First report of unusual case of parasitism by Amblyomma nodosum (Neumann, 1889) in a yellow cururu toad (Rhinella icterica) in the Northeastern Brazilian Caatinga / Primeiro relato de caso de parasitismo incomum por Amblyomma nodosum (Neumann, 1889) em um sapo-cururu (Rhinella icterica) na Caatinga, nordeste Brasileiro

Abstract The Amblyomma genus (Arachnida: Ixodidae) is widely distributed in South America, with 34 species occurring in Brazil. Amblyomma nodosum Neumann 1889 is a species that predominantly feeds on Passeriformes during immature stages (larvae and nymphs) and anteaters (Myrmecophagidae) during adult stages. The aim of the present study is to report, for the first time, an unusual case of parasitism by adults of A. nodosum on a yellow cururu toad (Rhinella icterica) captured in the city of Nossa Senhora da Glória, Sergipe state (Northeastern Brazil) in the Caatinga biome, and also investigate the presence of DNA of Rickettsia in the collected material. DNA was extracted from all specimens collected (N=8) and subjected to PCR assays based on the tick 16S rRNA endogenous gene and gltA gene for Rickettsia sp. All samples (8/8; 100%) were positive for the 16S rRNA endogenous gene and two amplicons (obtained from one male and one female) were purified and sequenced. The BLASTn analysis of the sequences revealed a high degree of similarity (95-100%) with A. nodosum sequences previously deposited on GenBank, while the phylogenetic analysis clustered the sequences obtained in the same clade as A. nodosum sequences from Brazil.

Resumo O gênero Amblyomma (Arachnida: Ixodidae) é amplamente distribuído na América do Sul, com 34 espécies ocorrendo no Brasil. Amblyomma nodosum Neumann 1889 é uma espécie que se alimenta predominantemente de Passeriformes, durante os estágios imaturos (larvas e ninfas), e de tamanduás (Myrmecophagidae) durante os estágios adultos. O objetivo do presente estudo é relatar, pela primeira vez, um caso incomum de parasitismo por adultos de A. nodosum em um Sapo-cururu (Rhinella icterica), capturado na cidade de Nossa Senhora da Glória, estado de Sergipe (Nordeste do Brasil) na Caatinga, e também investigar a presença de DNA de Rickettsia no material coletado. DNA foi extraído de todos os espécimes (N=8) coletados e submetidos a ensaios de cPCR baseados no gene endógeno 16S rRNA de carrapatos e no gene gltA de Rickettsia sp. Todas as amostras (8/8; 100%) foram positivas para o gene endógeno 16S rRNA e dois amplicons (obtidos de um macho e uma fêmea) foram purificados e sequenciados. A análise BLASTn das sequências revelou um alto grau de similaridade (95-100%) com sequências de A. nodosum previamente depositadas no GenBank, enquanto a análise filogenética agrupou as sequências obtidas no mesmo clado das sequências de A. nodosum do Brasil.

Brazil's battle against Rhipicephalus (Boophilus) microplus ticks: current strategies and future directions / A luta brasileira contra carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus: estratégias atuais e futuros caminhos

Abstract Ticks are parasitic arthropods that cause significant economic losses to livestock production worldwide. Although Rhipicephalus (Boophilus) microplus, the cattle tick, occurs throughout the Brazilian territory, there is no official program to control this tick, which is the vector of tick fever pathogens. We address the situation of R. (B.) microplus resistance to synthetic acaricides in Brazil, including cattle tick management; the status of tick resistance per Brazilian state; the history of resistance occurrence of different acaricides; multiple resistance occurrence; and the main strategies for integrated tick management. Tick control in Brazil is characterized by management errors. Local laboratories affiliated with federal and state research institutions and universities employ the Adult Immersion Test as a primary diagnostic method to assess acaricide resistance to topically applied drugs. Only three states (Acre, Amapá, and Amazonas) have no reports on resistant populations. Misinformation on tick control strategies, misuse of available products for tick control, no adoption of Integrated Parasite Management (IPM) practices, low technical support to producers, and the high-speed emergence of acaricide-resistant tick populations are the main problems. We also propose a list of needs and priorities for cattle tick control regarding communication, research, and policies.

Resumo Carrapatos são artrópodes parasitos que causam perdas econômicas significativas na produção de bovinos em todo o mundo. Embora o carrapato bovino - Rhipicephalus (Boophilus) microplus - esteja distribuído em todo o território brasileiro, não há um programa oficial de controle do parasito. Nesta revisão, foi abordada a situação da resistência de R. (B.) microplus aos carrapaticidas sintéticos no Brasil, incluindo: controle do carrapato; estado da resistência por estado; histórico da ocorrência de resistência a diferentes carrapaticidas; resistência múltipla; e as principais estratégias para o manejo integrado de carrapatos. No Brasil, laboratórios locais empregam empregam, inicialmente, o teste de imersão de adultos como método diagnóstico de resistência aos carrapaticidas. Apenas três estados (Acre, Amapá e Amazonas) não têm relatos de populações resistentes. O controle de carrapatos, no Brasil, é caracterizado por erros de manejo, há desinformação sobre estratégias de controle de carrapatos, uso inadequado dos produtos disponíveis, falta de adoção de práticas de manejo integrado de parasitos (MIP), baixo suporte técnico aos produtores e a rápida emergência de populações de carrapatos multirresistentes a carrapaticidas. Ao final, propõe-se uma lista de necessidades e prioridades para o controle de carrapatos em bovinos com relação à comunicação, pesquisa e políticas públicas.

Ornithodoros mimon colonizing a residence in Campinas, state of São Paulo, associated with human parasitism / Ornithodoros mimon colonizando uma residência em Campinas, estado de São Paulo, associado a parasitismo humano

Ornithodoros mimon is an argasid tick species usually associated with bats and marsupials and occasionally parasitizes humans inside their homes. This paper reports a tick infestation in a residence in the municipality of Campinas, located in the interior of the state of São Paulo (SP). This report increases O. mimon occurrence in SP and corroborates its anthropophilic activity. Further studies are needed to clarify its role as a vector of pathogens. We highlighted the presence of O. mimon in an area with a large human population (Campinas) associated with synanthropic animals.(AU)

Ornithodoros mimon é uma espécie de carrapato argasídeo, geralmente associada a morcegos e marsupiais, sendo ocasionalmente relatada parasitando humanos dentro de seus domicílios. Este trabalho relata a infestação por carrapatos em uma residência no município de Campinas, interior do estado de São Paulo (SP). O presente relato amplia a ocorrência de O. mimon no estado de SP, corroborando sua atividade antropofílica, sendo necessários mais estudos para esclarecer o seu possível papel como vetor de patógenos. Destaca-se a presença de O. mimon numa área de grande contingente humano (Campinas), associado a animais sinantrópicos.(AU)

Seroprevalence and hematological abnormalities associated with Ehrlichia canis in dogs referred to a veterinary teaching hospital in central-western Brazil / Soroprevalência e alterações hematológicas associadas com Ehrlichia canis em cães encaminhados a um hospital veterinário-escola no centro-oeste do Brasil

Ticks are significant parasites of dogs in the tropics, where tick-borne pathogens are highly prevalent, especially in areas where tick control measures are frequently neglected. This study investigated the seroprevalence and hematological abnormalities associated with Ehrlichia canis in dogs referred to a veterinary teaching hospital in Central-western Brazil. Out of 264 dogs tested for anti-Ehrlichia canis antibodies by an indirect immunofluorescence assay (IFA), 59.1% (156/264) were positive. Seropositivity was significantly associated to anemia and thrombocytopenia, alone or in combination, and to leukopenia. Conversely, there were no differences in terms of seroprevalence according to sex, breed and age. This study demonstrated that dogs referred to a veterinary teaching hospital in Central-western Brazil are highly exposed to E. canis and that seropositive dogs are more likely to present hematological abnormalities, particularly anemia, thrombocytopenia and leukopenia. To our knowledge, this is the first study on detection of anti-E. canis antibodies by means of IFA among dogs in the state of Goiás. These findings highlighted the need for increasing awareness among dog owners regarding tick control measures in Central-western Brazil, ultimately to reduce the risk of exposure to E. canis and other tick-borne pathogens.

