Production of a cloned calf from a fetal fibroblast cell line

The present study examined the in vitro and in vivo development of bovine nuclear-transferred embryos. A bovine fetal fibroblast culture was established and used as nucleus donor. Slaughterhouse oocytes were matured in vitro for 18 h before enucleation. Enucleated oocytes were fused with fetal fibroblasts with an electric stimulus and treated with cytochalasin D and cycloheximide for 1 h followed by cycloheximide alone for 4 h. Reconstructed embryos were cultured for 7-9 days and those which developed to blastocysts were transferred to recipient cows. Of 191 enucleated oocytes, 83 (43.5 percent) were successfully fused and 24 (28.9 percent) developed to blastocysts. Eighteen freshly cloned blastocysts were transferred to 14 recipients, 5 (27.8 percent) of which were pregnant on day 35 and 3 (16.7 percent) on day 90. Of the three cows that reached the third trimester, one recipient died of hydrallantois 2 months before term, one aborted fetus was recovered at 8 months of gestation, and one delivered by cesarian section a healthy cloned calf. Today, the cloned calf is 15 months old and presents normal body development (378 kg) and sexual behavior (libido and semen characteristics).

Establishment of new murine embryonic stem cell lines for the generation of mouse models of human genetic diseases

Embryonic stem cells are totipotent cells derived from the inner cell mass of blastocysts. Recently, the development of appropriate culture conditions for the differentiation of these cells into specific cell types has permitted their use as potential therapeutic agents for several diseases. In addition, manipulation of their genome in vitro allows the creation of animal models of human genetic diseases and for the study of gene function in vivo. We report the establishment of new lines of murine embryonic stem cells from preimplantation stage embryos of 129/Sv mice. Most of these cells had a normal karyotype and an XY sex chromosome composition. The pluripotent properties of the cell lines obtained were analyzed on the basis of their alkaline phosphatase activity and their capacity to form complex embryoid bodies with rhythmically contracting cardiomyocytes. Two lines, USP-1 and USP-3, with the best in vitro characteristics of pluripotency were used in chimera-generating experiments. The capacity to contribute to the germ line was demonstrated by the USP-1 cell line. This cell line is currently being used to generate mouse models of human diseases

Diagnóstico de cistos ovarianos pela palpaçäo de ultra-sonografia transretal em fêmeas suínas: relato de dois casos clínicos / Ovarian cysts, rectal palpation and ultra-rectal ultra-sonography diagnosis in sows: literature review and two clinical report studies

Foram abordados alguns conceitos sobre a fisiopatologia e a semiologia de cistos ovarianos em fêmeas suínas, descrevendo-se dois casos clínicos, um sintomático. Observou-se infertilidade, cios irregulares, edema de vulva e clitóris aumentado de volume. A palpaçäo retal, constataram-se cistos em ambos os ovários da fêmea com sintomas e um cisto no ovário esquerdo da assintomática. A ultra-sonografia possibilitou visualizar, assim como avaliar com precisäo grau de luteinizaçäo e o tamanho dos cistos. A necrópsia confirmou os achados da palpaçäo e ultra-sonografia transretal

Efeito de diferentes gonadotrofinas sobre o crescimento folicular e a ovulaçäo na cobaia (Cavia porcellus) / Effect of different gonadotrophins on the follicular development and ovulation in guinea pig (Cavia porcellus)

