Virulence, agr groups, antimicrobial resistance and epidemiology of Staphylococcus aureus isolated from bovine subclinical mastitis / Virulência, grupos agr, resistência a antimicrobianos e epidemiologia de isolados de Staphylococcus aureus obtidos de vacas com mastite

Fifty-two Staphylococcus aureus recovered from papillary ostium and milk samples collected from cows with subclinical mastitis and milking environments in three small dairy herds located in southeastern Brazil were subjected to PCR identification based on the thermonuclease (nuc) gene. All the strains were submitted to in vitro antimicrobial susceptibility testing, and we investigated the sequence types (STs), agr groups (I-IV), virulence genes encoding for Microbial Surface Components Recognizing Adhesive Matrix Molecules (MSCRAMMs), biofilm-associated proteins, bi-component toxins, pyrogenic toxin superantigens, and enterotoxins. Screening for oxacillin resistance (2-6 µg/ml oxacillin), beta-lactamase activity assays, and PCR for the mecA/mecC genes detected 26 methicillin-susceptible S. aureus(MSSA) and 26 mec-independent oxacillin-nonsusceptible S. aureus (MIONSA). While MSSA isolates were found to be susceptible to all antimicrobial agents tested, or only resistant to penicillin and ampicillin, MIONSA isolates were multidrug-resistant. ST126-agr group II MSSA isolates were prevalent in milk (n=14) and carried a broad set of virulence genes (clfA, clfB, eno, fnbA, fiB, icaA, icaD, lukED, hla, and hlb), as well as the ST126-agr group II MIONSA isolated from milking liners (n=1), which also carried the eta gene. ST1-agr group III MIONSA isolates (n=4) were found in papillary ostium and milk, but most MIONSA isolates (n=21), which were identified in both papillary ostium and milking liners, were agr-negative and assigned to ST126. The agr-negative and agr group III lineages showed a low potential for virulence. Studies on the characterization of bovine-associated MSSA/MIONSA are essential to reduce S. aureus mastitis to prevent economic losses in dairy production and also to monitor the zoonotic potential of these pathogens associated with invasive infections and treatment failures in healthcare.

Cinquenta e dois isolados de Staphylococcus aureus obtidos de amostras colhidas do óstio papilar, do leite de vacas com mastite subclínica e do ambiente de ordenha em três fazendas de rebanhos leiteiros localizadas no sudeste do Brasil foram identificados por PCR para o gene da termonuclease (nuc). Todos os isolados foram testados para sensibilidade a antimicrobianos e foram investigados os sequence types (STs), grupos agr (I-IV) e genes de virulência que codificam Microbial Surface Components Recognizing Adhesive Matrix Molecules (MSCRAMMs), proteínas associadas a biofilme, toxinas bi-componentes, toxinas pirogênicas com propriedades de superantígenos e enterotoxinas. Triagem para detecção de resistência à oxacilina (2-6 µg/ml oxacilina), ensaios de atividade de enzimas beta-lactamases e PCR para os genes mecA/mecC detectaram 26 estirpes de S. aureus sensíveis à meticilina (methicillin-susceptible S. aureus, MSSA) e 26 estirpes de S. aureus mec-negativas não sensíveis à meticilina (mec-independent oxacillin-nonsusceptible S. aureus, MIONSA). Enquanto os isolados MSSA foram sensíveis a todos os agentes antimicrobianos testados, ou apenas resistentes à penicilina e ampicilina, os isolados MIONSA foram multirresistentes. MSSA ST126-agr grupo II foram prevalentes no leite (n= 14) e apresentaram um amplo conjunto de genes de virulência (clfA, clfB, eno, fnbA, fiB, icaA, icaD, lukED, hla e hlb), assim como o isolado MIONSA ST126-agr grupo II proveniente de um insuflador (n= 1), o qual também apresentou o gene eta. MIONSA ST1-agr grupo III (n= 4) foram identificados no óstio papilar e leite, mas a maioria dos isolados MIONSA (n= 21), encontrados em óstios papilares e insufladores, foram agr-negativos e pertenceram ao ST126. As linhagens agr-negativas e agr grupo III apresentaram baixo potencial de virulência. Estudos sobre a caracterização de MSSA/MIONSA associados a bovinos são essenciais para a redução da mastite causada por S. aureus e de perdas econômicas na produção leiteira e, também, para o monitoramento do potencial zoonótico desses patógenos associados a infecções invasivas e falhas de tratamento em ambientes hospitalares.

