In silico analysis of the biodiversity of endophytic fungi isolated from the Brazilian Cerrado / Análise in silico da biodiversidade de fungos endofíticos isolados do Cerrado brasileiro

Abstract Endophytic microorganisms are those that inhabit the interior of plant tissues and organs without causing damage to the plant, triggering a mutualistic interaction. These endophytes are known to produce compounds with various applications in the areas of biotechnology, pharmaceutical industry and agriculture; therefore, molecular methods are used to investigate the phylogeny of these organisms. The Brazilian Cerrado is the second largest biome in Brazil and is considered a hotspot, with a high diversity of endemic fauna and flora. The objective of this work was to analyze, through in silico analysis, the phylogeny of cultivable endophytic fungi isolated from plants found in the Brazilian Cerrado biome. A search was carried out for articles that worked with endophytes in the period between 2012 and 2022. The dendrogram was generated using the Neighbor-joining method based on the ITS1-5.8S-ITS2 conserved region obtained by GenBank codes of isolated endophytes. The genera Xylaria, Diaporthe, and Colletotrichum were isolated in more than three plants in the seven articles found. Most of the articles found related to the biodiversity of endophytic fungi from the Brazilian Cerrado aim at the bioprospecting of bioactive compounds, through culture-dependent methods; as such, a part of endophytic diversity may be lost due to the inability of certain endophytes to grow in artificial media. In silico analysis can assist in the investigation of phylogenetic relationships between endophytic fungi and has the potential to guide future work aimed at prospecting for bioactive compounds, phylogenetic identification, or biodiversity of this group of endophytes.

Resumo Microrganismos endofíticos são aqueles que vivem no interior de tecidos e órgãos vegetais sem causar dano à planta, desencadeando uma interação mutualística. Esses endófitos são conhecidos por produzir compostos com diversas aplicações nas áreas de biotecnologia, indústria farmacêutica e agricultura; logo, métodos moleculares são utilizados para investigar a filogenia destes organismos. O Cerrado brasileiro é o segundo maior bioma do Brasil e é considerado um hotspot, com uma alta diversidade de fauna e flora endêmica. O objetivo deste trabalho foi analisar, por meio da análise in silico, a filogenia de fungos endofíticos cultiváveis isolados de plantas encontradas no bioma Cerrado brasileiro. Foi realizada uma busca por artigos que trabalharam com endófitos no período entre 2012 e 2022. O dendrograma foi gerado usando o método Neighbor-joining baseado na região conservada ITS1-5.8S-ITS2 obtida pelos códigos GenBank de endófitos isolados. Os gêneros Xylaria, Diaporthe e Colletotrichum foram isolados em mais de três plantas nos sete artigos encontrados. A maior parte dos artigos encontrados relacionados à biodiversidade de fungos endofíticos do Cerrado brasileiro visam à bioprospecção de compostos bioativos, através de métodos dependentes de cultura; como tal, uma parte da diversidade endofítica pode ser perdida devido à incapacidade de certos endófitos crescerem em meios artificiais. A análise in silico pode auxiliar na investigação das relações filogenéticas entre fungos endofíticos e tem potencial para orientar trabalhos futuros voltados à prospecção de compostos bioativos, identificação filogenética ou biodiversidade deste grupo de endófitos.

Diversity of Meliponini and anothers Apiformes (Apidae sensu lato) in a Cerrado fragment and its surrounding, Campo Grande, MS / Diversidade de Meliponini e demais Apiformes (Apidae sensu lato) em fragmento de Cerrado e entorno, Campo Grande, MS

Abstract: The aim of this study was to evaluate the diversity of Meliponini and anothers Apiformes (Apidae sensu lato) from a Cerrado fragment and its surrounding. Malaise traps were installed in a pasture near a fragment of Cerrado and its surrounding, from October to December 2010. Samples were collected at seven-day intervals and preserved in Dietrich solution. The apiforms specimens from each sample were separated in morphospecies and sent to identification. The tribe Meliponini was the most abundant in open areas of pasture than in the Cerrado fragment. The Meliponini species present were Trigona gr. fulviventris, Paratrigona lineata, Trigona recursa, Partamona sp, Trigona spinipes, Trigona gr. hyalinata, Trigona gr. fulviventris, Tetragonisca fiebrigi, Tetragona clavipes, Frieseomelitta cf. flavicornis, Lestrimelitta rufipes. The dominant species was Paratrigona lineata, comprising 82.47% of all species collected.

