Histopathological and immunophenotypical characterization of canine multicentric lymphoma in Brazil: a study of 203 cases / Caracterização histopatológica e imunofenotípica do linfoma multicêntrico canino no Brasil: um estudo de 203 casos

The immunophenotype is regarded as an independent prognostic factor in high-grade lymphomas, seeing that lymphomas of T-cell origin are associated with shorter survival time. Although a number of studies have evaluated the immunophenotypical profile of lymphoma in the USA and Europe, Brazilian research on the matter remains scarce. Exact characterization of the histopathological type is crucial to establish proper treatment and prognosis. This study evaluated the database of immunohistochemistry laboratories that perform immunophenotyping of canine lymphoma in Brazil. A total of 203 cases of multicentric lymphoma were classified according to the WHO classification. Immunophenotyping was able to identify 71.4% lymphomas of B-cell line, 27.1% of T-cell line and 1.5% of non-B cells and non-T cell lines. Diffuse large B-cell lymphoma was the most common with 59.1% of the cases. Among T-cell lymphomas, lymphoblastic was the most common (11.33% of the cases). Even though canine lymphomas tend to be high-grade, indolent lymphomas comprised 11.82% of the cases and T-zone lymphoma was the most prevalent (8.86%). The immunophenotype of multicentric lymphoma in Brazil is similar to those in other parts of the world, which suggests similar etiologic factors to the development of this disease.(AU)

O imunofenótipo é considerado um fator prognóstico independente em linfomas de alto grau, visto que os linfomas de origem de células T estão associados a menor tempo de sobrevida. Apesar de vários estudos terem avaliado o perfil imunofenotípico do linfoma nos EUA e na Europa, a pesquisa brasileira sobre o assunto ainda é escassa. A caracterização exata do tipo histopatológico é crucial para estabelecer o tratamento e o prognóstico adequados. Este estudo avaliou a base de dados de laboratórios de imuno-histoquímica que realizam imunofenotipagem do linfoma canino no Brasil. Um total de 203 casos de linfoma multicêntrico foi classificado de acordo com a classificação da OMS. A imunofenotipagem foi capaz de identificar 71,4% dos linfomas da linhagem de células B, 27,1% da linhagem de células T e 1,5% das linhagens de células não B e não T. O linfoma difuso de grandes células B foi o mais comum em 59,1% dos casos. Entre os linfomas de células T, o linfoblástico foi o mais comum (11, 33% dos casos). Embora os linfomas caninos tendam a ser de alto grau, os linfomas indolentes representaram 11,82% dos casos e o linfoma da zona T foi o mais prevalente (8,86%). O imunofenótipo do linfoma multicêntrico no Brasil é semelhante ao de outras partes do mundo, o que sugere fatores etiológicos semelhantes ao desenvolvimento dessa doença.(AU)

L-asparaginase de Erwinia chrysanthemi: expressão proteica livre de células e bioconjugação a bacteriófagos / L-asparaginase from Erwinia chrysanthemi: cell-free protein expression and bioconjugation to bacteriophages

A L-Asparaginase (L-ASNase) de Erwinia chrysathemi (ErA) é uma enzima amplamente utilizada para o tratamento da leucemia linfoblástica aguda (LLA). Embora o seu uso como segunda linha de tratamento para a LLA tenha proporcionado consideráveis benefícios clínicos, reações de hipersensibilidade e rápida depuração plasmática ainda são problemas recorrentes. Ademais, extensivos e custosos processos de produção da ErA são necessários para a obtenção da enzima pura. Com base nesses problemas, o presente trabalho propõe (1) o estudo de viabilidade de expressão da ErA em um sistema de síntese proteica livre de células (SPLC) e (2) a conjugação da proteína em bacteriófagos como ferramenta alternativa para o isolamento e monitoramento da depuração plasmática da ErA. Foram utilizados extratos celulares de Escherichia coli suplementados com solução energética contendo creatina fosfato (CP) como fonte de energia para síntese in vitro de ErA. Para conjugação da ErA a bacteriófagos, o sistema SpyTag/SpyCatcher foi implementado: SpyCatcher foi fusionado à porção N-terminal da ErA e bacteriófagos filamentosos da linhagem M13 e fd foram modificados de modo a expressar SpyTag nas proteínas de capsídeo pIII e pVIII, respectivamente. Em relação ao primeiro objetivo, o sistema de SPLC foi capaz de expressar a ErA com atividade. A proteína foi expressa na fração solúvel e apresentou atividade enzimática significativamente superior em relação à reação controle (7,07 ± 0,68 U/mL vs. 1,83 ± 0,14 U/mL). Tempo necessário para obtenção do extrato celular foi reduzido de 45 para 26 hrs, e sete componentes da solução energética foram removidos da composição original sem implicações negativas na eficiência de expressão da ErA, simplificando desta forma o processo de SPLC. Em relação ao segundo objetivo, ErA fusionada à SpyCatcher (SpyCatcher_ErA) foi conjugada com êxito em bacteriófagos capazes de expressar SpyTag fusionadas na porção N-terminal das proteínas pIII (SpyTag_pIII) e pVIII (SpyTag_pVIII). A porcentagem de formação dos conjugados entre SpyCatcher_ErA e SpyTag_pIII ((ErA)5-pIII) foi de 6% enquanto formação dos conjugados entre SpyCatcher_ErA e SpyTag_pVIII ((ErA)50-pVIII) foi de 46%, valores estes confirmados por atividade enzimática. Solução contendo conjugados foram injetados em camundongos e sequenciados/titulados com êxito. Não houve diferença de depuração plasmática entre (ErA)5-pIII e bacteriófago controle, mas houve maior taxa de eliminação de (ErA)50-pVIII em relação ao mesmo bacteriófago não conjugado à SpyCatcher_ErA. Os resultados aqui apresentados confirmam ser possível expressar ErA com atividade biológica em sistemas de SPLC. Além disso, o sistema de conjugação da ErA a bacteriófagos aqui desenvolvido foi capaz de monitorar a concentração de ErA presente na circulação em função do tempo, tornando-se uma potencial plataforma de desenvolvimento de novas proteoformas da ErA com características clínicas melhoradas

