Duplicación interna en tándem del gen de la tirosina quinasa 3

Introducción: La reacción en cadena de la polimerasa requiere de varios procedimientos y controles para garantizar la eficacia del estudio. Se debe realizar un control de calidad a la reverso transcripción con el fin de determinar la efectividad del proceso y pasar a la siguiente etapa. Se comprueba con la amplificación de un gen normal, que se interpreta mediante electroforesis. Por dificultades en la importación de reactivos, se propuso sustituir este paso por la identificación del gen de la tirosina quinasa 3, que en la leucemia mieloide aguda puede afectarse por una mutación del tipo duplicación interna en tándem. Objetivo: Evaluar si el biomarcador duplicación interna en tándem del gen de la tirosina quinasa 3 es útil como control del proceso de reverso transcripción dentro de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa para los estudios moleculares. Métodos: Se analizaron 235 muestras de aspirado medular de pacientes hematológicos, en el laboratorio de biología molecular del Instituto de Hematología e Inmunología entre junio de 2017 y junio de 2019. Resultados: El 85,53 % presentó solo una banda en la electroforesis capilar, correspondiente al alelo salvaje, y en el resto se observaron la banda normal y la correspondiente al alelo mutado. De esta forma, se comprobó la presencia de ADN complementario en todas las muestras. Conclusiones: La sustitución del control basado en un gen normal, por el biomarcador duplicación interna en tándem del gen de la tirosina quinasa 3 dentro de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa, se realiza como parte del protocolo de laboratorio para el estudio de pacientes con enfermedades oncohematológicas.

Introduction: The polymerase chain reaction requires several procedures and controls to ensure the quality of the study. Quality control must be performed on the reverse transcript in order to determine the effectiveness of the process and move to the next step. It is checked with the amplification of a normal gene, which is interpreted by electrophoresis. Due to difficulties in importing reagents, it was proposed to replace this step with the identification of the tyrosine kinase 3 gene, which in acute myeloid leukemia can be affected by an internal tandem duplication type mutation. Objective: To evaluate whether the biomarker internal tandem duplication of the tyrosine kinase 3 gene is useful as a control of the reverse transcription process within the polymerase chain reaction technique for molecular studies. Methods: 235 bone marrow aspirate samples from hematological patients were analyzed in the molecular biology laboratory of the Institute of Hematology and Immunology between June 2017 and June 2019. Results: 85.53% presented only one band in capillary electrophoresis, corresponding to the wild-type allele, and in the rest, the normal band and the band corresponding to the mutated allele were observed. Thus, the presence of cDNA was verified in all samples. Conclusions: The substitution of the control based on a normal gene, by the biomarker internal tandem duplication of the tyrosine kinase 3 gene, within the polymerase chain reaction technique, is possible and, moreover, useful as part of the laboratory protocol for the study of patients with oncohematological diseases.

CARL y MPL en pacientes cubanos con trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria / CARL and MPL in Cuban patients with essential thrombocythemia and primary mielofibrosi

Introducción: La trombocitemia esencial y la mielofibrosis primaria comparten la presencia de las mutaciones JAK2, CALR y MPL. En total, están presentes en poco más del 90 % de los pacientes con estas enfermedades. Objetivos: Determinar el comportamiento de las mutaciones más frecuentes en los genes MPL y CALR en pacientes cubanos. Métodos: Se realizó un estudio ambispectivo, descriptivo y longitudinal en el Instituto de Hematología e Inmunología de Cuba, entre los años 2010 y 2020. Se incluyeron todos los pacientes con sospecha de trombocitemia esencial y de mielofibrosis primaria con muestras de ADN válidas. Se les identificaron las mutaciones CALR y MPL por PCR en tiempo real. Resultados: De los 53 pacientes estudiados, el 67,9 % fueron diagnosticados con trombocitemia esencial, el 22,6 % con mielofibrosis primaria. En el 90,6 % se pudo detectar alguna de las mutaciones conductoras; el 67,9 % fueron positivos a la mutación JAK2V617F, el 13,2 % a las mutaciones en el gen que codifica para la calreticulina y en el 9,4 % se identificaron mutaciones en el gen MPL. Conclusiones: El comportamiento de las mutaciones conductoras JAK2V617F, CALR y MPL en la muestra de pacientes cubanos con trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria estuvo en correspondencia con lo descrito en la mayoría de las investigaciones.