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade de Meliponini e demais apiformes (Apidae sensu lato) de um fragmento de Cerrado e seus arredores. Armadilhas de Malaise foram instaladas em área de pastagem próximas a fragmento de Cerrado, de outubro a dezembro de 2010. As amostras foram coletadas em intervalos de sete dias e conservadas em solução de Dietrich. Das amostras foram separados os espécimes apiformes em morfoespécies e enviadas para identificação. A tribo Meliponini foi a mais abundante em áreas abertas de pastagem que em áreas de fragmento de Cerrado. As espécies de Meliponini presentes foram de Meliponini Trigona gr. fulviventris, Paratrigona lineata, Trigona recursa, Partamona sp, Trigona spinipes, Trigona gr. hyalinata, Trigona gr. fulviventris, Tetragonisca fiebrigi, Tetragona clavipes, Frieseomelitta cf. flavicornis, Lestrimelitta rufipes. A espécie dominante com 82,47% de indivíduos coletados foi Paratrigona lineata.

In vitro evaluation of the effect of botanical formulations used in the control of Aedes aegypti L. (Diptera: Culicidae) on liver enzymes.

Abstract: INTRODUCTION: Dengue fever is a viral disease transmitted by the Aedes aegypti Linn. (1792) (Diptera: Culicidae) mosquito, which is endemic in several regions of Brazil. Alternative methods for the control of the vector include botanical insecticides, which offer advantages such as lower environmental contamination levels and less likelihood of resistant populations. Thus, in this study, the ability of botanical insecticide formulations to inhibit the activity of the liver enzymes serum cholinesterase and malate dehydrogenase was evaluated. METHODS: Inhibition profiles were assessed using in vitro assays for cholinesterase and malate dehydrogenase activity and quantitated by ultraviolet-visible spectroscopy at 410nm to 340nm. RESULTS Insecticide products formulated from cashew nutshell liquid [A] and ricinoleic acid [B] showed cholinesterase activity levels of 6.26IU/mL and 6.61IU/mL, respectively, while the control level for cholinesterase was 5-12IU/mL. The products did not affect the level of 0.44IU/mL established for malate dehydrogenase, as the levels produced by [A] and [B] were 0.43IU/mL and 0.45IU/mL, respectively. CONCLUSIONS Our findings show that in vitro testing of the formulated products at concentrations lethal to A. aegypti did not affect the activity of cholinesterase and malate dehydrogenase, indicating the safety of these products.

Phytochemistry and larvicidal activity of Spermacoce latifolia Aubl. (Rubiaceae) in the control of Aedes aegypti L. (Culicidae) / Fitoquímica e atividade larvicida de Spermacoce latifolia Aubl. (Rubiaceae) no controle de Aedes aegypti L. (Culicidae)

In the search for alternative ways to control Aedes aegypti with minimal environmental impact and in a manner that preserves human health, this study sought to evaluate the larvicidal effect of the invasive and antioxidant Spermacoce latifolia plant by performing a phytochemical study. Phytochemical screenings were done according to characterization reactions and thin layer chromatography. Phenolics compounds content (Folin-Ciocalteu's) and flavonoids (AlCl3) spectrophotometric was performed, and the antioxidant activity was determined by the 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). The phytochemical results revealed the presence of phenolic, flavonoid, tannin, steroid, free triterpene, coumarin, and alkaloid compounds. The content of total phenols (TPs) (482.7 ± 1.8 mg mgGA g-1) and flavonoids (165.4 ± 1.5 mg QE g-1) accounted for the antioxidant activity of 150 µg mL-1 methanolic extract. In the proposed bioassays, groups of 25 third-stage larvae were challenged at different concentrations of plant crude extract (1.0, 0.5, 0.25, and 0.1 mg mL-1) of weight per volume in four replicates. In multiple concentration tests, the concentrations were selected to range from 0 % to 100 % mortality after 24 hours of contact with the solution. Toxicity was defined as the inhibition or total inactivity of the larvae. It was concluded that the methanol extract had an LC50 of 0.625 mg mL-1, indicating its potential use as a larvicide against A. aegypti and linking its activity to its phenolic and flavonoid components.

