Development and validation of an HPLC method for stability evaluation of nystatin

ABSTRACT

A liquid chromatography method for evaluating the stability of Nystatin (Nys) in an ointment was developed and validated, since the traditional pharmacopeial microbiological methods are unable to indicate stability. The stress experiments showed that Nys was found to significantly degrade in alkaline and acidic conditions and also under oxidative stress. Lower levels of degradation were detected under heat and with the sample exposed to Xenon light. Resolutions higher than 2 for Nys and degradation products (DP) chromatographic peaks were achieved by using an Inerstil ODS-3 column, isocratic elution with methanolwater and UV detection at 305 nm. The system was found to be linear over a range of 102 to 310 IU mL-1 and proved precise, since the RSD( percent) was 0.24 percent for the six replicates tested. The method also exhibited good levels of recovery (from 98.24 percent to 100.74 percent). Therefore, the validation fulfilled pharmacopeial requirements and the procedure was found to be reliable, precise, accurate and selective for determination of Nys and its degradation products.

RESUMO

Um método indicador de estabilidade por cromatografia líquida foi desenvolvido e validado para a análise de Nistatina (Nys) em uma pomada, uma vez que os métodos microbiológicos tradicionais não têm a habilidade de serem indicadores de estabilidade. A nistatina degradou significativamente em condições alcalinas e ácidas e também em meio oxidante. Quando a amostra foi exposta a luz de xenônio, foram observados menores níveis de degradação. A resolução entre os picos cromatográficos de Nys e seus produtos de degradação (PD) foi maior que 2, utilizando-se uma coluna Inerstil ODS-3, eluição isocrática com metanol água e detecção no UV em 305 nm. O sistema foi linear entre a faixa de 102 a 310 UI mL-1 e preciso uma vez que o DPR( por cento) foi de 0,24 por cento entre as seis replicatas testadas. Além disso, o método exibiu bons níveis de recuperação (de 98,24 por cento a 100,74 por cento). Consequentemente, considera-se que a validação atendeu a todos os requisitos farmacopêicos e o método pode ser considerado confiável, preciso, exato e seletivo para determinação de Nys e seus produtos de degradação.