Carrapatos são importantes parasitos de cães nos trópicos, onde patógenos transmitidos por carrapatos são altamente prevalentes, especialmente em áreas onde as medidas de controle de carrapatos são frequentemente negligenciadas. O estudo investigou a soroprevalência e as anormalidades hematológicas associadas à Ehrlichia canis em cães encaminhados para um hospital veterinário-escola no Centro-oeste do Brasil. Dos 264 cães testados para anticorpos anti-Ehrlichia canis por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), 59.1% (156/264) foram positivos. A soropositividade foi associada significativamente à anemia e trombocitopenia, isoladamente ou em combinação, e à leucopenia. Por outro lado, não houve diferenças quanto à soroprevalência segundo sexo, raça e idade. Este estudo demonstrou que cães encaminhados a um hospital veterinário-escola na região Centro-oeste do Brasil são altamente expostos à E. canis, e que cães soropositivos têm maior probabilidade de apresentar alterações hematológicas, principalmente anemia, trombocitopenia e leucopenia. Para o nosso conhecimento, este é o primeiro estudo sobre a detecção de anticorpos anti-E. canis por meio da RIFI em cães do estado de Goiás. Essas descobertas destacam a necessidade de aumentar a conscientização entre os proprietários de cães em relação às medidas de controle do carrapato no Centro-oeste do Brasil, em última análise, para reduzir o risco de exposição ao E. canis e outros patógenos transmitidos por carrapatos.

Assessment of weight gain and control of parasitism by Rhipicephalus microplus in dairy cattle in the field using organosynthetic parasiticide, phytotherapics and homeopathy / Avaliação do ganho de peso e controle do parasitismo por Rhipicephalus microplus em bovinos leiteiros a campo usando parasiticida organosintético, fitoterápicos e homeopatia

The goal of this research was to compare the effect of the following products on dairy cattle, parasitized by Rhipicephalus microplus: organosynthetics - Clorfenvinfós and Ivermectina (OG); phytotherapics - Eucalyptus oil (EG) and Neem cake (NG); Homeopathy (HG); The control group (CG) received no treatment. Infestation was by R. microplus (MIC) and weight gain (GP) were evaluated. The study included 60 animals (5 groups) from ­ Dutch / Zebu, aged between 25-44 months and initial weight between 211-477kg. EG and NG showed MIC 84.9% and 14.0% greater than CG, respectively (P <0.05; P = 0). HG and OG had MIC less than CG 24.4% and 16.9%, respectively (P<0.05; P <0.05). EG, NG and OG obtained GP lower than CG in 7.9%, 8.9% and 8.06% (P <0.05) respectively. The HG GP was 4.9% higher (P <0.05) than CG. This was the first research to prove parasitism control by R. microplus in a field test, using homeopathy. The methodology for choosing Homeopathy for the control of enzooties, developed and tested for the first time in this study, proved to be adequate and efficient, opening the possibility for establishing a new methodology for strategic control of parasitism by R. microplus.(AU)

O objetivo desta pesquisa foi comparar o efeito dos seguintes produtos sobre bovinos leiteiros, parasitados por Rhipicephalus microplus: organossintéticos - clorfenvinfós e ivermectina (OG); fitoterápicos - óleo de eucalipto (EG) e torta de Neem (NG) e homeopatia (HG). O grupo controle (CG) não recebeu tratamento. Foram avaliados infestação por R. microplus (MIC) e ganho de peso/grupo (GP) em 60 animais (5 grupos), a partir de ­ holandês/zebu, com idade entre 25 e 44 meses e peso inicial entre 211 e 477kg. EG e NG apresentaram MIC 84,9% e 14,0% maior que CG, respectivamente (P<0,05; P=0). HG e OG apresentaram MIC menor que CG 24,4% e 16,9%, respectivamente (P<0,05; P<0,05). EG, NG e OG obtiveram GP menor que CG em 7,9%, 8,9% e 8,06% (P<0,05), respectivamente. O GP do HG foi 4,9% maior (P<0,05) que o CG. Esta foi a primeira pesquisa a comprovar controle do parasitismo por R. microplus em teste a campo, usando homeopatia. A metodologia para escolha de medicamentos homeopáticos para controle de enzootias, desenvolvida e testada pela primeira vez neste estudo, mostrou-se adequada e eficiente, abrindo a possibilidade para estabelecimento de nova metodologia para controle estratégico do parasitismo por R. microplus.(AU)

Ectoparasites infesting animals living in close contact with human beings: a real trouble for One Health perspective? / [Ectoparasitos infestando animais que vivem em contato próximo com seres humanos: um problema real para a perspectiva Saúde Única?]

The number of domestic animals living with human beings is rapidly increasing in parallel with an enhanced risk of transmission of their parasites and the pathogens they might carry. The aim of this study was to assess the occurrence of hematophagous arthropods infesting domestic animals from Northeastern Brazil and to remark the implications of their occurrence on the epidemiology and control of selected veterinary and human diseases. From January 2017 to April 2019, ectoparasites infesting domestic cats, dogs and horses were collected for their respective hosts and identified. Overall, ectoparasites were sampled from 86 domestic animals, living in different anthropic settings. A total of 401 specimens (344 ticks and 57 fleas) were collected from different hosts [i.e., 10 (2.49%), 96 (23.94%) and 295 (73.57%) from cats, dogs and horses, respectively]. Two flea (i.e., Ctenocephalides canis and Ctenocephalides felis) and 5 tick species (i.e., Amblyomma ovale, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens, Rhipicephalus microplus and Rhipicephalus sanguineus sensu lato) were identified. This study provides data on the ectoparasite fauna infesting domestic animals from Northeastern Brazil. The diagnosis and treatment of these parasites should not be underestimated, considering the role that hematophagous arthropods display as vectors of pathogens of medical and veterinary concern.(AU)

O número de animais domésticos infestados por ectoparasitos vivendo em estreito contato com seres humanos está aumentando, elevando o risco de infecção pelos patógenos transmitidos por vetores. Objetivou-se neste estudo avaliar a ocorrência de ectoparasitos infestando animais do nordeste do Brasil e discutir as implicações desse parasitismo na epidemiologia e no controle de doenças de importância médico-veterinária. De janeiro de 2017 a abril de 2019, artrópodes foram coletados de gatos, cães e cavalos, e identificados morfologicamente. Ectoparasitos foram removidos de 86 animais infestados provenientes de áreas urbanas e rurais. Foram identificados 401 espécimes (344 carrapatos e 57 pulgas) coletados de diferentes hospedeiros (10 (2,49%), 96 (23,94%) e 295 (73,57%) de gatos, cães e cavalos, respectivamente. Duas espécies de pulgas (Ctenocephalides canis e Ctenocephalides felis) e cinco espécies de carrapatos (Amblyomma ovale, Amblyomma sculptum, Dermacentornitens, Rhipicephalus microplus e Rhipicephalus sanguineus sensu lato) foram identificadas. Este estudo fornece informações sobre a ectofauna de animais domésticos do nordeste do Brasil. Portanto, o diagnóstico e o tratamento desses parasitos não devem ser subestimados, considerando que os artrópodes aqui relatados podem veicular patógenos de importância médico-veterinária.(AU)