Na busca de alternativas de controle do Aedes aegypti que minimizem os impactos ambientais e preserve a saúde humana, procurou-se neste trabalho avaliar o efeito larvicida da planta invasora Spermacoce latifolia e antioxidante e realizar estudo fitoquímico. As análises fitoquímicas foram realizadas por meio de reações de caracterização e cromatografia de camada delgada. O teor de compostos fenólico (Folin-Ciocalteu), flavonoides (AlCI3) foram realizados utilizando a espectroscopia, e a atividade antioxidante foi determinada pelo método DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). Os resultados fitoquímicos indicaram a presença de compostos fenólicos; flavonoides; taninos, esteroides e triterpenos livre, cumarinas e alcaloides. O conteúdo de fenóis totais (482,7 ± 1,8 mgGA g-1) e flavonoides (165,4 ± 1,5 mg QE g-1) justificam a atividade antioxidante de 150 µg mL-1 do extrato metanólico. Nos bioensaios propostos usou grupos de 25 larvas de terceiro estádio, em diferentes concentrações das soluções dos extratos brutos (1,0; 0,5; 0,25 e 0,1 mg mL-1) de peso por volume para quatro réplicas. Nos testes de concentrações múltiplas foram eleitas as concentrações que produziram mortalidade entre 0% e 100%, após o período de 24 horas de contato com as soluções. Foi definida como toxidade a paralisação ou inatividade total das larvas. Conclui-se que o extrato metanólico apresentou CL50 de 0,625 mg L- 1 e indica potencialidade larvicida para o A. aegypti e esta atividade pode estar ligada aos compostos fenólicos e flavonoides.

Controle de mosca-branca em mandioca cultivada em casa de vegetação tratada com extrato de Anacardium humile (Anacardiaceae) / Control of silverleaf whitefly in cassava grown in the greenhouse treated with Anacardium humile (Anacardiaceae) extract

A Bemisia tuberculata (Bondar, 1923) é atualmente a principal praga da cultura da mandioca. Este trabalho descreve o efeito de diferentes concentrações do extrato CHCl3 das folhas de Anacardium humile, em relação à Bemisia tuberculata, em condições de laboratório, em plantas de mandioca, além da composição química deste extrato. O fracionamento do extrato CHCl3 forneceu os triterpenos ácidos: oleanólico, ursólico e betulínico. As estruturas foram determinadas com base nos dados espectrais (RMN-1D e 2D) e subsequente comparação com dados da literatura. O ácido anacárdico foi identificado no extrato CHCl3 por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O extrato CHCl3 causou efeito na mortalidade de ninfas de mosca branca B. tuberculata de 66,30 a 74,90% em todas as dosagens testadas (2; 0,8; 0,4 e 0,006%). A atividade inseticida do extrato CHCl3 de A. humile sobre as ninfas de mosca-branca sugere que os triterpenos isolados podem ser utilizados como modelo para o desenvolvimento de novos inseticidas para o controle deste inseto.

Bemisia tuberculata (Bondar, 1923) is the most important pest of cassava crops. This work describes the effect of different concentrations of CHCl3 extract from the leaves of Anacardium humile in relation to Bemisia tuberculata, under laboratory conditions, in cassava plants and chemical composition of this extract. Fractionation of the CHCl3 extract yielded the triterpene acids: oleanolic, ursolic and betulinic. Their structures were determined on the basis of spectral data (NMR-1D and 2D) and subsequent comparisons with the literature. Anacardic acid was identified in CHCl3 extract by high performance liquid chromatography (HPLC). CHCl3 extract caused mortality of whitefly nymphs of B. tuberculata from 66.30 to 74.90%, in doses tested. The insecticidal activity of CHCl3 extract of A. humile on the nymphs of the whitefly suggests that pentacyclic triterpenes and anacardic acid have potential insecticidal activity.

Evaluation of toxic effects with transition metal ions, EDTA, SBTI and acrylic polymers on Aedes aegypti (L., 1762) (Culicidae) and Artemia salina (Artemidae)

This work aimed to evaluate the toxicity of some insecticides compounds on Aedes aegypti and Artemia salina larvae. Bioassays were carried out to evaluate the toxic effect after of 24 and 72 h using the compounds or associations. The LC10, LC50 and LC90 values were obtained and utilized for toxicity comparations. For Ae. aegypti, LC50 were 32.65 mg L-1 in 24 h for Na2[EDTA-Cu(II)] and total mortality in 72 h for SAP-Na2[EDTA-Cu(II)].

