RESUMEN
Abstract The present research was made to determine the micronuclei and cytotoxic capacity of the antidepressant venlafaxine in an in vivo acute and subchronic assays in mouse. In the first study, we administered once 5, 50, and 250 mg/kg of the drug, and included a negative and a daunorubicin treated group. Observations were daily made during four days. The subchronic assay lasted 5 weeks with daily administration of venlafaxine (1, 5, and 10 mg/kg) plus a negative and an imipramine administered groups. Observations were made each week. In the first assay results showed no micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPE) increase, except with the high dose at 72 h. The strongest cytotoxic effect was found with 250 mg/kg at 72 h (a 51% cytotoxic effect in comparison with the mean control level). In the subchronic assay no MNPE increase was found; however, with the highest dose a significant increase of micronucleated normochromatic erythrocytes was observed in the last three weeks (a mean of 51% respect to the mean control value). A cytotoxic effect with the two high doses in the last two weeks was observed (a polychromatic erythrocyte mean decrease of 52% respect to the mean control value). Results suggest caution with venlafaxine.
Resumo A presente pesquisa foi feita para determinar a capacidade micronuclei e citotóxica do antidepressivo venlafaxina em ensaios agudos e subcrônicos in vivo em camundongos. No primeiro estudo, administramos uma vez 5, 50 e 250 mg/kg do medicamento e incluímos um grupo negativo e um grupo tratado com daunorubicina. As observações foram feitas diariamente durante quatro dias. O ensaio subcrônico durou cinco semanas com administração diária de venlafaxina (1, 5, e 10 mg/kg) mais um grupo negativo e um grupo administrado de imipramina. As observações foram feitas a cada semana. No primeiro ensaio, os resultados não mostraram aumento de eritrócitos policromáticos micronucleados (MNPE), exceto com a dose elevada a 72 h. O efeito citotóxico mais forte foi encontrado com 250 mg/kg a 72 h (um efeito citotóxico de 51% em comparação com o nível médio de controle). No ensaio subcrônico não foi encontrado aumento de MNPE; entretanto, com a dose mais alta, um aumento significativo de eritrócitos normocromáticos micronucleados foi observado nas últimas três semanas (média de 51% em relação ao valor médio de controle). Foi observado um efeito citotóxico com as duas altas doses nas últimas duas semanas (uma diminuição média de 52% em relação ao valor médio de controle dos eritrócitos policromáticos). Os resultados sugerem cautela com a venlafaxina.
Asunto(s)
Animales , Conejos , Daño del ADN , Antineoplásicos , Pruebas de Micronúcleos , Relación Dosis-Respuesta a Droga , Eritrocitos , Clorhidrato de Venlafaxina/toxicidadRESUMEN
Abstract The present research was made to determine the micronuclei and cytotoxic capacity of the antidepressant venlafaxine in an in vivo acute and subchronic assays in mouse. In the first study, we administered once 5, 50, and 250 mg/kg of the drug, and included a negative and a daunorubicin treated group. Observations were daily made during four days. The subchronic assay lasted 5 weeks with daily administration of venlafaxine (1, 5, and 10 mg/kg) plus a negative and an imipramine administered groups. Observations were made each week. In the first assay results showed no micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPE) increase, except with the high dose at 72 h. The strongest cytotoxic effect was found with 250 mg/kg at 72 h (a 51% cytotoxic effect in comparison with the mean control level). In the subchronic assay no MNPE increase was found; however, with the highest dose a significant increase of micronucleated normochromatic erythrocytes was observed in the last three weeks (a mean of 51% respect to the mean control value). A cytotoxic effect with the two high doses in the last two weeks was observed (a polychromatic erythrocyte mean decrease of 52% respect to the mean control value). Results suggest caution with venlafaxine.
Resumo A presente pesquisa foi feita para determinar a capacidade micronuclei e citotóxica do antidepressivo venlafaxina em ensaios agudos e subcrônicos in vivo em camundongos. No primeiro estudo, administramos uma vez 5, 50 e 250 mg/kg do medicamento e incluímos um grupo negativo e um grupo tratado com daunorubicina. As observações foram feitas diariamente durante quatro dias. O ensaio subcrônico durou cinco semanas com administração diária de venlafaxina (1, 5, e 10 mg/kg) mais um grupo negativo e um grupo administrado de imipramina. As observações foram feitas a cada semana. No primeiro ensaio, os resultados não mostraram aumento de eritrócitos policromáticos micronucleados (MNPE), exceto com a dose elevada a 72 h. O efeito citotóxico mais forte foi encontrado com 250 mg/kg a 72 h (um efeito citotóxico de 51% em comparação com o nível médio de controle). No ensaio subcrônico não foi encontrado aumento de MNPE; entretanto, com a dose mais alta, um aumento significativo de eritrócitos normocromáticos micronucleados foi observado nas últimas três semanas (média de 51% em relação ao valor médio de controle). Foi observado um efeito citotóxico com as duas altas doses nas últimas duas semanas (uma diminuição média de 52% em relação ao valor médio de controle dos eritrócitos policromáticos). Os resultados sugerem cautela com a venlafaxina.
RESUMEN
Introducción: Los bioderivados propuestos como candidatos a ingredientes alimentarios suelen requerir ciertas evaluaciones para las aplicaciones inmunonutricionales Los hongos comestibles-medicinales son un surtidor de compuestos con estas potencialidades. Entre ellos, las setas Pleurotus ostreatus contienen metabolitos bioactivos, con importantes usos en la industria alimenticia y en la práctica terapéutica de la industria médico-farmacéutica. Los ensayos de citotoxicidad in vitro constituyen métodos valiosos para evaluarproductos de origen natural, como los extractos fúngicos. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad de dos extractos obtenidos de la seta Pleurotus ostreatus en diferentes líneas celulares. Método: Se obtuvieron extractos hidrosolubles a partir del micelio y de los cuerpos fructíferos de Pleurotus ostreatus en laboratorios del Centro de Estudios de Biotecnología Industrial de la Universidad de Oriente. Se evaluó la citotoxicidad de los bioproductos por el ensayo de reducción del colorante resazurina sobre tres líneas celulares en el Laboratorio de Microbiología, Parasitología e Higiene (LMPH) de la Universidad de Amberes, Bélgica. Se utilizaron células no adherentes THP-1 (pre-monocitos de leucemia humana), células adherentes Caco-2 (epitelio de adenocarcinoma de colon humano) y células adherentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Los extractos de Pleurotus ostreatus no resultaron citotóxicos para ninguna de las líneas celulares estudiadas humanas o murina, ya que no ocasionaron daños sobre la viabilidad de las célulasepiteliales del sistema gastrointestinal, nisobrelas células del sistema inmune empleadas. Conclusiones: Este resultado demuestra que ambos bioderivados fúngicos pueden ser aplicados con seguridad en estudios inmunonutricionales.(AU)
Introduction: Bioderivatives proposed as candidates for food ingredients usually require certain evaluations for immunonutritional applications. Edible-medicinal mushrooms are a source of compounds with these potentials. Among them, Pleurotus ostreatus mushrooms contain bioactive metabolites, with important uses in the food industry and in the therapeutic practice of the medical-pharmaceutical industry. In vitro cytotoxicity assays are valuable methods to evaluate products of natural origin, such as fungal extracts. Objective: To evaluate the cytotoxicity of two extracts obtained from the Pleurotus ostreatus mushroom in different cell lines. Method: Water-soluble extracts were obtained from the mycelium and fruiting bodies of Pleurotus ostreatus in laboratories of the Center for Industrial Biotechnology Studies of the Universidad de Oriente. The cytotoxicity of the bioproducts was evaluated by the resazurin dye reduction assay on three cell lines at the Laboratory of Microbiology, Parasitology and Hygiene (LMPH) of the University of Antwerp, Belgium. Non-adherent THP-1 cells (human leukemia pre-monocytes), Caco-2 adherent cells (human colon adenocarcinoma epithelium) and RAW 264.7 adherent cells (murine macrophages) were used. Results: Pleurotus ostreatus extracts were not cytotoxic for any of the human or murine cell lines studied, since they did not cause damage to the viability of the epithelial cells of the gastrointestinal system, nor to the immune system cells used. Conclusions: This result demonstrates that both fungal bioderivatives can be safely applied in immunonutritional studies.(AU)
Introdução: Bioderivados propostos como candidatos a ingredientes alimentícios geralmente requerem determinadas avaliações para aplicações imunonutricionais. Pleurotus ostreatus contêm metabólitos bioativos, com importantes utilizações na indústria alimentícia e na prática terapêutica da indústria médico-farmacêutica. Ensaios de citotoxicidade in vitro são métodos valiosos para avaliar produtos de origem natural, como extratos de fungos. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade de dois extratos obtidos do cogumelo Pleurotus ostreatus em diferentes linhagens celulares. Método: Extratos hidrossolúveis foram obtidos do micélio e dos corpos frutíferos de Pleurotus ostreatus nos laboratórios do Centro de Estudos de Biotecnologia Industrial da Universidade de Oriente. A citotoxicidade dos bioprodutos foi avaliada pelo ensaio de redução do corante resazurina em três linhagens celulares no Laboratório de Microbiologia, Parasitologia e Higiene (LMPH) da Universidade de Antuérpia, Bélgica. Foram utilizadas células THP-1 não aderentes (pré-monócitos de leucemia humana), células aderentes Caco-2 (epitélio de adenocarcinoma do cólon humano) e células aderentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Os extratos de Pleurotus ostreatus não foram citotóxicos para nenhuma das linhagens celulares humanas ou murinas estudadas, pois não causaram danos à viabilidade das células epiteliais do sistema gastrointestinal, nem às células do sistema imunológico utilizadas. Conclusões: Este resultado demonstra que ambos os bioderivados fúngicos podem ser aplicados com segurança em estudos imunonutricionais.(AU)