Perfil clínico e laboratorial de cadelas sororeativas para erliquiose tratadas em um Hospital Veterinário Universitário em Niterói, Estado do Rio de Janeiro, Brasil / Clinical and laboratory profile of dogs seroreactive to ehrlichiosis treated at the Veterinary Medical Teaching Hospital in Niterói, State of Rio de Janeiro, Brazil

Ehrlichiosis is a tick-borne disease highly prevalent in Brazil, and is relevant in canine clinical practice due to its high morbidity and mortality. Its clinical signs are nonspecific and its phases are acute, lasting 2 to 4 weeks; subclinical, i.e., asymptomatic; and chronic, resembling an autoimmune disease. The purpose of this study was to identify the occurrence of reactivity to Ehrlichia canis of bitches treated at the Veterinary Medical Teaching Hospital of the Universidade Federal Fluminense (UFF) - Niterói, RJ, Brazil, based on serological examination by iELISA, and to compare the hematological, biochemical, urinary protein-creatinine and urinary density profiles of reactive and non-reactive animals. This study involved solely bitches, regardless of breed, starting at 1 year of age. One hundred and thirty bitches, 1 to 16 year-old (mean age 7.02 ± 4.00), weighing 1.5 to 50 kg (mean weight 12.12 ± 10.65) were subjected to clinical examination and abdominal ultrasound. Complete blood count, biochemical measurements, urinalysis and serology for E. canis were also performed. The serum was used in the iELISA to identify immunoglobulin G (IgG), using a canine Ehrlichia Imunotest® diagnostic kit (Imunodot®, Jaboticabal, SP, Brazil) according to the manufacturer's instructions. Sixty animals (46.20%) were reactive to E. canis. According to their owners, only 5 (8.3%) of the 60 seroreactive animals had a history of tick-borne disease. The most common profile was that of mixed breed animals living with their owners, older than 7 years, who had not been treated preventatively with specific drugs against ectoparasites. Laboratory tests showed significant differences between groups in terms of total protein (TP), and calcium and urinary protein-creatinine ratio (UPC). TP and UPC were elevated in the non-reactive group, while the only significant change in the reactive group was mild hypocalcemia. In this study, 30% (18/60) of the bitches were seroreactive to E. canis and had hypocalcemia. Of these, 50% (9/18) had a UPC above 0.5. Furthermore, 66.7% (12/18) of this group with hypocalcemia also showed urine density (UD) of less than 1024. Among these 18 bitches, 5 had both alterations, i.e., UPC > 0.5 and UD < 1024. In this study, a high prevalence of bitches seroreactive to Ehrlichia canis was observed, despite the absence of clinical and/or laboratory signs indicative of the disease. In the investigation of IgG class antibodies, it is not possible to determine the exact time of infection, and titers may remain high for a period of more than 11 months, even after treatment and elimination of the bacterium. The fact that most seroreactive bitches showed no symptoms compatible with the disease either before or during the study suggests that they were in the subclinical phase of ehrlichiosis. The main reason for calcium metabolism disorders is a phosphorus imbalance, a condition that occurs in kidney diseases. Isosthenuria reflects the kidney's inability to concentrate urine. This finding may be one of the first clinical manifestations of chronic kidney disease (CKD), especially in dogs. On the other hand, the UPC ratio may increase with the progression of CKD. The presence of hypocalcemia, isosthenuria and increased UPC associated with seroreactivity suggests that infection by E. canis may be associated with the onset of CKD. Veterinarians should keep in mind the complexity of the pathophysiology of ehrlichiosis to ensure the disease is not underdiagnosed in any of its phases, thereby ensuring the correct treatment is provided. Such awareness is expected to reduce the chronicity of the disease and underlying sequelae among dogs.(AU)

Effects of essential oils on native and recombinant acetylcholinesterases of Rhipicephalus microplus / Efeito de óleos essenciais sobre acetilcolinesterases nativa e recombinante de Rhipicephalus microplus

Abstract This study reports the action of essential oils (EO) from five plants on the activity of native and recombinant acetylcholinesterases (AChE) from Rhipicephalus microplus. Enzyme activity of native susceptible AChE extract (S.AChE), native resistant AChE extract (R.AChE), and recombinant enzyme (rBmAChE1) was determined. An acetylcholinesterase inhibition test was used to verify the effect of the EO on enzyme activity. EO from Eucalyptus globulus, Citrus aurantifolia, Citrus aurantium var.dulcis inhibited the activity of S.AChE and R.AChE. Oils from the two Citrus species inhibited S.AChE and R.AChE in a similar way while showing greater inhibition on R.AChE. The oil from E. globulus inhibited native AChE, but no difference was observed between the S.AChE and R.AChE; however, 71% inhibition for the rBmAChE1 was recorded. Mentha piperita oil also inhibited S.AChE and R.AChE, but there was significant inhibition at the highest concentration tested. Cymbopogon winterianus oil did not inhibit AChE. Further studies are warranted with the oils from the two Citrus species that inhibited R.AChE because of the problem with R. microplus resistant to organophosphates, which target AChE. C. winterianus oil can be used against R. microplus populations that are resistant to organophosphates because its acaricidal properties act by mechanism(s) other than AChE inhibition.

Resumo Este estudo relata a ação de óleos essenciais de cinco plantas na atividade de acetilcolinesterases (AChE) nativas e recombinantes de Rhipicephalus microplus. A atividade enzimática do extrato de acetilcolinesterase nativa suscetível (S.AChE) e resistente (R.AChE) e da enzima recombinante (rBmAChE1) foi determinada. Um teste de inibição da AChE foi utilizado, para verificar o efeito dos óleos essenciais sobre a atividade enzimática. Óleos essenciais de Eucalyptus globulus, Citrus aurantifolia, Citrus aurantium var. dulcis inibiram a atividade de S.AChE e R.AChE. Os óleos das duas espécies de Citrus inibiram S.AChE e R.AChE de maneira semelhante, mas mostraram maior inibição sobre R.AChE. O óleo de E. globulus inibiu a AChE nativa, mas sem diferença entre a S.AChE e a R.AChE; no entanto, 71% de inibição para rBmAChE1 foi observada. O óleo de Mentha piperita também inibiu S.AChE e R.AChE, mas houve inibição significativa apenas nas concentrações mais altas testadas. O óleo de Cymbopogon winterianus não inibiu a AChE. Estudos adicionais são necessários com os óleos das duas espécies de Citrus que inibiram a R.AchE, devido ao problema de R. microplus resistente aos organofosforados ter como alvo AChE. O óleo de C. winterianus pode ser usado contra populações de R. microplus, que são resistentes a organofosforados, porque suas propriedades acaricidas agem por mecanismos diferentes.

Parasitism by Amblyomma humerale (Acari: Ixodidae) on Chelonoidis denticulatus (Testudines: Testudinidae) in the Atlantic Forest / Parasitismo de Chelonoidis denticulatus (Testudines: Testudinidae) por Amblyomma humerale (Acari: Ixodidae) na Mata Atlântica

Abstract The present study reports on patterns of parasitism by Amblyomma humerale on yellow-footed tortoise, Chelonoidis denticulatus, in the Atlantic Forest of southeastern Brazil. The tortoises were sampled occasionally, from July 2005 to January 2020. We collected 81 adult ticks from seven tortoises (mean = 11.57 ± 6.90 ticks/host), of which 72 were males (88.9%) and nine females (11.1%), resulting in an 8:1 sex ratio (males:females). Males were found in clusters, attached to the carapace. Females occurred mainly isolated, attached to coriaceous integumental areas (n = 7; 77.8%), especially the engorged females (100%). We suggest that the difference between attachment sites is a strategy used by fertilized females to avoid mechanical removal from their host through friction with elements of the environment. Because they undergo a considerable increase of volume when engorged, they move to more sheltered places on their host's surface. The parasitism patterns by A. humerale on C. denticulatus were compatible with those observed in the Amazon region and in the Cerrado-Amazonia transition. The present work provides information about the life history and host-parasite interface of the two species and contributes to understanding the parasitism patterns by A. humerale on C. denticulatus in the Atlantic Forest of southeastern Brazil.

