Fungal infection control by garlic extracts (Allium sativum L) and modulation of peritoneal macrophages activity in murine model of sporotrichosis / Controle da infecção fúngica pelos extratos de alho (Allium sativum L) e modulação da atividade de macrófagos peritoneais em modelo murino de esporotricose

Abstract Garlic (Allium sativum L.) is grown all over the world as seasoning and medicinal vegetable since 3,000 BC. Allicin is the main component of garlic, being attributed to it the most of its biological activities, such as bactericidal, antifungal and antiviral actions. However, other compounds of garlic present antioxidant, hypocholesterolemic, vasodilator activities, protective action against different types of cancer, and immunomodulatory. Fungal infections are important causes of morbidity and mortality in people mainly in immunosuppressed ones. Sporothrix schenckii, the causing agent of Sporotrichosis (most common subcutaneous mycosis in Latin America), is dimorphic fungus, of saprophytic life in soil or plants, infecting people and animals mainly through skin injuries and bruises. The main of this work was to evaluate the influence of garlic consuming on immune modulation of healthy and infected Swiss mice in induced way by S. schenckii, since these animals functioning of peritoneal macrophages as well as the nitric oxide and cytokines' production (IL-1β, IL-10 and IL-12) and to evaluate the antifungal potential of garlic with S. schenckii through minimum inhibitory concentration test and colony-forming units. The results showed that garlic offers antifungal potential with S. schenckii. The oral taking of garlic extracts influences the releasing of cytokines by macrophages, regular consuming shows anti-inflammatory effect, and its acute use may take to an inflammatory response. Mice that consumed garlic responded more effectively to fight against the infection.

Resumo O alho (Allium sativum L.) é cultivado em todo o mundo como hortaliça condimentar e medicinal desde 3.000 a. C. A alicina é o principal componente do alho, sendo atribuída a ela a maior parte das suas atividades biológicas, dentre elas as ações bactericida, antifúngica e antiviral. Porém, outros compostos do alho apresentam atividade antioxidante, hipocolesterolemiante, vasodilatadora, ação protetora contra diversos tipos de câncer e imunomoduladora. As infecções por fungos são causas importantes de morbidade e mortalidade no homem principalmente em indivíduos imunossuprimidos. O Sporothrix schenckii, agente causal da esporotricose (micose subcutânea mais comum na América Latina), é fungo dimórfico, de vida saprofítica no solo ou em vegetais, infectando homens e os animais principalmente através de lesões e arranhões na pele. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do consumo de alho na imunomodulação de camundongos Swiss saudáveis e infectados de forma induzida por S. schenckii, a partir do estado funcional dos macrófagos peritoneais desses animais quanto à produção de óxido nítrico e das citocinas (IL-1β, IL-10 e IL-12) e avaliar o potencial antifúngico do alho frente ao S. schenckii por meio de teste de concentração inibitória mínima e unidades formadoras de colônia. Os resultados demonstraram que o alho apresenta potencial antifúngico frente S. schenckii. A administração oral de extratos de alho influencia a liberação de citocinas por macrófagos, o consumo regular apresenta efeito anti-inflamatório, e seu uso agudo pode gerar uma resposta inflamatória. Camundongos que consumiram alho responderam de forma mais efetiva no combate da infecção.

Avaliação do estresse oxidativo no sangue de consumidores habituais de suco de laranja / Evaluation of serum oxidative stress in regular consumers of orange juice

Dois biomarcadores do estresse oxidativo foram avaliados em indivíduos saudáveis que receberam doses diárias de suco de laranja, notadamente uma fonte de vitamina C e de flavanonas, que têm sido associadas aos efeitos antioxidante, anti-inflamatório e hipolipidêmico. A capacidade antioxidante do soro sanguíneo foi avaliada através da redução do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazila (DPPH) e a peroxidação lipídica foi avaliada pela presença de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Os resultados mostraram que após o período de suplementação com o suco de laranja houve um aumento 150% na capacidade antioxidante no soro das mulheres e 200% no soro dos homens (p<0,001), mas não houve alteração na peroxidação lipídica no sangue dos voluntários. Concluindo, o aumento das reservas de flavanonas e de vitamina C, decorrente da ingestão regular de suco de laranja, melhorou expressivamente a capacidade antioxidante no sangue, sem, entretanto, apresentar efeito sobre a peroxidação lipídica.

