Estudo sobre a propagação de vírus da febre amarela vacinal 17D e produção de vacina em culturas primárias de fibroblastos / Study on the propagation of virus of the vaccine yellow fever vaccine 17D and production in primary cultures of fibroblastos

RESUMO

A tecnologia básica para a produção de vacinas contra a febre amarela em embriões de galinha permanece inalterada,desde 1940.Descreve um método econômico e eficiente,de produção de vacina contra febre amarela da cepa 17DD,em culturas de fibroblasto de embrião de galinha(CEF),com títulos de 6,3 a 6,7 log10 PFU/mL.A metodologia foi utilizada com sucesso na produção de lotes sementes de vírus 17D/204/DD a partir de cDNA clonado e na produção de lotes vacinais com o vírus 17DD.A termoestabilidade de 2 diferentes formulações(5 e 50 doses)da vacina produzida em CEF com o vírus 17DD demonstraram ser tão alta quanto a das vacinas atualmente em uso.A produção em CEF não levou à seleção de variações genéticas.O vírus 17DD produzido em CEF também foi indistinguível do seu vírus semente parental em termos de tamanho de placa de lise e imunogenicidade em camundongos e macacos.A comparação do vírus produzido em CEF com o vírus do lote semente preparado em embrião,no teste em macacos revelou um escore clínico mais elevado para o vírus de CEF.As diferenças nos escores histológicos do sistema nervoso central para macacos inoculados com o vírus de embrião e com a vacina experimental de CEF ficaram no limite da significância estatística.O sistema do interferon foi identificado como sendo o fator de interferência levando à baixa produtividade viral em CEF.Esta identificação foi realizada através de diversas abordagens experimentais utilizando-se culturas de CEF em alta e baixa densidade e incluírama influência de sobrenadantes de culturas de CEF infectadas com vírus 17DD,tratados ou não por exposição ao ácido ou calor,na replicação de vírus Sindbis,a análise da atividade da enzima 2’-5’oligoadenilato sintetase,cuja expressão é controlada ao nível transcricional pelo sistema de interferon e a detecção por transcrição reversa seguida de amplificação por reação em cadeia da polimerase(RT-PCR)da expressão de genes de interferon e do gene da própria 2’-5’oligoadenilato sintetase.Embora experimentos com culturas de CEF em baixa densidade não tenham sido extensivamente realizados,os resultados sugerem que tanto em alta como em baixa densidade o IFN está sendo produzido.Devido à diluição do IFN no meio e ao espaçamento celular na cultura de baixa densidade,este não é capaz de estabelecer o estado anti-viral nas células ainda não infectadas a tempo de impedir a replicação do vírus.