L-Asparaginase (L-ASNase) from Erwinia chrysanthemi (ErA) is a widely used enzyme for treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL). Although its use as a second-line treatment has provided significant clinical benefits, hypersensitivity reactions and a fast clearance rate are recurring L-ASNase-related problems. In addition, extensive and costly production processes are required for the manufacturing of pure ErA. Based on these drawbacks, this current work proposes (1) the study of the use of a cell-free protein synthesis (CFPS) system as a viable platform for the synthesis of ErA and (2) the conjugation of the protein on bacteriophages as an alternative tool for the isolation and monitoring of ErA clearance. Escherichia coli-derived cell extracts supplemented with a creatine phosphate-based energy solution were used to synthesize ErA in vitro. To conjugate ErA on bacteriophages, the SpyTag/SpyCatcher system was implemented: SpyCatcher was fused to the N-terminus of the ErA while filamentous phage strains M13 and fd were engineered in order to display SpyTag on their pIII and pVIII capsid proteins, respectively. Regarding the first goal, the CFPS system was able to express an active ErA. The protein was expressed in the soluble fraction and there presented a significant higher enzymatic activity compared to the control reaction (7.07 ± 0.68 U/mL vs. 1.83 ± 0.14 U/mL). Time required to obtain the cell extract was reduced from 45 to 26 hours, and seven energy solution reagents were removed from the original solution without compromising the efficiency of ErA expression, thus simplifying the CFPS process. With respect to the second goal, ErA fused to SpyCatcher (SpyCatcher_ErA) was sucessfully conjugated on bacteriophages capable of displaying SpyTag fused to the Nterminus of the pIII (SpyTag_pIII) or pVIII (SpyTag_pVIII) proteins. Percentage of conjugate formation between SpyCatcher_ErA and SpyTag_pIII (ErA)5-pIII was 6% whereas conjugate formation between SpyCatcher_ErA and SpyTag_pVIII (ErA)50-pVIII was 46%, values that were confirmed by enzymatic activity. Sample containing conjugates were injected into mice and sucessfully sequenced/titrated. No clearance differences were observed between (ErA)5- pIII and a control bacteriophage, but a higher clearance rate was observed for (ErA)50-pVIII compared to SpyTag_VIII non conjugated to SpyCatcher_ErA. The results here presented confirm the expression of a biologically active ErA from a CFPS system. Besides, the development of a conjugation system capable of linking ErA to bacteriophages could be used as a means to monitor the ErA concentration in the blood as a function of time and also as a potential platform to be used in the development of novel ErA proteoforms with improved clinical properties

Produção de L-asparaginase pela levedura Leucosporidium muscorum CRM 1648 isolada de sedimento marinho coletado na Península Antártica / L-asparaginase production by the yeast Leucosporidium muscorum CRM 1648 isolated from marine sediments collected in Antarctic Peninsula