RESUMEN
The objective was to evaluate the cytotoxic, genotoxic and mutagenic properties of two experimental medication in Endodontics. For cytotoxic evaluation, fibroblast and osteoblast cells (1x104 cells/well) were plated and divided into groups conforming to the product added in culture medium: EM1 - 20 µL of experimental medication 1 (EM1); EM2 - 20 µL of experimental medication 2 (EM2); VE - 20 µL of vehicle used in medications; C - without product. The MTT assay was performed at 24, 48 e 72 hours for cytotoxic analysis. For genotoxic and mutagenic evaluation, 42 male rats were used. After 1 and 7 days of tubes containing EM1 or EM2, or empty (NC) were subcutaneously implanted, and after 1 day, a single dose of cyclophosphamide (CY) to be applied, the bone marrow was collected and submitted to comet and micronuclei assay. The significance level of 5% was considered for all statistical analysis. The viability of fibroblasts was <70% to both medications at 24h, and EM1 at 72h; at 72h, the proliferation cells was observed in EM2 (>100%). Both medications were non-cytotoxic to osteoblasts, and the EM2 stimulate the cell proliferation at 72h. The damage frequency of CY was statistically similar to EM1 and different to EM2 (p<0.05). The number of micronuclei was insignificant to EM1 and EM2 and no difference to group NC (p>0.05). Despite the absence of mutagenesis and non-cytotoxicity to osteoblasts, the EM1 was cytotoxic and genotoxic to fibroblasts. The EM2 was non-genotoxic, non-cytotoxic and nonmutagenic. (AU)
O objetivo foi avaliar as propriedades citotóxicas, genotóxicas e mutagênicas de dois medicamentos experimentais em Endodontia. Para avaliação citotóxica, células fibroblásticas e osteoblásticas (1x104 células/poço) foram plaqueadas e divididas em grupos de acordo com o produto adicionado no meio de cultura: EM1 - 20 µL da medicação experimental 1 (EM1); EM2 - 20 µL da medicação experimental 2 (EM2); VE - 20 µL de veículo utilizado em medicamentos; C sem produto. O ensaio MTT foi realizado aos 24, 48 e 72 horas para análise citotóxica. Para avaliação genotóxica e mutagênica foram utilizados 42 ratos machos. Após 1 e 7 dias foram implantados por via subcutânea tubos contendo EM1 ou EM2, ou vazios (NC), e após 1 dia, foi aplicada dose única de ciclofosfamida (CY), a medula óssea foi coletada e submetida ao ensaio de cometa e micronúcleos. O nível de significância de 5% foi considerado para todas as análises estatísticas. A viabilidade dos fibroblastos foi <70% para ambas as medicações às 24h e ao EM1 às 72h; às 72h, a proliferação de células foi observada em EM2 (>100%). Ambas as medicações foram não citotóxicas para os osteoblastos, e o EM2 estimulou a proliferação celular às 72h. A frequência de dano do CY foi estatisticamente semelhante ao EM1 e diferente do EM2 (p<0,05). O número de micronúcleos foi insignificante para EM1 e EM2 e não houve diferença para o grupo NC (p>0,05). Apesar da ausência de mutagênese e não citotoxicidade para osteoblastos, o EM1 foi citotóxico e genotóxico para fibroblastos. O EM2 era não genotóxico, não citotóxico e não mutagênico. (AU)
RESUMEN
myrsine coriacea (Sw.) R. Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae) conhecida popularmente como capororoquinha ou capororoca, é amplamente distribuída nas regiões sul e sudeste do Brasil. As espécies desse gênero apresentam um potencial antioxidante e anti-inflamatório, que pode ser acessado na busca de novos ativos para o tratamento de desordens pigmentares da pele. Desta forma, este trabalho teve como objetivos avaliar o potencial antitirosinase e antioxidante de extratos e frações de M. coriacea e identificar os possíveis compostos responsáveis por essas atividades. Foram realizados ensaios para avaliar o potencial antioxidante das amostras através do método do DPPH, enquanto a capacidade hipopigmentante das amostras foi avaliado pela inibição da enzima tirosinase. Como complemento, foram determinados os teores de compostos fenólicos totais e flavonoides através dos métodos colorimétricos empregando o reagente Folin-Ciocalteau e AlCl3. Adicionalmente, os extratos de M. coriacea tiveram avaliados seus potenciais citotóxicos utilizando diferentes linhagens tumorais humanas. O perfil fitoquímico de M. coriacea foi analisado por cromatografia a gás acoplada com espectrometria de massas (CG-EM) e cromatografia em camada delgada (CCD) com padrões. Nessas análises foram identificados 34 compostos, sendo o ácido palmítico e o palmitato de etila os compostos majoritários nas amostras de M. coriacea. O extrato bruto das folhas apresentou o maior teor de fenólicos totais, enquanto a fração de acetato de etila das folhas teve o maior teor de flavonoides. Contudo, o extrato bruto dos frutos apresentou a melhor atividade antioxidante de todas as amostras analisadas, apresentando também a melhor atividade antitirosinase. Dentre os compostos anotados, mandenol, ácido -linoleico e o linolenato de etila foram os compostos considerados como possíveis inibidores da tirosinase, com boa interação molecular com a enzima nas análises de ancoragem molecular in silico. Das amostras analisadas com relação a inibição de crescimento frente as células tumorais, a amostra da fração de clorofórmio das folhas foi a que apresentou potencial antitumoral frente as células de adenocarcinoma de cólon (HCT116)
myrsine coriacea (Sw.) R. Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae) popularly known as capororoquinha or capororoca, is widely distributed in southern and southeastern Brazil. Myrsine species have an antioxidant and anti-inflammatory potential, which can be accessed in the search for new actives for the treatment of skin pigmentation disorders. Thus, this work aimed to evaluate the antityrosinase and antioxidant potential from extracts and fractions of M. coriacea and to identify the probable compounds responsible for these activities. Assays were performed to evaluate the antioxidant potential of the samples using the DPPH method, while the hypopigmentation capacity of the samples was evaluated by the tyrosinase inhibition. As a complement, the amounts of total phenolic compounds and flavonoids were determined through colorimetric methods using the Folin-Ciocalteau reagent and AlCl3. Additionally, M. coriacea extracts had their cytotoxic potential evaluated using different human tumor cell lines. M. coriacea phytochemical profile was obtained by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) and thin layer chromatography (TLC) with standards. In these analyses, 34 compounds were identified, with palmitic acid and ethyl palmitate as the major compounds in M. coriacea samples. The leaf crude extract presented the highest total phenolics contents, while the leaf ethyl acetate fraction had the highest flavonoid amounts. However, the fruit crude extract showed the best antioxidant and antityrosinase activities of all analyzed samples. Among the annotated compounds, mandenol, -linoleic acid and ethyl linolenate were the compounds considered as putative tyrosinase inhibitors, presenting good molecular interaction with the enzyme active site in the in silico molecular docking analysis. The leaf chloroform fraction was the only sample that showed an antitumor potential against colon adenocarcinoma cells (HCT116)
Asunto(s)
Monofenol Monooxigenasa/análisis , Primulaceae/metabolismo , Myrsine/clasificación , Frutas/clasificación , Antioxidantes/análisis , Espectrometría de Masas/métodos , Pigmentación de la Piel/inmunología , Cromatografía en Capa Delgada/métodos , Hipopigmentación/patologíaRESUMEN
For many centuries human populations have been suffering and trying to fight with disease-bearing mosquitoes. Emerging and reemerging diseases such as Dengue, Zika, and Chikungunya affect billions of people around the world and recently has been appealing to control with chemical pesticides. Malathion (MT) is one of the main pesticides used against mosquitoes, the vectors of these diseases. This study aimed to assess cytotoxicity and mutagenicity of the malathion for the bioindicator Allium cepa L. using a multivariate and integrative approach. Moreover, an appendix table was compiled with all available literature of insecticides assessed by the Allium cepa system to support our discussion. Exposures during 48h to 0.5 mg mL-¹ and 1.0 mg mL-¹ MT were compared to the negative control (distilled water) and positive control (MMS solution at 10 mg L-¹). The presence of chromosomal aberrations, micronuclei frequency, and mitotic index abnormalities was evaluated. Anaphase bridges were the alterations with higher incidence and presented a significantly elevated rate in the concentration of 0.5 mg mL-¹, including when compared to the positive control. The integrative discriminant analysis summarizes that MT in assessed concentrations presented effects like the positive control, corroborating its potential of toxicity to DNA. Therefore, it is concluded that MT in its pure composition and in realistic concentrations used, has genotoxic potential in the biological assessment of A. cepa cells. The multivariate integrative analysis was fundamental to show a whole response of all data, providing a global view of the effect of MT on DNA.