Resumo O presente estudo relata os padrões de parasitismo de Amblyomma humerale em jabuti-tinga, Chelonoidis denticulatus, na Mata Atlântica do Sudeste do Brasil. Os jabutis foram amostrados de forma ocasional, entre julho de 2005 e janeiro de 2020. Foram amostrados sete jabutis e coletados 81 carrapatos adultos (media = 11,57 ± 6,90 carrapatos/hospedeiro), sendo 72 machos (88,9%) e nove fêmeas (11,1%), resultando em uma razão sexual de 8:1 (machos:fêmeas). Os machos encontravam-se agrupados e aderidos à carapaça. As fêmeas ocorreram principalmente isoladas e fixadas a áreas de tegumento coriáceo (n = 7; 77,8%), especialmente as fêmeas ingurgitadas (100%). Sugere-se que a diferença entre os locais de fixação seja uma estratégia das fêmeas fecundadas, para evitar a remoção mecânica por atrito com o ambiente, uma vez que aumentam consideravelmente seu volume quando ingurgitadas, deslocando-se para locais mais abrigados na superfície do hospedeiro. Os padrões de parasitismo de C. denticulatus por A. humerale foram compatíveis com aqueles observados na Amazônia e na transição Amazônia-Cerrado. O presente trabalho contribui com informações acerca da história de vida e da relação parasito-hospedeiro entre as duas espécies, contribuindo para o entendimento dos padrões de parasitismo de A. humerale em C. denticulatus na Mata Atlântica do sudeste do Brasil.

Analysis on the prokaryotic microbiome in females and embryonic cell cultures of Rhipicephalus sanguineus tropical and temperate lineages from two specific localities in Brazil / Análise do microbioma procarionte de fêmeas e cultura celular embrionária de Rhipicephalus sanguineus linhagens tropical e temperada de duas localidades no Brasil

Abstract Two lineages of Rhipicephalus sanguineus are known in Brazil: the temperate or southern and the tropical or northern populations. The distribution patterns of both lineages of R. sanguineus have epidemiological implications that can affect vectorial competence concerning Ehrlichia canis, the agent of canine monocytic ehrlichiosis. Intending to identify the microbiomes of both lineages and compare microorganisms in R. sanguineus, we used the 16S rRNA (V4-V5 region) gene-based metataxonomic approach, through NGS sequencing on the MiSeq Illumina platform. We selected specimens of females from the environment and samples of primary embryonic cell cultures, from both lineages, and this was the first study to investigate the prokaryotic microbiome in tick cell cultures. The results showed that many bacterial taxa detected in the samples were typical members of the host environment. A significant diversity of microorganisms in R. sanguineus females and in embryonic cell cultures from both lineages was found, with emphasis on the presence of Coxiella in all samples, albeit in different proportions. The Coxiella species present in the two lineages of ticks may be different and may have co-evolved with them, thus driving different patterns of interactions between ticks and the pathogens that they can harbor or transmit to vertebrate hosts.

Resumo Duas linhagens de Rhipicephalus sanguineus são conhecidas no Brasil: populações da linhagem temperada ou do sul, e tropical ou do norte. Os padrões de distribuição de ambas as linhagens de R. sanguineus têm implicações epidemiológicas, podendo afetar a competência vetorial de Ehrlichia canis, o agente etiológico da erliquiose monocítica canina. Com a intenção de identificar os microbiomas de ambas as linhagens e comparar microrganismos de R. sanguineus, foi utilizada a metataxonomia, baseada no gene 16S rRNA (região V4-V5), por meio do sequenciamento de nova geração na plataforma MiSeq Illumina. Foram selecionadas amostras de fêmeas do ambiente e cultivo primário de células embrionárias, considerando-se as duas linhagens conhecidas do Brasil. Este é o primeiro estudo que investiga o microbioma procariótico de células de cultura de carrapato. Os resultados mostram que muitos grupos de bactérias detectadas nas amostras são membros típicos do ambiente do hospedeiro. Uma diversidade significativa de microrganismos em fêmeas e cultura de células embrionárias nas duas linhagens de R. sanguineus foi encontrada, com ênfase na presença de Coxiella em todas as amostras, ainda que em diferentes proporções. Possivelmente, as espécies de Coxiella presentes nas duas linhagens de carrapatos são diferentes e co-evoluíram com essas linhagens, conduzindo a diferentes padrões de interação entre carrapatos e patógenos que podem abrigar ou transmitir aos hospedeiros vertebrados.

Prednisolone associated with doxycycline on the hematological parameters and serum proteinogram of dogs with ehrlichiosis / Efeitos da influência da prednisolona associada à doxiciclina nos parâmetros hematológicos e proteinograma sérico de cães com erliquiose

ABSTRACT: The objective of the present study was to assess the treatment of dogs with ehrlichiosis (tropical canine pancytopenia (TCP)) with doxycycline hydrochloride associated or not with prednisolone on the hematological profile and serum proteins. Ten dogs with TCP were selected in the Small Animal Medical Clinic Veterinary Hospital, Federal University of Campina Grande-UFCG-PB, Brazil. The diagnosis was obtained by clinical examination, hemogram and immunochromatographic test (with anti Ehrlichia canis antibodies). Samples were distributed randomly in two experimental groups of five animals each (n = 5), named GD and GDP. The GD group was treated with doxycycline (5 mg/kg, VO, BID for 28 days) and the GDP group was treated with doxycycline at the same dose and duration and prednisolone (2 mg/kg, VO, BID, for five days). Four blood collections were made during the treatment period: a base collection (M0), one at 10 days (M10), a second at 21 days (M21) and another at the end of the treatment (M28). These samples were used for the tests erythrogram, leucogram, plateletgram and proteinogram (dose of total proteins, pre-albumin, albumin, albumin, α-1 globulin, α-2 globulin, ß-globulin, ɣ-globulin and C- reactive protein) in the Clinical Pathology Laboratory, Veterinary Hospital-UFCG-PB. Results, that presented normal distribution, was submitted to the Tukey test (P<0.05). Comparison of treatments GD and GDP showed that both promoted discreet and similar response in the hematological parameters at different times. Results obtained allowed the conclusion that both therapeutic protocols resulted in clinical, hematological parameter and proteinogram improvement, but the use of prednisolone at the dose administered during the first five days of treatment did not show more beneficial effects than isolated administration of doxycycline.