L-asparaginase (L-ASNase) é uma enzima com propriedades interessantes para a indústria médica, farmacêutica e de alimentos, que tem recebido atenção especial, inclusive no Brasil, por fazer parte do protocolo de tratamento de distúrbios linfoproliferativos, como a leucemia linfoblástica aguda (LLA). No mercado desde a década de 1970, as enzimas de origem bacteriana enfrentam algumas limitações por provocarem reações adversas graves em quase 80% dos pacientes em tratamento. Nesse contexto, L-ASNases provenientes de leveduras se destacam como alternativa, por serem mais próximas às congêneres humanas. A Antártica ainda é um ambiente pouco explorado, com grande diversidade de microrganismos com potencial para a produção de moléculas biológicas de interesse industrial. Nesse contexto, 150 leveduras isoladas de amostras de sedimento marinho coletadas na Península Antártica como parte do projeto MICROSFERA (PROANTAR/CNPq) foram avaliadas para a produção de L-ASNase. A triagem resultou em 9 isolados produtores, dos quais 7 pertencem ao gênero Leucosporidium. A linhagem L. muscorum CRM 1648 foi a que produziu mais enzima (540 U.L-1), com maior produtividade (5,6 U.L-1.h-1) e, por isso, foi alvo deste estudo. A análise univariada de fontes de carbono e nitrogênio indicou maior crescimento desse microrganismo e produção de L-ASNase em meio CD com extrato de levedura, prolina e sacarose. Ureia, cloreto de amônio e sulfato de amônio resultaram em baixa ou nenhuma produção da enzima, sugerindo que a metabolização de fontes de nitrogênio por essa linhagem está sob a influência do fenômeno de repressão catabólica pelo nitrogênio (RCN). Dois delineamentos experimentais do tipo fatorial completo resultaram em um aumento de 10 vezes na produção e produtividade da enzima (4582,5 U.L-1 e 63,6 U.L-1.h-1, respectivamente). A análise univariada da concentração inicial de inóculo (X0), pH inicial do meio, temperatura e adição de água do mar mostrou que a melhor condição para a produção foi: pH = 5,5 ou 6,5, cultivo a 15°C com adição de água do mar (25-50% m/v). A variável X0 não foi significativa nas concentrações avaliadas. Cultivos em biorreator (batelada) foram conduzidos em quatro diferentes níveis de oxigênio dissolvido (OD): (1) OD não controlado e abaixo de 20%, (2) OD não controlado e acima de 20%, (3) OD controlado em 80% e (4) OD controlado em 20%. Os resultados mostraram que OD é fator limitante para o crescimento de L. muscorum CRM 1648 e produção de L-ASNase por essa levedura e deve ser mantido acima de 35% para maior produção da enzima.Neste trabalho, a composição do meio e condições de cultivo foram estabelecidas para favorecer a produção de uma nova L-ASNase livre de atividade glutaminásica por levedura adaptada ao frio, abrindo espaço para novos estudos acerca de seu potencial antileucêmico e possível uso como alternativa às enzimas já existentes no mercado no tratamento de LLA

L-asparaginase (L-ASNase) is an enzyme with interesting properties for medical, pharmaceutical and food industry, which has received special consideration, especially in Brazil, for being part of lymphoproliferative disorders treatment, such as acute lymphoblastic leukemia (ALL). Bacterial enzymes are on the market since the 1970s and face some limitations related to theirserious adverse reactions that reach almost 80% of all patients in treatment. In this context, L-ASNases from yeasts are highlighted as important alternative to bacterial enzymes, due to the closerphylogeny to human congeners. Antarctic environment has much to be explored, with a vast diversity of microorganisms with potential to produce biomolecules with industrial interest. A total of 150 yeasts isolated from Antarctic marine sediments as part of MICROSFERA project (PROANTAR/CNPq) were evaluated for L-ASNase production. The screening resulted in 9 producers, 7 species from the genus Leucosporidium. L. muscorum CRM 1648 was the strain that yielded the highest L-ASNase activity (540 U.L-1) and volumetric productivity (5.6 U.L-1.h-1). Carbon and Nitrogen sources were evaluated by a method of one-factor at a time (OFAT). From the gather results, sucrose, yeast extract and proline resulted in a maximal growth and highest enzyme production.The absence or low production of L-ASNase in medium with urea, ammonium chloride and ammonium sulfate suggests the presence of nitrogen catabolic repression (NCR). Carbon and nitrogen concentration were evaluated by full factorial design and yielded about ten times higher enzyme and volumetric productivity (4582.5 U.L-1 and 63.6 U.L-1.h-1, respectively). Initial inoculum concentration (X0), initial pH, temperature and concentration of seawater in the culture were evaluated by OFAT analysis and the best condition for L-ASNase production was: pH = 5.5 or 6.5, at 15 °C with addition of seawater (25-50 wt%). X0 was not considered a significant variable. Bioreactor assays (in batch regime) were performed in four different dissolved oxygen (DO) levels: (1) without DO control (DO remained under 20%), (2) without DO control (DO remained above 20%), (3) DO controlled at 80%, and (4) DO controlled at 20%.The results showed that DO is a key factor for growth of L. muscorum CRM 1648 and production of L-ASNase by this yeast and should be maintained above 35% for higher production of this enzyme.At this work, the medium and culture conditions were established to support the production of a novel glutaminase-free L-ASNase by a cold adapted yeast, opening a new path for further studies regarding its antileukemic potential and possible use as an alternative for ALL treatment

