosis of congenital toxoplasmosis in amniotic fluid samples

Introduction Toxoplasmosis may be life-threatening in fetuses and in immune-deficient patients. Conventional laboratory diagnosis of toxoplasmosis is based on the presence of IgM and IgG anti-Toxoplasma gondii antibodies; however, molecular techniques have emerged as alternative tools due to their increased sensitivity. The aim of this study was to compare the performance of 4 PCR-based methods for the laboratory diagnosis of toxoplasmosis. One hundred pregnant women who seroconverted during pregnancy were included in the study. The definition of cases was based on a 12-month follow-up of the infants. Methods Amniotic fluid samples were submitted to DNA extraction and amplification by the following 4 Toxoplasma techniques performed with parasite B1 gene primers: conventional PCR, nested-PCR, multiplex-nested-PCR, and real-time PCR. Seven parameters were analyzed, sensitivity (Se), specificity (Sp), positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV), positive likelihood ratio (PLR), negative likelihood ratio (NLR) and efficiency (Ef). Results Fifty-nine of the 100 infants had toxoplasmosis; 42 (71.2%) had IgM antibodies at birth but were asymptomatic, and the remaining 17 cases had non-detectable IgM antibodies but high IgG antibody titers that were associated with retinochoroiditis in 8 (13.5%) cases, abnormal cranial ultrasound in 5 (8.5%) cases, and signs/symptoms suggestive of infection in 4 (6.8%) cases. The conventional PCR assay detected 50 cases (9 false-negatives), nested-PCR detected 58 cases (1 false-negative and 4 false-positives), multiplex-nested-PCR detected 57 cases (2 false-negatives), and real-time-PCR detected 58 cases (1 false-negative). Conclusions The real-time PCR assay was the best-performing technique based on the parameters of Se (98.3%), Sp (100%), PPV (100%), NPV (97.6%), PLR (∞), NLR (0.017), and Ef (99%). .

IgG Western Blot for Confirmatory Diagnosis of Equivocal Cases of Toxoplasmosis by EIA-IgG and Fluorescent Antibody Test

The performance values of available techniques used in serodiagnosis of toxoplasmosis are satisfactory but they raise problems of equivocal and discordant results for very low IgG titers. Recently marketed, LDBio-Toxo II IgG Western blot (IB) showed an excellent correlation with the dye test. We estimated the proportion of equivocal and discordant results between the enzyme immunoassay Platelia Toxo IgG (EIA-IgG) and fluorescent antibody test (FAT) and assessed the usefulness of the IB as a confirmatory test. Out of 2,136 sera collected from pregnant women, 1,644 (77.0%) tested unequivocally positive and 407 (19.0%) were negative in both EIA-IgG and FAT. The remaining 85 (4%) sera showed equivocal or discordant results. Among them, 73 (85.9%) were positive and 12 (14.1%) were negative in IB. Forty-one (89.1%) equivocal sera in EIA-IgG and 46 (86.8%) equivocal sera in FAT were positive in IB. Reducing the cut-off values of both screening techniques improved significantly their sensitivity in detecting very low IgG titers at the expense of their specificity. In conclusion, equivocal results in routine-used techniques and their discordance in determination of the immune status in pregnancy women were not uncommon. IB test appeard to be highly useful in these situations as a confirmatory technique.

Infection by Toxoplasma gondii in Neotropical non-human primates / Infecção por Toxoplasma gondii em primatas neotropicais não-humanos

Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909) is an obligatory intracellular protozoan parasite of warm animals, including human and non-human primates. Domestic and wild felids are considered definitive hosts. Several authors have already identified lesions in New World primates caused by T. gondii. Nevertheless, little is known about serological studies on those animals. With this reason, New World non-human primates of the genera Cebus and Callithrix that were apprehended by governmental authorities and sent to the Wildlife Screening Center (Cetas)/IBAMA, at the municipality of Seropédica, state of Rio Janeiro, were bled and sera were submitted to the indirect hemagglutination test for detection of anti-T. gondii antibodies. From 21 sera of Cebus primates, 76.19% (16/21) had anti-T. gondii antibodies. Titles varied from 16 to 2048. In samples from 21 Callithrix, only 4.5% (1/22) had anti-T. gondii antibodies. Only one animal had a title of 32. During all the time those animals were clinical evaluated until sample was collected; none of them had any clinical sign or sequel related to infection by T. gondii. The fact that the origin of these primates is unknown and that there is no information about their feeding habits before captivity makes it difficult to determine the source of T. gondii infection.

Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909) é um protozoário parasita intracelular obrigatório de animais homeotérmicos, incluindo primatas humanos e não humanos, e que tem felídeos domésticos e silvestres como hospedeiros definitivos. Inúmeros trabalhos já identificaram lesões causadas por T. gondii em primatas neotropicais, entretanto, poucos estudos abordando a resposta sorológica destes animais ao parasito foram feitos. Com este intuito, primatas neotropicais do gênero Cebus e Callithrix apreendidos por órgãos governamentais e enviados ao Centro de Triagem de Animais Silvestres (Cetas)/IBAMA, no município de Seropédica/RJ, tiveram amostras de sangue coletadas e as alíquotas séricas submetidas ao teste de hemaglutinação indireta para detecção de anticorpos anti-T. gondii. Dos 21 animais do gênero Cebus avaliados, em 76,19% (16/21) das amostras foram identificados anticorpos hemaglutinantes anti-T. gondii. Os títulos hemaglutinantes variaram desde 16 até 2048. Por outro lado, dos 22 primatas do gênero Callithrix cujas amostras séricas foram testadas, apenas 4,5% (1/22) apresentaram anticorpos anti-T. gondii. Apenas o título de 32 foi identificado em um único animal. Durante a avaliação clínica e o tempo em que os animais permaneceram no CETAS, desde a chegada, em nenhum animal foram observados sinais clínicos ou sequelas condizentes com a infecção por T. gondii. O desconhecimento sobre a verdadeira procedência desses símios, bem como os aspectos sanitários relativos à alimentação deles dificulta a determinação da fonte de infecção por T. gondii.