RESUMO: Objetivou-se com este estudo avaliar os efeitos do tratamento de cães com erliquiose monocítica canina (EMC) com cloridrato de doxiciclina associada ou não à prednisolona sobre o perfil hematológico e de proteínas séricas. Foram selecionados, na Clínica Médica de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), 10 cães com EMC. O diagnóstico foi obtido através de exame clínico, hemograma e teste de imunoensaio imunocromatográfico (com anticorpos anti Ehrlichia canis). As amostras foram distribuídas aleatoriamente em dois grupos experimentais, com cinco animais cada (n=5), denominados GD e GDP. O grupo GD foi tratado com doxiciclina (5 mg/kg, VO, BID durante 28 dias) e o grupo GDP, tratado com doxiciclina na mesma dose e duração e prednisolona (2 mg/kg, VO, BID, durante 5 dias). Durante o período de tratamento, foram realizadas quatro coletas de sangue; uma coleta basal (M0), uma com 10 dias (M10), uma aos 21 dias (M21) e outra ao final do tratamento (M28). Dessas amostras foram realizados eritrograma, leucograma, plaquetograma e proteinograma (dosagem de proteínas totais, pré-albumina, albumina, α-1 globulina, α-2 globulina, ß-globulina, ɣ-globulina e proteína C-reativa) no Laboratório de Patologia Clínica do Hospital Veterinário da UFCG. Os resultados que apresentaram distribuição normal foram submetidos ao teste de Tukey (P<0,05). Ao comparar os tratamentos GD e GDP, observou-se que os dois promoveram resposta discreta e semelhante dos parâmetros hematológicos nos diferentes momentos. Os resultados obtidos permitem concluir que ambos os protocolos terapêuticos resultaram em melhora clínica e dos parâmetros hematológicos e do proteinograma. Porém, o uso da prednisolona na dose empregada durante os primeiros cinco dias de tratamento não demonstrou efeitos mais benéficos do que a administração isolada da doxiciclina.

Uso de microrganismos de efluente industrial no controle biológico de vetores / Use of industrial effluent microorganisms in biological vector control / Uso de microorganismos de efluentes industriales en el control biológico de vectores

Justificativa e Objetivos: a utilização de microrganismos como controle biológico de vetores sanitários pode ser considerada uma prática menos agressiva ao ambiente, em comparação com os produtos químicos utilizados. O presente estudo avaliou a eficiência de suspensões celulares de fungos e bactérias isolados de efluentes industriais têxteis no controle sanitário dos vetores naturais Aedes aegypti e Dermacentor nitens como alternativa sustentável de controle biológico. Métodos: foram avaliadas sete linhagens de fungos e seis de bactérias. Os isolados foram cultivados em caldo nutriente e caldo de batata, para bactérias e fungos, respectivamente. Alíquotas de 2 mL de cada suspensão microbiana foram adicionadas diretamente nas larvas dos mosquitos e nos carrapatos adultos. Foram analisadas alterações de movimentação e paralisação dos vetores em diferentes tempos de exposição entre zero e 20 minutos e três e 24 horas. Resultados: duas bactérias e um fungo promoveram uma desaceleração dos movimentos e/ou um aumento da movimentação dos ectoparasitas logo após a administração. Dois isolados bacterianos promoveram a paralisação dos movimentos de uma larva do mosquito Aedes aegypti em seu primeiro estágio de desenvolvimento, enquanto que um fungo provocou aumento da movimentação das larvas em seu estágio de desenvolvimento mais avançado. Conclusão: os microrganismos mostraram potencial uso no controle de vetores sanitários. Testes subsequentes de atividade dos possíveis metabólitos secundários produzidos e das formas de administração das culturas microbianas serão executados. Os resultados encontrados encorajam futuros estudos de otimização e caracterização dos extratos celulares, os quais poderão ser utilizados como ferramenta sustentável no controle biológico.(AU)

Background and Objectives: the use of microorganisms as biological control of health vectors can be considered a less aggressive practice to the environment, in comparison with the chemicals used. The present study evaluated the efficiency of cell suspensions of fungi and bacteria isolated from industrial textile effluents in the sanitary control of the natural vectors Aedes aegypti and Dermacentor nitens as a sustainable alternative for biological control. Methods: seven fungi and six bacteria strains were evaluated. The isolates were grown in nutrient broth and potato broth, for bacteria and fungi, respectively. 2 mL aliquots of each microbial suspension were added directly to mosquito larvae and adult ticks. Changes in movement and paralysis of vectors at different exposure times between zero and 20 minutes and three and 24 hours were analyzed. Results: two bacteria and a fungus promoted a slowdown in movement and / or an increase in the movement of ectoparasites shortly after administration. Two bacterial isolates caused the movement of a larva of the Aedes aegypti mosquito to stop in its first stage of development, while a fungus caused increased movement of the larvae in their most advanced stage of development. Conclusion: the microorganisms showed potential use in the control of health vectors. Subsequent activity tests of the possible secondary metabolites produced and the ways of administering the microbial cultures will be performed. The results found encourage future studies of optimization and characterization of cell extracts, which can be used as a sustainable tool in biological control.(AU)

Justificación y objetivos: el uso de microorganismos como control biológico de vectores sanitarios puede considerarse una práctica menos agresiva para el medio ambiente en comparación con los productos químicos utilizados. El presente estudio evaluó la eficiencia de las suspensiones de células fúngicas y bacterianas de efluentes industriales textiles en el control sanitario de los vectores Aedes aegypti y Dermacentor nitens como una alternativa sostenible para el control biológico. Métodos: evaluaron siete hongos y seis de bacterias. Los aislamientos se cultivaron en medio de cultivo, caldo nutrientes y de papa para bacterias y hongos, respectivamente. Se agregaron alícuotas de 2 mL de cada suspensión microbiana directamente a las larvas de mosquito y las garrapatas adultas. Analizaron los cambios en el movimiento y la parálisis de los vectores a diferentes tiempos de exposición entre cero y 20 minutos y tres y 24 horas. Resultados: dos bacterias y un hongo causaron una reducido el movimiento y/o aumentó el movimiento del ectoparásito poco después de la administración. Dos bacterias paralizaron los movimientos de las larvas de un mosquito en su primera etapa de desarrollo y un hongo causó un mayor movimiento de las larvas en su etapa posterior de desarrollo. Conclusión: los microorganismos mostraron uso potencial como control de vectores sanitarios. Se realizarán pruebas de actividad de los posibles metabolitos secundarios producidos y las formas de administración de los cultivos microbianos. Los resultados fomentan más estudios de optimización y caracterización de extractos celulares, que pueden utilizarse como herramienta sostenible en el control biológico.(AU)

Febre maculosa na Região Metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais - Brasil: Descrição dos casos e dos ambientes prováveis de infecção, 2017 / Spotted fever in the Metropolitan Region of Belo Horizonte, Minas Gerais - Brazil: Description of cases and probable environments of infection, 2017

Objetivo: investigar os casos de febre maculosa, verificar os aspectos relacionados à assistência à saúde e caracterizar o perfil epidemiológico desses e do ambiente de infecção. Métodos: estudo descritivo dos casos confirmados de FM entre janeiro e novembro de 2017. Foi elaborado um formulário semiestruturado para coleta dos dados. Para as análises epidemiológicas, foram utilizados os programas EpiInfoTM 7 e Qgis® 2.18.1. Foram calculadas frequências, medidas de tendência central, dispersão e indicadores de oportunidade de assistência. Nos ambientes prováveis de infecção, foram realizadas coletas de carrapatos que foram identificados e submetidos à pesquisa de Rickettsia do grupo da FM. Resultados: foram confirmados 15 casos de FM; desses, a maioria foi do sexo masculino (93%) com média de 42 anos de idade; 10 evoluíram para óbito. Todos apresentaram febre, 13(87%) cefaleia e 12(80%) mialgia. Apresentaram mediana e média de evolução para óbito pela doença de 6 dias (1 a 9), oportunidades de hospitalização, tratamento, diagnóstico e notificação de 4,5(0 a 8); 7(0 a 26); 9(DP±6) e 33(DP±45) dias, respectivamente. Para assistência à saúde, 14(93%) casos procuraram atendimento mais de duas vezes, com tempo de internação de 4,5 dias (0 a 8 dias). O hospital foi o serviço procurado, exclusivamente, no quarto atendimento. Dengue e FM foram as hipóteses diagnósticas mais frequentes. Foram coletados 250 espécimes de carrapatos em quatro municípios, sendo em um município identificado Amblyomma sculptum naturalmente infectados. Conclusões: foram assinaladas condições assistenciais pouco sensíveis à ocorrência da FM, o que, provavelmente, colaborou para ocorrência de óbitos, além da necessidade de sensibilização de equipes de saúde e vigilância quanto à ocorrência da FM na região.

