RESUMEN
Diferentes modelos animais são utilizados para investigação do metabolismo e reparo ósseo pós-menopausa, resultando em diferentes impactos na produção dos hormônios ovarianos. O presente trabalho analisou e comparou o processo de reparo ósseo intramembranoso após a extração dentária de camundongos fêmeas em condição de estropausa fisiológica, induzida quimicamente e por ovariectomia, bem como os níveis séricos de marcadores ósseos e de estresse oxidativo. Foram utilizados 46 camundongos fêmeas C57BL/6J, com idades iniciais entre 4, 6 e 18 meses, pesando cerca de 25 - 28 gramas, as quais constituíram cinco grupos: CT animas que não receberam nenhum tratamento (6 meses), SHAM ovariectomia fictícia (4 meses), OVX submetidas a ovariectomia (4 meses), VCD medicadas com diepóxido 4-vinilciclohexeno (VCD) (4 meses) na dose de 160 mg/Kg/dia, via IP por 20 dias consecutivos e ID em período pós-estropausa fisiológica (18 meses). Constatada a condição de diestro persistente nos animais de todos os grupos, os mesmos foram submetidos a exodontia do incisivo superior direito para posterior eutanásia nos períodos de 7 e 21 dias, quando as maxilas contendo os alvéolos foram removidas para obtenção de lâminas histológicas coradas com HE, Tricrômico de Goldner e para a técnica imuno-histoquímica para as proteínas RANKL e OPG. O sangue também foi coletado para as análises bioquímicas para dosagem dos níveis de cálcio, fosfato, fosfatase alcalina (FAL) e TRAP total, bem como para capacidade antioxidante total e TBARs. A análise histopatológica revelou que todos os alvéolos repararam aos 21 dias; porém, com diferenças nos aspectos histomorfológicos entre os grupos. Os grupos Controle e SHAM apresentaram trabeculado ósseo regular e em remodelação com moderada marcação para RANKL e OPG. Já os grupos OVX e Idosa apresentaram trabéculas ósseas irregulares e delgadas desde o dia 7, as quais mostravam-se pouco celularizadas aos 21 dias. O grupo VCD exibiu neoformação mais discreta aos 7 dias, porém, com tecido ósseo em franca remodelação aos 21 dias. Apesar destas diferenças, notou-se moderada marcação para RANKL e OPG nestes grupos, com destaque para o infiltrado inflamatório mononuclear. Os níveis séricos de TRAP e FAL estavam significativamente aumentados no grupo Idosa aos 21 dias em comparação com os demais grupos, bem como a capacidade antioxidante total. Não foram observadas diferenças estatísticas nos níveis de cálcio e fosfato, e em TBARs. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que os diferentes modelos de falência ovariana, fisiológica ou precoce, interferem de modo distinto no reparo ósseo alveolar pós-exodontia, bem como nos níveis séricos nos marcadores de remodelação óssea e de capacidade antioxidante, devendo ser considerados no momento da seleção do modelo e correlação com os achados clínicos em humanos(AU)
Different animal models are used to investigate postmenopausal metabolism and bone repair, resulting in different impacts on ovarian hormone production. The present work analyzed and compared the intramembranous bone repair process after tooth extraction in female mice in physiological stropause, chemically induced and by ovariectomy, as well as the serum levels of bone markers and oxidative stress. Fortysix C57BL/6J female mice were used, with initial ages between 4, 6 and 18 months, weighing about 25 - 28 grams, which constituted five groups: CT - animals that did not receive any treatment (6 months), SHAM - ovariectomy dummy (4 months), OVX submitted to ovariectomy (4 months), VCD medicated with 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) (4 months) at a dose of 160 mg/kg/day, via IP for 20 consecutive days and ID in the physiological post-estropause period (18 months). Once the condition of persistent diestrus was observed in the animals of all groups, they were submitted to extraction of the upper right incisor for later euthanasia in the periods of 7 and 21 days, when the jaws containing the alveoli were removed to obtain histological slides stained with HE, Goldner trichrome and for the immunohistochemical technique for RANKL and OPG proteins. Blood was also collected for biochemical analysis to measure calcium, phosphate, alkaline phosphatase (FAL) and total TRAP levels, as well as for total antioxidant capacity and TBARs. Histopathological analysis revealed that all alveoli repaired at 21 days; however, with differences in histomorphological aspects between the groups. The Control and SHAM groups showed regular bone trabeculation and remodeling with moderate staining for RANKL and OPG. On the other hand, the OVX and Elderly groups presented irregular and thin bone trabeculae from day 7, which showed little cellularization at day 21. The VCD group exhibited more discrete neoformation at 7 days, however, with bone tissue in clear remodeling at 21 days. Despite these differences, moderate staining for RANKL and OPG was observed in these groups, with emphasis on the mononuclear inflammatory infiltrate. The serum levels of TRAP and FAL were significantly increased in the Elderly group at 21 days compared to the other groups, as well as the total antioxidant capacity. No statistical differences were observed in calcium and phosphate levels, and in TBARs. From the results obtained, it can be concluded that the different models of ovarian failure, physiological or early, interfere differently in post-extraction alveolar bone repair, as well as in the serum levels of bone remodeling and antioxidant capacity markers, and should be considered at the time of model selection and correlation with clinical findings in humans(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Cirugía Bucal , Regeneración Ósea , Posmenopausia , Envejecimiento , Estrés Oxidativo , RatonesRESUMEN
INTRODUÇÃO: Os sarcomas de partes moles (SPM) de alto grau são neoplasias heterogêneas, de prognóstico ruim e que apresentam poucas alternativas de tratamento. A identificação de marcadores de resposta tumoral ao tratamento, prognóstico, e até ao desenvolvimento de novas drogas, é uma busca incessante para um melhor tratamento dos sarcomas. Neste aspecto, o receptor Lgr5 tem um grande potencial em ser um novo alvo molecular, sendo um marcador de células-tronco das criptas intestinais e glândulas mamárias que também atua como um modulador negativo da sinalização da via Wnt/ß-catenina, uma das mais importantes na biologia de sarcomas emerge como um promissor candidato para estudos pré-clínicos, uma vez que já foi demonstrada sua importância em tumores do trato gastrointestinal. Para isso, os modelos de tumor de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) representam uma plataforma valiosa para identificar novos biomarcadores e novos alvos, assim como o Lgr5 para avaliar a resposta à terapia e os mecanismos de resistência. OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo estabelecer, caracterizar e testar a proteína Lgr5 através de ensaios in vitro e in vivo para desvendar a importância de Lgr5 na biologia de SPM e estabelecer uma estrutura integrada, convergente e translacional para o estudo deste tipo de tumor. MATERIAIS E MÉTODOS: Para a determinação da expressão de Lgr5 foi estabelecida duas coortes de estudo, uma retrospectiva oriunda do Registro Institucional de Sarcomas e uma prospectiva, onde foram convidados pacientes operados na Instituição com o intuito de gerar Patient-derived xenografts (PDX), um modelo-pré-clínico que possui a capacidade de manter as características moleculares dos tumores dos pacientes. Para isso, foram utilizados fragmentos implantados em camundongos imunossuprimidos para gerar esses modelos tumorais derivados de pacientes, além dos estudos funcionais in vitro utilizando linhagens de SPM para análise de perfil de expressão da proteína Lgr5 através de ensaios com imunofluorescência para verificar a capacidade de expressão de Lgr5, citometria de fluxo para verificar o padrão e quantidade de proteína nas amostras analisadas e western blotting para obter um padrão de marcação da proteína Lgr5. Além dos ensaios funcionais para avaliar a participação da proteína na proliferação, se a expressão da proteína interfere no poder migratório das células e tumores de SPM e capacidade de auto renovação, bem como sua associação com os dados clínicos e dados de sobrevida. RESULTADOS: O Registro Institucional retrospectivo conta com mais de 300 pacientes, já o Registro prospectivo com 70 pacientes que derivaram a geração de 33 PDX. Foi observado que pacientes com H-score superior a 20 apresentaram sobrevida global menor em 5 anos em comparação com o H-score de pacientes com valores inferiores a 20. Agora na outra análise feita, o H-score de pacientes com valores superiores a 25 é pior em comparação com os que apresentaram valores inferiores a 25 nos dados de sobrevida livre de doença. Além disso, células que superexpressam a proteína Lgr5 tem maior capacidade migratória (p= 0.02) e uma tendência de aumento na proliferação e auto renovação. Realizamos o teste de implante dessas populações positivas e negativas de Lgr5, separadas previamente por cell sorting. Para isso foram utilizados animais Balb/c Nude. Sugerindo que a expressão da proteína transduzida pode ser modulada por mecanismos compensatórios que precisam ser explorados. CONCLUSÃO: A construção do Registro Institucional de SPM é um grande passo para o melhor compreendimento da biologia dos Sarcomas, além da possibilidade de estudar novos alvos terapêuticos desse tumor raro, uma vez que os estudos e artigos científicos ainda são muito escassos. A geração dos modelos PDX também foi uma estratégia implantada muito bem executada com a geração de 33 PDX de diversos subtipos histológicos. Além da proteína Lgr5 induzir a migração celular a sua expressão está relacionada a um pior prognóstico, uma vez que, quanto maior a expressão de Lgr5 menor é a sobrevida global do paciente.