Staphylococcal cassette chromosome mec elements from Staphylococcus intermedius group (SIG) isolates from dogs in a center for veterinary diagnostics in Brazil / Cassetes cromossômicos estafilocócicos mec de isolados do grupo Staphylococcus intermedius (GSI) de cães em um centro veterinário de diagnósticos no Brasil

ABSTRACT: Methicillin resistance in the Staphylococcus intermedius group (SIG) has emerged in small animal practice. Methicillin-resistant SIG (MRSIG) members have been implicated as causes of infections in both companion animals and humans. Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) elements carry the mecA/C genes, which encode for the transpeptidase PBP2a (PBP2') responsible for β-lactam antibiotic resistance in staphylococci. This study examined the SCCmec types of MRSIG isolates from different clinical specimens of dogs that exhibited methicillin MIC ≥ 0.5 μg/mL by an automated identification and susceptibility system in a Center for Veterinary Diagnostics in São Paulo, Brazil. Susceptibility to methicillin was determined by broth microdilution testing, and Oxoid® M.I.C.Evaluator® strips. PBP2a production was detected using a latex agglutination assay. SCCmec typing was performed according to the International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome Elements (IWG-SCC) guidelines. SCCmec type II (2A), SCCmec type III (3A), composite SCC structures consisting of a class A mec gene complex in addition to multiple ccr gene complexes, and non-typable SCCmec elements were reported in these MRSIG isolates. SCCmec type variants differing from those so far acknowledged by IWG-SCC were found, indicating new rearrangements in the genetic context of mecA in these canine MRSIG isolates.

RESUMO: A resistência à meticilina no grupo Staphylococcus intermedius (GSI) tem aumentado na clínica de pequenos animais. Membros GSI resistentes à meticilina (GSIRM) têm sido causas de infecções tanto em animais de companhia e humanos. Cassetes cromossômicos estafilocócicos mec (SCCmec) carregam os genes mecA/C, que codificam a transpeptidase PBP2a (PBP2') responsável pela resistência aos antibióticos β-lactâmicos em estafilococos. Nosso objetivo foi investigar os elementos SCCmec de GSIRM isolados de diferentes amostras clínicas de cães que exibiram CIM de meticilina ≥ 0,5 μg/mL por meio de um sistema automatizado em um Centro Veterinário de Diagnósticos em São Paulo, Brasil. A sensibilidade à meticilina foi determinada por meio do teste de microdiluição em caldo e fitas Oxoid® M.I.C.Evaluator®. A produção de PBP2a foi detectada usando um ensaio de aglutinação de látex. A tipagem dos elementos SCCmec foi realizada de acordo com as diretrizes do International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome Elements (IWG-SCC). SCCmec tipo II (2A), SCCmec tipo III (3A), SCC compostos de um complexo mec de classe A com múltiplos complexos ccr, e elementos SCCmec não tipáveis foram encontrados nesses isolados GSIRM. Variantes que diferem dos elementos SCCmec reconhecidos até o momento pelo IWG-SCC foram encontradas, indicando novos rearranjos no contexto genético de mecA nesses isolados GSIRM caninos.

Presence of blaTEM-116 gene in environmental isolates of Aeromonas hydrophila and Aeromonas jandaei from Brazil

It is known that Aeromonas spp. possess different chromosomal â-lactamase genes. Presence and phenotypic expression of blaTEM, blaSHV, and blaCTX-M ESBL-encoding genes were investigated in environmental water isolates of Aeromonas hydrophila and Aeromonas jandaei. Presence of blaSHV and blaCTX-M genes was not observed, and blaTEM gene was verified in 91 percent of the isolates. Sequencing of 10 fragments showed the occurrence of blaTEM-116.