Por muitos séculos, as populações humanas sofrem e tentam combater os mosquitos transmissores de doenças. Doenças emergentes e reemergentes como Dengue, Zika e Chikungunya afetam bilhões de pessoas em todo o mundo e, recentemente, vem apelando ao controle com pesticidas químicos. O Malation (MT) é um dos principais pesticidas usados contra mosquitos, vetores dessas doenças. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e a mutagenicidade do MT para o bioindicador Allium cepa L. usando uma abordagem multivariada e integrativa. Além disso, uma tabela suplementar foi compilada com toda a literatura disponível de inseticidas avaliada pelo sistema Allium cepa para apoiar nossa discussão. Exposições ao MT durante 48h a 0,5 mg mL-¹ e 1,0 mg mL-¹ foram comparadas a um controle negativo (água destilada) e um controle positivo (10 mg L-¹ de MMS). Foram avaliadas a presença de aberrações cromossômicas, frequência de micronúcleos e anormalidades no índice mitótico. As pontes anafásicas foram as alterações com maior incidência e apresentaram uma taxa significativamente elevada na concentração de 0,5 mg mL-¹, inclusive quando comparadas ao controle positivo. A análise discriminante integrativa resume que o MT nas concentrações avaliadas apresentou efeitos semelhantes ao controle positivo, corroborando seu potencial de toxicidade para o DNA. Portanto, conclui-se que o MT, em sua composição pura e nas concentrações realistas utilizadas, possui potencial genotóxico na avaliação biológica de células de A. cepa. A análise integrativa multivariada foi fundamental para mostrar uma resposta completa de todos os dados, fornecendo uma visão global do efeito da MT no DNA.
Asunto(s)
Aedes , Cebollas/efectos de los fármacos , Cebollas/genética , Cebollas/toxicidad , Intoxicación por Organofosfatos , MalatiónRESUMEN
Abstract For many centuries human populations have been suffering and trying to fight with disease-bearing mosquitoes. Emerging and reemerging diseases such as Dengue, Zika, and Chikungunya affect billions of people around the world and recently has been appealing to control with chemical pesticides. Malathion (MT) is one of the main pesticides used against mosquitoes, the vectors of these diseases. This study aimed to assess cytotoxicity and mutagenicity of the malathion for the bioindicator Allium cepa L. using a multivariate and integrative approach. Moreover, an appendix table was compiled with all available literature of insecticides assessed by the Allium cepa system to support our discussion. Exposures during 48h to 0.5 mg mL-1 and 1.0 mg mL-1 MT were compared to the negative control (distilled water) and positive control (MMS solution at 10 mg L-1). The presence of chromosomal aberrations, micronuclei frequency, and mitotic index abnormalities was evaluated. Anaphase bridges were the alterations with higher incidence and presented a significantly elevated rate in the concentration of 0.5 mg mL-1, including when compared to the positive control. The integrative discriminant analysis summarizes that MT in assessed concentrations presented effects like the positive control, corroborating its potential of toxicity to DNA. Therefore, it is concluded that MT in its pure composition and in realistic concentrations used, has genotoxic potential in the biological assessment of A. cepa cells. The multivariate integrative analysis was fundamental to show a whole response of all data, providing a global view of the effect of MT on DNA.
Resumo Por muitos séculos, as populações humanas sofrem e tentam combater os mosquitos transmissores de doenças. Doenças emergentes e reemergentes como Dengue, Zika e Chikungunya afetam bilhões de pessoas em todo o mundo e, recentemente, vem apelando ao controle com pesticidas químicos. O Malation (MT) é um dos principais pesticidas usados contra mosquitos, vetores dessas doenças. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e a mutagenicidade do MT para o bioindicador Allium cepa L. usando uma abordagem multivariada e integrativa. Além disso, uma tabela suplementar foi compilada com toda a literatura disponível de inseticidas avaliada pelo sistema Allium cepa para apoiar nossa discussão. Exposições ao MT durante 48h a 0,5 mg mL-1 e 1,0 mg mL-1 foram comparadas a um controle negativo (água destilada) e um controle positivo (10 mg L-1 de MMS). Foram avaliadas a presença de aberrações cromossômicas, frequência de micronúcleos e anormalidades no índice mitótico. As pontes anafásicas foram as alterações com maior incidência e apresentaram uma taxa significativamente elevada na concentração de 0,5 mg mL-1, inclusive quando comparadas ao controle positivo. A análise discriminante integrativa resume que o MT nas concentrações avaliadas apresentou efeitos semelhantes ao controle positivo, corroborando seu potencial de toxicidade para o DNA. Portanto, conclui-se que o MT, em sua composição pura e nas concentrações realistas utilizadas, possui potencial genotóxico na avaliação biológica de células de A. cepa. A análise integrativa multivariada foi fundamental para mostrar uma resposta completa de todos os dados, fornecendo uma visão global do efeito da MT no DNA.
RESUMEN
Abstract For many centuries human populations have been suffering and trying to fight with disease-bearing mosquitoes. Emerging and reemerging diseases such as Dengue, Zika, and Chikungunya affect billions of people around the world and recently has been appealing to control with chemical pesticides. Malathion (MT) is one of the main pesticides used against mosquitoes, the vectors of these diseases. This study aimed to assess cytotoxicity and mutagenicity of the malathion for the bioindicator Allium cepa L. using a multivariate and integrative approach. Moreover, an appendix table was compiled with all available literature of insecticides assessed by the Allium cepa system to support our discussion. Exposures during 48h to 0.5 mg mL-1 and 1.0 mg mL-1 MT were compared to the negative control (distilled water) and positive control (MMS solution at 10 mg L-1). The presence of chromosomal aberrations, micronuclei frequency, and mitotic index abnormalities was evaluated. Anaphase bridges were the alterations with higher incidence and presented a significantly elevated rate in the concentration of 0.5 mg mL-1, including when compared to the positive control. The integrative discriminant analysis summarizes that MT in assessed concentrations presented effects like the positive control, corroborating its potential of toxicity to DNA. Therefore, it is concluded that MT in its pure composition and in realistic concentrations used, has genotoxic potential in the biological assessment of A. cepa cells. The multivariate integrative analysis was fundamental to show a whole response of all data, providing a global view of the effect of MT on DNA.
Resumo Por muitos séculos, as populações humanas sofrem e tentam combater os mosquitos transmissores de doenças. Doenças emergentes e reemergentes como Dengue, Zika e Chikungunya afetam bilhões de pessoas em todo o mundo e, recentemente, vem apelando ao controle com pesticidas químicos. O Malation (MT) é um dos principais pesticidas usados contra mosquitos, vetores dessas doenças. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e a mutagenicidade do MT para o bioindicador Allium cepa L. usando uma abordagem multivariada e integrativa. Além disso, uma tabela suplementar foi compilada com toda a literatura disponível de inseticidas avaliada pelo sistema Allium cepa para apoiar nossa discussão. Exposições ao MT durante 48h a 0,5 mg mL-1 e 1,0 mg mL-1 foram comparadas a um controle negativo (água destilada) e um controle positivo (10 mg L-1 de MMS). Foram avaliadas a presença de aberrações cromossômicas, frequência de micronúcleos e anormalidades no índice mitótico. As pontes anafásicas foram as alterações com maior incidência e apresentaram uma taxa significativamente elevada na concentração de 0,5 mg mL-1, inclusive quando comparadas ao controle positivo. A análise discriminante integrativa resume que o MT nas concentrações avaliadas apresentou efeitos semelhantes ao controle positivo, corroborando seu potencial de toxicidade para o DNA. Portanto, conclui-se que o MT, em sua composição pura e nas concentrações realistas utilizadas, possui potencial genotóxico na avaliação biológica de células de A. cepa. A análise integrativa multivariada foi fundamental para mostrar uma resposta completa de todos os dados, fornecendo uma visão global do efeito da MT no DNA.
