Caracterización fenotípica y molecular de una familia colombiana con fenilcetonuria / Phenotypic and molecular characterization of a Colombian family with phenylketonuria

Introducción. La fenilcetonuria es un trastorno metabólico caracterizado por un compromiso neurológico grave y por alteraciones del comportamiento. Su diagnóstico temprano permite establecer un tratamiento efectivo que evita las secuelas y modifica el pronóstico. Objetivo. Caracterizar a una familia con fenilcetonuria en Colombia, a nivel clínico, bioquímico y molecular. Materiales y métodos. Se estudió una población de siete individuos de una familia consanguínea en la que cuatro hijos presentaban signos clínicos sugestivos de fenilcetonuria. Una vez firmado el consentimiento informado, se tomaron muestras de sangre y orina para las pruebas colorimétricas, la cromatografía de capa fina y la cromatografía líquida de alta eficacia. Se extrajo el ADN y se secuenciaron los 13 exones del gen PAH de todos los sujetos estudiados. Se diseñaron iniciadores para cada exón con el programa Primer 3; la secuenciación automática se hizo con el equipo Abiprism 3100 Avant y, el análisis de las secuencias, con el programa SeqScape v2.0. Resultados. Se describieron las características clínicas y moleculares de una familia colombiana con fenilcetonuria en la que se identificó la mutación c.398_401delATCA; se presentó una correlación fenotipo-genotipo con una interesante variabilidad clínica entre los afectados, a pesar de tener la misma mutación. Conclusiones. Es importante el reconocimiento temprano de esta enfermedad para evitar sus secuelas neurológicas y psicológicas, pues los pacientes llegan a edades avanzadas sin diagnóstico ni tratamiento adecuados.

Introduction: Phenylketonuria is a metabolic disorder characterized by severe neurological involvement and behavioral disorder, whose early diagnosis enables an effective treatment to avoid disease sequelae, thus changing the prognosis. Objective: To characterize a family with phenylketonuria in Colombia at clinical, biochemical and molecular levels. Materials and methods: The population consisted of seven individuals of a consanguineous family with four children with suggestive symptoms of phenylketonuria. After signing an informed consent, blood and urine samples were taken for colorimetric tests and high performance liquid and thin layer chromatographies. DNA extraction and sequencing of the 13 exons of the PAH gene were performed in all subjects. We designed primers for each exon with the Primer 3 software using automatic sequencing equipment Abiprism 3100 Avant. Sequences were analyzed using the SeqScape, v2.0, software. Results: We described the clinical and molecular characteristics of a Colombian family with phenylketonuria and confirmed the presence of the mutation c.398_401delATCA. We established a genotype-phenotype correlation, highlighting the interesting clinical variability found among the affected patients despite having the same mutation in all of them. Conclusions: Early recognition of this disease is very important to prevent its neurological and psychological sequelae, given that patients reach old age without diagnosis or proper management.

Alteration of placental haemostatic mechanisms in idiopathicintrauterine growth restriction / Alteración de los mecanismos hemostáticos de la placenta en restricción de crecimiento intrauterino idiopático / Alteração dos mecanismos hemostáticos da placenta em restrição de crescimento intra-uterino idiopático

La restriccióndel crecimiento intrauterino es una complicación del embarazo con alta probabilidad de morbilidad y mortalidad perinatal, que pareceser causada por desarrollo anormal de la vasculatura placentaria. Los procesos hemostáticos son importantes para el desarrollo de laplacenta y el desequilibrio entre factores procoagulantes y anticoagulantes se ha asociado con restricción del crecimiento intrauterino.Objetivo. Evaluar el compromiso hemostático en la placenta de los embarazos complicados con restricción del crecimiento intrauterinoidiopática. Materiales y métodos. Se estudiaron cinco placentas de embarazos con restricción de crecimiento intrauterino idiopática y 19controles. Se realizó examen macroscópico e histológico, y análisis de la expresión de factor tisular y trombomodulina a nivel de ARNmpor PCR en tiempo real y proteínas por ELISA. Resultados. Se evidenció compromiso hemostático en las placentas de embarazos conrestricción de crecimiento intrauterino idiopática, siendo la trombosis de los vasos coriales el hallazgo histológico más importante. Seencontró aumento en la expresión de la proteína del factor tisular (p=0,0411) y en la razón de factor tisular/trombomodulina a nivel deARNm (p=0,0411) y proteína (p=0,0215). No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los grupos en los niveles de ARNmde factor tisular o trombomodulina, ni de trombomodulina a nivel de proteína. Conclusión. Se presenta evidencia de alteración de losmecanismos hemostáticos de la placenta, incluyendo la expresión anormal de factor tisular y de la razón factor tisular/trombomodulina,en embarazos complicados con restricción del crecimiento intrauterino idiopática...