Introduction: Essential thrombocythemia and primary myelofibrosis share the presence of JAK2, CALR and MPL mutations. In total, they comprise slightly more than 90 % of patients with these diseases. Objectives: To determine the behavior of the most frequent mutations in MPL and CALR genes in Cuban patients. Methods: An ambispective, descriptive and longitudinal study was performed at the Institute of Hematology and Immunology of Cuba, between 2010 and 2020. All patients with suspected essential thrombocythemia and primary myelofibrosis with valid DNA samples were included. CALR and MPL mutations were identified by real-time PCR. Results: Of the 53 patients studied, 67.9% were diagnosed with essential thrombocythemia, and 22.6% with primary myelofibrosis. In 90.6% it was possible to detect any of the driver mutations: 67.9% were positive for the JAK2V617F mutation, 13.2% for mutations in the gene coding for calreticulin and in 9.4% mutations in the MPL gene were identified. Conclusions: The behavior of the driver mutations JAK2V617F, CALR and MPL in the sample of Cuban patients with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis was in correspondence with what is described in the majority of the investigations.

Influencia de la carga alélica del JAK2V617F en pacientes cubanos con trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria / Influence of JAK2V617F allelic burden in Cuban patients with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis

Introducción: La frecuencia de la mutación JAK2V617F se estima entre el 50 y 60 por ciento en pacientes con trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria. El 30 por ciento de los pacientes con policitemia vera y mielofibrosis primaria. Entre 2-4 por ciento de los pacientes con trombocitemia esencial presentan pérdida de heterocigosidad. Objetivos: Evaluar la influencia de la carga alélica de la mutación JAK2V617F y su relación con variables clínico-hematológicas en el diagnóstico de estas enfermedades en pacientes cubanos. Métodos: Se realizó un estudio retrospectivo, descriptivo y longitudinal en el Instituto de Hematología e Inmunología entre 2010 y 2020. Se incluyeron todos los pacientes con sospecha de trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria con muestras de ADN válidas. Se les cuantificó la carga alélica de la mutación por PCR en tiempo real. Resultados: Se detectó la mutación en 66,7 por ciento de los diagnosticados con trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria. El 62,5 por ciento de los pacientes con mielofibrosis primaria fueron homocigotos a la mutación, mientras que en la trombocitemia esencial solo el 20,8 por ciento. La diferencia de medias de cargas alélicas entre ambas enfermedades fue estadísticamente significativa. No se encontraron diferencias significativas en la comparación de las variables clínicas y hematológicas en estas enfermedades ni asociación con la carga alélica con excepción de las plaquetas en la mielofibrosis primaria. Conclusiones: El estudio estuvo limitado por la escasa muestra de pacientes, pero se corresponde con otras investigaciones que sostienen el concepto de que la presentación fenotípica de las neoplasias mieloproliferativasestá influenciada por la carga mutacional del JAK2V617F(AU)

Introduction: The frequency of the JAK2V617F mutation is estimated to be between 50 percent and 60 percent in patients with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis. 30 percent of patients with polycythemia vera and primary myelofibrosis and 2-4 percent of patients with essential thrombocythemia show loss of heterozygosity. Objectives: To evaluate the influence of the allelic load of the JAK2V617F mutation in the diagnosis of these diseases in Cuban patients and its relationship with clinical-hematological variables. Methodology: A retrospective, descriptive and longitudinal study was carried out at the Institute of Hematology and Immunology between 2010 and 2020. All patients with suspected essential thrombocythemia and primary myelofibrosis with valid DNA samples were included. The allelic load of the mutation was quantified by real-time PCR. Results: The mutation was detected in 66.7 percent of those diagnosed with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis. 62.5 percent of the patients with primary myelofibrosis were homozygous for the mutation, while in essential thrombocythemia only 20.8 percent. The difference in mean allelic loads between both diseases was statistically significant. No significant differences were found in the comparison of clinical and hematological variables in these diseases or association with allelic load, with the exception of platelets in primary myelofibrosis. Conclusions: The study was limited by the small sample of patients, but it corresponds to other investigations that support the concept that the phenotypic presentation of myeloproliferative neoplasms is influenced by the mutational load of JAK2V617F(AU)

¿Es importante conocer el tipo de transcripto BCR-ABL en la leucemia mieloide crónica? / Is it important to know the type of BCR-ABL transcript in chronic myeloid leukemia?