Asunto(s)
Humanos , Animales , Virus Zika , Infección por el Virus Zika , Insecticidas/toxicidad , Daño del ADN , Aberraciones Cromosómicas , Raíces de Plantas , Cebollas , Mosquitos Vectores , Malatión/toxicidad , Índice MitóticoRESUMEN
Introdução: Espécies da família Asteraceae são conhecidas por apresentarem propriedades aromática, cosmética e terapêutica; tendo diversas pesquisas que evidenciou potencial medicinal dessa família. Dentre as espécies de Asteraceae, está Praxelis clematidea, que é rica em substâncias químicas como flavonoides, terpenóides e esteroides, as quais podem desempenhar uma série de atividades biológicas. Objetivo: Verificar o potencial tóxico do extrato etanólico das folhas de P. clematidea frente à células sanguíneas humanas, afim de determinar a toxicidade teórica dessa espécie. Métodos: Para a realização do teste de atividade citotóxica foram preparadas suspensões sanguíneas dos tipos A, B e O, que posteriormente foram misturadas a concentrações distintas do extrato etanólico por 1 (uma) hora. A hemólise foi quantificada por espectrofotometria em comprimento de onda de 540 nm. Resultados: O extrato etanólico das folhas de P. clematidea em diferentes concentrações apresentou baixa citoxicidade contra os eritrócitos humanos in vitro, enfatizando o produto como uma possível opção viável para a indústria de medicamentos fitoterápicos. No entanto, é importante elucidar que mais estudos in vivo precisam ser realizados para confirmar esse perfil toxicológico do extrato.
SUMMARY Introduction: Species of the Asteraceae family are known to have aromatic, cosmetic and therapeutic properties; having several researches that evidenced medicinal potential of this family. Among the species of Asteraceae, there is Praxelis clematidea, which is rich in chemical substances such as flavonoids, terpenoids and steroids, which can perform a series of biological activities. Aim: To verify the toxic potential of the ethanolic extract of P. clematidea leaves against human blood cells, in order to determine the theoretical toxicity of this species. Method: For the performance of the cytotoxic activity test, blood suspensions of types A, B and O were prepared, which were subsequently mixed at different concentrations of the ethanolic extract for 1 (one) hour. Hemolysis was quantified by spectrophotometry at a wavelength of 540 nm. Results: The ethanolic extract of P. clematidea leaves in different concentrations showed low cytotoxicity against human erythrocytes in vitro, emphasizing the product as a possible viable option for the herbal medicine industry. However, it is important to clarify that more in vivo studies need to be carried out to confirm this toxicological profile of the extract.
Introducción: Se sabe que las especies de la familia Asteraceae tienen propiedades aromáticas, cosméticas y terapéuticas; habiendo varias investigaciones que evidenciaron el potencial medicinal de esta familia. Entre las especies de Asteraceae, se encuentra Praxelis clematidea, que es rica en sustancias químicas como flavonoides, terpenoides y esteroides, que pueden realizar una serie de actividades biológicas. Objetivo: Verificar el potencial tóxico del extracto etanólico de hojas de P. clematidea contra las células sanguíneas humanas, con el fin de determinar la toxicidad teórica de esta especie. Metodos: Para realizar la prueba de actividad citotóxica se prepararon suspensiones de sangre de los tipos A, B y O, que luego se mezclaron a diferentes concentraciones del extracto etanólico durante 1 (una) hora. La hemólisis se cuantificó mediante espectrofotometría a una longitud de onda de 540 nm. Resultados: El extracto etanólico de hojas de P. clematidea a diferentes concentraciones mostró baja citotoxicidad contra eritrocitos humanos in vitro, destacando el producto como una posible opción viable para la industria de la fitoterapia. Sin embargo, es importante aclarar que es necesario realizar más estudios in vivo para confirmar este perfil toxicológico del extracto.
RESUMEN
SUMMARY Introduction: Ethanolic and hydroalcoholic extracts of Ageratum fastigiatum are used in folk medicine as anti-inflammatory and analgesic agents. Aim: To evaluate toxicity in Artemia salina and in the cells of the connective tissue of mice (L929). Methodology: The extract was partitioned and its hexane, dichloromethane and hydroalcoholic phases were submitted to the same test. The phytochemical screening of the phases of the extract was performed using tests aimed at the detection of secondary metabolites and GC-MS. Regarding A. salina, the hydroalcoholic phase exhibited the highest toxicity (LC50, 1.33 mg/mL) and the crude ethanolic extract was the least toxic (LC50, 4.81 mg/mL). In the assay of L929 cells, the dichloromethane phase was the most toxic (95.48% reduction in cell viability; LC50, 11.39 µg/mL), while the hydroalcoholic phase was the least toxic (cell death percentage, 55.67-19.38 %; LC50, 174.20 µg/mL). Result: The phytochemical study indicated the presence of alkaloids, coumarins, saponins, triterpenes/steroids and tannins. The GC-MS analysis identified the presence of terpenoids and a lycopsamine derivative (a pyrrolizidine alkaloid). Conclusion: These results suggest that the ethanolic extract of A. fastigiatum had constituents (i.e., phenolic compounds) that corroborate its use in folk medicine as an anti-inflammatory agent. However, the toxicity detected and the presence of 3'-acetyl lycopsamine (a chemotaxonomic marker of the genus that is hepatotoxic) indicates that this medicinal plant should be used with caution.
RESUMO Introdução: Os extratos etanólico e hidroalcoólico de Ageratum fastigiatum são usados na medicina popular como agentes antiinflamatório e analgésico. Objetivo: Avalidar quanto à sua toxicidade em Artemia salina e nas células do tecido conjuntivo de camundongos (L929). Metodologia: O extrato foi particionado e suas fases hexânica, diclorometânica e hidroalcoólica foram submetidas ao mesmo teste. A triagem fitoquímica das fases do extrato foi realizada por meio de testes visando a detecção de classes de metabólitos secundários e GC-MS. Resultados: Em relação a A. salina, a fase hidroalcoólica apresentou a maior toxicidade (CL50, 1,33 mg/mL) e o extrato etanólico bruto foi o menos tóxico (CL50_ 4,81 mg/mL). No ensaio de células L929, a fase de diclorometânica foi a mais tóxica (95,48% de redução na viabilidade celular; LC50, 11,39 µg/mL), enquanto a fase hidroalcoólica foi a menos tóxica (porcentagem de morte celular, 55,67-19,38 %; LC50, 174,20 µg/mL). O estudo fitoquímico indicou a provável presença de alcalóides, cumarinas, saponinas, triterpenos/ esteróides e taninos. A análise por GC-MS identificou a presença de terpenóides e um derivado de licopsamina (alcalóide pirrolizidínico). Conclusão: Esses resultados sugerem que o extrato etanólico de A. fastigiatum possui constituintes (ou seja, compostos fenólicos) que corroboram seu uso na medicina popular como agente antiinflamatório. No entanto, a toxicidade detectada e a presença da 3'-acetil licopsamina (um marcador quimiotaxonômico do gênero, que é hepatotóxico) indicam que essa planta medicinal deve ser usada com cautela.
RESUMEN Introducción: Los extractos etanólico e hidroalcohólico de Ageratum fastigiatum se utilizan en la medicina popular como agentes antiinflamatorios y analgésicos. Objetivo: Evaluar la toxicidad en artemia salina y en las células del tejido conectivo de ratones (L929). Metodología: El extracto se fraccionó y se sometieron a la misma prueba sus fases hexano, diclorometano e hidroalcohólica. El tamizaje fitoquímico de las fases del extracto se realizó mediante pruebas dirigidas a la detección de metabolitos secundarios y GC-MS. En cuanto a A. salina, la fase hidroalcohólica presentó la mayor toxicidad (CL50, 1,33 mg/mL) y el extracto etanólico crudo fue el menos tóxico (CL50, 4,81 mg/mL). En el ensayo de células L929, la fase de diclorometano fue la más tóxica (95,48% de reducción de la viabilidad celular; CL50, 11,39 µg/mL), mientras que la fase hidroalcohólica fue la menos tóxica (porcentaje de muerte celular, 55,67-19,38 %; CL50, 174,20 µg/mL). Resultado: El estudio fitoquímico indicó la probable presencia de alcaloides, cumarinas, saponinas, triterpenos/esteroides y taninos. El análisis GC-MS identificó la presencia de terpenoides y un derivado de licopsamina (un alcaloide de pirrolizidina). Conclusión: Estos resultados sugieren que el extracto etanólico de A. fastigiatum tenía constituyentes (es decir, compuestos fenólicos) que corroboran su uso en la medicina popular como agente antiinflamatorio. Sin embargo, la toxicidad detectada y la presencia de 3'-acetil licopsamina (un marcador quimiotaxonómico del género que es hepatotóxico) indica que esta planta medicinal debe utilizarse con precaución.