Methicillin/Oxacillin-resistant Staphylococcus aureus as a hospital and public health threat in Brazil

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus is an established nosocomial pathogen (HA-MRSA, hospital acquired MRSA), but has recently begun to appear in the community (CA-MRSA, community acquired MRSA). The cause of resistance to methicillin and all other â-lactam antibiotics is the mecA gene, which is situated on a mobile genetic element, the Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec). Seven major variants of SCCmec, type I to VII are distinguished. HA-MRSA disseminated worldwide and causes the majority of S. aureus nosocomial infections with a limited number of clones disseminated including the Brazilian Epidemic Clone (BEC, ST239-MRSA-III). CA-MRSA isolates are susceptible to non-â-lactam antibiotics, usually isolated from healthy individuals which do not possess any unknown risk factors for MRSA infection and are associated with a larger clonal diversity compared with HA-MRSA. However, during recent years distinction between HA-MRSA and CA-MRSA is beginning to fade. Actually, knowledge about MRSA disseminating clones is required to implement any strategies to control the transmission of MRSA either within hospitals or in community. For this reason, rapid identification of strains is an important issue. The rate of HA-MRSA can be reduced substantially through the implementation of interventions strategies, even in settings where MRSA is endemic as in most Brazilian hospitals. However, these policies could be quite complicated in the light of an increasing CA-MRSA prevalence in healthcare facilities, considering that distinction between HA-MRSA and CA-MRSA has started to disappear.

Type IV SCCmec found in decade old Brazilian MRSA isolates

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) commonly causes infection in hospitalized patients. Since its appearance in the 1960s, the SCCmec has evolved throughout the years into 5 different types (I-V), each bearing a different set of genes. Infection with MRSA SCCmec types I, II or III is almost exclusively restricted to hospitalised patients. However, recently, community acquired MRSA (CA-MRSA) infections have been reported with increasing frequency, usually caused by a type IV SCCmec MRSA in nosocomial settings. We studied the prevalence of SCCmec types in 50 nosocomial strains collected from 1995 to 1999. The SCCmec complex type and presence of Panton-Valentine leukocidin (PVL) were determined by PCR. Strains had been previously typed by PFGE and were now typed by MLST. We found that 3 of the isolates studied bore a type IVc SCCmec all having different PFGE and MLST profiles (ST3, ST5 and ST88). All strains bearing a type III SCCmec belonged to MLST ST239 (Brazilian/Iberian clone). Only the strain which presented the ST5 profile bore the pvl gene. The type IVc SCCmec strains presented relatively lower levels of resistance to oxacillin in comparison to the type III SCCmec strains. The pattern of dissemination of the type IV SCCmec remains to be elucidated. The finding of strains carrying a type IV SCCmec in the present study among strains isolated at least 7 years ago indicates that clones bearing a type IV SCCmec have been present in Brazil for quite some time, and must have gone by undetected.

Characterization of ndh gene of isoniazid resistant and susceptible Mycobacterium tuberculosis isolates from Brazil

Resistance in Mycobacterium tuberculosis to isoniazid (INH) is caused by mutations in the catalase-peroxidase gene (katG) , and within the inhA promoter and/or in structural gene. A small percentage (~ 10 percent) of INH-resistant strains do not present mutations in both of these loci. Other genes have been associated with INH resistance including the gene encoding for NADH dehydrogenase (ndh) . Here we report the detection of two ndh locus mutations (CGT to TGT change in codon 13 and GTG to GCG change in codon 18) by analyzing 23 INH-resistant and in none of 13 susceptible isolates from Brazilian tuberculosis patients. We also detected two isolates without a mutation in ndh, or any of the other INH resistance-associated loci examined, suggesting the existence of additional, as yet to be described, INH resistance mechanisms.

DOD/AMB: in vivo activity of a novel amb formulation with synthetic cationic bilayer fragments