INTRODUCTION: High-grade soft tissue sarcomas (STS) are heterogeneous neoplasms with a poor prognosis and few treatment alternatives. The identification of tumor response markers to treatment, prognosis, and even the development of new drugs, is an incessant search for a better treatment of sarcomas. In this aspect, the Lgr5 receptor has great potential to be a new molecular target, being a marker of stem cells of the intestinal crypts and mammary glands that also acts as a negative modulator of the signaling of the Wnt/ß-catenin pathway, one of the most important in the biology of sarcomas emerges as a promising candidate for preclinical studies, since its importance in tumors of the gastrointestinal tract has already been demonstrated. To that end, patient-derived xenograft (PDX) tumor models represent a valuable platform to identify new biomarkers and new targets, as does Lgr5 to assess therapy response and resistance mechanisms. OBJECTIVE: This study aimed to establish, characterize, and test the Lgr5 protein through in vitro and in vivo assays to unravel the importance of Lgr5 in the biology of PMS and to establish an integrated, convergent and translational framework for the study of this type of tumor. MATERIALS AND METHODS: To determine the expression of Lgr5, two study cohorts were established, a retrospective one from the Institutional Registry of Sarcomas and a prospective one, in which patients operated on at the Institution were invited to generate Patient-derived xenografts (PDX), a pre-model -clinical that has the ability to maintain the molecular characteristics of patients' tumors. For this, fragments implanted in immunosuppressed mice were used to generate these tumor models derived from patients, in addition to in vitro functional studies using SPM strains to analyze the expression profile of the Lgr5 protein through immunofluorescence assays to verify the ability to express Lgr5, flow cytometry to verify the pattern and amount of protein in the analyzed samples and western blotting to obtain a pattern of labeling of the Lgr5 protein. In addition to functional assays to assess the protein's participation in proliferation, whether protein expression interferes with the migratory power of SPM cells and tumors and self-renewal capacity, as well as its association with clinical data and survival data. RESULTS: The Institutional Retrospective Registry has more than 300 patients, while the Prospective Registry has 70 patients who derived the generation of 33 PDX. It was observed that patients with an H-score greater than 20 had a lower overall survival at 5 years compared to the H-score of patients with values below 20. Now in the other analysis performed, the H-score of patients with values greater than 25 it is worse compared to those who had values less than 25 in the disease-free survival data. Furthermore, cells that overexpress the Lgr5 protein have greater migratory capacity (p=0.02) and a tendency to increase proliferation and self-renewal. We performed the implant test of these positive and negative populations of Lgr5, previously separated by cell sorting. For this, Balb/c Nude animals were used. Suggesting that the expression of the transduced protein can be modulated by compensatory mechanisms that need to be explored. CONCLUSION: The construction of the Institutional Registry of PMS is a big step towards a better understanding of the biology of Sarcomas, in addition to the possibility of studying new therapeutic targets for this rare tumor, since studies and scientific articles are still very scarce. The generation of PDX models was also an implemented strategy very well executed with the generation of 33 PDX of several histological subtypes. In addition to the Lgr5 protein inducing cell migration, its expression is related to a worse prognosis, since the higher the Lgr5 expression, the lower the overall survival of the patient
Asunto(s)
Sarcoma , Neoplasias de los Tejidos Blandos , Pronóstico , RatonesRESUMEN
A instalação das osteonecroses dos maxilares(OM) tem sido relacionada ao uso crônico de medicamentos antirreabsortivos indicados para doenças e distúrbios do metabolismo ósseo, como os bifosfonatos nitrogenados (nBF), especialmente quando associados a intervenções cirúrgicas-odontológicas. Deste modo, especulase que a instalação desta doença não ocorre somente devido à condição do tecido ósseo e sua capacidade reacional, mas principalmente pela sua condição de defesa imunológica. O presente estudo tem como objetivo analisar o padrão de reparo ósseo de alvéolos dentários de incisivos superiores recém-extraídos de camundongos 129/Sv geneticamente modificados (knockouts KO) para a enzima 5-lipoxigenase (5-LO), os quais apresentam fenótipo esqueletal osteopetrótico, comparando-os com tipo selvagem (Wild Type WT), com e sem administração de nBF. Para tanto foram utilizados 80 camundongos machos com idades variando entre 8 e 10 semanas, sendo 46 animais 129/Sv WT e 46 animais 129/Sv 5-LOKO, os quais foram submetidos à exodontia do dente incisivo superior direito e divididos em quatro grupos de acordo com o tratamento: Grupo WT 0,1 ml de soro fisiológico 0,9%, Grupo WT-ZL 0,5 mg/Kg de ácido zoledrônico (ZL), Grupo 5- LOKO - 0,1 ml de soro fisiológico 0,9%, Grupo 5-LOKO-ZL 0,5 mg/Kg de ZL, sendo ambas soluções administradas intraperitonealmente (IP) 1x por semana até o final do experimento. Após os períodos de 7, 14 e 30 dias, cinco animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia para remoção das maxilas direitas contendo os alvéolos para as análises histopatológica, histomorfométrica e imuno-histoquímica para COX-2, OPG, RANKL e TRAP. Os resultados não mostraram diferença significativa para a quantidade de matriz óssea entre os grupos WT, KO e WT-ZL. Contudo, foi observado que o grupo KO-ZL apresentou significativamente menos matriz óssea em todos os períodos quando comparado com WT-ZL, além de maior quantidade de células inflamatórias no 14 e 30 dias. Observou-se aumento significativo de células COX-2+ no grupo WT aos 14 dias em comparação com os demais. Detectou-se aumento de OPG ao final do reparo em todos os grupos. Aumento significativo de RANKL foi observado no grupo KO aos 7 dias, em comparação com 5-LOKO, sendo que ao final do reparo WT-ZL mostrou células RANKL+ significativamente elevadas em comparação com WT e KO-ZL. No entanto, somente aos 14 dias observou-se aumento significativo de células TRAP+ nos grupos WT e WT-ZL em comparação com KO e KO-ZL. A partir destes resultados, pode-se concluir que os animais 5-LOKO apresentaram formação óssea precoce em alvéolos dentários pós-exodontia comparados com os animais WT. No entanto, os efeitos do ZL foram mais deletérios nos camundongos 5-LOKO, possivelmente pela influência da droga e efeitos da inibição desta enzima nos eventos inflamatórios no curso do reparo(AU)