Objective: investigate the cases of spotted fever, verify aspects related to health care and characterize the epidemiological profile of these and of the environment of infection. Methods: A descriptive study of confirmed cases of SF between January and November 2017. A semi-structured form for data collection was developed. EpiInfoTM 7 and Qgis® 2.18.1. Frequencies, measures of central tendency, dispersion and indicators of opportunity of assistance were calculated. In the probable environments of infection ticks were collected, identified and submitted to Rickettsia research of the SF group. Results: Fifteen SF cases were confirmed; of these, the majority was male (93%) and averaged 42 years old; 10 evolved to death. All presented fever, 13 (87%) headache and 12 (80%) myalgia. They presented an average of evolution to death by SF of 6 days (1 to 9), opportunities for hospitalization, treatment, diagnosis and notification of 4.5(0 to 8); 7(0 to 26); 9(DP± 6) and 33(DP± 45) days respectively. For health care, 14(93%) cases sought care more than twice and were hospitalized for 4.5-days (0 to 8 days). The hospital was the only service exclusively sought in the fourth service. Dengue and SF were the most frequent diagnostic hypotheses. A total of 250 specimens of ticks were collected in four counties, and in one municipality Amblyomma sculptum was identified as naturally infected. Conclusions: It was pointed out that assistance conditions were not very sensitive to the occurrence of SF which probably contributed to the instance of deaths as well as the need for sensitization of health and surveillance teams regarding the appearance of SF in the region.

Molecular detection of Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens in Rhipicephalus sanguineus s.l. isolated from dogs in Midwest Brazil / Detecção molecular de Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos em Rhipicephalus sanguineus s.l. isolados de cães no Centro-Oeste do Brasil

Abstract The aim of the present study was to detect Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens and to perform molecular characterization of the tick Rhipicephalus sanguineus s.l. collected from dogs. Ticks (n = 432, including 8 larvae, 59 nymphs, and 365 adults) were sampled from domiciled dogs (n = 73) living in Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Midwest Brazil). All ticks were morphologically identified as R. sanguineus. Genomic DNA was extracted in pools (three to five ticks per animal) and was used for definition of R. sanguineus haplotypes (based on 16S rRNA analysis) and pathogen identification (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli and Rickettsia spp.). Rhipicephal us sanguineus specimens were identified as haplotypes A and B. DNA of Cercopithifilaria bainae (43.83%; 32/73), Ehrlichia canis (24.65%; 18/73), Anaplasma platys (19.17%; 14/73), and Hepatozoon canis (5.47%; 4/73) was detected. The identity of pathogens was confirmed by DNA sequence analysis. The present study confirms the presence of haplotypes A and B of R. sanguineus in the state of Mato Grosso do Sul and its importance as a vector of several pathogens of veterinary concern. Finally, this is the first report to identify C. bainae in ticks in the Midwestern region of Brazil.

Resumo O objetivo do presente estudo foi detectar Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos e realizar a caracterização molecular do carrapato Rhipicephalus sanguineus s.l. coletado em cães. Carrapatos (n = 432, incluindo 8 larvas, 59 ninfas e 365 adultos) foram amostrados de cães domiciliados (n = 73) residentes no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (centro-oeste do Brasil). Todos os carrapatos foram identificados morfologicamente como R. sanguineus. O DNA genômico foi extraído em pools (três a cinco carrapatos por animal), seguido pela definição de haplótipos (com base no gene 16S rRNA) e pela investigação de patógenos (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli e Rickettsia spp.). Os espécimes coletados foram identificados como haplótipos A e B de R. sanguineus. Foram detectados DNA de Cercopithifilaria bainae (43,83%; 32/73), Ehrlichia canis (24,65%; 18/73), Anaplasma platys (19,17%; 14/73) e Hepatozoon canis (5,47%; 4/73). A identidade dos patógenos foi confirmada por análise de sequência de DNA. O presente estudo confirma a circulação dos haplótipos A e B de R. sanguineus no estado de Mato Grosso do Sul e sua importância como vetor de vários patógenos de interesse veterinário. Finalmente, este é o primeiro relato de C. bainae em carrapatos na região centro-oeste do Brasil.

In vitro efficacy of two commercial products of Metarhizium anisopliae s.l. for controlling the cattle tick Rhipicephalus microplus / Eficácia in vitro de dois produtos comerciais de Metarhizium anisopliae s.l. no controle do carrapato bovino Rhipicephalus microplus

Abstract The effects of two different products - Metarril® SP Organic (dry conidia) and Metarril® SC Organic (emulsifiable concentrated conidia in vegetable oil) - on eggs, larvae and Rhipicephalus microplus engorged females were here explored. Three concentrations (108, 107, and 106 conidia mL-1) for both products were prepared in water + 0.1% Tween® 80 (v/v); afterward, bioassays were carried out for all R. microplus stages by immersion in suspensions (Metarril® SP) or formulations (Metarril® SC). Metarril® SP suspensions showed low efficacy and did not affect biological parameters of treated engorged females; for eggs and larvae, only slight decreases in hatchability and larvae population were observed. Despite a delay in germination, Metarril® SC presented better results; for females, reductions in Egg Mass Weight (EMW) and Egg Production Index (EPI) were reported. On eggs, 108 conidia mL-1 increased Incubation Period (IP), shortened Hatching Period (HP) and decreased hatchability by up to 61%; for larvae, 107 and 108 conidia mL-1 reached 99.6 and 100% larval mortality respectively, 10 days after fungal exposure. Thus, further studies involving the use of oil-based formulations for ticks such as Metarril® SC need to be performed, especially to control the most susceptible stages (eggs and larvae).

Resumo No presente trabalho, os efeitos de dois diferentes produtos foram avaliados - Metarril® SP Organic (conídios secos) e Metarril® SC Organic (conídios concentrados em óleo vegetal) - para ovos, larvas e fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus. Três concentrações (108, 107 e 106 conídios mL-1) para cada produto foram preparadas em água + Tween® 80 0,1% (v/v); os bioensaios foram realizados para todos os estágios de R. microplus por imersão nas suspensões (Metarril® SP) ou formulações (Metarril® SC). Metarril® SP não afetou os parâmetros biológicos das fêmeas, demonstrando assim baixa eficácia; para ovos e larvas, foram observadas discretas diminuições na eclodibilidade e na população de larvas. Apesar de um atraso na germinação, Metarril® SC apresentou melhores resultados; para as fêmeas, foram detectadas reduções no Peso da Massa de Ovos (PMO) e no Índice de Produção de Ovos (IPO). Para os ovos, a concentração de 108 conídios mL-1 aumentou o Período de Incubação (PI), reduziu o Período de Eclosão (PE) e também o da eclodibilidade em até 61%; para larvas, 107 e 108 conídios mL-1 atingiram 99,6 e 100% de mortalidade larval, respectivamente, 10 dias após a exposição fúngica. Com isso, estudos adicionais que envolvem o uso de formulações à base de óleo para carrapatos, como Metarril® SC, precisam ser realizados, especialmente para controlar os estágios mais suscetíveis (ovos e larvas).