La leucemia mieloide crónica se caracteriza por la ocurrencia de una translocación recíproca entre los cromosomas 9 y 22; que da origen a un cromosoma 22 derivativo conocido como Filadelfia. En el sitio de unión se forma el gen de fusión BCR-ABL que conlleva a la síntesis de una proteína híbridacon propiedades oncogénicas. El sitio de unión entre los cromosomas 9 y 22 es variable y da lugar a transcritos diferentes; los conocidos como e13a2 y e14a2 son los más frecuentes y estudiados. El análisis de las características clínico-hematológicas de presentación y la respuesta al tratamiento entre los pacientes portadores de e13a2 o e14a2 ha revelado diferencias que pueden ser útiles para la predicción del pronóstico. Se realizó una revisión de la literatura científica a través de PUBMED. Se analizó y resumió la información. Se evidencian diferentes características de presentación, pero no existe coincidencia entre todos los autores. Respecto al comportamiento de la respuesta al tratamiento con inhibidores de tirosina quinasa, algunos autores encuentran diferencias y algunos sugieren que puede tratarse de dos enfermedades diferentes. Puede ser importante conocer el tipo de transcripto BCR-ABL en la LMC ya que, al menos entre los dos más frecuentes, existen diferencias que pueden ser útiles en la predicción del pronóstico para el paciente, así como para el manejo del tratamiento(AU)

Chronic myeloid leukemia is characterized by the occurrence of a reciprocal translocation between chromosomes 9 and 22; which gives rise to a derivative chromosome 22 known as Philadelphia. At the binding site, the BCR-ABL fusion gene is formed, which leads to the synthesis of a hybrid protein with oncogenic properties. The binding site between chromosomes 9 and 22 is variable and gives rise to different transcripts; those known as e13a2 and e14a2 are the most frequent and studied. The analysis of the clinical-hematological characteristics of presentation and the response to treatment among patients with e13a2 or e14a2 has revealed differences that may be useful for the prediction of prognosis. To describe the different characteristics reported for one or another transcript and to know if it is important to know the type of transcript in the CML. A review of the scientific literature was carried out through PUBMED. The information was analyzed and summarized. Different presentation characteristics are evident but there is no coincidence between all the authors. Regarding the behavior of the response to treatment with tyrosine kinase inhibitors, some authors find differences and some suggest that it may be two different entities. It may be important to know the type of BCR-ABL transcript in CML cause, at least between the two most frequent, there are differences that may be useful in predicting the prognosis for the patient as well as for the management of treatment(AU)

Técnicas de citogenética y biología molecular para el diagnóstico y seguimiento de la leucemia promielocítica / Cytogenetic and molecular biology techniques for the diagnosis and monitoring of promyelocytic leukemia

Introducción: La leucemia promielocítica es un subtipo de leucemia mieloide aguda que se presenta frecuentemente con una coagulopatía potencialmente mortal, por lo que representa una emergencia médica. En la gran mayoría de los pacientes ocurre la t(15;17)(q24;q21) que genera el gen aberrante PML-RARA. Mediante diferentes técnicas de citogenética y de la biología molecular que detectan dichas aberraciones es posible diagnosticar la entidad de manera inequívoca y estudiar la enfermedad mínima residual. Objetivo: Describir, comparar y analizar las técnicas de citogenética y de la biología molecular que son útiles para el diagnóstico y el seguimiento del paciente con leucemia promielocítica. Así como señalar sus ventajas y limitaciones. Métodos: Se realizó revisión de la bibliografía científica de los últimos cinco años relacionada con el tema a través de PUBMED. Se realizó análisis y resumen de la información. Análisis y síntesis de la información: Se describen dos técnicas de citogenética y tres moleculares basadas en la aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa. Se comparan y analizan sus ventajas y limitaciones. Conclusiones: Algunas de estas técnicas son útiles únicamente para el diagnóstico, mientras que otras, por su alta sensibilidad, se recomiendan para el seguimiento del paciente con leucemia promielocítica(AU)

Introduction: Promyelocytic leukemia (PML) is a subtype of acute myeloid leukemia that frequently presents with a potentially fatal coagulopathy, therefore it represents a medical emergency. In the vast majority of patients, the t (15; 17) (q24; q21) occurs, which generates the aberrant gene PML-RARA. Using different cytogenetic and molecular biology techniques that detect these aberrations, it is possible to unequivocally diagnose the entity and study minimal residual disease. Objective: To describe, compare and analyze cytogenetics and molecular biology techniques that are useful for diagnosis and follow-up of the patient with Promyelocytic leukemia. As well as pointing out its advantages and limitations. Methods: A review of the scientific bibliography of the last five years related to the subject was carried out through PUBMED. An analysis and summary of the information was made. Analysis and synthesis of the information: Two cytogenetic and three molecular techniques are described based on the application of the polymerase chain reaction. Its advantages and limitations are compared and analyzed. Conclusions: Some of these techniques are only useful for diagnosis, while others, due to their high sensitivity, are recommended for monitoring the patient with Promyelocytic leukemia(AU)