Para estudar a resposta superovulatória em cobaias, frente a vários esquemas de tratamentos com diferentes gonadotrofinas, foram utilizadas 60 fêmeas, divididas em 10 grupos de 6 animais cada um. Em uma 1§ fase, formada por 6 grupos, cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: PMSG; FSH-p em dose única; FSH-p em 3 doses; FSH-h; HMG e soluçäo de NaCl 0,9 por cento (grupo controle), respectivamente. Numa 2§ fase, constituída por 4 grupos, cada um recebeu 22 UI de FSH-h, 15 UI de FSH-h; HMG e soluçäo de NaCl 0,9 por cento (grupo controle), respectivamente. Nos 3 grupos experimentais da 2§ fase foi aplicada também PGF2alfa. Todos os grupos, com exceçäo dos 2 controles, receberam também HCG. Os 3 primeiros grupos da 1§ fase tiveram ovulaçäo bloqueada, sendo que a PMSG causou luteinizaçäo generalizada dos folículos e as demais gonadotrofinas induziram luteinizaçäo folicular precoce com aprisionamento dos óvulos. Na 2§ fase, obteve-se um número médio de ovulaçöes em um grupo e a superovulaçäo de 2 animais. Concluiu-se que a PGF2alfa participa dos mecanismos de ovulaçäo na cobaia e que é possível obter aumento do crescimento folicular múltiplo com o emprego de FSH-h + HCG e HMG + HCG, associados ou näo à PGF2alfa

Utilizaçäo de marcadores de DNA para o diagnóstico genômico de animais domésticos: 1. Detecçäo da mutaçäo pontual causadora da deficiência de adesäo de leucócitos bovinos (BLAD) em gado Holandês no Brasil / Use of DNA markers for genomic diagnosis of domestic animals: 1. Detection of point mutation causing bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) in Brazilian Holstein cattle

Analisaram-se 10 bovinos da raça Holandesa, descendentes da linhagem Ivanhoe. Submeteram-se os DNAs, purificados a partir de leucócitos destes animais, à técnica de Polymerase Chain Reaction (PCR) e posterior digestäo com as enzimas de restriçäo Hae III e Taq I. Estabeleceu-se, desta maneira, o diagnóstico genômico da Deficiência de Adesäo de Leucócitos Bovinos (BLAD). Os exames revelaram que 2 animais eram portadores e 8, normais. A partir do desenvolvimento da metodologia de PCR, tornou-se disponível um método rápido, prático e eficiente para a seleçäo de touros em Centrais de Inseminaçäo Artificial, por meio da detecçäo de animais portadores e normais

Utilizaçäo de marcadores de DNA para o diagnóstico genômico de animais domésticos: 2. Detecçäo da mutaçäo pontual causadora da Paralisia Hipercalêmica Periódica (HYPP) em equinos da raça Quarto de Milha / Use of DNA markers for genomic diagnosis of domestic animals: 2. Detection of point mutation causing Hyperkalemic Periodic Paralysis (HYPP) in Quarter horses

Analisaram-se 12 equinos da raça Quarto de Milha, descendentes da linhagem Impressive. Submeteram-se os DNAs purificados a partir de leucócitos destes animais, à técnica de Polymerase Chain Reaction (PCR) e posterior digestäo com a enzima de restriçäo Taq I. Estabeleceu-se, dessa maneira, o diagnóstico genômico da Paralisia Hipercalcêmica Periódica (HYPP). Os exames revelaram que 9 animais eram portadores heterozigotos (N/H) e 3, normais homozigotos (N/N). A partir do desenvolvimento da metodologia de PCR tornou-se possível diagnosticar o problema e propor maneiras de controle do alastramento desse gene defectivo na populaçäo por meio da detecçäo de animais portadores e normais

Características seminais de cäes da raça Pastor Alemäo / Seminal characteristics of German Shepherd dogs