In vitro acaricidal activity of different ectoparasiticide classes against Amblyomma sculptum larvae / Atividade acaricida in vitro de diferentes classes de ectoparasiticidas frente a larvas de Amblyomma sculptum

Abstract Zoonoses are major causes of morbidity and mortality worldwide. Among them, Brazilian Spotted Fever (BSF) is an important one that occurs in some regions of South America and can be transmitted by the "star tick" Amblyomma sculptum. Application of acaricides against the larval stage is important as strategy of population control. However, there is still a deficiency of studies on chemical control of A. sculptum and the present work aims to evaluate the in vitro acaricidal activity of cypermethrin, flumethrin, deltamethrin, fipronil, coumaphos and chlorpyrifos against A. sculptum larvae. Bioassays were performed using the larval immersion test method. A discriminatory analysis between the antiparasitic classes most used for tick control was carried out, which made it possible to determine the classes with higher potential for controlling A. sculptum larvae. Our results showed that A. sculptum larvae present highest sensitivity to the synthetic pyrethroid group, followed by the phenylpyrazole, organophosphate and macrocyclic lactone groups. These findings may support studies on improvement of tick control as in animals as in the environment.

Resumo As zoonoses são a maior causa de morbidade de mortalidade no mundo. A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma importante zoonose que ocorre em algumas regiões da América do Sul e pode ser transmitida pelo "carrapato-estrela" Amblyomma sculptum. A aplicação de acaricidas, frente ao estágio larval, é importante como estratégia no controle da população. No entanto, ainda há uma deficiência de estudos para o controle químico de A. sculptum. Devido à necessidade de mais informações sobre o controle de A. sculptum, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade acaricida in vitro de cipermetrina, flumetrina, deltametrina, fipronil, coumafós e clorpirifós frente a larvas de A. sculptum. Os bioensaios foram realizados pelo método Teste de Imersão de Larva. Foi realizada uma análise discriminatória entre as classes antiparasitárias mais utilizadas para controle de carrapatos, possibilitando determinar classes com maior potencial para o controle de larvas de A. sculptum. Os resultados deste trabalho mostraram que as larvas de A. sculptum apresentam maior sensibilidade ao grupo dos piretroides sintéticos, seguido pelos grupos fenilpirazóis, organofosforados e lactonas macrocíclicas. Esses achados poderiam apoiar estudos visando ao controle do carrapato tanto em animais quanto no meio ambiente.

The nonparasitic phase of Dermacentor nitens under field conditions in southeastern Brazil / A fase não-parasitária de Dermacentor nitens em condições de campo no Sudeste do Brasil

Abstract Dermacentor nitens is a one-host tick that uses domestic equids as main hosts. Herein, the nonparasitic phase of D. nitens was evaluated under field conditions in Pirassununga, São Paulo state, Southeastern Brazil. By exposing engorged females of D. nitens to field conditions (grass plots) for 24 consecutive months, this tick species was able to complete its nonparasitic phase by producing host-seeking larvae in the pasture throughout the year. Preoviposition and egg incubation periods were longer during autumn and winter months than during the other months. The number of larvae generated by engorged females was in most of the times lower during autumn and winter months, as demonstrated by lower egg hatching values. Such conditions could be linked to lower mean temperatures and rainfall. Larvae with the longest longevity hatched from the eggs with the shortest incubation periods. An apparent synchronism of larval hatching during spring was observed from the eggs laid by females during late winter and autumn, which is consistent with the phenomenon of "spring rise". The results indicate that D. nitens can complete up to five generations per year in southeastern Brazil, providing baseline data to develop future protocols for the appropriate control of D. nitens on horses.

Resumo Dermacentor nitens é um carrapato de um hospedeiro, que utiliza equídeos domésticos como principais hospedeiros. Neste estudo, a fase não parasitária de D. nitens foi avaliada em condições de campo, em Pirassununga, estado de São Paulo, no Sudeste do Brasil. Fêmeas ingurgitadas de D. nitens foram expostas a condições de campo (canteiros de capim) por 24 meses consecutivos. Este carrapato foi capaz de completar sua fase não parasitária, através da produção de larvas infestantes, durante todos os meses do ano. No outono e inverno, os períodos de pré-oviposição e incubação de ovos foram mais longos. O número de larvas geradas por fêmeas ingurgitadas foi menor no outono e inverno, como demonstrado pelos menores valores de eclosão dos ovos. Tal condição poderia estar ligada a temperaturas médias e índices pluviométricos mais baixos. Larvas com maior longevidade nasceram de ovos com períodos de incubação mais curtos. Observou-se um aparente sincronismo da eclosão das larvas durante a primavera, a partir de ovos postos pelas fêmeas durante o final do inverno e outono, consistente com o fenômeno do "pico da primavera". Os resultados indicam que D. nitens pode completar até cinco gerações por ano no Sudeste do Brasil, fornecendo bases para futuros protocolos de controle racional de carrapatos.

Biocidal potential of Eugenia pyriformis essential oil in the control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus in the free-living cycle / Potencial biocida do óleo essencial de Eugenia pyriformis Cambess no controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus no ciclo de vida livre

Brazil has one of the largest commercial cattle herds in the world, which naturally coexist with an enormous number of parasitic species. Southern cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, is among these species, interfering with animal productivity and causing losses to the beef and dairy cattle sector. The use of chemical acaricides in the control of this mite has resulted in the emergence of resistant populations. In this sense, alternative control measures using plants as sources of botanical acaricides have shown to be effective. Eugenia pyriformis Cambess is a Brazilian plant with antioxidant and antimicrobial activity; however, there are no reports on its acaricidal activity in the literature. The present study aimed to evaluate the acaricidal and larvicidal potential of E. pyriformis leaf essential oil (EO) on southern cattle tick at different stages of the reproductive cycle. E. pyriformis leaves were collected and dried, and had their EO extracted by hydrodistillation (3h) using a modified Clevenger apparatus. Chemical analysis was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC/MS), and 32 compounds belonging to the sesquiterpene class were identified: hydrocarbons (17.98%) and oxygenated forms (81.96%), with spathulenol (43.65%) and caryophyllene oxide (12.17%) as the most common. The EO was evaluated by the Adult Immersion Test at the concentrations (500.00 to 3.12mg/mL) in which the following parameters were measured: mortality of females (%), hatchability of eggs (%), and product efficiency (%). Larvae were assessed by the Larval Packet Test at concentrations ranging from 25.00 to 0.00004mg/mL. Lethal concentrations (LC) required for killing 50 and 99.9% of adult females and larvae were determined using Probit analysis. LC50 and LC99.9 of EO were 0.06 and 24.60mg/mL and 1,208.80 and 2,538mg/mL for larvae and adult females, respectively. Action of the EO in the free-living cycle of R. (B.) microplus larvae was another parameter assessed. To this end, the larvae were deposited in pots containing Brachiaria decumbens and, after migration to the leaf apex, a solution containing LC99.9 (24.60mg/mL) of the EO was sprayed. After 24h, 72.25% of the larvae had died, indicating stability of the EO when subjected to uncontrolled temperature and humidity conditions. The mechanism of action through which the EO killed the larvae and adult females was investigated by the Bioautographic Method, which showed inhibition of 3.15mg/mL of the EO on the acetylcholinesterase (AChE) enzyme. The results found in the present experiment indicate that E. pyriformis essential oil is an alternative in the control of southern cattle tick in the larval (parasitic) and free-living cycle (non-parasitic) stages under field conditions.(AU)