Osteonecrosis of the jaws has been related to the chronic use of antiresorptive drugs indicated for diseases and disorders of bone metabolism, such as nitrogenous bisphosphonates (nBP), especially when associated with surgical-dental interventions. Thus, it is speculated that the onset of this disease does not occur only due to the condition of the bone tissue and its reactive capacity, but mainly due to its immunological defense condition. The present study aimed to analyze the bone repair pattern of dental alveoli of maxillary incisors recently extracted from 129/Sv 5- LOKO mice, which had an osteopetrotic skeletal phenotype, comparing them with wild type, 129/Sv WT, with and without administration of nBP. For that, 80 male mice were used with ages varying between 8 and 10 weeks, being 46 animals 129/Sv WT and 40 animals 129/Sv 5-LOKO, which were submitted to the extraction of the upper right incisor tooth and divided into four groups of according to treatment: WT Group - 0.1 ml of 0.9% saline solution, WT-ZL Group - 0.5 mg/Kg of zoledronic acid, Group 5- LOko - 0.1 ml of 0.9 saline solution %, Group 5-LOko-ZL 0.5 mg/Kg of zoledronic acid, both solutions being administered intraperitoneally (IP) 1x a week until the end of the experiment. After periods of 7, 14 and 30 days, five animals from each group were euthanized to remove the right jaws containing the alveoli. They were immediately fixed in order to be prepared for the following methodological procedures: histotechnical processing for making histological slides stained with hematoxylin and eosin and immunohistochemical No significant difference was found for the amount of bone matrix between the WT, KO and WT-ZL groups. However, it was observed that the KO-ZL group presented significantly less bone matrix in all periods when compared to WT-ZL, in addition to a greater amount of inflammatory cells at 14 and 30 days. There was a significant increase in COX-2+ cells in the WT group at 14 days compared to the others. An increase in OPG was detected at the end of the repair in all groups. Significant increase in RANKL was observed in the KO group at 7 days, compared to 5-LOKO, and at the end of repair WT-ZL showed significantly elevated RANKL+ cells compared to WT and KO-ZL. However, only at 14 days there was a significant increase in TRAP+ cells in the WT and WT-ZL groups compared to KO and KO-ZL. From these results, it can be concluded that 5-LOKO animals showed early bone formation in post-extraction tooth sockets compared to WT animals. However, the effects of ZL were more deleterious in 5-LOKO mice, possibly due to the influence of the drug and the effects of inhibition of this enzyme on inflammatory events in the course of repair(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Regeneración Ósea , Araquidonato 5-Lipooxigenasa , Cirugía Bucal , Ratones de la Cepa 129 , Osteonecrosis de los Maxilares Asociada a DifosfonatosRESUMEN
O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da inibição do receptor 1 de cisteinil leucotrieno (CisLT1R) e da enzima 5-lipoxigenase (5-LO) sobre o processo de reparo peri-implantar oral em camundongos. Para tanto, um total de 63 camundongos machos da linhagem 129/Sv foram utilizados, com idades variando de 12 a 14 semanas, sendo 42 animais WT (do inglês Wild Type) e 21 animais geneticamente modificados (knockout-KO) para a enzima 5-LO (5-LOKO), a fim de comporem os seguintes grupos: Controle/WT, MTK/WT e 5-LOKO. Todos os animais foram submetidos ao procedimento cirúrgico para instalação de um micro parafuso de titânio (liga Ti-6Al-4V) na região edêntula da maxila, imediatamente à frente do primeiro molar esquerdo. Previamente ao procedimento cirúrgico, os animais do grupo MTK/WT foram medicados 2 mg/Kg/dia de montelucaste (MTK), via oral, em volume de 10ul, iniciando um dia antes do procedimento e continuando até o final dos períodos experimentais, fixados aos 7, 14 e 30 dias pós-operatórios. Os animais dos grupos Controle/WT e 5-LOKO receberam 10ul de solução fisiológica 0,9%, seguindo o mesmo protocolo dos animais MTK/WT. Completados os períodos, os animais foram submetidos à eutanásia para a coleta das amostras e subsequente processamento para análises histológicas e imunohistoquímicas para avaliação do processo de reparo peri-implantar. Após a obtenção dos dados quantitativos, os mesmos foram submetidos a tratamento estatístico considerando o nível de significância de 5% (p< 0,05). Os animais dos grupos MTK/WT e 5-LOKO apresentaram formação precoce de tecido ósseo ao redor dos implantes, maior número de células COX-2+ e menor de células TRAP+, quando comparados com animais do grupo Controle/WT. Concluiu-se que, a inibição do CisLT1R pelo MTK, bem como a ausência do gene para a 5-LO aceleraram o processo de reparação óssea peri-implantar oral no presente modelo experimental(AU)
The present study aimed to evaluate the effects of inhibition of cysteinyl leukotriene receptor 1 (CisLT1R) and 5-lipoxygenase enzyme (5-LO) on the process of oral periimplant repair in mice. For this purpose, a total of 63 male mice of the 129/Sv strain were used, with ages ranging from 12 to 14 weeks, of which 42 WT (Wild Type) and 21 genetically modified (knockout-KO) animals for the 5-LO enzyme (5-LOKO), in order to compose the following groups: Control/WT, MTK/WT and 5-LOKO. All animals were submitted to a surgical procedure to install a titanium micro screw (Ti6Al-4V alloy) in the edentulous region of the maxilla, immediately in front of the first left molar. Previous to the surgical procedure, the animals in the MTK/WT group were medicated 2 mg/Kg/day of montelukast (MTK), orally, in a 10ul volume, starting one day before the procedure and continuing until the end of the experimental periods, set at 7, 14 and 30 postoperative days. The animals in the Control/WT and 5-LOKO groups received 10ul of 0.9% saline solution, following the same protocol as the MTK/WT animals. After the periods were completed, the animals were euthanized for sample collection and subsequent processing for histological and immunohistochemical analysis to evaluate the peri-implant repair process. After obtaining the quantitative data, they were submitted to statistical treatment considering a significance level of 5% (p< 0.05). Animals in the MTK/WT and 5-LOKO groups showed early bone tissue formation around the implants, higher numbers of COX-2+ cells and fewer TRAP+ cells, when compared to animals in the Control/WT group. It was concluded that, the inhibition of CisLT1R by MTK as well as the absence of the gene for 5-LO accelerated the process of oral peri-implant bone repair in the present experimental model(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Titanio , Regeneración Ósea , Implantes Dentales , Arcada Edéntula , Ratones de la Cepa 129RESUMEN
Abstract Introduction: Nuocytes play an important role in Type 2 immunity. However, the contribution of ILC2s to allergic rhinitis remains to be clearly elucidated. Objective: To evaluate the role of nuocytes from mesenteric lymph node on allergic responses in mice. Methods: After intraperitoneal administration of interleukin IL-25 and IL-33 to wild-type and Il17br-/-Il1rl1-/- double-deficient mice, nuocytes were purified from the the nasal-associated lymphoid tissue and mesenteric lymph nodes. Then, we assessed productions of IL-5 and IL-13 in nuocytes' cultures. Finally, we adoptively transferred the mesenteric lymph node-derived nuocytes from wild-type and Il17br-/-Il1rl1-/- mice to the murine model of allergic rhinitis to evaluate their roles in nasal allergic responses. Results: We showed that nuocytes in the mesenteric lymph nodes of wild-type mice were upregulated after application of IL-25 and IL-33, and were induced to produce IL-5 and IL-13. Numbers of sneezing and nasal rubbing as well as eosinophils were all enhanced after the adoptive transfer of wild-type nuocytes. Concentrations of IL-5, IL-13, IL-25 and IL-33 in nasal lavage fluid of allergic mice were also increased. However, nuocytes fromIl17br-/-Il1rl1-/- mice did not increase sneezing and nasal rubbing and eosinophilia, and upregulate the above cytokines in the nasal lavage fluid. Conclusion: The findings demonstrate that nuocytes from the mesenteric lymph nodes of wildtype mice promote allergic responses in a mouse model.