RESUMEN
Flavoring additives are of great technological importance for the food industry. However, there is little information regarding the toxicological properties of these micro-ingredients, especially at the cellular level. The present study used meristematic root cells of Allium cepa L. to evaluate the toxicity of a liquid, aroma and flavor synthetic chocolate additive, manufactured and widely marketed throughout Brazil and exported to other countries in South America. The flavoring concentrations evaluated were 100.00; 50.00; 25.00; 1.00; 0.50 and 0.25 µL/L, where the highest concentration established was one-hundred times lower than that commercially suggested for use. The concentration 100 µL/L substantially reduced cell division of meristems within 24- and 48-hours exposure. Concentrations from 100.00 to 0.50 µL/L resulted in a significant number of prophases to the detriment of the other phases of cell division, indicating an aneugenic activity, and induced a significant number of cellular changes, with emphasis on micronuclei, nuclear buds and chromosomal breaks. Under the established analysis conditions, with the exception of concentration 0.25 µL/L, the flavoring of chocolate caused cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity to root meristems.
Os aditivos aromatizantes têm grande importância tecnológica para a indústria de alimentos. Contudo, poucas são as informações quanto as propriedades toxicológicas desses microingredientes, especialmente, em nível celular. No presente estudo avaliou-se, sobre as células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., a toxicidade de um aditivo sintético líquido de aroma e sabor de chocolate, fabricado e amplamente comercializado em todo Brasil, e exportado para outros países da América do Sul. As concentrações de aromatizante avaliadas foram 100,00; 50,00; 25,00; 1,00; 0,50 e 0,25 µL/L, onde a maior concentração estabelecida foi cem vezes menor que a sugerida comercialmente para uso. Com base na interpretação dos resultados, a concentração 100 µL/L reduziu substancialmente a divisão celular dos meristemas nas 24 e 48 horas de exposição. As concentrações 100,00 a 0,50 µL/L demonstraram número significativo de prófases em detrimento as outras fases da divisão celular, indicando ação aneugênica, e induziram número significativo de alterações celulares, com ênfase a micronúcleos, broto nucleares e quebras cromossômicas. Nas condições de análises estabelecidas, com exceção a concentração 0,25 µL/L, o aromatizante de chocolate causou citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade aos meristemas radiculares.
Asunto(s)
Chocolate , Mutágenos/toxicidad , Daño del ADN , Brasil , Raíces de Plantas , Cebollas , Aditivos AlimentariosRESUMEN
Objetivo: Avaliar a citotoxicidade e o efeito antibacteriano do extrato hidroalcoólico de cúrcuma branqueado comparado ao hipoclorito de sódio como irrigante endodôntico. Material e Métodos: A citotoxicidade foi avaliada em fibroblastos de pele humana usando o ensaio MTT. Os irrigantes foram testados em intervalos de tempo de 1, 5 e 15 minutos. Após o tempo de contato, a solução de MTT foi adicionada e as placas de poços foram incubadas. Após o período de incubação, a densidade óptica foi lida e correlacionada com a porcentagem de viabilidade celular. A eficiência antibacteriana foi avaliada usando o teste de contato direto. Cada irrigante endodôntico foi adicionado à suspensão fresca de Enterococcus faecalis e ao meio de infusão cérebro-coração e então incubados por 48 horas. Após o período de incubação, as leituras de densidade óptica foram obtidas e lidas por leitor de ELISA a 620 nm. Resultados: Os resultados do teste de citotoxicidade revelaram que o extrato de cúrcuma branqueado apresentou porcentagem de viabilidade celular significativamente maior do que o hipoclorito de sódio (NaOCl) em todos os intervalos de tempo (p<0,001). No entanto, no grupo de intervenção, a porcentagem de viabilidade celular diminuiu significativamente ao longo do tempo. Os resultados do teste antibacteriano mostraram inibição bacteriana por ambos os grupos com diferença não significativa entre os dois grupos testados (p<0,05). Conclusão:O extrato hidroalcoólico de cúrcuma branqueado pode representar uma alternativa fitoterápica irrigante endodôntico para evitar os efeitos tóxicos indesejáveis do NaOCl devido à sua menor citotoxicidade e efeito antibacteriano proeminente contra Enterococcus faecalis (AU)
Objective: To evaluate the cytotoxicity and antibacterial effect of bleached turmeric hydro-alcoholic extract compared to sodium hypochlorite as an endodontic irrigant. Material and Methods: Cytotoxicity was evaluated on human skin fibroblasts using MTT assay. The irrigants were tested at 1, 5- and 15-minutes time intervals. After contact time, MTT solution was added and well plates were incubated. After the incubation period, optical density was read and correlated with cell viability percent. Antibacterial efficiency was evaluated using direct contact test. Each endodontic irrigant was added to fresh Enterococcus faecalis suspension and brain heart infusion media then incubated for 48 hours. After incubation period, optical density readings were obtained and read by ELISA reader at 620 nm. Results:Results of cytotoxicity test revealed that bleached turmeric extract had significant higher cell viability percent than Sodium hypochlorite (NaOCl) at all time intervals (p<0.001). However, in the intervention group, cell viability percent significantly decreased over time. Results of antibacterial test showed bacterial inhibition by both groups with non-significant difference between the two tested groups (p<0.05). Conclusion: Bleached turmeric hydro-alcoholic extract can represent an herbal alternative endodontic irrigant to avoid the undesirable toxic effects of NaOCl due to its less cytotoxicity and prominent antibacterial effect against Enterococcus faecalis. (AU)
Asunto(s)
Irrigantes del Conducto Radicular , Hipoclorito de Sodio , Curcuma , Toxicidad , AntibacterianosRESUMEN
Flavoring additives are of great technological importance for the food industry. However, there is little information regarding the toxicological properties of these micro-ingredients, especially at the cellular level. The present study used meristematic root cells of Allium cepa L. to evaluate the toxicity of a liquid, aroma and flavor synthetic chocolate additive, manufactured and widely marketed throughout Brazil and exported to other countries in South America. The flavoring concentrations evaluated were 100.00; 50.00; 25.00; 1.00; 0.50 and 0.25 µL/L, where the highest concentration established was one-hundred times lower than that commercially suggested for use. The concentration 100 µL/L substantially reduced cell division of meristems within 24- and 48-hours exposure. Concentrations from 100.00 to 0.50 µL/L resulted in a significant number of prophases to the detriment of the other phases of cell division, indicating an aneugenic activity, and induced a significant number of cellular changes, with emphasis on micronuclei, nuclear buds and chromosomal breaks. Under the established analysis conditions, with the exception of concentration 0.25 µL/L, the flavoring of chocolate caused cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity to root meristems.
Os aditivos aromatizantes têm grande importância tecnológica para a indústria de alimentos. Contudo, poucas são as informações quanto as propriedades toxicológicas desses microingredientes, especialmente, em nível celular. No presente estudo avaliou-se, sobre as células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., a toxicidade de um aditivo sintético líquido de aroma e sabor de chocolate, fabricado e amplamente comercializado em todo Brasil, e exportado para outros países da América do Sul. As concentrações de aromatizante avaliadas foram 100,00; 50,00; 25,00; 1,00; 0,50 e 0,25 µL/L, onde a maior concentração estabelecida foi cem vezes menor que a sugerida comercialmente para uso. Com base na interpretação dos resultados, a concentração 100 µL/L reduziu substancialmente a divisão celular dos meristemas nas 24 e 48 horas de exposição. As concentrações 100,00 a 0,50 µL/L demonstraram número significativo de prófases em detrimento as outras fases da divisão celular, indicando ação aneugênica, e induziram número significativo de alterações celulares, com ênfase a micronúcleos, broto nucleares e quebras cromossômicas. Nas condições de análises estabelecidas, com exceção a concentração 0,25 µL/L, o aromatizante de chocolate causou citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade aos meristemas radiculares.