Intrauterine growth restriction is a complication of pregnancy with a high probability of perinatal morbidity and mortality. It appears tobe caused by abnormal development of placental vasculature. Haemostatic processes are important for the development of the placenta,and an imbalance between procoagulant and anticoagulant factors has been associated with risk of intrauterine growth restriction.Objective. To evaluate coagulation abnormalities in placenta of pregnancies complicated with idiopathic intrauterine growth restriction.Materials and methods. Five placentas from pregnancies with idiopathic intrauterine growth restriction were compared to 19 controls.We performed gross and histological examination of the placenta. Analysis was made of both mRNA expression by real-time PCRand protein by ELISA of tissue factor and thrombomodulin in placental tissue. Results. Results based on histological evaluation wereconsistent with an increased prothrombotic state in placentas from pregnancies with idiopathic intrauterine growth restriction, andthrombosis of chorionic vessels was the most important finding. The study showed an increased expression of tissue factor protein(p=0.0411) and an increase in the ratio of tissue factor/thrombomodulin mRNA (p=0.0411) and protein (p=0.0215) in placentas frompregnancies with idiopathic intrauterine growth restriction. There were no statistically significant differences neither between cases andcontrols in the mRNA levels of tissue factor or thrombomodulin nor at the protein level of thrombomodulin. Conclusion. Evidence ofalteration of local haemostatic mechanisms at the level of the placenta, including abnormal expression of tissue factor and tissue factor/thrombomodulin ratio, in pregnancies that occur with idiopathic intrauterine growth restriction is presented...

A restrição do crescimentointra-uterino é uma complicação da gravidez com alta probabilidade de morbidade e mortalidade perinatal, que parece ser causada pelodesenvolvimento anormal da vasculatura placentária. Os processos hemostáticos são importantes para o desenvolvimento da placenta,e o desequilíbrio entre fatores pró-coagulantes e anticoagulantes têm sido associadas com a restrição de crescimento intra-uterino.Objetivo. Avaliar o compromisso hemostático na placenta com gestações complicadas com restrição de crescimento intra-uterinoidiopático. Materiais e métodos. Foram estudadas cinco placentas de gestações com restrição de crescimento intra-uterino idiopáticoe 19 controles. Foi realizada uma análise macroscópica e histológica e análise da expressão do factor tecidual e trombomodulina emARNm por PCR em tempo real e de proteína pelo método de ELISA. Resultados. Foi evidente o compromisso hemostático nas placentasde gestações com restrição de crescimento intra-uterino idiopático; a trombose dos vasos coriônicos é o descobrimento histológico maisimportante. Aumentaram a expressão de proteína do fator tecidual (p= 0,0411) e a proporção do fator tecidual/ trombomodulina aonível de ARNm (p= 0,0411) e de proteína (p= 0,0215). Não houve diferenças estatisticamente significativas entre os grupos nos níveisde ARNm do fator tecidual ou trombomodulina, nem de trombomodulina ao nível de proteína. Conclusão. Se apresenta evidência dealteração dos mecanismos hemostáticos da placenta, incluindo a expressão anormal de fator tecidual e da proporção do fator tecidual/trombomodulina, em gestações complicadas com restrição de crescimento intra-uterino idiopático...

Identification of messenger RNA of fetoplacental source in maternal plasma of women with normal pregnancies and pregnancies with intrauterine growth restriction / Identificacion de RNA mensajero de origen fetoplacentario en plasma materno de mujeres con embarazos normales y gestantes con restriccion de crecimiento intrauterino