Toxicidade do extrato aquoso das folhas de Anacardium humile para Bemisia tuberculata / Toxicity of aqueous extract of Anacardium humile leaves on Bemisia tuberculata

A mosca-branca Bemisia tuberculata (Bondar, 1923) (Hem.: Aleyrodidae) é uma das principais pragas da cultura da mandioca no Estado do Mato Grosso do Sul; no entanto, não há produtos registrados para seu controle. Produtos vegetais podem constituir em alternativa viável de controle de insetos e, por sua fotodegradabilidade, diminuir os riscos ao ambiente e ao homem. Objetivou-se, por meio deste trabalho, avaliar o efeito do extrato aquoso do "cajuzinho-do-cerrado" Anacardium humile St Hill (Anacardeaceae), nas concentrações de 2,0; 0,8; 0,4 e 0,05 por cento, sobre a biologia de B. tuberculata, bem como identificar a classe de metabólitos secundários presentes no referido extrato. O experimento foi conduzido em casa de vegetação, sob temperatura de 26±4°C. O extrato aquoso de A. humile causou aumento da duração da fase larval e mortalidade significativamente superior à testemunha em todas as concentrações testadas. Concluiu-se que o extrato aquoso de folhas de A. humile provoca mortalidade em ninfas de B. tuberculata e alongamento da fase das ninfas sobreviventes. O extrato aquoso de folhas de A. humile apresenta taninos, açúcares redutores e saponinas, e o seu índice de espuma (Índice Afrosimétrico) é de 1250.

The whitefly Bemisia tuberculata (Bondar, 1923) (Hem.: Aleyrodidae) is the main pest of cassava crops in Mato Grosso do Sul state, however there are no products registered for its control. Plant products may represent a viable alternative for insect pest control and, due to their photo-degradability, they may reduce risks to the environment and to man. The aim of this study is to assess the effect of "cajuzinho-do-cerrado" Anacardium humile St Hill (Anacardeaceae) aqueous leaf extract on the biology of B. tuberculata at the concentrations 2.0; 0.8; 0.4; 0.05 percent, as well as to identify the class of secondary metabolites present in the referred extract. The experiment was carried out in a greenhouse at a temperature of 26±4°C. The aqueous extract of A. humile caused an increase in the duration of the larval phase and a significantly higher mortality rate than the control at all the tested concentration levels. It was concluded that the aqueous extract of A. humile leaves causes mortality in B. tuberculata nymphs and the prolongation of the nymph phase in surviving insects. The aqueous extract of A. humile leaves contains tannin, reducing sugars and saponins, and the foaming rate (Afrosymmetric Rate) is 1250.

The effect of sub-lethal doses of Azadirachta indica (Meliaceae) oil on the midgut of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera, Noctuidae) / Efeito de doses subletais do óleo de Azadirachta indica (Meliaceae) no mesêntero de Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) (Lepidoptera, Noctuidae)

The fall armyworm, Spodoptera frugiperda, is one of the major field pests for maize production. It is mainly controlled by means of synthetic, and more recently by resistant cultivar of maize expressing Bt toxins. The neem tree, Azadirachta indica, is a plant that can potentially control insects with the advantage of being food and environmental safe. The aim of this study was to assess the effect of neem oil on the development and survival of S. frugiperda caterpillars by assessing histological alterations caused on their midgut. Newly hatched caterpillars were submitted to three neem oil concentrations: 0.006; 0.05; 0.4 percent, which were added to their artificial diet. Ten 3rd instar caterpillars, taken from each treatment, were submitted to histological analysis. The alimentary canals from the specimens were fixed in Baker for 12 hours, desiccated and diaphanized in alcohol/xylol (1:1) and xylol. After placing the samples in paraffin, they were sliced in 8 µm sections and stained with hematoxylin-eosin stain. The neem oil added to the diet of S. frugiperda caused total mortality at dose of 0.4 percent whilst still in the first instars, prolonged the larval and pupal stages, and reduced the pupal weight. Histo-physiological alterations such as degeneration of the epithelial lining of the midgut and in the peritrophic matrix were found at all concentrations of neem oil.