Asunto(s)
Aditivos Alimentarios/administración & dosificación , Aditivos Alimentarios/toxicidad , Cebollas/efectos de los fármacosRESUMEN
Abstract Flavoring additives are of great technological importance for the food industry. However, there is little information regarding the toxicological properties of these micro-ingredients, especially at the cellular level. The present study used meristematic root cells of Allium cepa L. to evaluate the toxicity of a liquid, aroma and flavor synthetic chocolate additive, manufactured and widely marketed throughout Brazil and exported to other countries in South America. The flavoring concentrations evaluated were 100.00; 50.00; 25.00; 1.00; 0.50 and 0.25 µL/L, where the highest concentration established was one-hundred times lower than that commercially suggested for use. The concentration 100 µL/L substantially reduced cell division of meristems within 24- and 48-hours exposure. Concentrations from 100.00 to 0.50 µL/L resulted in a significant number of prophases to the detriment of the other phases of cell division, indicating an aneugenic activity, and induced a significant number of cellular changes, with emphasis on micronuclei, nuclear buds and chromosomal breaks. Under the established analysis conditions, with the exception of concentration 0.25 µL/L, the flavoring of chocolate caused cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity to root meristems.
Resumo Os aditivos aromatizantes têm grande importância tecnológica para a indústria de alimentos. Contudo, poucas são as informações quanto as propriedades toxicológicas desses microingredientes, especialmente, em nível celular. No presente estudo avaliou-se, sobre as células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., a toxicidade de um aditivo sintético líquido de aroma e sabor de chocolate, fabricado e amplamente comercializado em todo Brasil, e exportado para outros países da América do Sul. As concentrações de aromatizante avaliadas foram 100,00; 50,00; 25,00; 1,00; 0,50 e 0,25 µL/L, onde a maior concentração estabelecida foi cem vezes menor que a sugerida comercialmente para uso. Com base na interpretação dos resultados, a concentração 100 µL/L reduziu substancialmente a divisão celular dos meristemas nas 24 e 48 horas de exposição. As concentrações 100,00 a 0,50 µL/L demonstraram número significativo de prófases em detrimento as outras fases da divisão celular, indicando ação aneugênica, e induziram número significativo de alterações celulares, com ênfase a micronúcleos, broto nucleares e quebras cromossômicas. Nas condições de análises estabelecidas, com exceção a concentração 0,25 µL/L, o aromatizante de chocolate causou citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade aos meristemas radiculares.
RESUMEN
Ainda não foi encontrado um medicamento capaz de desinfetar os canais radiculares e permitir a recuperação celular e a regeneração tecidual em dentes permanentes jovens com comprometimento endodôntico. Dois importantes flavonóis detectados no vinho tinto, morina (MO) e miricetina (MY), são atualmente estudados por suas amplas propriedades biológicas, incluindo atividade antimicrobiana. No entanto, o desenvolvimento de sistemas de liberação controlada pode ser útil para a liberação desses flavonóis para fins de terapia endodôntica. Este estudo avaliou a citocompatibilidade e os efeitos antimicrobianos/antibiofilme de MO e MY, isolados ou incorporados em hidrogéis termorreversíveis de quitosana-poloxamer-ß-glicerofosfato de sódio (CPG), além dos efeitos de MO e MY, isolados e combinados sobre a viabilidade, atividade de ALP e produção de nódulos de mineralização em células MDPC-23. A atividade antimicrobiana dos compostos foi avaliada em Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Fusobacterium nucleatum em condições planctônicas, em biofilmes dual-espécies e multiespécies e analisadas por contagem bacteriana e microscopia de varredura. Os hidrogéis CPG foram caracterizados por reometria de fluxo e oscilatória, temperatura de gelificação, perfil de textura e análise de bioadesão em espécimes de dentina. MO, MY e controles (hidróxido de cálcio CH e clorexidina CHX) foram incorporados em hidrogéis de CPG e o efeito do antibiofilme sobre biofilmes multiespécies formados em amostras de dentina radicular foi avaliado por microscopia confocal. O efeito de toxicidade dos compostos isolados ou incorporados em hidrogéis de CGP foi determinado em cultura de fibroblastos por ensaios de resazurina. Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes ANOVA e Tukey considerando p < 0,05. A combinação de MO e MY foi sinérgica ou aditiva contra bactérias endodônticas testadas a partir de concentrações de 0,03 mg/mL MO + 0,06 mg/mL MY e não foram tóxicas para fibroblastos até 0,125mg/mL. MO + MY apresentou melhor efeito sobre biofilmes dual-espécies e multiespécies considerando suas menores concentrações quando comparados com os flavonóis isolados. Os hidrogéis CPG foram caracterizados como termorreversíveis e com propriedades mecânicas e bioadesivas adequadas. Hidrogéis de CPG carregados com MO+MY, CH e CHX apresentaram efeitos inibitórios semelhantes quando aplicados em biofilmes multiespécies formados no interior dos túbulos dentinários radiculares por 48h e seus extratos apresentaram citotoxicidade acima de 50% de diluição. As células semelhantes a odontoblastos (MDPC-23) foram expostas a diferentes concentrações de MO, MY, isoladamente ou em combinação e CH como controle positivo por 24h e 48h, e troca contínua de meio osteogênico por 8 dias e 14 dias. As combinações de MO+MY ou CH também foram incorporadas em hidrogéis de quitosana-poloxamer-ß-glicerofosfato e seus extratos em meio de cultura celular foram coletados após 48h e 7 dias. Viabilidade celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP) e ensaios de deposição de nódulos mineralizados (MN) foram realizados pelo método de resazurina, ensaios de monofosfato de timolftaleína e coloração com vermelho de alizarina, respectivamente. Todos os compostos não causaram citotoxicidade nas concentrações testadas em 24h e 8 dias e 0,5 mg/mL MO e MY isolados reduziram a viabilidade celular em 48h. A atividade de ALP e a deposição de MN foram aumentadas para a combinação MO+MY e CH em células MDPC-23. Extratos de hidrogel de 7 dias contendo ou não MO+MY não foram citotóxicos até diluição de 25% em 48h e em baixas concentrações estimularam a atividade de ALP e deposição de MN aos 8 e 14 dias de avaliação. Em conclusão, a combinação de morina e miricetina incorporada ou não em hidrogéis de CPG apresentou efeito antibiofilme sobre patógenos orais e baixa toxicidade sobre fibroblastos. Morina e miricetina em baixas concentrações, isoladas, em combinação ou em hidrogéis CPG não foram citotóxicas e foram eficazes na indução de marcadores de mineralização em células semelhantes a odontoblastos(AU)
A drug capable of disinfecting the root canals and allow cell recovery and tissue regeneration in permanent young teeth with endodontic problems has not been found yet. Two important flavonols detected in red wine, morin (MO) and myricetin (MY), are currently studied for their wide biological properties including antimicrobial activity. However, the development of controlled release systems could be useful for the delivery of these flavonols for endodontic therapies. This study evaluated the cytocompatibility and antimicrobial/antibiofilm effects of MO and MY, alone or incorporated in thermoreversible chitosanpoloxamer hydrogels containing sodium ß-glycerophosphate (CPG), in addition to the effects of isolated and combined morin and myricetin flavonols on viability, ALP activity and production of mineralization nodules in MDPC-23 cells. Antimicrobial activity of the compounds was evaluated on Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii, and Fusobacterium nucleatum under planktonic conditions, on dual-species and multispecies biofilms and analyzed by bacterial counts and scanning microscopy. CPG hydrogels were characterized by flow and oscillatory rheometry, gelation temperature, texture profile and bioadhesion analysis in dentin specimens. MO, MY and controls (calcium hydroxide CH and chlorhexidine CHX) were incorporated in CPG hydrogels and antibiofilm effect on multispecies biofilms formed in radicular dentin samples were evaluated by confocal microscopy. Cytotoxicity of the compounds alone or incorporated in CGP hydrogels was determined on fibroblasts culture by resazurin assays. Data were statistically analyzed by ANOVA and Tukey considering p < 0.05. The combination of MO and MY had synergistic or additive against oral bacteria tested starting at concentrations of 0.03 mg/mL MO + 0.06 mg/mL MY and they were not toxic to fibroblasts up to 0.125mg/mL. MO + MY had better effect on dual-species and multispecies biofilms considering their lower concentrations when compared with the flavonols alone. CPG hydrogels were characterized as thermoreversible and with adequate mechanical and bioadhesive properties. CPG hydrogels loaded with MO+MY, CH and CHX have similar inhibitory effects when applied on multispecies biofilms formed inside root dentin tubules for 48h and their extracts were cytotoxicity above 50% dilution. Furthermore, the effects of morin, myricetin, alone or in combination or incorporated in chitosan-based hydrogels on cytotoxicity and expression of mineralization markers in odontoblast-like cells. The MDPC-23 cells were exposed to different concentrations of morin (MO), myricetin (MY), alone or in combination and calcium hydroxide (CH) as a positive control for 24h and 48h, and continuous osteogenic medium changing for 8 days and 14 days. The combinations of MO+MY or CH were also incorporated in chitosan-poloxamer-ß- glycerophosphate hydrogels and their extracts in cell culture media were collected after 48h and 7 days. Cell viability, alkaline phosphatase (ALP) activity and assays mineralized nodules (MN) deposition were performed using resazurin method, thymolphthalein monophosphate assays and alizarin red staining, respectively. Data were statistically analyzed considering p< 0.05. All compounds were non-toxic at the concentrations tested at 24h and 8 days and 0.5 mg/mL MO and MY alone reduced cell viability at 48h. ALP activity and deposition of MN were increased for MO+MY combination and CH in MDPC-23 cells. 