Sêmen de 25 cäes da raça Pastor Alemäo, com 1 a 7 anos de idade e pesando 30 a 35 quilos, foi coletado por masturbaçäo. Com o objetivo de utilizar o material para inseminaçäo artificial, colheu-se a segunda e parte da terceira fraçäo, constatando-se, em média, volume de 7,17 ml; cor branca e aspecto leitoso; motilidade de 68,84 por cento; vigor de 3,5; concentraçäo de 136.192 espermatozóides por mm3 e de 889.772.000 por ejaculado; defeitos espermáticos maiores de 9,92 por cento e menores de 7,62 por cento. O pH do sêmen, dos diluidores e do sêmen diluído variou, respectivamente, de 6,02 a 6,60; 5,85 a 6,90; e 5,97 a 6,76; a pressäo osmótica de 285,20 a 295,00; 240,00 a 310,00; e 272,32 a 303,92 mOsmois e a concentraçäo de sódio e potássio, respectivamente, para o plasma seminal e os 4 diluidores, de 134,40 a 156,00; 7,80 a 13,72; 3,00 a 270,00; e 6,00 a 25,00 mEq/l. Verificou-se que entre cäes, houve variaçäo significante de todas as características seminais, exceto a pressäo osmótica e, ainda, correlaçöes entre os caracteres seminais e entre estes e os totais de patologias espermáticas. A variabilidade das características seminais entre os cäes foi bem maior quando comparada entre as colheitas de cada animal, exceto a pressäo osmótica e a concentraçäo de sódio, que se apresentaram de maneira inversa

Efeitos do hormônio folículo estimulante (FSH) e da gonadotrofina da menopausa humana (hMG) como agentes superovulantes em tratamentos sucessivos de vacas da raça Holandesa variedade preta e branca, utilizadas em transferência de embriöes / Effect of follicle stimulating hormone (FSH) and human menopausae gonadotrophin (hMG) as superovulating agents in consecutive treatments of Holstein black and white cows used in embryo transfer

Para verificar o efeito superovulante de 38mg de FSH e de 2400 U.I. de hMG (1200 U.I. de FSH + 1200 U.I. de LH) em doses diárias decrescentes durante 4 dias consecutivos, a partir do 10§ dia do ciclo estral, foram utilizadas 10 vacas Holandêsas, variedade preta e branca. No 3§ dia após o início do tratamento, os animais receberam 500 ug de Cloprostenol para sincronizaçäo do ciclo estral, sendo inseminados 12 e 24 horas após o início do cio. O processo de superovulaçäo foi repetido por 5 vezes, com intervalo de 60 dias, empregando-se os mesmos animais e as mesmas doses hormonais para verificar as possíveis alteraçöes das respostas superovulatórias. Realizaram-se as colheitas dos embriöes no 7§ dia após o cio, através do método näo cirúrgico, em sistema fechado e com o auxílio de catéter Neustadt Ad-Aisch. Utilizaram-se, para cada corno uterino, 500ml do meio de Dulbecco modificado (PBS), aquecidos a 37§C e enriquecidos com 1 por cento de soro fetal bovino. O meio recuperado permaneceu em repouso por 30 minutos, sifonando-se o sobrenadante. Os 100ml restantes foram colocados em placas de Petri quadriculadas para localizaçäo das estruturas, empregando-se estereomicroscópio com aumentos de 10 e 40 vezes. Das 105 estruturas obtidas com FSH e 43 com hMG, 79 (75 por cento) e 31 (72 por cento) eram viáveis, sendo os embriöes inovulados nos cornos uterinos ipsolaterais aos corpos lúteos através do método näo cirúrgico. O diagnóstico de gestaçäo foi realizado através de palpaçäo retal, 45-60 dias após as transferências, obtendo-se taxas de 43 por cento (34/79) para o FSH e 55 por cento (17/31) para o hMG

Electroejaculation and seminal characteristics in chinchilla (Chinchilla laniger)

O método da eletroejaculaçäo foi utilizado em chinchila através de eletrodo introduzido a 3 cm no reto do animal, obtendo-se os melhores resultados com uma série de 9 choques de 12,5 mA, 6 choques de25,0 mA e 19 choques de 50,0 mA. O sêmen obtido nestas condiçöes foi considerado de boa qualidade, comportando-se satisfatoriamente tanto no processo de congelamento, quanto no descongelamento