Estudos estruturais e funcionais de Tsa1 de Saccharomyces cerevisiae: um modelo biológico para o estudo de inibidores de crescimento celular para leucemia linfoide aguda / Functional and structural evaluation of Tsa1 from Saccharomyces cerevisiae: a biological model for study of cellular growth inhibitors for acute lymphocytic leukemia

As peroxirredoxinas (Prx) são enzimas antioxidantes que se destacam pela capacidade de decompor uma grande variedade de hidroperóxidos com elevada eficiência (106-108M-1s-1), mantendo essas moléculas em níveis adequados à homeostase celular. Entretanto, já foi demonstrado que em diversos tipos tumorais os níveis de Prx são extremamente aumentados e experimentos envolvendo sua inativação resultam na diferenciação ou apoptose de células tumorais. Recentemente, foi descoberto um diterpenóide denominado adenantina que seria o primeiro inibidor para as Prx1 e Prx2 de humanos e foi demonstrada que sua aplicação em células de leucemia mieloide aguda promoveu diferenciação ou apoptose dessas células. Nesse contexto, o presente trabalho apresenta duas vertentes: 1) A caracterização das alterações estruturais e funcionais promovidas pela ligação da adenantina ao sítio ativo das Prx utilizando Tsa1 de Saccharomyces cerevisiae como modelo biológico, em função da sua alta similaridade com Prx2 de humanos; 2) Avaliação da atividade antitumoral dose dependente de adenantina sobre as linhagens celulares REH e MOLT-4 de leucemia linfoide aguda. No que concerne à primeira linha de investigação, nossos resultados revelam que Tsa1 é suscetível à inibição por adenantina, uma vez que o tratamento reduziu em ~66 % a velocidade de decomposição de peróxido de hidrogênio. Adicionalmente, a mutação da Thr44 de Tsa1, pertencente à chamada tríade catalítica, por uma Ser resultou em uma proteína mais suscetível a alterações na estrutura secundária e à inibição da atividade peroxidásica em função da ligação com adenantina, apresentando uma diminuição de ~85% na velocidade de reação. Características semelhantes foram observadas para a proteoforma Tsa2 de S. cerevisiae, que carreia naturalmente a substituição da Thr44 pela Ser. Análises de sequências de Prx em bancos de dados revelaram que majoritariamente proteínas contendo Ser são encontradas em organismos procariotos, muitos deles patogênicos. Finalmente, demonstramos por meio de ensaios citotoxicidade que as bactérias Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis, que possuem uma Ser na tríade catalítica, têm seu crescimento inibido pelo tratamento com adenantina (IC50 de 460µM e 77µM, respectivamente), enquanto que para Escherichia coli, que possui Thr nessa posição, a toxicidade da adenantina foi bastante baixa (não foi possível determinar o IC50 nas condições utilizadas). Dessa forma, os dados apresentados neste trabalho demonstram o potencial da utilização da adenantina tanto como antibiótico quanto como antileucêmico