7 days hydrogel extracts containing or not MO+MY were not cytotoxic up to 25% dilution at 48h and at low concentrations stimulated ALP activity and MN deposition at 8 and 14 days of evaluation. In conclusion, the combination of morin and myricetin incorporated or not in CPG hydrogels presented antibiofilm effect on oral pathogens and low cytotoxicity on fibroblasts. Morin myricetin at low concentrations, alone, in combination or in CPG hydrogels were not cytotoxic and were effective in inducing mineralization markers in odontoblast-like cells(AU)
Asunto(s)
Flavonoles , Odontoblastos , Irrigantes del Conducto Radicular , Flavonoides , Flavonoides/toxicidad , Supervivencia Celular , Flavanonas , Flavonoles/toxicidad , Fosfatasa AlcalinaRESUMEN
Abstract Vernonanthura polyanthes, popularly known as assa-peixe, is a medicinal plant that has been widely used by Brazilian Cerrado population for treatment of diseases without a detailed evaluation of their effectiveness, toxicity, and proper dosage. Thus, more studies investigating the safety of V. polyanthes aqueous extract before the use are needed. The purpose of this study was to evaluate the toxicity, cytotoxicity and genotoxicity of V. polyanthes leaves aqueous extract using the Artemia salina and Allium cepa assays. For the A. salina assay, three groups of 10 larvae were exposed to V. polyanthes leaves aqueous extract at the concentrations of 5, 10, 20, 40, and 80 mg/ml. For the A. cepa assay, 5 onion bulbs were exposed to V. polyanthes leaves aqueous extract at 10, 20, and 40 mg/ml, and then submitted to macroscopic and microscopic analysis. As result it was identified a toxicity and cytotoxicity of V. polyanthes dependent on the extract concentration. The A. salina assay suggests that the concentration of 24 mg/ml of the V. polyanthes extract is able to kill 50% of naupllis; while the A. cepa assay suggests that V. polyanthes leaves aqueous extract is toxic at concentrations higher than 20 mg/ml; however the cytotoxic effect in A. cepa root cells was observed at 40 mg/ml of the extract. It is important to say that the V. polyanthes leaves aqueous extract concentration commonly used in popular medicine is 20 mg/ml. Thus, the popular concentration used is very close to toxicity limit in A. salina model (24 mg/ml) and is the concentration which showed toxic effect in A. cepa root cells (20 mg/ml). No genotoxic activity of V. polyantes leaves aqueous extract was observed in the conditions used in this study. Because of the antiproliferative action and no genotoxic activity, V. polyanthes leaves aqueous extract may present compounds with potential use for human medicine. However more detailed studies need to be performed to confirm this potential.
Resumo Vernonanthura polyanthes, popularmente conhecida como assa-peixe, é uma planta medicinal amplamente utilizada pela população brasileira do Cerrado para o tratamento doenças, sem uma avaliação detalhada de sua eficácia, toxicidade e dosagem adequada. Dessa forma, são necessários estudos para investigar a segurança do uso do extrato aquoso de V. polyanthes. O objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade, citotoxicidade e genotoxicidade do extrato aquoso de folhas de V. polyanthes utilizando os ensaios de Artemia salina e Allium cepa. Para o ensaio de A. salina, três grupos de 10 larvas foram expostos ao extrato aquoso de folhas de V. polyanthes nas concentrações de 5, 10, 20, 40 e 80 mg/ml. Para o ensaio de A. cepa, 5 bulbos de cebola foram expostas ao extrato aquoso de folhas de V. polyanthes nas concentrações de 10, 20 e 40 mg/ml, e então submetidos a análise macroscópica e microscópica. O ensaio de A. salina sugere que a concentração de 24 mg/ml do extrato de V. polyanthes é capaz de matar 50% dos náuplios; enquanto o ensaio de A. cepa sugere que o extrato aquoso das folhas de V. polyanthes é tóxico em concentrações superiores a 20 mg/ml. O efeito citotóxico nas células da raiz de A. cepa foi observado apenas na concentração de 40 mg/ml. É importante dizer que a concentração de extrato aquoso de folhas de V. polyanthes comumente usada na medicina popular é de 20 mg/ml. Assim, a concentração popular utilizada está muito próxima do limite de toxicidade no modelo de A. salina (24 mg/ml) e é a mesma concentração que apresentou efeito tóxico nas células da raiz de A. cepa (20 mg/ml). Não foi observada atividade genotóxica do extrato aquoso de folhas de V. polyantes nas condições utilizadas neste trabalho. Por causa da ação antiproliferativa e ausência de atividade genotóxica, o extrato aquoso de folhas de V. polyanthes pode ser uma boa fonte natural de compostos antitumorais e pode apresentar potencial para uso na medicina. No entanto, estudos mais detalhados precisam ser realizados para confirmar esse potencial.
Asunto(s)
Humanos , Animales , Extractos Vegetales/toxicidad , Asteraceae , Brasil , Hojas de la Planta , CebollasRESUMEN
Abstract Introduction: The anti-human globulin-enhanced complement-dependent cytotoxicity crossmatch (AHG-CDCXM) assay has been used to assess the presence of donor-specific antibodies (DSA) in recipient's serum before kidney transplantation. The flow cytometric crossmatch (FCXM) assay was first introduced as an additional test. The aim of this study was to clinically validate the single use of the FCXM assay. Methods: This study compared the outcomes of a cohort of kidney transplant patients that underwent FCXM only (FCXM group) versus a cohort of kidney transplant patients that underwent AHG-CDCXM (control group). Results: Ninety-seven patients in the FCXM group and 98 controls were included. All crossmatches in the control group were negative. One patient in the FCXM group had a positive B cell crossmatch. One year after transplantation, there were no significant differences in patient survival (p = 0.591) and graft survival (p = 0.692) between the groups. Also, no significant difference was found in the incidence of Banff ≥ 1A acute cellular rejection episodes (p = 0.289). However, acute antibody-mediated rejections occurred in 3 controls (p = 0.028). Conclusion: The results showed that discontinuing the AHG-CDCXM assay does not modify the clinical outcomes in a 1-year follow-up.
Resumo Introdução: O ensaio de prova cruzada por citotoxicidade dependente do complemento antiglobulina humana (AHG-CDCXM - do inglês anti-human globulin-enhanced complement-dependent cytotoxicity crossmatch) tem sido usado para avaliar a presença de anticorpos específicos contra o doador (DSA - do inglês donor-specific antibodies) no soro do receptor antes do transplante renal. O ensaio de prova cruzada por citometria de fluxo (CFXM) foi introduzido pela primeira vez como um teste adicional. O objetivo deste estudo foi validar clinicamente o uso único do ensaio CFXM. Métodos: Este estudo comparou os resultados de uma coorte de pacientes de transplante renal que foram submetidos apenas ao CFXM (grupo CFXM) contra uma coorte de pacientes de transplante renal submetidos ao AHG-CDCXM (grupo controle). Resultados: Foram incluídos noventa e sete pacientes no grupo CFXM e 98 controles. Todas as provas cruzadas no grupo controle foram negativas. Um paciente no grupo CFXM teve uma prova cruzada positiva para células B. Um ano após o transplante, não houve diferenças significativas na sobrevida do paciente (p = 0,591) e na sobrevida do enxerto (p = 0,692) entre os grupos. Também não foi encontrada diferença significativa na incidência de episódios de rejeição aguda celular (p = 0,289) segundo critério de Banff ≥ 1A. No entanto, rejeições agudas mediadas por anticorpos ocorreram em 3 controles (p = 0,028). Conclusão: Os resultados mostraram que a interrupção do ensaio AHG-CDCXM não modifica os desfechos clínicos em um acompanhamento de 1 ano.