Resumo Introdução: Os nuócitos desempenham um papel importante na imunidade do tipo 2. No entanto, a contribuição das interleucinas ILC2s na rinite alérgica ainda precisa ser elucidada. Objetivo: Avaliar o papel dos nuócitos de linfonodos mesentéricos nas respostas alérgicas em camundongos. Método: Após a administração intraperitoneal de interleucina (IL)-25 e IL-33 em camundongos do tipo selvagem e camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- com deficiência dupla, os nuócitos foram purificados do tecido linfoide associado a mucosa nasal e linfonodos mesentéricos. Em seguida, avaliamos as produções de IL-5 e IL-13 em culturas de nuócitos. Finalmente, transferimos adotivamente os nuócitos derivados de linfonodos mesentéricos de camundongos do tipo selvagem e camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- para o modelo murino de rinite alérgica para avaliar seu papel nas respostas alérgicas nasais. Resultados: Mostramos que os nuócitos nos linfonodos mesentéricos de camundongos do tipo selvagem estavam up-regulados após a aplicação de IL-25 e IL-33 e foram induzidos a produzir IL-5 e IL-13. Os espirros e friçcão nasal, bem como os eosinófilos, aumentaram após a transferência adotiva de nuócitos do tipo selvagem. As concentrações de IL-5, IL-13, IL-25 e IL-33 no líquido da lavagem nasal de camundongos alérgicos também estavam aumentadas. Entretanto, os nuócitos de camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- não aumentaram os espirros e a friçcão nasal ou eosinofilia e up-regularam as citocinas acima no líquido de lavagem nasal. Conclusão: Os achados demonstram que os nuócitos dos linfonodos mesentéricos de camundongos selvagens promovem respostas alérgicas em um modelo de camundongo.
Asunto(s)
Animales , Ratones , Rinitis Alérgica , Inmunidad Innata , Linfocitos , Citocinas , Modelos Animales de Enfermedad , Proteína 1 Similar al Receptor de Interleucina-1 , Ganglios Linfáticos , Mucosa NasalRESUMEN
The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20μg); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.(AU)
A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20μg); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Streptococcus equi/genética , Inmunogenicidad Vacunal , Ratones/microbiología , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Anticuerpos AntibacterianosRESUMEN
Metabólitos do ácido araquidônico são conhecidos por exercerem importante papel nos processos inflamatórios e no metabolismo do tecido ósseo. No entanto, as ações pontuais, especialmente dos leucotrienos derivados da 5-lipoxigenase (5-LO) sobre o processo de reparo ósseo intramembranoso são pouco exploradas. O presente estudo tem como objetivo analisar os efeitos tempo-dose-resposta da droga montelucaste (MTK), potente antagonista dos receptores de cisteinil leucotrienos tipo 1 (CisLT1Rs), no curso do reparo alveolar pós-exodontia em camundongos 129Sv/Ev, bem como nos níveis plasmáticos de marcadores ósseos bioquímicos. Para tanto, foram utilizados 70 camundongos machos jovens divididos em quatro grupos, de acordo com o tratamento: C - Grupo Controle (não tratados); CV - Grupo Controle Veículo, 20 µL de solução fisiológica (SF) 0,9%; MTK2 2 mg/kg de MTK e MTK4 4 mg/kg de MTK. Os animais dos grupos CV, MTK2 e MTK4 foram tratados diariamente por via oral, iniciando 24 horas antes do procedimento cirúrgico, continuando até o final dos períodos experimentais de 7, 14 e 21 dias pós-operatórios. Ao final dos períodos determinados, os animais foram submetidos à eutanásia para coleta de sangue para análise bioquímica dos níveis de cálcio, fosfato, fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) total e fosfatase alcalina (FAL), coleta da maxila direita contendo os alvéolos dentários para serem analisados por meio de microtomografia computadorizada (microCT), e análise histopatológica. Os resultados obtidos foram submetidos à testes estatísticos considerando-se nível de confiança de 5%. Observou-se aumento do BV/TV para os animais tratados com MTK em relação aos grupos C e CV, tanto aos 14 dias quanto aos 21 dias, sendo maior no grupo MTK4 aos 14 dias em relação ao grupo MTK2. Do mesmo modo, os animais tratados com MTK em ambas doses apresentaram aumento significativo de Tb.Th em comparação aos grupos C e CV aos 21 dias. Chamou a atenção valores de BV/TV e Tb.Th significativamente reduzidos no grupo CV em comparação ao C, indicando um efeito negativo da manipulação do animal. Na análise histopatológica observou-se reparo ósseo precoce nos animais MTK2 e MTK4 em todos os períodos avaliados, em comparação aos do grupo C, bem como atraso no processo de reparo no grupo CV aos 21 dias. Quanto aos marcadores plasmáticos, observou-se aumento do cálcio no grupo MTK4 em relação ao grupo C aos 7 dias, e aos 21 dias também em relação ao grupo MTK2. Já o fosfato mostrouse significantemente elevado nos períodos de 7 e 21 dias no grupo MTK2 em relação aos demais grupos. FAL e TRAP total não apresentaram níveis plasmáticos significativamente diferentes comparando-se os grupos e períodos. Considerando os resultados obtidos, concluiu-se que o MTK exerceu efeito tempo-dose-dependente, acelerando o processo de reparo ósseo intramembranoso alveolar e interferindo nos níveis plasmáticos de cálcio e fosfato no presente modelo animal(AU)
Arachidonic acid metabolites are known to play an important role in inflammatory processes and in bone metabolism. However, the role of these products on alveolar bone repair post tooth extraction remains to be explored, especially leukotrienes, derived from 5-lipoxygenase (5-LO). The present study aims to analyze the time-doseresponse effects of the drug montelukast (MTK), a potent type 1 leukotriene cystenyl antagonist (CisLT1Rs), in the alveolar repair process after extraction in male 129Sv/Ev mice. For this purpose, 70 young male mice were used, divided into four groups: C - Control Group (no treatment); VC - Vehicle Control Group, treated with 20 µL of 0.9% SF; MTK2 - treated with 2mg / Kg of MTK and MTK4 - treated with 4mg / Kg of MTK. The animals of the CV, MTK2 and MTK4 groups were treated daily orally (V.O.), starting 24 hours before the surgical procedure, continuing until the end of the experimental periods of 7, 14 and 21 days postoperatively. At the end of the experimental periods, the animals were euthanized for blood collection for serum markers as calcium, phosphate, tartrate-resistant acid phosphate (TRAP) and alkaline phosphatasis (FAL), and to removal of the right maxilla containing the dental socket to be analyzed under computed microtomography (microCT) and histopathology. The results obtained were subjected to statistical tests considering a confidence level of 5%. Results revealed an increase in BV/TV for MTK vs. C and CV groups, in both 14 and 21 days time points. Of note, this increase was higher in MTK4 than in the MTK2 at 14 days. Considering Tb.Th, both MTK2 e MTK4 groups presented positive effects in the BV/TV and Tb.Th increase when compared to controls groups (C and CV) at 21 days. A decrease in BV/TV and Tb.Th was observed in CV compared to C, as a negative effect of animal manipulation. As observed in H&E sections, both MTK2 and MTK4 experimental groups presented an early bone repair in comparison with C group from 7 to 21 days. CV group presented a slight delayed bone healing compared to C. Levels of calcium was increased in MTK4 in comparison to C and MTK2 at 7 and 21 days. Phosphate was significantly elevated at 7 and 21 days in MTK2 in comparison to the other groups. Despite of beneficial effects on observed on morphological levels on sites of healing (microCT and HE), no significant changes were found for bone markers of remodeling in blood plasma (FAL and TRAP). Taken together, these results indicate that MTK induced early bone healing post tooth extraction in 129Sv/Ev mice. Thus, the inhibition of CysLT is suggested to exert a positive influence on intramembranous bone repair post tooth extraction(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Regeneración Ósea , Inhibidores de la Lipooxigenasa , Densidad Ósea , Antagonistas de Leucotrieno , Ratones de la Cepa 129 , Fosfatasa Ácida TartratorresistenteRESUMEN
ABSTRACT: The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20g); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.