A lagarta-do-cartucho, Spodoptera frugiperda, é a mais importante praga da cultura do milho. Esta é usualmente, controlada por inseticidas sintéticos e mais atualmente por meio de variedades resistentes de milho com a toxina Bt. O nim Azadirachta indica é planta com potencial no controle de insetos, que possui as vantagens de segurança alimentar e ambiental. Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito do óleo do nim no desenvolvimento e sobrevivência de lagartas de S. frugiperda em decorrência das alterações no mesêntero. As lagartas recém nascidas foram submetidas a três concentrações do óleo de nim: 0,006; 0,05; 0,4 por cento, adicionadas à dieta artificial. Dez lagartas do 3º instar, retiradas de cada tratamento, foram submetidas à análise histológica. O canal alimentar dos indivíduos foi fixado em Baker por 12 horas, desidratado, diafanizado em álcool/xilol (1:1) e xilol. Após a inclusão em parafina, as amostras foram seccionadas em 8 µm e coradas pela técnica de hematoxilina-eosina. Observou-se que o óleo de A. indica adicionado à dieta de S. frugiperda causa: mortalidade total na dosagem 0,4 por cento nos primeiros instares, aumento na duração do período larval e pupal, redução no peso de pupas. Alterações histofisiológicas, como degeneração do epitélio do revestimento do mesêntero, da matriz peritrófica foram registradas em todas as concentrações do óleo de neem.

Atividade larvicida do óleo de Anacardium humile Saint Hill sobre Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) (Diptera, Culicidae) / Larvicidal activity of Anacardium humile Saint Hill oil on Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) (Diptera, Culicidae)

O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial do cajuzinho do cerrado (Anacardium humile) sobre larvas de Aedes aegypti. Os extratos hexânico, etanólico, aquoso e o óleo das folhas foram obtidos do material vegetal coletado em fragmento de cerrado. Estes foram testados nas concentrações 1 por cento; 0,5 por cento, 0,25 por cento, 0,125 por cento, 0,05 por cento e 0,0125 por cento diluídas em dimetil sulfóxido 1 por cento. A contagem das larvas mortas foi realizada após 24 horas. Utilizou-se o método Probit de análise para obtenção das CL50 e respectivos intervalos de confiança. Conclui-se que apenas o óleo extraído de folhas de Anacardium humile causa 100 por cento de mortalidade em larvas de 4º estádio de Aedes aegypti nas concentrações até 0,125 por cento, o que parece indicar que os ingredientes ativos estão na fase mais apolar. O que indica a potencialidade de uso da planta como larvicida de Aedes aegypti, entretanto, novos testes deverão ser conduzidos utilizando outros órgãos vegetais, assim como outros métodos e solventes utilizados na extração.

The objective of this study was to evaluate the potential of Anacardium humile (monkey nuts) against Aedes aegypti larvae. Hexane, ethanol and aqueous extracts and oil from leaves were obtained from plant material collected from the Brazilian savanna. These were tested at concentrations of 1 percent, 0.5 percent, 0.25 percent, 0.125 percent, 0.05 percent and 0.0125 percent, diluted in 1 percent dimethyl sulfoxide. The dead larvae were counted 24 hours later. The Probit analysis method was used to obtain the LC50 and the respective confidence intervals. The conclusion was that only the oil extracted from Anacardium humile leaves caused 100 percent mortality among fourth-instar Aedes aegypti larvae, using concentrations of up to 0.125 percent. This seems to indicate that the active ingredients are present in the most apolar phase. This indicates that this plant has potential use as a larvicide against Aedes aegypti. However, new tests should be carried out using other plant organs, as well as using other methods and solvents for the extraction.

