Clinical Significance of Quantitation of WT1 Gene Expression for Minimal Residual Disease Monitoring of Acute Myelogenous Leukemia / 대한진단검사의학회지

BACKGROUND: Following induction chemotherapy for AML, a sensitive determination of minimal residual disease (MRD) in patients achieving complete remission (CR) should enable the detection of early relapse. This study was designed to verify if quantitative assessment of the Wilms' tumor (WT1) gene by real time polymerase chain reaction (RQ-PCR) can be used as a marker for MRD detection during the monitoring of AML. METHODS: WT1 gene expression was quantified by RQ-PCR in 31 patients with AML at diagnosis (27 patients) and during follow-up (29 patients) relative to ABL control gene. In four patients, the WT1 gene expression was analyzed in comparison to a second PCR marker, PML-RARA fusion transcript. Prognostic significance of WT1 gene expression was analyzed at diagnosis and at the primary CR evaluation. Longitudinal WT1 gene analysis was performed in 17 AML patients. RESULTS: At diagnosis, WT1 gene expression exceeded the control level in all of the patients. Higher levels of WT1 gene expression were not associated with shorter event free survival or overall survival at diagnosis. Higher levels of WT1 gene expression were associated with shorter event free survival after induction chemotherapy. Relapse was observed in eight of 17 patients analysed longitudinally, and an increase of WT1 gene expression preceded morphologic relapse in four patients with the fusion transcript negative. Concomitant monitoring of PML-RARA fusion transcript reveals the lack of a significant correlation withWT1 gene expression. CONCLUSIONS: Quantitation of WT1 gene expression could be used for MRD monitoring of AML and for the early detection of relapse, especially in patients lacking specific molecular markers.

Citoquímica hematológica / Hematological cytochemistry

Se revisan la aplicación y utilidad diagnóstica de los principales métodos citoquímicos en diferentes trastornos hematológicos. Se describen las técnicas siguientes: hemosiderina y sideroblastos, fosfatasa alcalina leucocitaria, mieloperoxidasa, reacción con ácido peryódico-Schiff (PAS), fosfatasa ácida, esterasas específicas e inespecíficas; con indicaciones sobre procedimientos e interpretación de resultados acorde con la experiencia de los autores. Se propone un algoritmo para el estudio de leucemias agudas y se expone un amplio material fotográfico que abarca a todas las técnicas empleadas

Presentación de caso: Leucemia Mieloide Aguda diagnosticada por tinciones citoquímicas e inmunotipificación / Report of case: Leukemia miloide sharp diagnostic by stains citogeneticas and inmunotipificacion

Las leucemias y estados preleucémicos fueron clasificados inicialmente en base a criterios morfológicos, de acuerdo a la clasifiación FAB (French-American-Brithish). Posteriormente, estos fueron complementados con información obtenida de tinciones citoquímicas, que detectan enzimas o sustancias propias de cada linaje. Sin embargo, esta clasificación, eminentemente morfológicas, tiene limitaciones relacionadas con el porcentaje de blastos encontrados en los extendidos de médula ósea, además del número de blastos positivos para algunas enzimas, como es el caso de la mieloperoxidasa. Por otro lado, algunas de las categorías FAB no son reproducibles y no es posible identificar leucemias bifenotípicas con estos criterios. El desarrollo de las técnicas inumocitoquímicas, juntamente con la tecnología de anticuerpos monoclonales (AcM) ha hecho posible la determinación de moléculas de superficie celular y/o intracitoplasmáticos, que caracterizan las diferentes líneas hematopoyéticas, además de los diferentes estadíos de maduración y diferenciación de las células sanguíneas (1, 2, 3, 4). Por tanto el uso de AcM en la caracterización de las células leucémicas, conocido como inmunotipificación, se ha expandido ampliamente en la última década; numerosos estudios remarcan la especificidad de los mismos para discriminar las diferentes variedades de leucemias agudas y los estadios de maduración de las células malignas (1,5), criterios que son importantes para definir la terapia y establecer el pronóstico en cada caso (1, 5, 6). Hasta 1997, nuestro medio se vió privado de acceder al diagnóstico de neoplasias hematológicas por inmunotipificación, es en noviembre de ese año que el Instituto SELADIS comienza la oferta de este importante servicio diagnóstico, juntamente con la caracterización de base a tinciones citoquimicas, aproximación diagnóstica ofertada también en forma pionera. El presente trabajo está basado en la presentación de un caso diagnosticado de Leucemia Mieloide Aguda tipo M4, mediante tinciones citoquímicas e inmunotipificación, como un ejemplo del diagnóstico integrado, combinando estos criterios