RESUMO: A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20g); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.
RESUMEN
ABSTRACT Objective To evaluate the morphology and morphometry of the muscles extensor digitorium longus and soleus of C57BL/6 females, who were exposed to glyphosate during pregnancy and lactation. Methods Twelve female mice from the C57BL/6 lineage were used. After detection of pregnancy, they were divided into a Control Group, which received only water, and a Glyphosate Group, which received water with 0.5% glyphosate during pregnancy and lactation. Both groups received ad libitum standard diet. After weaning, the females were euthanized and weighed; naso-anal length was measured, and fats were collected and weighed. The muscles extensor digitorium longus and soleus were collected, and their length and weight were measured. Then, the muscles were fixed in Methacarn to perform the histological study of muscle fibers. Results Glyphosate Group presented lower weight gain during pregnancy and also lower final body weight and naso-anal length; however, the other body parameters evaluated did not present a significant difference in relation to the Control Group. Significant differences were also not observed in the analysis of muscle fibers and connective tissue. Conclusion Exposure to 0.5% glyphosate during pregnancy and lactation resulted in lower weight gain during pregnancy, final weight, and naso-anal length. Despite not directly altering the morphology of muscle tissue, these results may indicate enough exposure to interfere with animal metabolism.
RESUMO Objetivo Avaliar a morfologia e a morfometria dos músculos extensor longo dos dedos e sóleo de fêmeas C57BL/6 expostas ao glifosato durante a prenhez e lactação. Métodos Foram utilizados 12 camundongos fêmeas da linhagem C57BL/6. Após detecção da prenhez, foram separadas em Grupo Controle, que recebeu somente água, e Grupo Glifosato, que recebeu água com 0,5% de glifosato durante a prenhez e lactação. Ambos os grupos receberam dieta padrão ad libitum. Após o desmame, as fêmeas foram eutanasiadas e pesadas; o comprimento nasoanal foi mensurado, e as gorduras foram coletadas e pesadas. Os músculos extensor longo dos dedos e sóleo foram coletados, e seu comprimento e peso foram mensurados. Em seguida, os músculos foram fixados em Methacarn para a realização do estudo histológico das fibras musculares. Resultados O Grupo Glifosato apresentou menor ganho de peso durante a prenhez e também menor peso corporal final e comprimento nasoanal, entretanto os demais parâmetros corporais avaliados não apresentaram diferença significativa em relação ao Grupo Controle. Na análise das fibras musculares e do tecido conjuntivo, também não foram observadas diferenças significativas. Conclusão A exposição a 0,5% de glifosato durante a prenhez e lactação resultou em menor ganho de peso na gestação, peso final e comprimento nasoanal, o que pode indicar que, apesar de não alterar a morfologia do tecido muscular diretamente, a exposição foi suficiente para interferir no metabolismo dos animais.
Asunto(s)
Animales , Femenino , Embarazo , Ratones , Músculo Esquelético , Fibras Musculares Esqueléticas , Lactancia , Glicina/análogos & derivados , Ratones Endogámicos C57BLRESUMEN
The main objective of current study was to investigate the chemopreventive and chemotherapeutic activity of Artemisia vulgaris extract on diethylnitrosoamine induced hepatocarcinogenesis in Balb C mice. Diethylnitrosoamine (DEN: 0.9%) was prepared to induce hepatocarcinoma in Balb C mice. The extract Artemisia vulgaris (AV) was prepared by maceration technique. Mice were classified into four groups as follows: Group 1 a control group (N=7) received saline solution (3.5 l/mg), group 2 (N=14) received diethylnitrosoamine (3.5 l/mg) intraperitoneally once in a week for eight consecutive weeks, group 3 (N=7) received only plant extract (AV: 150 mg/kg (Body weight) once in a week, while group 4 (N=7) was given in combination of diethylnitrosoamine (3.5 l/mg) and plant extract (AV: 150 mg/kg (body weight). After eight weeks of DEN administration, mice of group 2 were divided into two subgroups containing seven mice each; subgroup 1 was sacrificed while subgroup 2 was treated with plant extract only (150 mg/kg (body weight)) once in a week for eight consecutive weeks. The DEN injected mice significant decline in levels of albumin with concomitant significant elevations such as aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase, alpha feto protein, gamma glutamyl transferase, 5 nucleotidase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and bilirubin. The administration of A. vulgaris significantly decreased the DEN induced hepatotoxicity. Present study revealed the potential anti-cancerous nature of Artemisia vulgaris, both in case of chemopreventive and post-treatment of A. vulgaris. Further studies are needed to explore the mechanism of prevention and therapy.
O objetivo principal do presente estudo foi investigar as atividades quimiopreventiva e quimioterápica do extrato de Artemisia vulgaris em hepatocarcinogênese induzida por dietilnitrosoamina (DEN) em camundongos Balb C. Dietilnitrosoamina (DEN: 0,9%) foi preparada para induzir hepatocarcinoma em camundongos da linhagem Balb C. O extrato de A. vulgaris (AV) foi preparado pela técnica de maceração. Os camundongos foram classificados em quatro grupos conforme os seguintes: grupo 1, grupo controle (N=7) recebeu solução salina (3,5 µl/mg); grupo 2 (N=14) recebeu dietilnitrosoamina (3,5 µl/mg) por via intraperitoneal uma vez por semana durante oito semanas consecutivas; grupo 3 (N=7) recebeu apenas o extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal) uma vez por semana; enquanto no grupo 4 (N=7) foi administrado uma combinação de dietilnitrosoamina (3,5 l/mg) com extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal). Após oito semanas de administração de DEN, os camundongos do grupo 2 foram divididos em dois subgrupos, contendo sete camundongos cada um; no subgrupo 1, os animais foram sacrificados, enquanto no subgrupo 2, os animais foram tratados apenas com extrato vegetal (150 mg/kg (peso corporal)) uma vez por semana durante oito semanas consecutivas. Os camundongos nos quais foram injetados DEN apresentaram declínio significativo nos níveis de albumina, mas elevações significativas concomitantes de: aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, lactato desidrogenase, alfa-fetoproteína, gama-glutamiltransferase, 5 nucleotidase, glicose-6-fosfato desidrogenase e bilirrubina. A administração de A. vulgaris diminuiu significativamente a hepatotoxicidade induzida pelo DEN. O presente estudo apresentou a potencialidade anticancerosa da A. vulgaris, tanto nos casos de quimioprevenção quanto no pós-tratamento da A. vulgaris. Mais estudos são necessários para explorar o mecanismo de prevenção e a terapia.