Two biomarkers of oxidative stress were evaluated in healthy volunteers treated with daily doses of orange juice that is well known source of vitamin C and citric flavanones, which have been associated with antioxidant, anti-inflammatory and hypolipidemic effects. The antioxidant capacity in the blood serum was evaluated by studying the scavenging of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical, and also lipid peroxidation was evaluated by the thiobarbituric acid reacting substances (TBARS) assay. The results have shown that the regular consumption of orange juice increased 150% and 200% the serum antioxidant capacity for women and men respectively, but it was no significant change in the serum lipid peroxidation. In conclusion, the increase of flavonones and vitamin C in the body due to the regular intake of orange juice expressively improved the antioxidant capacity, but without significant effect on the lipid peroxidation.

Ação do extrato metanólico e etanólico de Davilla elliptica St. Hill. (Malpighiaceae) na resposta imune / Action of Davilla elliptica St. Hill. (Malpighiaceae) methanolic and ethanolic extracts in the immune response

Plantas têm contribuído no tratamento da maioria das doenças. Considerando a importância terapêutica das plantas medicinais, foi avaliada a atividade imunológica dos extratos metanólico e etanólico de Davilla elliptica. Macrófagos estão envolvidos em todos estágios da resposta imune, podendo liberar componentes como: peróxido de hidrogênio (H2O2), óxido nítrico (NO) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa). A estimulação dos macrófagos foi avaliada pela determinação de H2O2, NO e TNF-alfa em culturas de macrófagos peritoneais de camundongos na presença dos extratos da D. elliptica. IC50 foi determinado através de ensaio utilizando MTT. Os estudos fitoquímicos realizados mostraram a presença de flavonóides derivados da quercetina e miricetina entre outros compostos. A produção de H2O2 não foi muito expressiva em ambos extratos, contudo a de NO foi significativa. Os dois extratos induziram a produção de TNF-alfa, sendo que a liberação dessa citocina pelo extrato metanólico foi quase cinco vezes maior do que pelo extrato etanólico. Uma relação entre as sínteses de NO e TNF-alfa foi observada. O aumento na produção de NO está relacionado com a indução de citocinas pró-inflamatórias como TNF-alfa. Analisando os resultados, sugere-se que os extratos metanólico e etanólico de D. elliptica podem modular a ativação de macrófagos.

Plants have contributed in a significant way to the treatment of most of the diseases. Considering the therapeutic importance of the medicinal plants, the immunological activity of the methanolic and ethanolic extract of Davilla elliptica was evaluated. In every stage of the immune response macrophages are involved and they can release many compounds such as hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha). Macrophages stimulation was evaluated by the determination of H2O2, NO and TNF-alpha in peritoneal macrophages cultures of mice in the presence of the D. elliptica extracts. IC50 was determined by MTT assay. The phytochemical study showed flavonoids derived from quercetin and myricetin and other compounds. The production of H2O2 was not very expressive in both extracts, but they presented a significant effect on NO production. The two extracts induced TNF-alpha production, although the methanolic liberated almost five times more TNF-alpha than the ethanolic one. A relationship among the synthesis of NO and TNF-alpha was observed. The increase of NO production is related with the induction of proinflammatory cytokines like TNF-alpha. Analyzing the results, it is suggested that methanolic and ethanolic extract of D. elliptica can modulate macrophage activation.

Cytotoxicity of chlorhexidine digluconate to murine macrophages and its effect on hydrogen peroxide and nitric oxide induction

Chlorhexidine, even at low concentrations, is toxic for a variety of eukaryotic cells; however, its effects on host immune cells are not well known. We evaluated in vitro chlorhexidine-induced cytotoxicity and its effects on reactive oxygen/nitrogen intermediate induction by murine peritoneal macrophages. Thioglycollate-induced cells were obtained from Swiss mice by peritoneal lavage with 5 ml of 10 mM phosphate-buffered saline, washed twice and resuspended (10(6) cells/ml) in appropriate medium for each test. Cell preparations contained more than 95 percent macrophages. The cytotoxicity was determined by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide assay and the presence of hydrogen peroxide (H2O2) and nitric oxide (NO) by the horseradish peroxidase-dependent oxidation of phenol red and Griess reaction, respectively. The midpoint cytotoxicity values for 1- and 24-h exposures were 61.12 ± 2.46 and 21.22 ± 2.44 æg/ml, respectively. Chlorhexidine did not induce synthesis or liberation of reactive oxygen/nitrogen intermediates. When macrophages were treated with various sub-toxic doses for 1 h (1, 5, 10, and 20 æg/ml) and 24 h (0.5, 1, and 5 æg/ml) and stimulated with 200 nM phorbol myristate acetate (PMA) solution, the H2O2 production was not altered; however, the NO production induced by 10 æg/ml lipopolysaccharide (LPS) solution varied from 14.47 ± 1.46 to 22.35 ± 1.94 æmol/l and 13.50 ± 1.42 to 20.44 ± 1.40 æmol/l (N = 5). The results showed that chlorhexidine has no immunostimulating activity and sub-toxic concentrations did not affect the response of macrophages to the soluble stimulus PMA but can interfere with the receptor-dependent stimulus LPS.