Peroxiredoxins (Prx) are antioxidant enzymes which stand out due the ability to decompose a wide variety of hydroperoxides with high efficiency (106-108M-1s-1) maintaining these molecules at suitable levels to cellular homeostasis and participating in several signaling events. However, it has been shown that, in many tumor types, Prx levels are extremely increased and experiments involving its inactivation have resulted in differentiation or apoptosis of tumor cells. It was recently found a diterpenoid, called adenanthin, that would be the first human Prx1 and Prx2 inhibitor and it was demonstrated that its application in acute myeloid leukemia cells was able to promote differentiation or apoptosis. In this context, this work presents two lines of research: 1) Characterization of structural and functional changes promoted by adenanthin binding to Prx active site using Tsa1 from Saccharomyces cerevisiae as biological model, due to its high similarity to human Prx2. 2) Evaluation of adenanthin dose-dependent antitumor activity over the acute lymphoid leukemia cell lines REH and MOLT-4. As regards the first line of research, our result reveal that Tsa1 is susceptible to inhibition by adenanthin, since the treatment with this binder reduced the hydrogen peroxide decomposition velocity in ~ 66%. In addition, the replacement of Thr44 from Tsa1, aminoacid belonging to the so-called catalytic triad, by a Ser resulted in a protein more susceptible to alterations in secondary structure and to peroxidase activity inhibition in function of adenanthin binding, presenting ~85% of decrease in reaction velocity. Similar characteristics were observed for Tsa2 proteoform from S. cerevisiae, which naturally carries the substitution of Thr44 by Ser. Prx sequences analyzes in databases revealed that mostly Ser-containing proteins are found in prokaryotic organisms, many of them pathogenic ones. Finally, we demonstrate through cytotoxicity assays that the bacteria Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis, which have a Ser in catalytic triad, have their growth inhibited by adenanthin treatment (IC50 of 460µM and 77µM, respectively), whereas for Escherichia Coli, which has Thr at that position, the tocyxicity of adenanthin was quite low (it was not possible to determine the IC50 under the used conditions). Regarding the second line of investigation, we found that adenanthin is able to induce the death of leukemic cell lines REH and MOLT-4, and for the last one, there was an unexpected proliferation of cells treated by the longest incubation period (72 hours), characterizing a possible indication of differentiation process. In this sense, the data presented here demonstrate the potential of adenanthin use in both antibiotic and antileukemic treatment

Role of FAB classification of acute leukemias in era of immunophenotyping.

French-American-British classification for leukemias had been widely accepted due to its objectiveness and good reproducibility. WHO classification of leukemias was formulated in 1997 with a purpose of further enhancing the objectivity. However, the requirement of cytogenetics and immunophenotyping makes it difficult for many countries like India to put WHO classification in routine use. This study was carried to know the effectiveness of FAB classification in an era of technical advancement. A retrospective analysis of all acute leukemias over a period of 2 years was done. Out of total of 469 cases of acute leukemias, 193 were diagnosed as Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL), 200 as Acute Myeloid Leukemia (AML), and 76 cases diagnosed as Acute Leukemia, cytochemically undifferentiated. Hence, only 16% of all leukemias remained unclassifiable. Subclassification of AML cases revealed a much higher percentage of AML-M3, as compared to western literature. In conclusion, FAB classification, based on morphology and simple cytochemical stains, remains effective enough, although cytogenetics and immunophenotyping can add to diagnostic accuracy in some cases.

Haematological and cytomorphological study of acute lymphoblastic leukemia [ALL]

Acute lymphoblastic leukaemia [ALL] has long been recognized to be clinically and morphologically heterogeneous .We tried to study, analyze, and interpret the relationships between age, sex, clinical manifestations, FAB classification, and hematological investigations. Over a period of 6 months, sixty-four, newly diagnosed [Sudan Black B 'negative], cases had been included in this study, from different centers. Clinical study was conducted concentrating on the presence of fever, pallor, bleeding tendency, lymph node enlargement, spleen and liver enlargement, neurological and testicular manifestations, and the presence of mediastinal mass on chest x-rays. Hematological investigations included haemoglobin concentration, initial total white cell count, and platelets count. Bone marrow smears were stained with MGG stain and the FAB classification and the FAB scoring system had been used. Showed that children were 61% of total cases while adults were 39%, with the highest age incidence between 0-5 years. Male: female ratio was 2:1. Age incidence in males was higher than that for females for all age groups. Lymph node enlargement and hepatomegaly were the most common clinical findings. The presence of mediastinal mass on chest x-ray was more in male than female sex [39.5% Vs 9.5%]. L2- morphological subtype was more common in both children and adults 87.2% and 92% respectively] than L1 morphological subtype [12.8% and 8% respectively]. No L3 type had been found in our study. ALL is a disease of children mainly with higher incidence in males than females and, unlike the internationally reported cases where L1 type is more prevalent, L2 type is more prevalent in Iraqi cases

Leucemia linfoide aguda común: estudio del inmunofenotipo y las características clínicas y morfológicas / Common acute lymphocytic leukemia: study of the immunophenotype and of the clinical and morphological characteristics