Frecuencia de aberraciones moleculares en pacientes cubanos con leucemia mieloide aguda / Frequency of molecular disorders in Cuban patients with acute myeloid leukemia

Introducción: En el Instituto de Hematología e Inmunología se realiza el estudio molecular de las leucemias mieloides agudas (LMA). Para las leucemias mieloides agudas no promielocíticas (LPM) se determinan cuatro biomarcadores: los genes de fusión RUNX1-RUNX1T1 y CBF(-MYH11, la duplicación interna en tándem del gen FLT3 (DIT FLT3) y la mutación A del gen NPM1 (NPM1-A). Objetivo: Determinar la frecuencia de estos cuatro biomarcadores, en pacientes cubanos con leucemias mieloides agudas primaria no promielocíticas. Métodos: Se incluyeron 91 pacientes entre niños y adultos, estudiados en el Instituto durante tres años desde el debut. A partir de ARN de sangre medular se obtuvo ADN complementario por transcripción inversa; se amplificaron los fragmentos correspondientes mediante la reacción en cadena de la polimerasa y el producto se analizó por electroforesis capilar. Resultados: El RUNX1-RUNX1T1 apareció en el 24,2 por ciento, fue más frecuente en los pacientes pediátricos y disminuyó significativamente con la edad. El CBFβ-MYH11 solo se encontró en adultos (4,8 por ciento). La NPM1-A con 41 por ciento fue mayoritaria entre los adultos. La DIT FLT3 se observó en el 21,6 por ciento y no mostró relación con la edad. NPM1-A y DIT FLT3 fueron las aberraciones con mayor presencia simultánea. Conclusiones: Por primera vez se describe la frecuencia de los cuatro biomarcadores moleculares en los pacientes cubanos con leucemias mieloides agudas primaria no promielocíticas; su comportamiento fue similar a lo descrito por otros autores, aunque se encontraron algunas particularidades(AU)

Introduction: At the Institute of Hematology and Immunology, the molecular study of acute myeloid leukemias (AML) is carried out. For nonpromyelocytic acute myeloid leukemias, four biomarkers are determined: the RUNX1-RUNX1T1 and CBF(-MYH11 fusion genes, the internal tandem duplication of the FLT3 gene (DIT FLT3), and the A mutation of the NPM1 gene (NPM1-A). Objective: To determine the frequency of these four biomarkers in Cuban patients with nonpromyelocytic primary acute myeloid leukemias. Methods: 91 patients were included, children and adults, who were studied at the Institute for three years from their disease debut. Complementary DNA was obtained from medullary blood RNA by reverse transcription. The corresponding fragments were amplified by polymerase chain reaction and the product was analyzed by capillary electrophoresis. Results: RUNX1-RUNX1T1 appeared in 24.2 percent; it was more frequent in pediatric patients and decreased significantly with age. CBFβ-MYH11 was found only in adults (4.8 percent). NPM1-A, accounting for 41 percent, represented the majority among adults. FLT3 DIT was observed in 21.6 por ciento and was not related to age. NPM1-A and DIT FLT3 were the disorders with the greatest concurrence. Conclusions: For the first time, the frequency of the four molecular biomarkers is described in Cuban patients with primary non-promyelocytic acute myeloid leukemias. Its characterization was similar to that described by other authors, although some peculiarities were found(AU)

Caso atípico de leucemia mieloide aguda con coexistencia de NPM1-A e inversión del cromosoma 16 / A rare case of acute myeloid leukemia with coexistence of NPM1-A mutation and chromosome 16 inversion

Introducción: La leucemia mieloide aguda (LMA) es un grupo heterogéneo de desórdenes clonales con una gran variabilidad en términos de patogénesis, características morfológicas, genéticas e inmunofenotípicas. Las mutaciones en el gen NPM1 representan una de las más comunes en las LMA y está asociada con una respuesta clínica favorable. Por citogenética, la inversión del cromosoma 16 define el subgrupo de las LMA de factor de unión al grupo con un pronóstico favorable. Objetivo: Describir un caso con diagnóstico de LMA en los cuales el estudio molecular del gen NPM1 y de la inv(16) fueron positivos. Caso clínico: A nivel molecular, la hibridación in situ fluorescente fue positivo a la inv(16) y por biología molecular fue positivo tanto a la inv(16) como al gen NPM1-A, elementos de baja frecuencia de aparición. Se le administró a la paciente un esquema de poliquimioterapia no intensiva para mejorarla clínicamente. Después de una mejoría clínica inicial, la paciente comenzó con complicaciones y falleció. Conclusiones: La coexistencia de estas dos mutaciones es muy poco frecuente en pacientes con LMA, y a pesar de ser de buen pronóstico la paciente falleció a los pocos días de tratamiento(AU)