Citotoxicidade de Styrax camporum Pohl em macrófagos peritoneais e a liberação de H202 / Citotoxicity of Styrax camporum Pohl in peritoneal macrophages and H202 liberation

A resposta imunológica engloba contexto amplo envolvendo várias células, sendo o macrófago importante na resposta inflamatória que antecede a resposta imune celular. Existem vários estímulos à membrana macrofágica que podem desencadear a liberação de H2O2, contribuindo para uma ação antimicrobiana e citotóxica. Atualmente há uma forte tendência em se estudar produtos naturais quanto à capacidade de atuação no sistema imunológico. Este estudo avaliou a citotoxicidade do extrato bruto (EB) e das frações hexânica (HX) e acética (AC) extraídos do caule de Styrax camporum Pohl (Styracaceae) e determinou a concentração de H2O2 nos sobrenadantes de culturas de macrófagos peritoneais de camundongos expostos à EB, HX e AC nas concentrações de 4,2 e 1 mg/ml. A fração HX a 2 mg/ml foi capaz de promover significativa liberação de H2O2, quando comparada com Zimosan (controle positivo). Na concentração de 4 mg/ml, HX e EB apresentaram alta toxicidade. A fração AC não promoveu nenhuma liberação de H2O2, enquanto EB produziu baixa liberação. Concluiu-se que a fração HX é um potente estimulador de macrófagos, apresentando toxicidade elevada em altas concentrações

Efeito de um novo produto fermentado de soja sobre os lípides séricos de homens adultos normocolesterolêmicos / Effect of a new fermented soy milk product on serum lipid levels in normocholesterolemic adult men

This study was undertaken to verify the effect of a daily intake of a new fermented soy milk produced with Enterococcus faecium and Lactobacillus jugurti on the serum lipid levels in normocholesterolemic middle-aged men. The study was randomized, double-blind and placebo-controlled and was performed for a period of 6 weeks. Forty-four normocholesterolemic healthy, male volunteers, aged 40-55 years old were randomly separated in two groups: The F-group received 200 ml of the fermented product daily and the P-group received 200 ml of placebo (chemically fermented). The blood samples were drawn initially and after 3 and 6 weeks and serum values for total cholesterol, HDL-cholesterol and triglyceride were determined. The LDL-cholesterol value was estimated. No significant changes in the fermented group (F) were observed for total cholesterol, LDL-cholesterol or triglyceride levels, while the HDL-cholesterol level was significantly higher (p < or = 0.05) after 6 weeks. The total cholesterol and LDL-cholesterol levels were significantly higher (p < or = 0.05) in the placebo group (P), but no changes were found for the HDL-cholesterol and triglyceride levels during the experimental period. In conclusion, the intake of 200 ml/day of the fermented soy milk, produced with E. faecium and L. jugurti, for 6 weeks, did not affect the serum total cholesterol and LDL-cholesterol, and led an increase of 10 per cent in the HDL-cholesterol level.

Ativação de macrófagos por produtos naturais obtidos da Achillea millefolium L. (Asteraceae) / Macrophage activation by natural products from Achillea millefolium L. (Asteraceae)

As plantas têm sido valiosa fonte de produtos naturais para a manutenção da saúde humana. O objetivo deste trabalho foi estudar a atividade imunológica da mil-folhas (Achillea millefolium L.), planta muito utilizada na medicina popular por possuir uma série de ações, como, por exemplo, antiinflamatória, adstringente, anti-séptica e antiespasmódica. Avaliou-se a ativação de macrófagos, determinando-se a liberação de óxido nítrico (NO), peróxido de hidrogênio (N2O2) e do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa) em sobrenadantes de culturas de macrófagos peritoneais de camundongos, na presença do extrato etanólico 70 por cento bruto da mil-folhas. A análise cromatográfica do extrato também foi realizada, revelando presença de rutina. Observou-se liberação moderada de H2O2 em todas as concentrações de extrato testadas, enquanto que somente nas amostras mais concentradas (6,8 e 10mg/mL) ocorreu maior produção de NO. Houve moderada produção de TNT-a em todas as amostras, sendo que a maior ocorreu na concentração de 4mg/mL. Pelos resultados encontrados, sugere-se que o extrato da mil-folhas é um agente modulador da ativação de macrófagos.