Se estudiaron las características biológicas, clínicas, de laboratorio y fenotípicas de 87 niños con leucemia linfoide aguda común (LLA-c) en un período de 17 años. El inmunofenotipaje celular se realizó mediante los métodos inmunocitoquímicos (UMICIQ) y de fosfatasa alcalina anti-fosfatasa alcalina (APAAP). Se observó una mayor incidencia (52,9 por ciento) en el grupo de edad entre 2-5 años. Los niños varones blancos fueron los más afectados. El 98,8 por ciento de los enfermos presentó la variedad L1. En el 79,3 por ciento los leucocitos fueron de <20x109/L y no se demostraron adenopatías mediastínicas al inicio de la enfermedad. El 4,6 por ciento de los enfermos presentó infiltración del sistema nervioso central (SNC) al inicio. Se encontró hepatomegalia, esplenomegalia y adenopatías en el 47,1 por ciento, 24,1 y 31 por ciento, respectivamente. Los antígenos CD10, CD19 y Tdt se encontraron en el 100 por ciento de los pacientes, el CD22 en el 98,8 por ciento, el HLA-DR en el 96,5 por ciento y el CD20 en el 6,9 por ciento. Se diagnosticaron 14 (16,1 por ciento) LLA-c Mi+; de estas 6 (42,8 por ciento) presentaron leucocitos de >20x109/L. Estos resultados demuestran que la LLA es una enfermedad clínica y fenotípicamente heterogénea, que representa expansiones clonales de linfoblastos en distintos estadios de maduración

Leucemias agudas na infância / Childhood acute leukemias

As leucemias constituem a neoplasia mais freqüente na infância. São responsáveis por cerca de um terço dos cânceres pediátricos. A leucemia linfocítica aguda (LLA) representa cerca de 75% dos casos de leucemias infantis. As leucemias mielóides agudas (LMA) representam 15% a 20% das leucemias em pacientes com idade inferior a 15 anos. As manifestações clínicas das leucemias agudas são decorrentes da inibição da hematopoiese pelas células leucêmicas e dos efeitos da infiltração leucêmica em diversos órgãos e sistemas. Observa-se anemia devido à diminuição dos eritrócitos, sangramentos decorrentes da trombocitopenia e infecções conseqüentes à neutropenia. A infiltração dos diferentes tecidos resulta em hepatomegalia, esplenomegalia e linfadenomegalia. O diagnóstico das leucemias é firmado pela presença de mais de 25% de células leucêmicas na punção aspirativa de medula óssea (mielograma). O tratamento da LLA é feito com regimes quimioterápicos de longa duração. A indicação do trans- plante de medula óssea durante uma primeira remissão permanece controversa. A probabilidade de cura da LLA pode chegar a 80%. Na LMA, com o uso exclusivo de quimioterapia, a probabi- lidade de sobrevida livre de doença (SLD) por períodos prolonga- dos é de 30% a 40%. Quando se emprega o transplante de medula óssea alogênico, a probabilidade estimada de SLD a longo prazo é de 50% a 60%...(AU)

The leukemias are the most common malignant neoplasm in child- represents 15% to 20% of cases in patients less than 15 years old. The clinical manifestations of acute leukemias are secondary to inhibition of hematopoiesis by leukemic cells and to the effects of leukemic infiltration in different organs and systems. Anemia is caused by reduction of erythrocytes, bleeding is secondary to thrombocytopenia, and infections are related to neutropenie. The infiltration of tissues results in hepatomegaly, splenomegaly and lymphadenopathy Acute leukemias are diagnosed by abone mar- row aspirate that demonstrates more than 25% of the bone mar- row cells as a relatively homogeneous population of blasts. The treatment of ALL consists of prolonged chemotherapy regimens. The role of allogeneic bone marrow transplantation during first remission remains controversiet. The probability of cure in ALL reaches 80%, In AML, with chemotherapy alone, the probability of long term disease free survival is from 30% to 40%. When bone marrow transplantation is used the estimated probability of prolonged disease free survival is 50% to 60%...

Factores predisponentes para recaída en niños con Leucemia Linfocítica aguada, tratados con el Procologo LLA 2000, en el Hospital Infantil Manuel de Jesús Rivera, Marzo 2000. diciembre 2003 / Factors predisponentes for relapse in children with Leucemia watery ++Linfocítica, treated with ++Procologo ++LLA 2000, in the Infantile Hospital Manuel of Jesus Rivera, March 2000. December 2003

De Marzo 2000 ù Diciembre 2003 en el Servicio de Hemato-Oncología del Hospital Infantil Manuel de Jesús Rivera se diagnosticaron 230 casos de Leucemia Linfocítica Aguda, de éstos 50 presentaron recaídas, se estudiaron 43 pacientes a quienes se les inició tratamiento con el Protocolo LLA 2000. La informaciórt fue recolectada de la Base de datos y Expedientes Clínicos, siendo el estudio descriptivo de corte transversal, retrospectivo.Se encontró que el sexo masculino fue el más afectado, predominando el grupo etéreo de 1 a 5 años, el 23.2 porciento de los pacientes eran originarios de Managua y el 76.8 porciento del resto de los Departamentos del País, el 65.1 porciento de los niños estudiados presentaban algún grado de desnutrición. Al momento del diagnóstico el 79 porciento estaban en condiciones clínicas estables. El sitio de recaída más frecuente fue la médula ósea. El tiempo de recaída más frecuente fue de 7-12 meses. La clasificación inmunológica común o Calla positiva se presentó en el 76.8 porciento de los pacientes. El 65.1 porciento de los pacientes presentó interrupción de la quimioterapia, siendo la causa más frecuente la neutropenia asociada o no a infecciones. En el 42.9 porciento de los pacientes, la interrupcion de quimioterapia duró más de 14 días. El 86 porciento de los pacientes respondió adecuadamente a la monoterapia conPrednisona. Al concluir el estudio la situación de los pacientes fue de remisión el 46.5 porciento; fallecidos 37.2 porciento y nueva recaída 16.3 porciento ...