A habilidade do brometo de dioctadecildimetilamônio (DOBAB), em formar bicamada de lipídio sintético e a demonstração prévia do forte poder solubilizante de anfotericina B (ANB) , incentivou-nos a realizar a avaliação da atividade de DODAB/AMB in vivo contra candidíase sistêmica em modelo de camundongos para verificar a sua sobrevida bem como a recuperação das leveduras de C. albicans dos órgãos colonizados (baço e rins). O AMB foi simplesmente adicionado à DODAB em pó previamente disperso em água e sonicado com auxílio de ponteiras, nas concentrações de <0,1e 10 mg/mL, respectivamente, assegurando-se a completa ausência de solventes orgânicos nesta formulação. O estado de agregação do AMB foi avaliado por meio do espectro de absorção da luz UV-visível e a distribuição de tamanhos das formulações estudadas, determinadas por meio de analisador ZetaPlus Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY) equipado com um laser de 570 nm e dynamic light scattering (90ºC) para a medição dos tamanhos (Grabowski & Morrison, 1983). AMB foi estabilizada na bicamada de DODAB em forma monomérica, eliminando-se os grandes agregados de AMB insolúveis em água. Tanto a sobrevida dos animais como os experimentos com recuperação das leveduras dos órgãos colonizados (baço e rins) mostraram eficácia equivalente à demonstrada por Fungizona (DOC/AMB) - a sobrevida foi de 100 e 70% respectivamente nas concentrações de 0.4 mg/kg/dia via i.p. por 10 dias (P>0.05), em relação a eliminação da colonização de C. albicans dos rins e baço. Em resumo, DOD/AMB foi efetivo no tratamento de candidíase sistêmica em modelo animal.

DOD/AMB: in vivo activity of a novel amb formulation with synthetic cationic bilayer fragments

The ability of the versatile dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB), a bilayer-forming synthetic lipid previously shown to solubilize Amphotericin B (AMB), inspired this evaluation of in vivo activity of the DODAB/AMB formulation (DOD/AMB) against systemic candidiasis in a mouse model from survival and tissue burden experiments. AMB was simply added to a DODAB powder dispersion in water previously obtained by sonication with tip at concentrations 0.1 and 10 mg/mL, respectively, organic solvents completely absent. AMB aggregation state was evaluated from UV-visible light absorption and dynamic light scattering for aggregate sizing. AMB was stabilized by the DODAB bilayer fragments in its monomeric form, causing disappearance of large water insoluble drug aggregates. From survival and tissue burden experiments, DOD/AMB efficacy was equivalent to the one exhibited by Fungizone (DOC/AMB) - 100 and 70% survival respectively, at 0.4 mg/kg/day given i.p. for 10 days (P>0.05) -, regarding elimination of Candida colonization in spleen and kidneys. In summary, DOD/AMB, was effective for treating systemic candidiasis in a mouse model.

A habilidade do brometo de dioctadecildimetilamônio (DOBAB), em formar bicamada de lipídio sintético e a demonstração prévia do forte poder solubilizante de anfotericina B (ANB) , incentivou-nos a realizar a avaliação da atividade de DODAB/AMB in vivo contra candidíase sistêmica em modelo de camundongos para verificar a sua sobrevida bem como a recuperação das leveduras de C. albicans dos órgãos colonizados (baço e rins). O AMB foi simplesmente adicionado à DODAB em pó previamente disperso em água e sonicado com auxílio de ponteiras, nas concentrações de 0,1e 10 mg/mL, respectivamente, assegurando-se a completa ausência de solventes orgânicos nesta formulação. O estado de agregação do AMB foi avaliado por meio do espectro de absorção da luz UV-visível e a distribuição de tamanhos das formulações estudadas, determinadas por meio de analisador ZetaPlus Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY) equipado com um laser de 570 nm e dynamic light scattering (90ºC) para a medição dos tamanhos (Grabowski & Morrison, 1983). AMB foi estabilizada na bicamada de DODAB em forma monomérica, eliminando-se os grandes agregados de AMB insolúveis em água. Tanto a sobrevida dos animais como os experimentos com recuperação das leveduras dos órgãos colonizados (baço e rins) mostraram eficácia equivalente à demonstrada por Fungizona (DOC/AMB) - a sobrevida foi de 100 e 70% respectivamente nas concentrações de 0.4 mg/kg/dia via i.p. por 10 dias (P>0.05), em relação a eliminação da colonização de C. albicans dos rins e baço. Em resumo, DOD/AMB foi efetivo no tratamento de candidíase sistêmica em modelo animal.