Objective: to quantify placenta-specific RNA in plasma of women carrying foetuses with intrauterine growth restriction and pregnant women with normal pregnancies. Materials and methods: 8 pregnant women with foetuses with intrauterine growth restriction were studied as well as 18 women with uncomplicated pregnancies in the third pregnancy trimester. Total free RNA was quantified in maternal plasma by spectrophotometry and the gene expression of hPL (Human Placental Lactogen) at the messenger RNA level through technical Real Time-Chain Reaction Polymerase. Results: plasma RNA of fetoplacental origin was successfully detected in 100% of pregnant women. There were no statistically significant differences between the values of total RNA extracted from plasma (p = 0.5975) nor in the messenger RNA expression of hPL gene (p = 0.5785) between cases and controls. Conclusion: messenger RNA of fetoplacental origin can be detected in maternal plasma during pregnancy.(AU)Objective: to quantify placenta-specific RNA in plasma of women carrying foetuses with intrauterine growth restriction and pregnant women with normal pregnancies. Materials and methods: 8 pregnant women with foetuses with intrauterine growth restriction were studied as well as 18 women with uncomplicated pregnancies in the third pregnancy trimester. Total free RNA was quantified in maternal plasma by spectrophotometry and the gene expression of hPL (Human Placental Lactogen) at the messenger RNA level through technical Real Time-Chain Reaction Polymerase.Results: plasma RNA of fetoplacental origin was successfully detected in 100% of pregnant women. There were no statistically significant differences between the values of total RNA extracted from plasma (p = 0.5975) nor in the messenger RNA expression of hPL gene (p = 0.5785) between cases and controls.Conclusion: messenger RNA of fetoplacental origin can be detected in maternal plasma during pregnancy

Objetivo: cuantificar RNA específico de placenta en el plasma de mujeres con embarazos con fetos con Restricción de Crecimiento Intrauterino y gestantes con embarazos normales. Materiales y métodos: se estudiaron 8 mujeres con embarazos con fetos con Restricción de Crecimiento Intrauterino y 18 mujeres con embarazos sin complicaciones, en el tercer trimestre de embarazo. Se cuantificó el RNA total libre en plasma materno por espectrofotometría y la expresión del gen hPL (Lactógeno Placentario Humano) a nivel de RNA mensajero por medio de la técnica Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real. Resultados: se logró detectar RNA en plasma de origen fetoplacentario en el 100% de las gestantes. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los valores de RNA total extraído de plasma (p=0,5975) ni en la expresión del RNA mensajero del gen hPL (p=0,5785) entre casos y controles. Conclusión: es posible detectar RNA mensajero de origen fetoplacentario en plasma materno durante el embarazo.

Hiperamonemia neonatal causada por defectos del ciclo de la urea / Neonatal hyperammonemia in urea cycle disorders patients

Los defectos del ciclo de la úrea se deben a deficiencias de diferentes enzimas; las manifestaciones clínicas son similares y están relacionadas con la hiperamonemia. Se presentan las historias clínicas de tres neonatos a término, sin evidencia de alteración al nacimiento. Se les detectó hiperamonemia y se sospechó enfermedad metabólica. La cromatografía de aminoácidos sugirió defectos del ciclo de la úrea. El manejo incluyó dieta con restricción de proteínas, administración de benzoato de sodio, exsanguinotransfusión y diálisis peritoneal pese a lo cual fallecieron. Se revisan las causas de hiperamonemia en el neonato y se propone una secuencia para su diagnóstico.

Estudio preliminar del retardo mental en la población de Rovira (Tolima, Colombia) / Preliminary study of mental retardation in Rovira (Tolima, Colombia)

El retardo mental se caracteriza por limitaciones en el desempeño como resultado de significativas deficiencias de la inteligencia y la conducta adaptativa. En Colombia, la mayor parte de los pacientes con esta alteración no reciben evaluación genética. El objetivo de este trabajo es evaluar y caracterizar el retardo mental en un grupo de personas con esta condición en la población de Rovira (Tolima) e identificar los posibles factores asociados. La metodología consistió en realizar un diagnóstico clínico preliminar de 25 pacientes con retardo mental y realizar la correspondiente toma de muestras de sangre y orina para efectuar los exámenes correspondientes. Se realizaron estudios bioquímicos (cloruro férrico, nitrosonaftol, nitroprusiato de sodio, benedict, cromatografía para la detección de aminoácidos y carbohidratos) y citogenéticos (Bandeo G). Para la detección de plaguicidas, se realizó un muestreo aleatorio en diferentes puntos de todo el recorrido del sistema de distribución de agua y ciertos lugares del centro del municipio de Rovira. Con este fin, se recolectaron 20 muestras de agua y 20 muestras de tomate, elegidas al azar, de los diferentes sitios de distribución y cultivos de la hortaliza. Se identificó una familia de tres hijos afectados (dos mujeres y un hombre) con retardo mental, lo cual sugiere un componente genético en este caso. Las pruebas metabólicas fueron negativas y los cariotipos normales. Se plantea la necesidad de realizar pruebas moleculares que incluyan el síndrome de X-frágil para complementar el estudio y realizar consejería genética. En cuanto a los resultados y el análisis pertinente de las muestras para organofosforados, el 100% de éstas resultaron positivas. Se reportó un 60% de positividad en las muestras de agua y del 100% en las muestras de tomate, para el caso de los carbamatos; sin embargo, para el caso de los organoclorados, el 100% de las muestras estudiadas resultaron negativas.