Immunophenotyping of acute leukemia in northwestern Iran

The significance of immunophenotyping is growing day by day. It provides basic information in regard to classification and prognosis of acute leukemia which helps the management of patients. This study was conducted to Identify CD markers in leukemic patients admitted to Tabriz, in northwestern Iran. Immunophenotyping of 60 patients with acute leukemia was determined. Patients with acute myelogenous leukemia [AML] were 42% of M2 type, 23.6% M3, 15.7% M4, 13% M1 and 5.7% M5. CD13 and CD33 were the most prevalent myeloid markers. T-lymphoid markers consisted mainly of CD7 and its occurrence was mostly in M2 and M4, and least in M3 subtypes. The most common lymphoid markers in patients with Tcell acute lymphoblastic leukemia [ALL] were CD2, CD3, CD7 and in those with B-cell ALL were CD10, CD19 and HLA-DR. The most prevalent myeloid markers in T-ALL were CD14, CD33 and CD13

Fenotipificacion y clasificacion francesa-americana-britanica de la leucemia linfoide aguda infantil / FAB classification and acute lymphocytic leukemia

Objetivo: describir el inmunofenotipo determinado mediante citometría de flujo láser de una población de niños con leucemia linfoide aguda y su correlación con la clasificación morfológica FAB. Diseño: estudio descriptivo. Pacientes: se estudiaron 38 niños con sospecha de LLA, que consultaron al Servicio de Hematooncología Infantil de la Universidad de Antioquia y el Hospital Universitario San Vicente de Paúl entre octubre de 1996 y marzo de 1997. Mediciones: se confirmó el diagnóstico de leucemia con el aspirado de médula ósea y la coloración citoquímica del Sudán Negro B. Se usó la clasificación morfológica del grupo FAB y se correlacionó con el inmunofenotipo por citometría de flujo láser usando los anticuerpos monoclonales (AcMo) CD10, CD19, CD20 para linaje B y CD2, CD7 para linaje T. Resultados: en 32 pacientes se confirmó el diagnóstico de LLA, 26 con morfología L1 y 6 con morfología L2; 81,2 por ciento de linaje B y 18,8 por ciento de linaje T. Seis pacientes que no marcaron para estirpe linfoide, se identificaron con los AcMo CD13 (4 pacientes) y CD 41 (2 pacientes). Conclusiones: se enfatiza en la necesidad de identificar correctamente la clona maligna, desde el momento mismo del diagnóstico, dado el pésimo pronóstico de las LLA de linaje T, para poder ofrecer a cada paciente protocolos de tratamiento más adecuados a su patología.

Anomalias cromosomicas en enfermedades hematologicas malignas / Chromosomal abnormalities in malignant hematologic diseases

La inclusión del estudio citogenético en el protocolo de estudio de pacientes con enfermedades hematológicas malignas es de gran importancia ya que sus resultados contribuyen a establecer con mayor exactitud el diagnóstico, el pronóstico y sugiere precozmente manejo terapéutico más adecuado. Se realizaron 200 cariotipos de pacientes con edades comprendidas entre 2 y 84 años, 56/200 correspondieron a Leucemia Linfoide Aguda (LLA), 55/200 a Leucemia Meloide Aguda (LMA), 631200 a Leucemia Mieloide Crónica (LMC), 201200 a Síndromes Mielodisplásicos (SMD) y 6/200 a Leucemia Linfoide Crónica (LLC). Ciertas diferencias han sido observadas en este trabajo. En LLA la hiperdiploidía fue la anomalía cromosómica más frecuente y no se reportan casos de cromosoma Ph+, en cuanto a LMA las monosomías y trisomías de autosomas fueron los hallazgos más frecuentes. En SMD, 10 porciento de los pacientes presentaron trisomía 14, anomalía reportada muy raras veces. En LMC, no se reportan casos con doble Ph+, y sólo un caso con i(17q), sin embargo se encontró un caso en fase acelerada con deleción 21q anomalía aún no reportada. En LLC, no se encontró trisomía 12. Estos hallazgos son discutidos en el contexto de heterogeneidad geográfica de anormalidades cromosómicas en leucemia, enfatizando una la necesidad de continuar con los estudios epidemiológicos.