Asunto(s)
Artemisia/efectos de los fármacos , Artemisia/química , Ratones , Carcinogénesis , Dietilnitrosamina , Preparaciones FarmacéuticasRESUMEN
Abstract The main objective of current study was to investigate the chemopreventive and chemotherapeutic activity of Artemisia vulgaris extract on diethylnitrosoamine induced hepatocarcinogenesis in Balb C mice. Diethylnitrosoamine (DEN: 0.9%) was prepared to induce hepatocarcinoma in Balb C mice. The extract Artemisia vulgaris (AV) was prepared by maceration technique. Mice were classified into four groups as follows: Group 1 a control group (N=7) received saline solution (3.5 μl/mg), group 2 (N=14) received diethylnitrosoamine (3.5 μl/mg) intraperitoneally once in a week for eight consecutive weeks, group 3 (N=7) received only plant extract (AV: 150 mg/kg (Body weight) once in a week, while group 4 (N=7) was given in combination of diethylnitrosoamine (3.5 μl/mg) and plant extract (AV: 150 mg/kg (body weight). After eight weeks of DEN administration, mice of group 2 were divided into two subgroups containing seven mice each; subgroup 1 was sacrificed while subgroup 2 was treated with plant extract only (150 mg/kg (body weight)) once in a week for eight consecutive weeks. The DEN injected mice significant decline in levels of albumin with concomitant significant elevations such as aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase, alpha feto protein, gamma glutamyl transferase, 5 nucleotidase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and bilirubin. The administration of A. vulgaris significantly decreased the DEN induced hepatotoxicity. Present study revealed the potential anti-cancerous nature of Artemisia vulgaris, both in case of chemopreventive and post-treatment of A. vulgaris. Further studies are needed to explore the mechanism of prevention and therapy.
Resumo O objetivo principal do presente estudo foi investigar as atividades quimiopreventiva e quimioterápica do extrato de Artemisia vulgaris em hepatocarcinogênese induzida por dietilnitrosoamina (DEN) em camundongos Balb C. Dietilnitrosoamina (DEN: 0,9%) foi preparada para induzir hepatocarcinoma em camundongos da linhagem Balb C. O extrato de A. vulgaris (AV) foi preparado pela técnica de maceração. Os camundongos foram classificados em quatro grupos conforme os seguintes: grupo 1, grupo controle (N=7) recebeu solução salina (3,5 µl/mg); grupo 2 (N=14) recebeu dietilnitrosoamina (3,5 µl/mg) por via intraperitoneal uma vez por semana durante oito semanas consecutivas; grupo 3 (N=7) recebeu apenas o extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal) uma vez por semana; enquanto no grupo 4 (N=7) foi administrado uma combinação de dietilnitrosoamina (3,5 μl/mg) com extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal). Após oito semanas de administração de DEN, os camundongos do grupo 2 foram divididos em dois subgrupos, contendo sete camundongos cada um; no subgrupo 1, os animais foram sacrificados, enquanto no subgrupo 2, os animais foram tratados apenas com extrato vegetal (150 mg/kg (peso corporal)) uma vez por semana durante oito semanas consecutivas. Os camundongos nos quais foram injetados DEN apresentaram declínio significativo nos níveis de albumina, mas elevações significativas concomitantes de: aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, lactato desidrogenase, alfa-fetoproteína, gama-glutamiltransferase, 5' nucleotidase, glicose-6-fosfato desidrogenase e bilirrubina. A administração de A. vulgaris diminuiu significativamente a hepatotoxicidade induzida pelo DEN. O presente estudo apresentou a potencialidade anticancerosa da A. vulgaris, tanto nos casos de quimioprevenção quanto no pós-tratamento da A. vulgaris. Mais estudos são necessários para explorar o mecanismo de prevenção e a terapia.
Asunto(s)
Animales , Conejos , Carcinoma Hepatocelular , Artemisia , Neoplasias Hepáticas , Extractos Vegetales , Dietilnitrosamina , Carcinogénesis , Ratones Endogámicos BALB CRESUMEN
Free-range chickens may ingest oocysts of T. gondii present in the environment and consequently harbor virulent strains of this parasite in different tissues, without any clinical signs. Isolation of T. gondii through bioassays on mice and cats from naturally infected chicken tissues has been described in several countries, demonstrating the importance of free-range chickens in the transmission of this parasite. The aim of this study was the genotypic characterization of T. gondii isolates obtained from naturally infected free-range chickens in a rural area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Brain and heart tissue from 12 chickens seropositive for T. gondii were processed using peptic digestion technique for parasite isolation. From 12 samples subjected to mouse bioassay, nine isolates were obtained. RFLP-PCR genotypic characterization was performed using 11 genetic markers: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 and Apico. Genetic characterization of the isolates revealed the presence of five atypical genotypes according to ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 and # 163). Our results showed a wide genetic diversity of T. gondii in free-range chickens in this region.(AU)
Galinhas criadas ao ar livre podem ingerir oocistos de T. gondii presentes no ambiente e, com isso, albergar cepas virulentas desse parasita em diferentes tecidos, sem sinais clínicos. O isolamento de T. gondii por meio de bioensaios em camundongos e gatos, a partir de tecidos de galinhas naturalmente infectadas, tem sido descrito em vários países. Isso demonstra a importância das galinhas caipiras na epidemiologia desse parasita. O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente isolados de T. gondii obtidos de galinhas caipiras naturalmente infectadas em uma área rural do município de Santa Maria, estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Fragmentos de cérebro e de coração, de 12 galinhas soropositivas para T. gondii, foram processados pela técnica de digestão péptica para isolamento do parasita. Das 12 amostras submetidas a bioensaio com camundongos, nove isolados foram obtidos. A caracterização genotípica por RFLP-PCR foi realizada utilizando-se 11 marcadores genéticos: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 e Apico e revelou a presença de cinco genótipos atípicos de acordo com o ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 e # 163). Os resultados mostraram uma ampla diversidade genética de T. gondii em galinhas caipiras nessa região.(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Toxoplasma , Bioensayo/veterinaria , Pollos/virología , Toxoplasmosis Animal , Técnicas de Genotipaje/veterinaria , Medio Rural , Reacción en Cadena de la Polimerasa/veterinariaRESUMEN
Analisar o efeito do tratamento com vitamina C sobre a lipoperoxidação hepática e muscular, assim como sobre parâmetros bioquímicos de camundongos C57BL/6 submetidos à dieta de cafeteria durante nove semanas. Dezessete camundongos da linhagem C57BL/6, com dois meses de idade foram alocados em três grupos: 1) Controle, 2) Cafeteria e 3) Cafeteria + Vitamina C. O ensaio biológico foi conduzido por nove semanas, os animais foram mantidos em jejum de doze horas, e depois de sacrificados, o sangue e os tecidos foram coletados para dosagens bioquímicas. A partir de amostras de fígado e músculo sóleo, foram quantificados os teores de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e de lipídeos totais. Os fígados dos camundongos alimentados com dieta de cafeteria tratados ou não com vitamina C apresentaram maiores teores de TBARS comparados aos controles (p<0,05). Já o teor de TBARS muscular foi maior nos camundongos do grupo Cafeteria + Vitamina C comparado àquele encontrado para os animais Cafeteria e Controle (p<0,05). As concentrações de colesterol hepático e muscular foram mais elevadas no grupo Cafeteria + Vitamina C comparadas às dos grupos Controle e Cafeteria (p<0,05). O tratamento com vitamina C aumentou a lipoperoxidação muscular, mas não influenciou esse parâmetro no fígado de camundongos C57BL/6 alimentados com dieta de cafeteria. Além disso, a vitamina C elevou a concentração de colesterol nos tecidos hepático e muscular, mas não alterou a glicemia e os lipídeos séricos dos animais após nove semanas de tratamento.(AU)