Mental retardation is characterized by limitations in performance, significant deficiency in intelligence and adaptative behavior, causing clinical and social disability. Most patients with mental retardation in Colombia do not receive clinical genetics evaluation. The aims of the present study are to evaluate and characterize a group of patients with mental retardation from the population of Rovira. The present study included twenty five patients with mental retardation from Rovira (Tolima) which were studied by clinical examination, metabolic screening (ferric chloride, nitrosonaphtol, silver nitroprusiate, dinitrophenylhydrazine and benedict) and cytogenetics (G-Banding kariotype). Pesticide detection was perfomed by random sampling of water and tomatoes in twenty different places of water distribution, the center of the town and crop fields. A family with three affected sibs (two females, one male) with mental retardation was identified, suggesting a genetic component. Metabolic screening was negative and karyotypes were normal. The analyses performed for organophosphates were positive in 100% of the samples. Carbamates were positive in 60% of the water source and 100% of tomato samples. All the samples tested were negative for organochlorides. Further studies as molecular fragile-X test, will be performed.

Acidemia orgánica (propiónica) en un neonato detectada por espectrometría de masas en tándem / Neonatal onset of organic acidemia (propionic) diagnosed by tandem mass spectrometry

Institución donde se llevó a cabo el trabajo: Instituto Materno-Infantil, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, D.C., Colombia. La acidemia propiónica es un error innato del metabolismo de herencia autosómica recesiva, causada por la deficiencia de la enzima propionil CoA carboxilasa, que cataliza la conversión de propionil CoA a malonil CoA. Es la principal causa de hiperglicinemia cetósica. En el período neonatal se manifiesta comúnmente con vómito, dificultad en la alimentación, hipotonía, letargia, acidosis metabólica, cetosis e hiperamonemia. Se presenta el caso de una recién nacida con cuadro clínico de encefalopatía asociada a hipoglucemia, cetonuria, hiperamonemia, acidosis metabólica con anión gap aumentado, anemia, leucopenia y trombocitopenia en quien se diagnosticó una acidemia orgánica mediante espectrometría de masas en tándem. Existían antecedentes de consanguinidad entre los padres, de un aborto, un mortinato y tres muertes neonatales, sugestivo de enfermedad genética.

Encefalopatía neonatal. Algo mas que asfixia al nacer / Neonathal encefhalopathy something more that perinatal asphysia

La hiperglicinemia no cetósica (HGNC) es un error innato del metabolismo, de carácter recesivo, debido a un defecto en el sistema de clivaje, que ocasiona acumulación de glicina en la sangre y en el sistema nervioso central, donde activa dos receptores diferentes. El receptor localizado en la médula espinal, inhibitorio, provoca la apnea y el hipo de estos pacientes. El receptor cortical, excitatorio, produce la lesión cerebral y las convulsiones. Se presenta la historia de un recién nacido masculino, a término, que se torna encefalopático en los primeros días de vida. No presentó hipoglicemia, acidosis metabólica, cetosis ni hiperamonemia. La ecografía transfontanelar fue normal. A los seis días ameritó ventilación mecánica. La cromatografía en capa fina mostró banda de glicina en plasma y orina. El paciente recibió manejo con benzoato de sodio, diazepam y restricción proteica. A los 20 días de vida presentó mejoría neurológica y salió del hospital a los 42 días de vida con igual manejo. El estudio de acilcarnitinas en sangre por tandem-masas hecho en Santiago de Compostela fue normal. La cuantificación de aminoácidos hecha en el CEDEM mostró aumento de los niveles de glicina en plasma y LCR y la relación glicina LCR / plasma confirmó el diagnóstico de hiperglicinemia no cetósica típica. Se revisan las causas de encefalopatía neonatal y se plantea una secuencia para el diagnóstico.