Introduction: Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous group of clonal disorders with great variability in terms of pathogenesis, morphological, genetic and immunophenotypic characteristics. NPM1 mutations represent one of the most common in AML and are associated with favorable clinical response. By cytogenetics, chromosome 16 inversion defines, with a favorable prognosis, the core‐binding factor for the subgroup of AMLs Objective: To describe a AML case in which the molecular study of the NPM1 gene and the chromosome 16 inversion were positive. Clinical case: At the molecular level, fluorescent in situ hybridization was positive for chromosome 16 inversion and, by molecular biology, it was positive for both chromosome 16 inversion and for the NPM1-A gene, elements with a low frequency of appearance. The patient was administered a non-intensive combination as part of a chemotherapy regimen to improve her clinical status. After initial clinical improvement, the patient began with complications and died. Conclusions: The coexistence of these two mutations is very rare in patients with AML. Despite presenting a good prognosis, the patient died after a few days of treatment(AU)

Casos atípicos e14a3 (b3a3) en el gen de fusión BCR-ABL de la leucemia mieloide crónica en Cuba / Rare cases of e14a3 (b3a3) BCR-ABL fusion in chronic myeloid leukemia in Cuba

Introducción: La leucemia mieloide crónica es un desorden clonal maligno de células madres hematopoyéticas pluripotentes que se caracteriza por la presencia del cromosoma Filadelfia, consecuencia de la traslocación cromosómica recíproca entre los brazos largos de los cromosomas 9 y 22. El resultado de esta alteración cromosómica es un gen de fusión que contiene las uniones b2a2 (e13a2) o b3a2 (e14a2). En la mayor parte de los casos, las células de la leucemia mieloide crónica expresan uno de los dos transcritos (b2a2 o b3a2); sin embargo, el 5 por ciento de los pacientes tienen ambos tipos de ARNm como resultado de empalmes alternativos. Se han encontrado otros transcriptos como e19a2, e2a2, e1a3, e6a2, e13a3(b2a3), y e14a3(b3a3), que ocurren con menos frecuencia. Objetivo: Describir el comportamiento de dos pacientes con leucemia mieloide crónica que presentan un trascripto BCR/ABL atípico. Casos clínicos: En el estudio molecular por reacción en cadena de la polimerasa cualitativo realizado a los dos pacientes, se observó un punto de ruptura del gen de fusión BCR/ABL poco frecuente, el cual se correspondía al transcripto e14a3 (b3a3). Estos pacientes iniciaron tratamiento con mesilato de imatinib a dosis de 400 mg diarios. Al primer paciente a los dos meses de tratamiento se le detectó crisis blástica, por lo que se le cambió el tratamiento a nilotinib 400 mg diarios que mantiene hasta la actualidad. La segunda paciente mantuvo igual tratamiento, aunque en ocasiones ha sido necesario incorporar tratamiento citorreductor con hidroxiurea por presentar leucocitosis. Conclusiones: Los pacientes con BCR/ABL a3 presentan un curso más benigno de la enfermedad. Aunque en los pacientes estudiados no se observó una respuesta satisfactoria al tratamiento pues presentaron diversas complicaciones(AU)

Introduction: Chronic myeloid leukemia is a malignant clonal disorder of pluripotent hematopoietic stem cells and characterized by the presence of the Philadelphia chromosome, which is the product of a reciprocal translocation between the long arms of chromosomes 9 and 22. The result of this chromosomal alteration is a fusion gene that contains the e13a2 (b2a2) and e14a2 (b3a2) junctions. In most cases, chronic myeloid leukemia cells express one of the two transcripts (b2a2 or b3a2); however, 5 percent of patients have both types of mRNA, as a result of alternative junctions. Other transcripts have been identified, such as e19a2, e2a2, e1a3, e6a2, e13a3 (b2a3), and e14a3 (b3a3), which occur less frequently. Objective: To describe the behavior of two patients with chronic myeloid leukemia who have an atypical BCR-ABL transcript. Clinical cases: In a qualitative molecular study of polymerase chain reaction carried out with two patients, a BCR-ABL fusion gene breakpoint was observed, which corresponded to the e14a3 (b3a3) transcript. These patients started treatment with imatinib mesylate at a dose of 400mg/d. At two months, the first patient had a diagnose of blast crisis, so the treatment was changed to nilotinib at a dose of 400mg/d, which the patient maintained to date. The second patient maintained the same treatment, although it was sometimes necessary to incorporate cytoreductive treatment with hydroxyurea due to leukocytosis. Conclusions: Patients with BCR-ABL a3 present a more benign evolution of the disease. However, a satisfactory response to treatment was not observed in the patients studied, as long as they presented various complications(AU)