To analyze the effect of vitamin C treatment on hepatic and muscular lipoperoxidation, as well as on biochemical parameters of C57BL / 6 mice submitted to the cafeteria diet for nine weeks. Seventeen mice of the C57BL / 6 lineage, two months old, were allocated to three groups: 1) Control, 2) Cafeteria and 3) Cafeteria + Vitamin C. The biological assay was conducted for nine weeks, the animals were kept in fasting for 12 hours and after being sacrificed, blood and tissues were collected for biochemical dosages. From the samples of liver and muscle, the contents of thiobarbituric acid reactive species (TBARS) and total lipids were quantified. The livers of mice fed with a diet of coffee or not treated with vitamin C showed higher levels of TBARS compared to controls (p <0.05). The muscle TBARS content was higher in the mice of the Cafeteria + Vitamin C group compared to that found for the Cafeteria and Control animals (p <0.05). The concentrations of hepatic and muscular cholesterol were higher in the Cafeteria + Vitamin C group compared to the Control and Cafeteria groups (p <0.05). Treatment with vitamin C increased muscle lipoperoxidation, but did not influence this parameter in the liver of C57BL 6 mice fed with cafeteria diet. In addition, vitamin C increased cholesterol concentration in liver and muscle tissues, but did not change serum glycemia and serum lipids after nine weeks of treatment.(AU)
Asunto(s)
Ratas , Linaje , Ácido Ascórbico , Glucemia , Colesterol , Dieta , HígadoRESUMEN
Nabumetone is used to reduce the pain and inflammation in rheumatoid arthritis. In the current study, immunomodulatory effect of Nabumetone is investigated in mice. The control group was administered normal saline orally as placebo. Nabumetone was administered orally via gavage in two treatment groups at 14mg/kg.b.w. doses and 28mg/kgb.w., respectively. Haemagglutination (HA) assay, Jerne hemolytic plaque and mice lethality assays were applied. In HA assay, the titer was significantly decreased in Nabumetone treatment groups (P< 0.001). In Jerne hemolytic plaque formation assay, there was a significant reduction (P< 0.001) in number of plaques in Nabumetone treated groups when compared with control. In mice lethality assay, there was a significant difference in mortality ratio of mice in control and Nabumetone treated groups (P< 0.001). Therefore, it is concluded that Nabumetone suppresses the humoral immune response in mice.(AU)
A nabumetona é usada na redução da dor e inflamação da artrite reumática. No presente estudo, o efeito imunomodulador é investigado em camundongos. O grupo de controle recebeu solução salina via oral como placebo. Nabumetona foi administrada oralmente via gavagem em dois grupos de tratamentos com doses de 14mg/kg.b.w. e 28mg/kgb.w., respectivamente. Foram realizados ensaios de hemaglutinação (HA), placa hemolítica de Jerne e letalidade dos camundongos. No ensaio HA, o grau foi significativamente menor nos grupos de tratamento com nabumetoma (P< 0.001). No ensaio de formação de placa hemolítica de Jerne houve redução significativa (P< 0.001) no número de placas em grupos tratados com nabumetoma comparado ao controle. No ensaio de letalidade dos camundongos houve diferença significativa no grau de mortalidade de camundongos no grupo de controle e grupos tratados com nabumetoma (P< 0.001). Portanto, conclui-se que a Nabumetoma suprime a resposta imune humoral em camundongos.(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Inmunidad Humoral/efectos de los fármacos , Nabumetona/administración & dosificación , Factores Inmunológicos/análisis , Artritis Reumatoide/veterinaria , Solución Salina , HemaglutinaciónRESUMEN
Resumo Fundsamento As sementes de Moringa oleifera , que são utilizadas para clarificação de água, contêm uma lectina chamada WSMoL que tem mostrado atividade antibacteriana e imunomoduladora in vitro . Devido ao seu valor nutritivo e potencial terapêutico, as folhas e as sementes dessa árvore são consumidas em algumas comunidades. Algumas lectinas de plantas não são tóxicas para mamíferos, mas tem sido relatado que outras são prejudiciais quando ingeridas ou administradas por outros meios. Objetivo Como um dos passos necessários para determinar a segurança de WSMoL, nós avaliamos os possíveis efeitos cardiotóxicos desta proteína purificada. Métodos Durante 21 dias consecutivos, a WSMoL foi administrada a camundongos por gavagem. Foram investigadas as funções eletrofisiológicas, mecânicas e metabólicas in vivo e ex vivo por meio de registros eletrocardiográficos, ressonância magnética nuclear e respirometria de alta resolução. Resultados O tratamento com WSMoL não induziu alterações nos níveis de glicose no sangue ou peso corporal em comparação com o grupo controle. Adicionalmente, as relações peso cardíaco/peso corporal e peso cardíaco/comprimento tibial estavam semelhantes em ambos os grupos. A ingestão de lectina também não modificou a tolerância à glicose ou resistência à insulina. Não foram observadas alterações nos parâmetros eletrocardiográficos ou na duração do potencial de ação cardíaco. Os corações dos camundongos dos grupos controle e WSMoL mostraram função ventricular esquerda preservada. Além disso, a WSMoL não induziu alterações na função mitocondrial (em todos os casos, p > 0,05). Conclusões A administração de WSMoL demonstrou ter um perfil de segurança cardíaca. Estes resultados contribuem à avaliação de segurança do uso de sementes de M. oleifera para tratar água, visto que essa lectina está presente na preparação empregada por algumas populações com esse fim. (Arq Bras Cardiol. 2020; [online].ahead print, PP.0-0)
Abstract Background Moringa oleifera seeds, which are used for water clarification, contain a lectin named WSMoL which has shown in vitro antibacterial and immunomodulatory activity. Due to their nutritional value and therapeutic potential, the leaves and seeds of this tree are eaten in some communities. Some plant lectins are non-toxic to mammals, but others have been reported to be harmful when ingested or administered by other means. Objective As one of the steps needed to define the safety of WSMoL, we evaluated possible cardiotoxic effects of this purified protein. Methods: WSMoL was administered for 21 consecutive days to mice by gavage. Electrophysiological, mechanical, and metabolic cardiac functions were investigated by in vivo and ex vivo electrocardiographic recordings, nuclear magnetic resonance, and high-resolution respirometry. Results The treatment with WSMoL did not induce changes in blood glucose levels or body weight in comparison with control group. Moreover, the heart weight/body weight and heart weight/tibia length ratios were similar in both groups. Lectin ingestion also did not modify glucose tolerance or insulin resistance. No alterations were observed in electrocardiographic parameters or cardiac action potential duration. The heart of mice from the control and WSMoL groups showed preserved left ventricular function. Furthermore, WSMoL did not induce changes in mitochondrial function (in all cases, p > 0.05). Conclusions The administration of WSMoL demonstrated a cardiac safety profile. These results contribute to the safety evaluation of using M. oleifera seeds to treat water, since this lectin is present in the preparation employed by some populations to this end. (Arq Bras Cardiol. 2020; [online].ahead print, PP.0-0)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Semillas/química , Extractos Vegetales/farmacología , Moringa oleifera/química , Lectinas de Plantas/farmacología , Agua , Extractos Vegetales/química , Lectinas de Plantas/aislamiento & purificaciónRESUMEN