O Brasil dispõe de um dos maiores rebanhos bovinos comerciais do mundo, sendo natural que junto a esse rebanho, coexista uma enorme quantidade de espécies parasitárias; dentre estes o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus que interfere na produtividade animal, causando prejuízos à pecuária de corte e leite. A utilização de acaricidas químicos no controle deste ácaro tem causado o surgimento de populações resistentes e neste sentido, controles alternativos utilizando plantas como fontes de acaricidas botânicos têm se mostrado eficazes. Eugenia pyriformis Cambess é uma planta brasileira com atividades antioxidante e antimicrobiana, entretanto não há relatos da atividade acaricida. O objetivo do presente estudo consistiu na avaliação do potencial acaricida e larvicida do óleo essencial das folhas de E. pyriformis sobre o carrapato bovino nos diferentes estágios do ciclo reprodutivo. As folhas foram coletadas, secas e o OE extraído por hidrodestilação (3 horas) em aparelho Clevenger modificado. A análise química foi realizada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM) sendo identificados 32 compostos, pertencentes à classe sesquiterpenos: hidrocarbonetos (17.98%) e oxigenados (81.96%); tendo como majoritários o spathulenol (43,65%) e caryophylene oxide (12,17%). O OE foi avaliado pelo teste de imersão de adultos nas concentrações (500,00 a 3,12mg/mL) onde foram mensurados os parâmetros: mortalidade das fêmeas (%), eclodibilidade dos ovos (%) e eficiência do produto (%). As larvas foram avaliadas pelo teste de imersão larval (Larval Packet Test) nas concentrações que variaram de 25,00 a 0,00004mg/mL. Foram determinadas as concentrações letais (CLs) necessárias para matar 50 e 99,9% das fêmeas adultas e das larvas utilizando a análise de Probitos. As CL50 e CL99,9 do OE foram (0,06 e 24,60mg/mL) para as larvas e (1.208,80 e 2.538mg/mL) para as fêmeas adultas, respectivamente. Outro parâmetro avaliado em nossa pesquisa foi mensurar a ação do OE no ciclo de vida livre das larvas de R.(B.) microplus; onde as larvas foram depositadas em vasos com Brachiaria decumbens e após migração destas para o ápice das folhas, foi aspergido solução contendo a CL99,9 (24,60mg/mL) do OE. Após 24 horas, 72,25% das larvas morreram indicando que houve estabilidade do OE quando submetido a condições de temperatura e umidade não controladas. O mecanismo de ação pelo qual o OE matou as larvas e fêmeas adultas foi investigado pelo método bioautográfico, indicando uma inibição de 3,15mg/mL do óleo essencial sobre a enzima acetilcolinesterase (AChE). Os resultados encontrados no presente experimento indicaram que o óleo essencial de E. pyriformis é uma alternativa no controle do carrapato bovino no estágio larval (parasitário) e no ciclo de vida livre (estágio não parasitário) em condições de campo.(AU)

Detection molecular of Rangelia vitalii in dogs from Parana State, Southern Brazil / Detecção molecular de Rangelia vitalii em cães do Estado do Paraná, Sul do Brasil

Abstract Rangelia vitalii infects erythrocytes, leukocytes and endothelial cells of dogs. The present study aimed to report the molecular detection confirmed by sequencing of R. vitalii in the state of Paraná, as well as describe the clinical, hematological and biochemical alterations of the infected dogs. Three sick dogs from the metropolitan area of Curitiba, PR, Brazil, underwent a physical exam, and laboratory tests included hematology, biochemistry, polymerase chain reaction (PCR), and gene sequencing. Clinical signs included apathy, anorexia, and hemorrhage. Intra-erythrocytic and extracellular piroplasms were found on peripheral blood smears from all three dogs. Blood samples from these animals were positive for Babesia sp. by PCR targeting 18S rRNA. PCR products from all three dogs were sequenced, and BLAST analysis showed that the PCR-generated sequences were highly homologous with those of R. vitalii previously reported. Hematologic findings included severe anemia, shift of neutrophils to the regenerative left, and thrombocytopenia. Serum urea levels were increased in all three dogs, and direct bilirubin levels were elevated in one dog.

Resumo Rangelia vitalii infecta eritrócitos, leucócitos e células endoteliais de cães. O presente estudo objetivou relatar a detecção molecular confirmada por sequenciamento de R. vitalii no estado do Paraná e descrever as alterações clínicas, hematológicas e bioquímicas dos cães infectados. Três cães doentes da região metropolitana de Curitiba, PR, Brasil, foram submetidos a exame físico e exames laboratoriais que incluíram hematologia, bioquímica, reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Os sinais clínicos incluíram apatia, anorexia e hemorragia. Piroplasmas intra-eritrocíticos e extracelulares foram encontrados em esfregaços de sangue periférico dos três cães. As amostras de sangue destes animais foram positivas para Babesia sp. pela PCR baseada no gene 18S rRNA. Os produtos de PCR dos três cães foram sequenciados e a análise de BLAST mostrou que as seqüências geradas por PCR eram altamente homólogas com as de R. vitalii previamente relatadas. Os achados hematológicos incluíram anemia grave, desvio de neutrófilos à esquerda regenerativo e trombocitopenia. Os níveis de uréia no soro aumentaram nos três cães, e os níveis de bilirrubina direta foram elevados em um cão.

Antitumoral effects of Amblyomma sculptum Berlese saliva in neuroblastoma cell lines involve cytoskeletal deconstruction and cell cycle arrest / Efeito antitumoral da saliva do carrapato Amblyomma sculptum Berlese em células de neuroblastoma envolve desconstrução do citoesqueleto e parada do ciclo celular

Abstract The antitumor properties of ticks salivary gland extracts or recombinant proteins have been reported recently, but little is known about the antitumor properties of the secreted components of saliva. The goal of this study was to investigate the in vitro effect of the saliva of the hard tick Amblyomma sculptum on neuroblastoma cell lines. SK-N-SK, SH-SY5Y, Be(2)-M17, IMR-32, and CHLA-20 cells were susceptible to saliva, with 80% reduction in their viability compared to untreated controls, as demonstrated by the methylene blue assay. Further investigation using CHLA-20 revealed apoptosis, with approximately 30% of annexin-V positive cells, and G0/G1-phase accumulation (>60%) after treatment with saliva. Mitochondrial membrane potential (Δψm) was slightly, but significantly (p < 0.05), reduced and the actin cytoskeleton was disarranged, as indicated by fluorescent microscopy. The viability of human fibroblast (HFF-1 cells) used as a non-tumoral control decreased by approximately 40%. However, no alterations in cell cycle progression, morphology, and Δψm were observed in these cells. The present work provides new perspectives for the characterization of the molecules present in saliva and their antitumor properties.

Resumo As propriedades antitumorais de extratos de glândulas salivares de carrapatos ou proteínas recombinantes foram relatadas recentemente, mas pouco se sabe sobre as propriedades antitumorais dos componentes secretados da saliva. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito in vitro da saliva bruta do carrapato duro Amblyomma sculptum sobre as linhagens celulares de neuroblastoma. Células SK-N-SK, SH-SY5Y, Be(2)-M17, IMR-32 e CHLA-20 foram suscetíveis à saliva, com redução de 80% na sua viabilidade em comparação com controles não tratados, como demonstrado pelo ensaio de Azul de Metileno. Investigações posteriores utilizando CHLA-20 revelaram apoptose, com aproximadamente 30% de células positivas para anexina-V, e G0/G1 (> 60%) após tratamento com saliva. O potencial de membrana mitocondrial (Δψm) foi reduzido significativamente (p <0,05), e o citoesqueleto de actina foi desestruturado, como indicado pela microscopia de fluorescência. A viabilidade do fibroblasto humano (células HFF-1), usado como controle não tumoral, diminuiu em aproximadamente 40%. No entanto, não foram observadas alterações na progressão do ciclo celular, morfologia e Δψm nestas células. O presente trabalho fornece novas perspectivas para a caracterização das moléculas presentes na saliva e suas propriedades antitumorais.