Biomarcadores en las neoplasias mieloproliferativas clásicas BCR-ABL1 negativas / Biomarkers in Classical Myeloproliferative Neoplasms BCR-ABL1 negative

Introducción: Los biomarcadores son útiles en la definición del diagnóstico, pronóstico y seguimiento de múltiples enfermedades. La detección o medición de uno o más biomarcadores específicos representan alteraciones en vías genéticas o epigenéticas que controlan la proliferación, diferenciación o muerte celular. Las neoplasias mieloproliferativas constituyen un grupo fenotípicamente diverso de hemopatías malignas de origen clonal, caracterizadas por una sobreproducción simple o multilineal de los elementos eritroides, mieloides y megacariocíticos; así como de una marcada predisposición a la trombosis, sangramiento y transformación leucémica. Dentro de ellas se incluyen: la policitemia vera, la trombocitemia esencial y la mielofibrosis primaria, conocidas como neoplasias mieloproliferativas clásicas BCR-ABL1 (o cromosoma Philadelfia) negativas. Las mutaciones somáticas en genes como JAK2, MPL y CARL se comportan como mutaciones drivers iniciadoras, responsables del fenotipo mieloproliferativo. Métodos: Se revisaron artículos relacionados publicados en los últimos años, en algunas bases de datos de la Biblioteca Virtual de Salud. En esta revisión se exponen los mecanismos moleculares generales de esas mutaciones y su expresión clínica; se hace referencia a las neoplasias mieloproliferativas triple negativas y sus implicaciones clínicas y se indica el algoritmo diagnóstico propuesto por la Organización Mundial de la Salud que incluye los nuevos biomarcadores. Conclusiones: El estudio molecular proporciona información valiosa para el diagnóstico y seguimiento de las neoplasias mieloprolifrativas, pero no logra diferenciar entre cada una de ellas. Por esto, se requiere de la adecuada aplicación del método clínico para llegar a un diagnóstico certero con ayuda de otros exámenes complementarios(AU)

Introduction: Biomarkers are useful in the definition of diagnosis, prognosis and monitoring of multiple diseases. The detection or measurement of one or more specific biomarkers represents alterations in genetic or epigenetic pathways that control proliferation, differentiation or cell death. The myeloproliferative neoplasms constitute a phenotypically diverse group of malignant hemopathies of clonal origin, characterized by a simple or multilinear overproduction of the erythroid, myeloid and megakaryocytic elements; as well as a marked predisposition to thrombosis, bleeding and leukemic transformation. These include: polycythemia vera, essential thrombocythemia, and primary myelofibrosis, known as classical negative myeloproliferative neoplasms BCR-ABL1 (or Philadelphia chromosome). Somatic mutations in genes such as JAK2, MPL and CARL behave as initiating driver mutations responsible for the myeloproliferative phenotype. Methods: Articles published in the last years were reviewed in some databases of the Virtual Health Library (VHL). In this review we expose the general molecular mechanisms of these mutations and their clinical expression; reference is made to the triple negative myeloproliferative neoplasms and their clinical implications and the diagnostic algorithm proposed by the World Health Organization that includes the new biomarkers is indicated. Conclusions: The molecular study provides valuable information for the diagnosis and monitoring of myeloproliferative neoplasms, but fails to differentiate between each of them. Therefore, the appropriate application of the clinical method is required to arrive at an accurate diagnosis with the help of other complementary tests(AU)

Caracterización del gen de fusión RUNX1-RUNX1T1 en pacientes cubanos con leucemia mieloide aguda, 2000-2016 / Characterization of RUNX1-RUNX1T1 fusion gene in Cuban patients with acute myeloid leukemia, 2000-2016