RESUMEN
In this study, the toxic effects of melittin on Madin-Darby Bovine Kidney cells (MDBK) were analyzed with respect to mitochondrial functionality by reduction of MTT and flow cytometry, apoptosis potential, necrosis, oxygen reactive species (ROS) production, lipid peroxidation, and DNA fragmentation using flow cytometry and cell membrane destabilization by confocal microscopy. The toxicity presented dose-dependent characteristics and mitochondrial activity was inhibited by up to 78.24 ±3.59% (P<0.01, n = 6) in MDBK cells exposed to melittin (10µg/mL). Flow cytometry analysis revealed that melittin at 2µg/mL had the highest necrosis rate (P<0.05) for the cells. The lipoperoxidation of the membranes was also higher at 2µg/mL of melittin (P<0.05), which was further confirmed by the microphotographs obtained by confocal microscopy. The highest ROS production occurred when the cells were exposed to 2.5µg/mL melittin (P<0.05), and this concentration also increased DNA fragmentation (P<0.05). There was a significative and positive correlation between the lipoperoxidation of membranes with ROS (R=0.4158), mitochondrial functionality (R=0.4149), and apoptosis (R=0.4978). Thus, the oxidative stress generated by melittin culminates in the elevation of intracellular ROS that initiates a cascade of toxic events in MDBK cells.(AU)
Neste estudo, os efeitos tóxicos da melitina em células Madin-Darby Bovine Kidney (MDBK) foram analisados quanto à funcionalidade mitocondrial, por redução de MTT e citometria de fluxo, potencial de apoptose, necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e fragmentação de DNA, utilizando-se citometria de fluxo e desestabilização da membrana celular, por microscopia confocal. A toxicidade apresentou características dose-dependentes e a atividade mitocondrial foi inibida até 78,24±3,59% (P<0,01, n = 6) em células MDBK expostas à melitina (10µg/mL). Análises por citometria de fluxo revelaram que a melitina a 2µg/mL apresentou o maior índice necrótico celular (P<0,05). A maior lipoperoxidação de membranas também foi na concentração de 2µg/mL de melitina (P<0,05), o que foi posteriormente confirmado por microscopia confocal. A maior produção de ROS aconteceu quando as células foram expostas a 2,5µg/mL de melitina (P<0,05), e essa concentração também aumentou a fragmentação de DNA (P<0,05). Houve uma significativa correlação positiva entre a lipoperoxidação de membranas e a produção de ROS (R=0,4158), funcionalidade mitocondrial (R=0,4149) e apoptose (R=0,4978). Portanto, o estresse oxidativo gerado pela melitina culminou na elevação de ROS intracelular, que inicia uma cascata de eventos tóxicos nas células MDBK.(AU)
Asunto(s)
Especies Reactivas de Oxígeno/efectos adversos , Apoptosis , Citotoxinas/análisis , Meliteno/análisis , Venenos de Abeja/análisis , Microscopía Confocal , Citometría de FlujoRESUMEN
Objective: Unlike traditional composite resins, bulk-fill composite resins could be polymerized as thicker layers. This study aims to contribute to the field by investigating the cytotoxic effects of various bulk-fill composite resins on L929 mouse fibroblast cells in vitro. Material and Methods: In our study, six bulk fill and one conventional composite resin were used. Composite resin samples (8×4 mm) were prepared in a sterile cabinet by using a glass mod and polymerizing with a led light device (DTE LUX E, Germany). Composite samples (n:3) of which surface area was calculated according to ISO 10993-12: 2012 standards (3 cm2/ml), were kept in media for 24 h and 72 h in 37 oC incubator, their extracts were filtered in 1:1 and 1:2 proportion and were added on L929 mouse fibroblast cells. Cell viability was examined by the MTT assay and cell death by the LDH test. Cell viability results were evaluated using one-way analysis of variance (ANOVA) test (p<0.05). Results: When the 1:1 extracts from 4 mm thick bulk-fill composite samples were applied on L929 mouse fibroblast cells, cell viability rates showed significant differences compared to the control group at the end of 24 h and 72 h (except for Estelite Bulk Fill Flow). Although the extracts of the tested composite samples at 1:1 and 1:2 ratio at the end of 72 hours caused a decrease in L929 mouse fibroblast cell viability, the cell viability rate of only PRG-containing bulk fill composite and conventional composite remained below the cell viability ratio (70%) specified in ISO standards. Bulk fill composites did not produce toxic effects (except Beautifil Bulk Restorative) according to the LDH test. Conclusions: Despite decreasing in general the cell viability, bulk-fill composite resins used in 4 mm thick layers provided cell viability rates over the acceptability level, except PRG-containing bulk fill composite (Beautifil Bulk Restorative), which was cytotoxic to L929 mouse fibroblasts. (AU)
Objetivo: Ao contrário das resinas compostas tradicionais, as resinas compostas bulk-fill podem ser polimerizadas como camadas mais espessas. Este estudo visa investigar in vitro os efeitos citotóxicos de várias resinas compostas bulk-fill em células de fibroblastos de camundongo L929.Material e Métodos: Em nosso estudo, seis resinas tipo bulk fill e uma resina composta convencional foram usadas. Amostras de resina composta (8 × 4 mm) foram preparadas em gabinete estéril usando um molde de vidro e polimerizado com um dispositivo de luz LED (DTE LUX E, Alemanha). Amostras compostas (n=3) cuja área de superfície foi calculada de acordo com os padrões ISO 10993-12:2012 (3cm2/ml), foram mantidas em meio e incubadas por 24 h e 72 h a 37 ºC, seus extratos foram filtrados na Proporção de 1:1 e 1:2 e foram acondicionados em cultura de células de fibroblastos de camundongo L929. A viabilidade celular foi examinada pelo ensaio MTT e a morte celular pelo teste LDH. Os resultados de viabilidade celular foram avaliados usando o teste de análise de variância (ANOVA) um fator (p <0,05). Resultados: Quando os extratos foram plaqueados na proporção 1:1 de amostras de compósito bulk-fill de 4 mm de espessura com as células de fibroblastos de camundongo L929, as taxas de viabilidade celular mostraram diferenças significativas em comparação com o grupo controle no final de 24 h e 72 h (exceto para Estelite Bulk Fluxo de enchimento). Embora os extratos das amostras compostas testadas na proporção de 1:1 e 1:2 ao final de 72 horas tenham causado uma diminuição na viabilidade das células de fibroblastos de camundongo L929, a taxa de viabilidade celular apenas do compósito de preenchimento total contendo PRG e o compósito convencional permaneceram abaixo a taxa de viabilidade celular (70%) especificada nas normas ISO. Os compósitos de preenchimento a granel não produziram efeitos tóxicos (exceto Beautifil Bulk Restorative) de acordo com o teste de LDH. Conclusão: Apesar de diminuir em geral a viabilidade celular, as resinas compostas bulk-fill usadas em camadas de 4 mm de espessura forneceram taxas de viabilidade celular acima do nível aceitável, exceto o compósito bulk fill contendo PRG (Beautifil Bulk Restorative), que foi citotóxico para fibroblastos de camundongos L929 (AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Resinas Compuestas , Toxicidad , FibroblastosRESUMEN
Hydroxyapatite, chitosan, and carbon nanotube composite biomaterial were developed to improve bone healing. Previous studies suggested that a combination of biomaterials and mesenchymal stem cells (MSCs) can potentially help promote bone regeneration. In the present study, we first developed hydroxyapatite, chitosan, and carbon nanotube composite biomaterial. Then, the effect of different concentrations of the extract on the viability of Vero cells (ATCC CCL-81) and MSCs obtained from sheep bone marrow using methylthiazol tetrazolium (MTT) and propidium iodide (PI) assays were evaluated. The biomaterial group demonstrated an absence of cytotoxicity, similar to the control group. Samples with 50% and 10% biomaterial extract concentrations showed higher cell viability compared to samples from the control group (MTT assay). These results suggest that the presence of this composite biomaterial can be used with MSCs. This study also concluded that hydroxyapatite, chitosan, and carbon nanotube composite biomaterial were not cytotoxic. Therefore, these could be used for performing in vivo tests.(AU)
O compósito à base de hidroxiapatita, quitosana e nanotubo de carbono foi desenvolvido com o intuito de auxiliar na consolidação óssea. Estudos anteriores sugerem que a combinação de substitutos ósseos e células-tronco mesenquimais (CTM) podem auxiliar a potencializar e promover a regeneração óssea. No presente estudo, o biomaterial foi desenvolvido e a viabilidade e a citotoxicidade de células Vero (ATCC CCL-81) e CTM obtidas de medula óssea provenientes de ovinos utilizando ensaios metil-tiazol-tetrazólio, MTT e iodeto de propídeo (PI) foram avaliadas em diferentes concentrações de extrato desse compósito. O compósito demonstrou ausência de citotoxicidade com comportamento semelhante ao grupo controle. Amostras com 50% e 10% de concentração de extrato do compósito mostraram resultados maiores comparados ao grupo controle (ensaio MTT). Esses resultados também sugerem que a presença do biomaterial pode ser utilizada em associação a CTM. Assim, esse estudo conclui que o compósito apresentado de hidroxiapatita, quitosana e nanotubo de cabono não foi considerado citotóxico e pode ser utilizado em teste in vivo.(AU)