Primer conseso de leucemia guda linfoblástica pediátrica en México / First pediatric consensus on acute lymphoblastic leukemia in Mexico

Se informa sobre el primer consenso de leucemia aguda linfoblástica (LAL) en pediatría celebrado en la ciudad de Morelia con la participación de 43 especialistas en hematología o hemato-oncología pediátricas. La participación fue exclusiva de profesionales institucionales: se obtuvo una representación amplia en servicios del sector salud que atienden este problema en las principales ciudades del país. El objetivo fue establecer criterios básicos de laboratorio, factores pronósticos y conceptos generales de tratamiento, los cuales se presentan en este documento para conocimiento general de los participantes y de otros profesionales interesados

Tratamiento de los linfomas no Hodgkin en niños: actualización de protócolos revisión de la literatura / Treatment of the non Hodgkin lynphoma in children: current of present protocols: review of the literature

Se presenta una revisión crítica y actualizada de los diferentes esquemas de quimioterapia utilizados en el linfoma no Hodgkin de los niño en sus diferentes variedades hitológicas y en sus diferentes estadios clínicos

Fatores prognósticos na leucemia linfoblástica aguda da criança / Prognostic factors in acute lymphocytic leukemia in child

A efetividade do tratamento modifica a importância da maioria dos fatores associados com o prognóstico. Entre as manifestaçöes clínicas e laboratoriais de rotina, apenas a idade e a contagem leucocitária permanecem independentemente correlacionadas ao resultado do tratamento. A imunofenotipagem é útil para a classificaçäo das LLA, mas, possivelmente, com exceçäo do antígeno CD10, tem muito pouca importância prognóstica no contexto de uma abordagem terapêutica efetiva. Alteraçöes cariotípicas continuam a ter importante valor preditivo. Hiperdiplodia (>50 cromossomos) está associada ao bom prognóstico, enquanto que a t (9;22) e t(4;11), ao insucesso terapêutico. Casos com imunofenótipo pré-B e t(1;19) têm mau prognóstico, se tratados com regimes terapêuticos baseados em antimetabólicos, e, portanto, o tratamento desse grupo de pacientes deve incluir outras classes de drogas. Finalmente, algumas alteraçöes cromossômicas, como a dic(9;12), podem estar associadas ao bom prognóstico. Com exceçäo do tratamento da leucemia de células B, protocolos terapêuticos especificamente direcionados a grupos segregados por análise imunofenotípica ou genotípica näo têm sido bem sucedidos. portanto, a seleçao da melhor opçäo terapêutica para um determinado paciente deverá ser orientada pela probabilidade do insucesso terapêutico. Para pacientes com alto risco de recidivas (i.e. com uma probabilidade>70 por cento) a utilizaçäo de protocolos experimentais é justificável, mesmo em face dos efeitos colaterais agudos e tardios decorrentes do tratamento. Para o grupo de crianças de baixo risco de recidiva (<20 por cento de probabilidade), terapia que evita as medicaçöes mais perigosas deve ser administrada.

Intraobserver and interobserver reproducibility of the FAB classification in acute leukaemia.

Intraobserver and interobserver reproducibility of FAB classification for acute leukaemia was assessed using the modified criteria of the FAB classification. Leishman stained peripheral smear and May Grunwald Giemsa stained bone marrow smears from 72 cases of acute leukaemia were used for this purpose. Cytochemical stains used were peroxidase, PAS and Sudan black B. Intraobserver and interobserver concordance/discordance was calculated. Kappa statistic was used to correct the chance expected agreement. Intraobserver and interobserver concordance was 76% which improved to 91% when cytochemistry was included. Lymphocytic/Nonlymphocytic concordance was 87.5% and 90% respectively for intraobserver and interobserver groups.

Immunophenotype and cytochemical reactions of acute lymphoblastic leukemia in Thai children.

The immunophenotypes of acute lymphoblastic leukemia (ALL) in 28 Thai children were studied by the APAAP technique using a panel of eight specific monoclonal antibodies: HLA-DR, CD 19, CALLA (CD 10), IgM, CD 7, CD 3, CD 4, and CD 8. Sixty-eight, 18, 3.5, 3.5, and 7 per cent were respectively shown to be common, null, pre-B, B, and mature thymocyte T subtypes. Cytochemical reactions (beta-glucuronidase, alpha naphthyl acetate esterase, and acid phosphatase) in this study could identify null, common, and T ALLs with confidence, and could be used in the process of ALL subtyping to reduce cost.