Avaliação da atividade imunológica de Achillea millefolium L. ("mil-folhas")

Macrófagos são as primeiras células a participarem da resposta imunológica, e quando são ativados liberam mais de cem compostos ao meio extracelular, entre os compostos reativos intermediários de nitrogênio (NO). Neste trabalho determinou-se a liberação de óxido nítrico em culturas de macrófagos peritoneais de camundongos em presença de óleo essencial bruto e extrato etanólico 70 por cento bruto obtidos a partir de folhas de Achillea millefolim L. (Asteraceae). Diferentes diluições do óleo essencial foram testadas (1:50, 1:100 e 1:200). Apenas a diluição 1:100 produziu uma maior quantidade de óxido nítrico (NO). Em relação ao extrato etanólico 70 por cento, observou-se nas amostras mais concentradas (6 mg/mL, 8 mg/mL e 10 mg/mL) maior produção de NO. Analisando-se os resultados obtidos no presente trabalho, pode-se sugerir que tanto o óleo essencial quanto o extrato etanólico 70 por cento bruto de A. millefolium L são agentes moduladores da ativação de macrófagos, nas concentrações de 20, 10 e 5 mg/mL, quando comparado com LPS (lipopolissacarídeo-potente estimulador da produção de NO).

Interação das enterotoxinas estafilocócicas com o sistema imune do hospedeiro / Interaction of staphylococcal exterotoxins with the immmune system of the host

As enterotoxinas estafilocócicas estão entre as principais causas de intoxicação alimentar e, possivelmente, da síndrome do choque tóxico não menstrual. Essas enterotoxinas são também denominadas de superantígenos, pela capacidade de serem potentes ativadores de células T e macrófagos. Os superantígenos ligam-se diretamente às moléculas classe II do complexo de histocompatibilidade principal sobre as células apresentadoras de antígenos e estimulam células T que expressam os elementos VB do seu receptor. A produção excessiva de citocinas por essas células e pelos macrófagos é responsável pela patôgenese da intoxicação alimentar. Essas citocinas incluem o fator de necrose tumoral-a (TNF-a), o interferon-y (IFN-y), a interleucina-l (IL-1) e mediadores proinflamatórios com potentes efeitos no sistema imune, com o óxido nítrico (NO), que apresenta tanto efeito cintotóxico como regulador.

Macrophage activation by Paepalanthus spp. extracts

Macrófagos são conhecidos por exercerem uma importante função de mecanismo de defesa quando estas células são estimuladas com produtos naturais e produtos bacterianos (dentre outros). Uma variedade de citocinas e compostos químicos são liberados para induzir sistema de defesa fundamental. Entre outros peróxido de hidrogênio (H2O2) tem sido identificado como moléculas tendo multifunções. Entretanto está bem estabelecido que (H2O2) está envolvido em inúmeros processos fisiológicos, como por exemplo, neurotransmissão, relaxamento da musculatura lisa ou regulação imune. Para a determinação de peróxido de hidrogênio (H2O2) em macrófago peritoneal em camundongos, determinou-se a ação imunomodulatória de extratos (etanólico e etanólico 70 por cento) obtidos de quatro espécies do gênero Paepalanthus (Eriocaulaceae) na concentração de 10 mg/mL. Os estratos etanólicos 70 por cento de capítulos de P. Hilairei, P. robustus, P. vellozioides e P. speciocus apresentaram maior liberação de (H2O2) do que os outros extratos etanólicos.

Macrophages are known to play an important role in host defense mechanisms when these cells are stimulated with natural and bacterial products (and others). A variety of cytokines and chemicals compounds are released to induce fundamental defense system. Among them hydrogen peroxide (H2O2) has been identified as molecules having multi-functions. Moreover it has been established that H2O2 is involved is a number physiological processes, e.g., neurotransmission, smooth muscle relaxation or immune regulation. By the determination of hydrogen peroxide (H2O2) in peritoneal macrophage cultures of mice, we determined the immunomodulatory action of two extracts (ethanolic and 70 percent ethanolic) obtained of the four species to the Paepalanthus genus (Eriocaulaceae) in the concentration of 10 mg/mL. The 70 percent ethanolic extracts from capitula of P. hilairei, P. robustus, P. vellozioides . and P. speciosus presented higher liberation of H2O2 than the ethanolic extracts.