Ocorrência e determinaçäo do perfil de sensibilidade às drogas das cepas de Staphylococcus Aureus isoladas de fossas nasais e orofaringe dos servidores hospitalares / Frequency and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus strains isolated from hospital staff

O Staphylococcus aureus causa uma série de infecçöes, desde lesöes purulentas e localizadas da pele até infecçöes generalizadas e sistêmicas, sendo particularmente graves em indivíduos debilitados. A infecçäo hospitalar por este microrganismo representa um sério problema médico-social, sendo necessária a sua prevençäo e controle. Neste contexto, os pacientes e os servidores hospitalares säo considerados reservatórios e propagadores importantes desta bactéria. A ocorrência de cepas de S. aureus resistentes a oxacilina (MRSA), no entanto, tem contribuído para o agravamento desta situaçäo uma vez que se trata de germes caracterizados por apresentar resistência múltipla aos agentes antimicrobianos usualmente empregados na prática hospitalar. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de S. aureus nos vestíbulos nasais e cavidade oral de servidoresde três hospitais de Bauru, e determinar o perfil de resistência das bactérias isoladas aos agentes antimicrobianos mais freqüentes. Dos 213 funcionários analisados, 94 (44,13 por cento) eram portadores de S. aureus e 47 (50 por cento) das cepas foram isoladas de fossas nasais, 23 (24,5 por cento) de cavidade oral e 24 (25,5 por cento) de ambos os sítios. As provas metabólicas realizadas mostraram que as cepas isoladas apresentaram 100 por cento de correlaçäo com a cepa de referência ATCC 29213. As 94 cepas apresentaram sensibilidade variada aos antimicrobianos testados verificando-se ausência de cepas vancomicina resistentes e apenas 8 (8,5 por cento) resistentes a oxacilina.

Microbiota indígena do meato acústico externo de gatos hígidos / Normal microflora of the ear canal in healthy cats

Cinqüenta felinos hígidos, adultos - vinte e seis machos e vinte e quatro fêmeas - sem definiçäo racial, com distintas idades, reunidos em dois grupos (GRUPO 1 - animais domiciliados e GRUPO 2 - animais querenciados) de vinte e cinco animais cada. Após anamnese e prévia sedaçäo, os gatos foram submetidos a exame físico e à otoscopia, comprovando-se a ausência de lesöes meatais e timpânicas, com cureta de Buck e zaragatoas estéreis, foi colhido material meatal, que foi entäo submetido a exames bacteriológico e micológico. No Grupo 1, foi evidenciado presença de Otodectes cynotis (4 porcento das amostras), em 72 porcento dos casos de bolores e leveduras (Cladosporium sp 66,6 porcento, Malassezia sp 40 porcento, Penicillium sp 33 porcento, Aspergillus sp 33,3 porcento, Rhodotorula sp 20,0 porcento, Mycelia sp 13,3 porcento e Alternaria sp, Aureobasidium sp, Rysopus sp, Trichosporon sp, todos com 6,6 porcento) e, finalmente, em 64 porcento da amostragem, bactérias dos gêneros Staphylococcus spp (81,2 porcento), Pseudomonas sp (12,5 porcento), Klebsiella sp (12,5 porcento), Acinetobacter sp, Bacilos difteróides, Enterobacter sp, Lactobacillus spp (todos com 6,2 porcento). No grupo 2, o Otodectes sp foi identificado em 36 porcento das amostras, em 96 porcento daquelas isolaram-se fungos dos gêneros: Malassezia sp - 54,1 porcento, Aspergillus e Penicillium sp, ambos com 33,3 porcento, Microsporum sp - 29,1 porcento, Cladosporium sp - 16,6 porcento, Trichoderma sp - 12,5 porcento, Alternaria e Phoma sp, ambos com 8,3 porcento e Epicoccum sp, Neurospora sp, Mycelia sp, Rhodotorula sp, todos com 4,1 porcento e, por fim, em 20 das 25 amostras (80 porcento) isolaram-se pelo menos uma cepa bacteriana (Staphylococcus spp 75 porcento, Klebsiella sp 20,8 porcento, Bacilos difteróides 12,5 porcento, Pseudomonas sp, 8,3 porcento) e Acinetobacter sp, Enterobacter sp e Escherichia sp, todos com 4,1 porcento cada um em cultivo monoespecífico ou em associaçäo.