Introducción: el gen de fusión RUNX1-RUNX1T codifica para una proteína quimérica con múltiples efectos en la proliferación, diferenciación y viabilidad de las células leucémicas. Objetivo: describir el comportamiento del RUNX1-RUNX1T1 en pacientes cubanos con dicha enfermedad. Método: Para ello se estudió el gen de fusión RUNX1-RUNX1T1 en 251 pacientes con leucemia mieloide aguda, mediante la reacción en cadena de la polimerasa, en el Instituto de Hematología e Inmunología de La Habana, entre los años 2000 y 2016. Resultados: El 20,3 por ciento (51 pacientes) fue positivo para el gen de fusión RUNX1-RUNX1T1, con una edad comprendida entre los 11 meses y los 80 años, media de 26 años. En los pacientes pediátricos la frecuencia del transcrito fue casi el doble de la de los adultos (29,2 por ciento y 15,3 por ciento, respectivamente) (p= 0,009). Mayor cantidad de pacientes masculinos presentaron el gen quimérico. En menores de 25 años hubo una mayor frecuencia del transcrito (p=0,019) con predominio significativo de la mutación en los adolescentes (p=0,027). Cinco pacientes fueron positivos al RUNX1-RUNX1T1 y a la duplicación interna en tándem del gen FLT3 (12,2 por ciento). Ningún paciente positivo al RUNX1-RUNX1T1 presentó el gen de fusión CBFB-MYH11. La mayor asociación estuvo con la mutación A del gen NPM1 para un 25 por ciento. El debut de la enfermedad se caracterizó por anemia moderada (p= 0,024), trombocitopenia severa (p= 0,004) y gran infiltración medular. La mayor discrepancia entre diagnósticos se concentró entre las variantes morfológicas M2 y M3 (p= 0,000). Conclusiones: En pacientes cubanos la leucemia mieloide aguda con gen de fusión RUNX1-RUNX1T1 positivo, tiene un comportamiento similar a lo descrito internacionalmente con algunas particularidadesen las características hematológicas de presentación de la enfermedad. El estudio molecular es imprescindible para definir el diagnóstico, y la estrategia terapéutica en estos pacientes(AU)

Introduction: The RUNX1-RUNX1T fusion gene codes for a chimeric protein with multiple effects on the proliferation, differentiation and viability of leukemic cells. Objective: To describe the behavior of RUNX1-RUNX1T1 in Cuban patients with this disease. Method: The RUNX1-RUNX1T1 fusion gene was studied in 251 patients with acute myeloid leukemia, through the polymerase chain reaction, at the Institute of Hematology and Immunology of Havana, between 2000 and 2016. Results: The 20.3 percent (51 patients) were positive for the RUNX1-RUNX1T1 fusion gene, with an age between 11 months and 80 years, average of 26 years.In pediatric patients, the transcript frequency was almost twice that of adults (29.2 percent and 15.3 percent , respectively) (p= 0.009). More male patients presented the chimeric gene. There was a higher frequency of the transcript in children under 25 years of age (p= 0.019) with a significant predominance of the mutation in adolescents (p= 0.027).Five patients were positive for RUNX1-RUNX1T1 and for internal tandem duplication of the FLT3 gene (12.2 percent ).No patient positive for RUNX1-RUNX1T1 presented the CBFB-MYH11 fusion gene. The greatest association was with the A mutation of the NPM1 gene for 25 percent . The onset of the disease was characterized by moderate anemia (p= 0.024), severe thrombocytopenia (p= 0.004) and extensive bone marrow infiltration. The greatest discrepancy between diagnoses was concentrated between the morphological variants M2 and M3 (p= 0.000). Conclusions: In Cuban patients, acute myeloid leukemia with a positive RUNX1-RUNX1T1 fusion gene has a behavior similar to that described internationally with some peculiarities in the hematological characteristics of the disease presentation.The molecular study is essential to define the diagnosis, and the therapeutic strategy in these patients(AU)

La biología molecular en la precisión diagnósticade las leucemias / Molecular biology in the diagnostic accuracy of leukemia

