La inducción de alcohol oxidasa en levaduras metilotróficas / Induction of alcohol oxidase in methylotrophic yeasts

Se reporta el desarrollo de un micrométodo para la determinación de la actividad de la alcohol oxidasa en levaduras metilotróficas, basado en la gran cantidad de enzima que se acumula en estos microorganismos al crecerlos en presencia de metanol. El método es una modificación del anteriormente reportado por Ellis et al. (1985). La proporción de alcohol oxidasa en extractos celulares de Pichia pastoris y Hansenula polimorpha resultó ser muy alta: 32 % y 34 % de la proteina total respectivamente. La inducción de la enzima ocurre como parte de una respuesta fidiológica general al metanol, que incluye la inducción de otras proteinas y un aumento en el número y tamaño de los peroxisomas. Para obtener una alta actividad de alcohol oxidasa es necesario considerar tres parámetros sencillos: el tiempo de crecimiento en condiciones de represión, la densidad óptica en el momento de la inducción y la duración de la inducción

Secreción de renina de hongo recombinante en Kluyveromyces lactis / Secretion of recombinant fungal rennin in Kluyveromyces lactis

Kleyveromyces lactis es una levadura industrial cuyo uso como hospedero para la expresión de genes cobra interés creciente. El método de transformación desarrollado en el presente trabajo rinde 5x10*transformantes por microgramo de ADN replicativo y de 5 a 10 colonias x 10*g de ADN integrativo. Sólo el 16% de las colonias transformantes pierde la información que porta el lucus de integración, el resto permanece con fenotipo lac+. El gen de la renina del hongo Mucor pusillus fuevexpresado en Kluyveromyces lactis bajo el control del promotor LAC4 y la señal de secreción del factor * de Saccharomyces cerevisiae. La enzima fue secretada eficientemente al medio de cultivo y los niveles de secreción fueron dependientes de la adición de lactosa durante el crecimiento y del Ph de crecimiento