Three cases of amoebic liver abscess causing inferior vena cava obstruction, with a review of the literature / 대한간학회지

Amoebic liver abscess is a common disease, especially in endemic areas, but it is a rare cause of inferior vena cava (IVC) obstruction, with only a few cases appearing in the literature. We report three cases of amoebic liver abscess complicated with obstruction of the IVC and which responded to conservative treatment or radiological intervention.

Canine visceral leishmaniasis: study of methods for the detection of IgG in serum and eluate samples / Leishmaniose visceral canina: avaliação de métodos para detecção de IgG em amostras de soro e eluato

The Brazilian Ministry of Health recommends the culling and euthanasia of dogs with a positive serological test for canine visceral leishmaniasis (CVL). In the Municipality of Rio de Janeiro, the technique used for the diagnosis of CVL is the indirect fluorescent antibody test (IFAT), using blood samples eluted on filter paper (eluate). A dog survey was conducted over a period of one year in the region of Carapiá, in order to evaluate the diagnosis of CVL in this region. All animals underwent clinical examination, and blood samples (serum and eluate) were collected for analysis by enzyme immunoassay (ELISA) and IFAT. A skin biopsy was obtained for parasitological examination (culture). A total of 305 animals were studied and Leishmania chagasi was isolated from nine animals. Sensitivity and specificity were 100 percent and 96.6 percent for ELISA, respectively, 100 percent and 65.5 percent for IFAT (cut-off at a 1:40 dilution), 100 percent and 83.4 percent for IFAT (cut-off at a 1:80 dilution), and 22.2 percent and 97.0 percent for eluate IFAT. In conclusion, ELISA was the best tool for the diagnosis of CVL among the serological techniques tested. The present results suggest the need for a better evaluation of filter paper IFAT as the only diagnostic method for CVL in the Municipality of Rio de Janeiro.

O Ministério da Saúde recomenda a eutanásia de cães sororreatores como controle da leishmaniose visceral canina (LVC). No Município do Rio de Janeiro, a técnica utilizada para o diagnóstico da LVC é o teste de imunofluorescência indireta (IFI), utilizando amostras de sangue eluídas em papel de filtro (eluato). Um levantamento, durante um ano, foi conduzido na região de Carapiá, a fim de avaliar o diagnóstico da LVC nesta região. Todos os animais foram submetidos a exame clínico e coleta de sangue (soro e eluato) para realização do ensaio imunoenzimático (ELISA) e imunofluorescência indireta (IFI). Biópsia de pele foi obtida para o exame parasitológico (cultura). Foram avaliados 305 (89,4 por cento) animais de uma população de 341 cães e Leishmania chagasi foi isolada de nove animais. A sensibilidade e especificidade do ELISA foram de 100 por cento e 96,6 por cento, na IFI (ponto de corte 1:40) de 100 por cento e 65,5 por cento, na IFI (ponto de corte 1:80) de 100 por cento e 83,4 por cento e na IFI (eluato) de 22,2 por cento e 97,0 por cento, respectivamente. A partir dos resultados obtidos podemos concluir que entre as técnicas sorológicas empregadas, o teste de ELISA apresentou-se como a melhor ferramenta para o diagnóstico da LVC. Os resultados sugerem a necessidade de uma melhor avaliação do teste de IFI realizada com eluato, como único método de diagnóstico para LVC no município do Rio de Janeiro.

Anti-Toxoplasma gondii secretory IgA in tears of patients with ocular toxoplasmosis: immunodiagnostic validation by ELISA

Toxoplasma gondii causes posterior uveitis and the specific diagnosis is based on clinical criteria. The presence of anti-T. gondii secretory IgA (sIgA) antibodies in patients' tears has been reported and an association was found between ocular toxoplasmosis and the anti-T. gondii sIgA isotype in Brazilian patients. The purpose of this study was to provide an objective validation of the published ELISA test for determining the presence of anti-T. gondii sIgA in the tears of individuals with ocular toxoplasmosis. Tears from 156 patients with active posterior uveitis were analysed; 82 of them presented characteristics of ocular toxoplasmosis (standard lesion) and 74 patients presented uveitis due to other aetiologies. Cases of active posterior uveitis were considered standard when a new inflammatory focus satellite to old retinochoroidal scars was observed. The determination of anti-T. gondii sIgA was made using an ELISA test with crude tachyzoite antigenic extracts. Tears were collected without previous stimulation. Detection of sIgA showed 65.9 percent sensitivity (95 percent CI = 54.5-74.4), 71.6 percent specificity (95 percent CI = 59.8-81.2), a positive predictive value of 72 percent (95 percent CI = 60.3-81.5) and a negative predictive value of 65.4 percent (95 percent CI = 54.0-75.4). sIgA reactivity was higher in the tears of patients with active posterior uveitis due to T. gondii (p < 0.05). The test is useful for differentiating active posterior uveitis due to toxoplasmosis from uveitis caused by other diseases.