Níveis de progesterona em leite desnatado de vacas no período pós-parto e diagnóstico precoce de gestaçäo / Progesterone levels in fat-free milk of cows during post partum period and early pregnancy diagnosis

Foram avaliados os períodos pós-parto de vacas primíparas mestiças Gir x Caracu e Nelore x Caracu, mantidas em regime extensivo de pastagem. Para a determinaçäo dos níveis hormonais de progesterona, amostras de leite foram coletadas semanalmente até que os animais apresentassem o 1§ estro perceptível, quando foram inseminadas artificialmente. Decorridos 21 dias da inseminaçäo, amostras foram coletadas e dosadas para fazer o diagnóstico precoce de gestaçäo. Os resultados mostraram início de ciclicidade ovariana com 9,89 semanas após o parto para vacas Gir x Caracu, com valores médios de progesterona de 0,28 nmol/l no dia do estro e 7,62 nmol/l aos 21 dias após a inseminaçäo. Para vacas Nelore x Caracu, o estro se deu com 12,08 semanas após o parto e com valores médios de progesterona de 0,46 nmol/l e 9,23 nmol/l para o dia do estro e no 21§ dia, respectivamente. Dez gestaçöes de doze diagnosticadas no 21§ dia foram confirmadas por palpaçäo retal, tendo ocorrido um caso de mortalidade embrionária precoce. Outras três vacas foram inseminadas durante a fase luteínica. A eficiência na observaçäo dos estros foi de 52,94 por cento, pois de 34 identificados pelos níveis hormonais, 18 foram percebidos visualmente. A variaçäo entre os cruzamentos näo alterou significativamente o nível de progesterona no dia do estro, tampouco no 21§ dia após inseminaçäo e também quanto ao período necessário ao reinício da atividade ovariana pós-parto

Investigaçäo sobre a presença de leptospiras nos ovários de hamsters experimentalmente infectados com Leptospiras interrogans sorotipo pomona / Investigation on the presence of leptospires in ovaries of hamsters experimentally infected with Leptospiras interrogans serovar pomona

De 90 hamsters primíparas com 80 a 120 gramas de peso vivo, 75 foram inoculadas com a dose individual de 0,5 ml de estirpe virulenta do sorotipo pomona (30 a 40 leptospiras ativas por campo microscópico, no aumento de 200 vezes) e as 15 remanescentes constituíram o grupo testemunho näo infectado. Todos os animais tratados com leptospiras apresentaram os sinais da infecçäo (prostraçäo, taquipnéia, eriçamento do pelame, icterícia e hemorragias nasal, bucal e perineal) e foram sacrificados por ocasiäo da fase agônica da doença, situada entre o quarto e o sétimo dia da inoculaçäo. Nesta oportunidade, os ovários foram colhidos em condiçöes assépticas e submetidos à técnica de visualizaçäo de leptospiras (exame direto em microscopia de campo escuro, coloraçäo argêntica de Levaditi e reaçäo de imunofluorescência direta), cultivo em meio de Fletcher e exame histopatológico (coloraçäo de hematoxilina e eosina). A ocorrência de uma possível contaminaçäo estabelecida durante a retirada dos ovários foi investigada através da lavagem em soluçäo salina tamponada estéril. As leptospiras foram demonstradas em todos os ovários do grupo de animais experimentalmente inoculados (lavados e näo lavados), através da coloraçäo de Levaditi, reaçäo imunofluorescência direta e também no cultivo em meio de Fletcher. O exame direto em microscopia de campo escuro mostrou ser uma técnica muito pouco sensível. O exame das preparaçöes submetidas à coloraçäo argêntica possibilitou a visualizaçäo de leptospiras em diferentes estruturas dos ovários, incluindo: o interstício, a zona pelúcida e o interior dos óvulos. Os exames histopatológicos permitiram observar as alteraçöes morfológicas típicas de um processo inflamatório agudo em 57 por cento dos ovários examinados