Técnicas de amplificaçäo de gene para o diagnóstico da tuberculose / Gene amplification techniques to M. tuberculosis diagnosis

O advento das técnicas de biologia molecular no diagnóstico laboratorial vem mudando o panorama de procedimentos clínico-terapêuticos. Discorreu-se, nesse artigo, sobre as várias formas de contribuiçöes da biologia molecular e particularmente de PCR no campo da microbacteriologia. As aplicaçöes técnicas mais comuns e as suas potencialidades säo discutidas para uso em amostras clínicas, procurando enfocar a rapidez e o aumento da sensibilidade como vantagens. Discutiu-se também a importância das amostras e dos cuidados requeridos quando se trabalha com amplificaçäo molecular do DNA, evidenciando-se os cuidados requeridos na preparaçäo das amostras utilizadas nas técnicas de PCR.

Aplicaçäo de técnicas de biologia molecular na avaliaçäo da resistência de M. tuberculosis a drogas antimicrobianas / Molecular approaches to the diagnosis of drug resistant tuberculosis

A tuberculose tem sido uma das infecçöes com maior índice de mortalidade no mundo. O surgimento de cepas multidrogas resistentes tem chamado a atençäo e levado muitos estudiosos a pesquisarem os mecanismos que provocam esta resistência. Provavelmente o pequeno esforço na pesquisa de M. tuberculosis, inclusive na área da genética microbacteriana, justifiquem o desconhecimento, até recente, dos mecanismos moleculares de resistência da bactéria. Com o advento das técnicas de biologia molecular, muitas descriçöes de mutaçöes gênicas que levam à resistência às drogas têm sido relatadas. O mecanismo de resistência à rifampicina e à estreptomicina säo similares para M. tuberculosis e outras bactérias; no entanto, o da isonizada parecer ser específico para o bacilo da tuberculose. Duas mutaçöes no cromossomo do M. tuberculosis, no locu da katG e inhA, estäo relacionadas com a resistência à isonizada. Portanto, a identificaçäo e a caracterizaçäo das mutaçöes abrem novas possibilidades para entender os mecanismos e aplicá-los no desenvolvimento de novos fármacos. Discutiram-se aqui algumas mutaçöes relacionadas aos genes de resistência a drogas mais comumente encontradas em M. tuberculosis e as técnicas mais utilizadas para o seu estudo.

Leucócitos fecais na diarréia aguda por Campylobacter sp termofílico / Fecal leucocytes in Campylobacter associated acute diarrhea

Com o intuito de se comparar as porcentagens de positividade para leucócitos fecais obtidas em esfregaços de fezes corados pelo método de Gram, de acordo com o agente enteropatogênico identificado, foram estudadas, em Säo Paulo - SP, 184 amostras de fezes provenientes de crianças com diarréia aguda. Dessas amostras, 29 eram positivas para Campylobacter sp termofílico, 12 para agentes invasivos e 103 para agentes näo invasivos, sendo que nas 40 amostras restantes nenhum agente enteropatogênico. Leucócitos fecais foram encontrados nos casos de campilobacteriose em proporçöes estatisticamente semelhante às encontradas em casos de diarréias causadas por patógenos intestinais invasivos e significativamente maiores do que em infecçöes por agentes näo invasivos ou naquelas onde nenhum agente enteropatogênico foi identificado

Diagnóstico rápido (presuntivo) da diarréia aguda causada por Campylobacter sp termofílico / Rapid (presumptive) diagnosis of acute diarrhea caused by thermophilic Campylobacter sp

Com o objetivo de se verificar o valor do exame direto de fezes coradas pelo método de Gram, no diagnóstico rápido (presuntivo) da diarréia aguda por Campylobacter sp termofílico, foram estudadas, em Säo Paulo - SP, amostras provenientes de 208 crianças com diarréia aguda e de 46 sem sintomas gastrintestinais, nas quais pesquisaram-se microrganismos delgados, Gram-negativos, espiralados ou em forma de "S", ou ainda de "asa de gaivota". Os resultados foram comparados com os da cultura das fezes em meio de Skirrow modificado. No grupo de crianças com diarréia, microrganismos com as características citadas foram observadas em 28 das 29 lâminas de fezes (96,5%) com cultura positivas para o microrganismo e em 19 lâminas de fezes do total de 179 examinadas (19,6%), cujas culturas foram negativas para essa bactéria. Assim, o método da coloraçäo de Gram apresentou sensibilidade de 96,5%, especificidade de 89%, valores preditivos de um resultado positivo 60% e de um resultado negativo 99,4%, tendo sido sua eficiência calculada em 90,4%