Cut-off values of immunological tests to identify patients at high risk of severe lupus nephritis

Cut-off values for anti-dsDNA, anti-nucleosome and anti-C1q antibodies tests and for complement-mediated hemolytic activity (CH50) were explored to identify patients with high risk of developing severe lupus nephritis (LN). Forty-one patients with confirmed systemic lupus erythematosus (SLE) were identified; their levels for the three antibodies and complement had been measured on a same serum sample. These patients were classified based on the presence of renal involvem ent; sixteen had active proliferative LN. With the cut-off values accepted in the laboratory for SLE diagnosis (anti-dsDNA > 100 UI/ml, anti-nucleosome > 50 U/ ml or CH50 < 190 UCH50%) no significant differences were found between patients with and without LN. Anti-C1q > 40 U/ml showed a statistically significant association with LN and had 80% of specificity. Cut-off values for LN identified by Receiver Operating Characteristic curves (ROC) were higher for anti-dsDNA (> 455 IU/ml) and anti-nucleosome (>107 U/ml), lower for CH50 (< 150 UCH50%) and, for anti-C1q (> 41 U/ml) coincided with the cut-off values accepted for SLE. Anti-C1q > 134 U/ml had a 92% of specificity, 56% of sensibility and was associated with a fifteen-fold increased risk of LN. The simultaneous presence of anti-nucleosome > 107 U/ml and anti-C1q > 134 U/ml was associated with a 27-fold higher probability for LN. According to these results, the cut-off values used to detect SLE activity could be inadequate to identify patients at high risk of severe LN.

Se exploraron valores de corte para los ensayos de anti-ADNdc, anti-nucleosoma, anti-C1q y complemento hemolítico total (CH50) capaces de identificar los casos con mayor riesgo de nefritis lúpica (NL) grave. Se seleccionaron 41 pacientes ≥ 16 años con lupus eritematoso sistémico (LES) confirmado que tenían titulados los niveles de los tres anticuerpos y CH50, en una misma muestra de suero. Fueron clasificados según presencia de compromiso renal; 16 presentaron formas proliferativas de NL activa. Con los valores de corte aceptados por el laboratorio para el diagnóstico de LES (anti-ADNdc > 100 UI/ml, anti-nucleosoma > 50 U/ml o un CH50 < 190 UCH50%) no se encontraron diferencias significativas entre casos con y sin NL. Un anti-C1q > 40 U/ml tuvo una especificidad del 80% y mostró una asociación estadísticamente significativa con NL. Al aplicar curvas Receiver Operating Characteristic (ROC) para NL, se identificaron valores de corte más altos para anti-ADNdc (> 455 IU/ml) y anti-nucleosoma (> 107 U/ml), más bajo para CH50 (< 150 UCH50%) y para el anti-C1q (> 41 U/ml) coincidió con el aceptado para diagnóstico de LES. Un anti-C1q > 134 U/ml presentó una sensibilidad del 56%, una especificidad del 92% y se asoció con quince veces más riesgo de NL. La presencia simultánea de anti-C1q > 134 U/ml y anti-nucleosoma > 107 U/ml se asoció 27 veces más riesgo de NL. De acuerdo a estos resultados los valores de corte empleados para actividad en pacientes con LES podrían resultar inadecuados para identificar pacientes con mayor riesgo de NL grave.

Suero de conejo con actividad de complemento para tipificación del complejo mayor de histocompatibilidad humano / Rabbit serum with complement activity to typify human major histocompatibility complex

En el ensayo de microlinfocitotoxicidad, el suero de conejo como fuente de complemento desempeña un rol esencial en la clasificación del complejo mayor de histocompatibilidad humano, tanto para la tipificación antigénica como en el cross-match linfocitario de la pareja donante-receptor antes de realizar los trasplantes. En este trabajo, se obtuvieron 3 lotes experimentales de dicho hemoderivado con óptimos indicadores de rendimiento, actividad biológica y estabilidad. El exanguíneo de los animales se realizó por la técnica de yugulación. El suero fue separado por centrifugación en condiciones ambientales y de temperatura controladas. Posteriormente, el producto se sometió a filtración esterilizante y se tomaron muestras para los ensayos de calidad. El estudio mostró que el producto conserva la actividad biológica al menos durante 18 meses y que los valores de citotoxicidad se encuentran dentro de los límites de aceptación para su empleo en los ensayos de histocompatibilidad pretrasplante