Los estudios de citogenética y biología molecular permiten correlacionar la presencia de determinadas anomalías cromosómicas y moleculares con tipos específicos de leucemias y linfomas. Este conocimiento ha hecho posible el perfeccionamiento progresivo del sistema de clasificación de las enfermedades oncohematológicas. Actualmente la presencia de ciertas anomalías citogenéticas o moleculares son suficientes para identificar algunas de estas entidades y en ocasiones, el diagnóstico cambia después de un análisis integrado de la citomorfología con la citogenética y la biología molecular. Este reporte pretende resaltar la importancia del estudio molecular cuando la citomorfología es compleja y propicia diagnósticos erróneos. Mediante la reacción en cadena de la polimerasa, previa reverso-transcripción del ARN aislado de sangre medular, se estudiaron cuatro biomarcadores: los genes de fusión AML1-ETO, BCR-ABL, CBFβ-MYH11 y PML-RARα. Fueron estudiados 14 pacientes con diagnósticos inicial citomorfológico de: leucemia promielocítica (n= 6), leucemia aguda de linaje indefinido (n= 3) y dudoso entre leucemia mieloide crónica en crisis blástica mieloide y leucemia mieloide aguda (LMA) (n= 5). Al culminar la caracterización molecular todos fueron diagnosticados como LMA. Los resultados ilustran la importancia del estudio molecular en la clasificación de las leucemias, lo cual redunda en que el paciente reciba el tratamiento más adecuado y alcance una mejor respuesta.

Cytogenetic and molecular studies have correlated the presence of certain chromosomal and molecular anomalies with leukemia and lymphomas specific types. These evidences have allowed the progressive improvement of the system of classification of the oncohematological entities. Currently, the presence of certain cytogenetic or molecular anomalies is sufficient to identify specific entities and, in some occasions, the diagnostic changes after an integral analysis of cytomorfologic, cytogenetic and molecular studies. T This report aims to highlight the importance of molecular study when cytomorphology is complex and leads to erroneous diagnoses. Through polymerase chain reaction, prior reverse transcription of the RNA isolated from medullary blood, four biomarkers were studied: the fusion genes AML1-ETO, BCR-ABL, CBFβ-MYH11 and PML-RARα. Fourteen patients with initial diagnosis of: promyelocytic leukemia (n= 6), acute leukemia without lineage definition (n= 3) and chronic myeloid leukemia in myeloid blastic crisis or acute myeloid leukemia (AML) (n= 5) were studied. At the end of the molecular characterization all were diagnosed as AML. These results enlightened the role of the molecular studies in the classification of leukemia, which permit the patient receives the more appropriate treatment and achieve a better response.

Transcripto E2A-PBX1 en paciente pediátrico con leucemia aguda híbrida linfoide b/mieloide / E2A-PBX1 transcript in pediatric patient with acute hybrid lymphoid b/myeloid leukemia

Las leucemias agudas representan un grupo heterogéneo de hemopatías malignas que pueden ser de origen linfoide o mieloide en dependencia del clon celular que da lugar al proceso maligno. Sin embargo, existen casos de leucemias agudas con fenotipo mixto donde coexisten características propias de más de un linaje celular y que se conocen hoy como leucemias agudas de fenotipo mixto. Se presenta el caso de un paciente que se diagnosticó como una leucemia aguda híbrida linfoide B/mieloide mediante citometría de flujo. Se encontró la presencia del gen de fusión E2A-PBX1 que se forma como consecuencia de una traslocación entre los cromosomas 1 y 19. El paciente, un niño de 20 meses de nacido, falleció a los 12 días de iniciados los primeros síntomas clínicos. Se conoce que esta anormalidad cromosómica está asociada a un pronóstico desfavorable, principalmente por la grave afectación del sistema nervioso central como en efecto ocurrió. Hasta donde se alcanzó a revisar, no se encontró un reporte similar en la literatura de una leucemia aguda híbrida linfoide B/mieloide positiva al gen defusión E2A-PBX1(AU)

The acute leukemias are an heterogenous group of malignant hemopathies diseases characterized by excessive proliferation of an inmature cellular clon. Depending of the myeloid or lymphoid origin of such clon, the acute leukemia could be classified in myeloid or lymphoid respectivement. However, there are cases of acute leukemias with mixed phenotype where immunologic markers of more than on elineage are present. In the patient of this report was founded a mixed immunophenotype pattern by flow cytometry and the entity was classified as acute hybrid lymphoid B/ mieloid leukemia. Basedon theinicial diagnostic of acutelymphoidleukemia, the molecular studydiscoveredthepresence of E2A-PBX1 fusion gen. That molecular anomaly is formed as consequence of a traslocation between the1 and 19 chromosomes. The patient, a child of 20 months, died 12 days afte rthe first clynic symptoms begining. E2A-PBX1 fusion gen is associated to unfavorable outcome, mainly because the severe damage at the central nervous system as in fact it occurred. Until it was possible review, no any similar report was founded about a case of acute hybrid lymphoidB/myeloid leukemia positive to the E2A-PBX1 fusion gen(AU)