Detección de antígenos dominantes para el diagnóstico de cisticercosis por inmunoelectrotransferencia (Eitb) / Detection of dominants antigens to diagnosis of cisticercosis for immunoelectrotransference (Eitb)

Se emplearon quistes liofilizados de Cisticerco cellullosae para preparar un extracto antigénico, el cual se utilizó en la identificación de antígenos de Taenia soliumreconocidos por inmunoglobulinas G de pacientes con cisticercosis, por medio de la prueba de inmunoelectrotransferencia (EITB). Se estudiaron 193 muestras (105 líquidos cefalorraquídeos - LCR y 88 sueros) de individuos con diagnóstico de cisticercosis por hallazgos clínicos, epidemiológicos y serológicos mediante el inmunoensayo enzimático (ELISA). El análisis de las proteínas antigénicas por electroforesis, permitió identificar polipéptidos de 29, 45, 66, 96 y 116 kDa principalmente, así como también algunos menores de 29 kDa. Los de mayor frecuencia de aparición en muestras de suero y LCR fueron los de 29, 45 y 66 kDa. Por lo tanto, estos antígenos inmunodominantes, podrían emplearse con predilección en estudios epidemiológicos y clínicos de cisticercosis por western blot

Homocistinuria: casos diagnosticados en Colombia / Homo cysteinuria: diagnosed cases in Colombia

Introducción. La homocistinuria es un error innato del metabolismo causado por deficiencia de algunas de las enzimas que intervienen en el catabolismo de la metionina, entre éstas la metiltetrahidrofolato reductasa (MTHFR) o la cistationina b sintasa (CbS). La deficiencia de ChS es el defecto bioquímico más común para esta enfermedad y se han descrito 104 mutaciones en esta enzima. Objetivo. Establecer una aproximación diagnóstica para la homocistinuria. Materialy métodos. Cuantificación de metionina y de homocisteína total en plasma y confirmación del defecto bioquímico que ocasiona la enfermedad en siete pacientes colombianos identificados clínicamente como homocistinúricos. Resultados. La confirmación del defecto bioquímico se demuestra por cuantificación de la actividad de las enzimas estudiadas, siendo normal para la MTHFR en linfocitos mientras que la CbS extraída del cultivo de fibroblastos de estos pacientes fue deficiente, al compararla con los controles. Conclusiones. Se establece un protocolo de estudio para pacientes con esta alteración bioquímica presente en nuestra población. Se adelantan estudios para establecer la causa molecular de esta enfermedad en Colombia.

Diagnóstico clínico-bioquímico de la enfermedad de Pompe

La enfermedad de Pompe es una de las glicogenosis o enferemdad de depósito del glucógeno, que se transmite con carácter autosómico recesivo y es producida por la deficiencia de la enzima maltasa ácida que degrada glicógeno en los lisosomas. Se dintinguen tres tipos de enferemdad de Pompe : el tipo infantil que se acracteriza por la acumulación de glicógeno en el hígado, músculo esquelético y cardíaco y células del sistema nervioso central; los pacientes fallecen usaulamente antes de los dos años por falla cardiorespiratoria; el fenotipo juvenil se presenta en niños o jóvenes, no siempre involucra el sistema nervioso central o el músculo cardíaco y los pacientes fallecen generalmente durante la segunda década de vida; el tipo adulto cursa con distrofia muscular, algunas veces asociada con deficiencia respiratoria por compromiso de los músculos diagragma e intercostales. El pronóstico depende del grado de la falla respiratoria, la cual es causa principal de la muerte de estos pacientes. En este trabajo se informa el caso de un niño de seis meses de edad, afectado por cardiomegalia, retardo psicomotor e hipotonía. La confirmación bioquímica de la enfermedad se hizo determinando la actividad de la alfa-glucosidasa en leucocitos por dos métodos diferentes, usando como sustrato maltasa o el sustrato fluorescente 4-metil-umbeliferil-glucósido. La actividad de la maltasa ácida en leucocitos, usando maltosa como sustrato fue de 6,36Umol glucosa/min/g, con un valor de referencia entre 16-63 Umoles/glucosa/min/g de proteína. Con el sustrato fluorogénico, la activida en el paciente fue de 34.48 nanomoles/h/mg, de proteína, para un valor de referencia entre 194 y 258. La actividad en leucocitos tanto del padre como de la madre corresponde a un 60 por ciento del valor normal, hallado en personas en cuya familia no se sospecha dicha enfermedad.