Microlinfocitotoxicity assay is one of the serological methods used to classify human major histocompatibility complex. In this technique the rabbit´s serum as complement source, plays an essential role in antigens determination and in lymphocytes cross match assay as necessary stage before the selection of the best donor-receiver pair to realize the organ transplant. Three experimental lots of normal rabbit serum were developed with excellent indicators of efficiency, biological activity and stability. Rabbit's blood was obtained through jugulating technique and serum was separated by centrifugation in controlled environment and temperature´s conditions. The sterilization process was performed by filtration and the samples were taken for quality´s control assays. Stability studies showed that the product kept the biological activity at least during 18 months after it was processed and cytotoxicity's values were adequate for its employment in histocompatibility pre-transplant assays

Determinación de la actividad anti-C3d en reactivos antiglobulina humana / Determination of the anticomplement activity in human antiglobulin reagent

La evaluación de la actividad de anti-C3d en reactivos de Coombs poliespecíficos, con los procedimientos clásicos presenta, según la experiencia de los autores, dificultades técnicas y falta de reproductibilidad. El objetivo de este trabajo fue describir una técnica para controlar la actividad de los reactivos antiglobulina humana (AGH) poliespecíficos y monoespecíficos anti-C3d, utilizando glóbulos rojos de carnero (GRc) sensibilizados con fragmentos de complemento (C'). La obtención de GRc sensibilizados con C3d, se evaluó con reactivos de calidad certificada por la firma comercial. Se obtuvieron reacciones de aglutinación francamente positivas con reactivos de Coombs poliespecíficos y con reactivos anti-C3d, -C3d monoespecíficos. La sensibilidad, especificidad y sencillez de esta técnica induce a proponerla dentro del protocolo de Control de Calidad de los antisueros AGH poliespecíficos y anti-C3d, -C3d, utilizados de rutina en los Servicios de Medicina Transfusional

Hyperimmune antirabies sera titration by standard mouse neutralization and counterimmunoelectrophoresis tests, comparing results of different laboratories

Para a determinacao do nivel de anticorpos de vinte quatro amostras de soros equinos hiperimunes contra a Raiva, foram utilizadas as tecnicas de soroneutralizacao em camundongos (SN) e contraimunoeletroforese (CIE). As provas foram realizadas nos Institutos Butantan (IB) e Panamericano de Proteccion de Alimentos y Zoonosis (INPPAZ). A analise estatistica mostrou que para o SN e CIE feitas no IB, a correlacao foi de r=0,9317, enquanto que no INPPAZ foi de r=0,974. Comparando-se os dados obtidos pelo CIE nos dois laboratorios observou-se uma correlacao de r=0,845. A tecnica de CIE demonstrou ser tao sensivel e eficiente quanto a SN na titulacao de soros anti-rabicos hiperimunes de origem equina. Assim, com base nos resultados de CIE, que e uma tecnica simples, rapida e economica, pode-se estimar os titulos de anticorpos dos soros em SN.

Critical study of the effect of temperature on total serum complement determination

Basic rules establish that the total serum complement determination (CH50) should be done after quick serum separation at 4 degrees Celsius. When there is a long period between blood sample collection and laboratory tests, the results may not be exact, with findings being below normal level due to thermolability and dysfunction of some of the components. Sera from 15 normal individuals and 15 patients with Systemic Erithematous Lupus (SEL) were studied. CH50 determinations were performed by the radial immunohemolysis technique according to the above basic rules and compared to determinations performed after 4, 8, 12 and 24 h in sera maintained at room temperature and after 24 h in those maintained at 4 degrees Celsius. Five samples (2 controls and 3 lupoid) were stored at -2O degrees Celsius and -7O degrees Celsius. CH50 determinations were performed weekly in sera kept at -2O degrees Celsius and after l month in those stored at -7O degrees Celsius. Analysis of the results suggest that, if blood samples are kept at room temperature and the determination is performed within about 8 h, the results are still reliable, that is, they will be within normal levels. The same will happen if the sera are stored at -2O degrees Celsius or -7O degrees Celsius for up to l month.

Determinacion de los valores de la actividad hemolitica del complemenmto en individuos normales de la ciudad de La Paz / Determination of the values of hemolitic activity of complement in personal subjects of the city of La Paz

Los resultados obtenidos de la actividad hemolitica del Complemento en nativos e inmigrantes, muestra que no existen diferencias significativas al comparar ambos grupos. Probablemente una adaptacion rapida a nuestro medio no permitiria mostrar ningun cambio en la actividad hemolitica en nuestro estudio.