Brucella ovis causes economic and reproductive losses in sheep herds. The goal of this study was to characterize infection with B. ovis field isolates in a murine model, and to evaluate protection induced by the candidate vaccine strain B. ovis ΔabcBA in mice challenged with these field isolates. B. ovis field strains were able to colonize and cause lesions in the liver and spleen of infected mice. After an initial screening, two strains were selected for further characterization (B. ovis 94 AV and B. ovis 266 L). Both strains had in vitro growth kinetics that was similar to that of the reference strain B. ovis ATCC 25840. Vaccination with B. ovis ΔabcBA encapsulated with 1% alginate was protective against the challenge with field strains, with the following protection indexes: 0.751, 1.736, and 2.746, for mice challenged with B. ovis ATCC25840, B. ovis 94 AV, and B. ovis 266 L, respectively. In conclusion, these results demonstrated that B. ovis field strains were capable of infecting and inducing lesions in experimentally infected mice. The attenuated vaccine strain B. ovis ΔabcBA induced protection in mice challenged with different B. ovis field isolates, resulting in higher protection indexes against more pathogenic strains.(AU)
Brucella ovis é responsável por perdas econômicas e reprodutivas em rebanhos ovinos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a infecção com as cepas isoladas de campo de B. ovis em modelo murino e avaliar a eficiência vacinal da mutante B. ovis ΔabcAB para proteção contra desafio com as cepas isoladas de campo. Foram utilizadas sete cepas isoladas de campo foram capazes de colonizar e provocar lesões no fígado e no baço de camundongos após sete dias pós-infecção. Após triagem, duas cepas foram selecionadas para a melhor caracterização (B. ovis 94 AV and B. ovis 266L). Ambas apresentaram crescimento em placa de cultivo semelhante ao da cepa de referência B. ovis ATCC 25840. A vacinação com a cepa de Brucella ovis ΔabcBA encapsulada com alginato a 1% foi capaz de proteger camundongos desafiados com as cepas isoladas de campo, com os seguintes índices de proteção: 0,751, 1,736 e 2,746, para camundongos desafiados com B. ovis ATCC 25840, B. ovis 94 AV e B. ovis 266 L, respectivamente. Estes resultados demonstraram que as cepas isoladas de campo de B. ovis são capazes de infectar e induzir lesão em camundongos experimentalmente infectados. O uso da cepa mutante atenuada B. ovis ΔabcBA para vacinação de fêmeas C57BL/6 desafiados com diferentes cepas de B. ovis induziu proteção nos camundongos desafiados com diferentes cepas de B. ovis. Deste modo, mostrando-se eficiente na proteção das cepas de campo de B. ovis.(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Brucelosis/prevención & control , Ovinos/microbiología , Vacunas Bacterianas/inmunología , Brucella ovis/aislamiento & purificación , Brucella ovis/inmunología , Brucella ovis/patogenicidadRESUMEN
Abstract Background: The emergence of coronary heart disease is increased with menopause, physical inactivity and with dyslipidemia. Physical training is known to promote the improvement of cardiovascular functions. Objective: To investigate the effects of aerobic physical training on the left ventricle in ovariectomized LDL knockout mice. Methods: Thirty animals were divided into 6 groups (n = 5): Sedentary non-ovariectomized control; Sedentary ovariectomized control; Trained ovariectomized control; Sedentary non-ovariectomized LDL-knockout, sedentary ovariectomized LDL-knockout and trained ovariectomized LDL-knockout. We analyzed the average parameters of apparent density of collagen fibers types I and III, and metalloproteinase type 2 and type 9, were considered significant p < 0.05. Results: The results showed that the proposed exercise protocol altered the volume of type I collagen fibers, altered collagen remodeling parameters (MMP-2), and also reduced the 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8OHdG) oxidative stress parameter. Conclusion: Moderate intensity aerobic training acts on collagen fiber volume, on collagen remodeling with the reduction of oxidative stress in the left ventricles of ovariectomized LDL-knockout mice.
Resumo Fundamento: O surgimento da doença cardíaca coronariana aumenta com a menopausa, inatividade física e dislipidemia. Sabe-se que o treinamento físico promove a melhora das funções cardiovasculares Objectivo: Investigar os efeitos do treinamento físico aeróbico sobre o ventrículo esquerdo em camundongos LDL knockout ovariectomizadas. Métodos: Trinta animais foram divididos em 6 grupos (n = 5): controle sedentário não ovariectomizado, controle sedentário ovariectomizado, controle treinado ovariectomizado, sedentário LDL-knockout não ovariectomizado, sedentário LDL-knockout ovariectomizado e treinado LDL-knockout ovariectomizado. Analisamos os parâmetros médios da densidade de volume de fibras colágenas tipo I e III, e metaloproteinases 2 e 9. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: Os resultados mostram que o protocolo de exercício proposto alterou o volume de fibras colágenas do tipo I e os parâmetros de remodelamento do colágeno (MMP-2), e ainda reduziu o parâmetro de estresse oxidativo do 8-hidroxi-2'-deoxiganosina (8-OhdG). Conclusão: O treinamento aeróbico de intensidade moderada age sobre o volume das fibras colágenas e sobre o remodelamento de colágeno, com redução do estresse oxidativo em ventrículos esquerdos de camundongos ovariectomizados LDLr Knockout.
Asunto(s)
Animales , Femenino , Ratas , Metaloproteinasa 2 de la Matriz/metabolismo , Metaloproteinasa 9 de la Matriz/metabolismo , Colágeno Tipo I/metabolismo , Colágeno Tipo III/metabolismo , Inflamación/fisiopatología , Miocardio/metabolismo , Condicionamiento Físico Animal/fisiología , Inmunohistoquímica , Ovariectomía , Ratones Noqueados , Estrés Oxidativo/fisiología , Modelos AnimalesAsunto(s)
Animales , Ratas , Metaloproteinasa 2 de la Matriz , Miocardio , Colágeno , Ratones Noqueados , Estrés Oxidativo , InflamaciónRESUMEN
ABSTRACT Objective To evaluate the effects of oxidative stress on insulin signaling in cardiac tissue of obese mice. Methods Thirty Swiss mice were equally divided (n=10) into three groups: Control Group, Obese Group, and Obese Group Treated with N-acetylcysteine. After obesity and insulin resistance were established, the obese mice were treated with N-acetylcysteine at a dose of 50mg/kg daily for 15 days via oral gavage. Results Higher blood glucose levels and nitrite and carbonyl contents, and lower protein levels of glutathione peroxidase and phosphorylated protein kinase B were observed in the obese group when compared with their respective control. On the other hand, treatment with N-acetylcysteine was effective in reducing blood glucose levels and nitrite and carbonyl contents, and significantly increased protein levels of glutathione peroxidase and phosphorylated protein kinase B compared to the Obese Group. Conclusion Obesity and/or a high-lipid diet may result in oxidative stress and insulin resistance in the heart tissue of obese mice, and the use of N-acetylcysteine as a methodological and therapeutic strategy suggested there is a relation between them.
RESUMO Objetivo Avaliar os efeitos do estresse oxidativo sobre a sinalização da insulina em tecido cardíaco de camundongos obesos. Métodos Utilizaram-se 30 camundongos Swiss subdivididos igualmente (n=10) em três grupos: Grupo Controle, Grupo Obeso e Grupo Obeso Tratado com N-acetilcisteína. Após estabelecidas a obesidade e a resistência à insulina, os camundongos obesos foram tratados diariamente, durante 15 dias, via gavagem oral, com N-acetilcisteína na dose de 50mg/kg. Resultados Observaram-se maiores níveis de glicose sanguínea, conteúdos de nitrito e carbonil, e menores níveis proteicos de glutationa peroxidase e proteína quinase B fosforilada no Grupo Obeso quando comparado a seu respectivo controle. Por outro lado, o tratamento com N-acetilcisteína se mostrou eficiente em diminuir os níveis glicêmicos, os conteúdos de nitrito e carbonil, e aumentar significativamente os níveis proteicos de glutationa peroxidase e proteína quinase B fosforilada, quando comparados ao Grupo Obeso. Conclusão Obesidade e/ou dieta hiperlipídica levam a estresse oxidativo e à resistência à insulina no tecido cardíaco de camundongos obesos, e o uso da N-acetilcisteína como estratégia metodológica e terapêutica sugeriu haver relação entre ambos.