Eficiência de produtos vegetais no controle da lagarta-do-cartucho-do-milho Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) / Efficience of extracts of plantas in control of fall armyworm in corn Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae)

O presente trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência de produtos vegetais no controle de Spodoptera frugiperda (J.E.Smith, 1797) na cultura do milho. Os experimentos foram instalados, nos anos de 2002 e 2004, com a pulverização dos produtos vegetais em cinco tratamentos, e quatro repetições. No ano de 2002, os produtos testados foram: Azadirachta indica A. Juss. (extrato aquoso 2 por cento), e óleo a 1 por cento; Melia azedarach L. (extrato aquoso 2 por cento); Quassia amara L. (extrato aquoso 2 por cento); óleo de nim, Azadirachta indica 1 e 2 por cento. No ano de 2004, os produtos testados foram: A. indica (extrato aquoso 5 por cento), e óleo a 2 por cento, M. azedarach (extrato aquoso 5 por cento), Trichilia pallida Sw. (extrato aquoso 5 por cento). As avaliações, porcentagem de infestação da lagarta-do-cartucho por parcela, foram efetuadas aos três, sete e dez dias após a pulverização dos extratos. Conclui-se que extratos aquosos das plantas A. indica 2 por cento, T.pallida 5 por cento, Q. amara 2 por cento e M. azedarach 2 por cento e 5 por cento e óleo de A. indica 1 por cento e 2 por cento com adição de tenso ativo não iônico, não possuem eficiência necessária como único método de controle da largarta-do-cartucho S. frugiperda em condições de campo. Os produtos começam a afetar o desenvolvimento da lagarta após alguns dias da ingestão das folhas pulverizadas, observado na avaliação efetuada aos sete dias após a aplicação dos extratos.

The objective of this work was to study the efficiency of vegetable pesticides in the control of Spodoptera frugiperda (J.E.Smith, 1797) in corn culture. The experiments were installed, in the years of 2002 and 2004, with the spraying of the vegetable products in five treatments, and four repetitions. In the year of 2002 the tested products were: Azadirachta indica A. Juss (aqueous extract 2 percent), and oil at 1 percent; Melia azedarach L. (aqueous extract 2 percent); Quassia amara L. (aqueous extract 2 percent); nim oil, Azadirachta indica 1 and 2 percent. In the year of 2004 the tested products were: A. indica (aqueous extract 5 percent), and oil at 2 percent, M. azedarach (aqueous extract 5 percent), Trichilia pallida Sw. (aqueous extract 5 percent). The evaluations like percentage of infestation of the fall armyworm per plot, were made three, seven and ten days after the extracts application respectively. It was possible to verify that aqueous extracts of the plants A. indica 2 percent, T. pallida 5 percent, Q. amara 2 percent and M. azedarach 2 percent and 5 percent and A. indica oil 1 percent and 2 percent with addition of non ionic active tense, don't possess necessary efficiency as the only control method of the fall armyworm S. frugiperda in field conditions. The products begin to affect the development of fall armyworms some days after the ingestion of the powdered leaves, observed in the seven days after the extracts application.

Efeito residual do extrato acetato de etila de Trichilia pallida Swartz ( Meliaceae ) para lagartas de diferentes idades de Spodoptera frugiperda ( J. E. Smith, 1797 ) ( Lepidoptera: Noctuidae ) / Residual effect of ethyl acetate extract of Trichilia pallida Swartz ( Meliaceae ) for Spodoptera frugiperda ( J. E. Smith, 1797 ) ( Lepidoptera: Noctuidae ) larvae of diferents ages

Inseticidas de origem vegetal mostram limitada persistência em condições ambientais já que são degradados pela temperatura, por raios ultravioletas e por outros fatores ambientais. Com o objetivo de avaliar o efeito residual do extrato acetato de etila de Trichilia pallida, plantas de milho cultivadas em casa de vegetação foram pulverizadas com o referido extrato na concentração de 2 por cento, e as suas folhas utilizadas para alimentação de lagartas de Spodoptera frugiperda, em laboratório. As folhas foram oferecidas às lagartas aos 1, 3 e 7 dias após a pulverização, correspondendo cada época a um tratamento. Foram utilizados dois grupos de lagartas: recém-eclodidas e com 10 dias de idade. As folhas foram trocadas diariamente e, 10 dias após o início do experimento, foram avaliados a mortalidade, a largura da cápsula cefálica e o peso das lagartas. Verificou-se que, nas três épocas, o extrato reduziu a sobrevivência e prolongou o desenvolvimento larval. A intensidade destes efeitos foi maior quanto menor o intervalo entre a aplicação do extrato e o início do fornecimento das folhas aos insetos. Lagartas alimentadas com folhas tratadas com o extrato desde a eclosão foram mais afetadas que aquelas alimentadas a partir dos 10 dias.