Caracterização citoquímica e imunocitoquímica da larva infectante (L3) de Wuchereria bancrofti (Nematoda: Filarioidea) / Cytochemical and immunocytochemical characterization of the third-stage larvae of Wuchereria bancrofti (Nematoda: Filarioidea)

RESUMO

Entre as doenças infecciosas, a filariose constitui um sério problema de saúde pública. Estima-se que aproximadamente 129 milhões de pessoas no mundo encontrem-se infectadas e que mais de 90 por cento destas infecções sejam causadas pela Wuchereria bancrofti. O parasita filarial W. bancrofti é extremamente hospedeiro-específico, e, devido a ausência de um modelo experimental e dificuldades com cultivo in vitro, existem poucos estudos a respeito da larva infectante de terceiro estádio. Neste trabalho várias técnicas citoquímicas foram utilizadas para analisar a larva infectante (L3) de Wuchereria bancrofti. Uma solução de tetróxido de ósmio com tampão imidazol foi empregada para a visualização de ácidos graxos insaturados. Um material altamente contrastado formando uma estrutura contínua foi observada na superfície da larva e sobre a epicutícula. Forte reação foi observada no esôfago e no material encontrado em seu interior. Carboidratos contendo grupos do tipo vic-glicol não foram observados na cutícula da larva L3 de W. bancrofti submetidas à técnica do Thiéry. Utilizando um painel de oito lectinas conjugadas a ouro, foi demonstrado que a cutícula exibe uma discreta marcação com todas as lectinas, indicando a presença de resíduos de N-acetil-D-glicosamina, N-acetil-galactosamina, D-galactose, D-manose e L-fucose. Sítios aniônicos de superfície foram visualizadas através da utilização de partículas de ferritina cationizada. O tratamento com tripsina inibiu parcialmente a reação, enquanto o tratamento com condroitinase ABC, uma enzima específica para gligosaminoglicanas, aboliu completamente a marcação com partículas catiônicas. Os resultados dos tratamentos com as enzimas indicam que condroitina-4, condroitina-6, sulfato de dermatano e ácido hialurônico assim como as cadeias laterais de proteoglicanas, provavelmente são os principais componentes carregados negativamente presentes na superfície da L3. Em uma segunda abordagem, técnicas imunocitoquímicas e bioquímicas foram empregadas para a detecção de uma proteína semelhante à albumina humana em larvas L3 de W. bancrofti, fêmeas adultas do parasita filarial Litomosoides chagasfilhoi e no nematóide de vida livre Caenorhabditis elegans...