Diagnosis of Neospora caninum in bovine fetuses by histology, immunohistochemistry, and nested-PCR / Pesquisa de Neospora caninum em fetos bovinos por histologia, imunoistoquímica e nested-PCR

ABSTRACT

Neospora caninum, a cause of abortion and stillbirth in cattle, was studied by histology, immunohistochemistry, and nested-PCR, using primers from the Nc5 region of the genomic DNA (PCR PLUS) and primers from the ITS1 region of the ribosomal DNA (PCR JB). A total of 105 fetal samples sent to the Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico from January 2006 to May 2008 were examined for evidence of N. caninum. Histological examination revealed 71.4 percent with non-suppurative inflammation in the heart, lung, liver, kidney, placenta, and brain. Immunohistochemistry detected infections in 8.6 percent of the samples, mainly in the brain, placenta, and heart. Nested-PCR JB revealed 6.7 percent with infections, while nested-PCR PLUS returned 20.9 percent positive results, mainly in brain and placenta, and in the pooled liver and heart. Kappa statistics demonstrated little agreement among the three techniques. The three methods are complementary, since they have distinct diagnostic characteristics and were combined to give a positivity rate of 24.8 percent.

RESUMO

Pesquisou-se Neospora caninum como causador de abortamento e natimortalidade em bovinos, por meio de exame histopatológico (hematoxilina-eosina), imunoistoquímica (IHQ) e nested-PCR, utilizando primers da região Nc5 do DNA genômico (PCR PLUS) e primers da região ITS1 do DNA ribossomal (PCR JB). Foram avaliadas 105 amostras de abortamento bovino entre janeiro de 2006 a maio de 2008, encaminhadas ao Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico para diagnóstico diferencial de causas infecciosas. Observou-se em 71,4 por cento das amostras lesões histológicas (HE) caracterizadas pela presença de células inflamatórias mononucleares no coração, pulmão, fígado, rim, placenta e cérebro. A IHQ detectou 8,57 por cento de positividade, sendo maior no cérebro, placenta e coração. A nested-PCR JB revelou 6,66 por cento de casos positivos, enquanto que a nested-PCR PLUS apresentou maior taxa de positividade (20,95 por cento), principalmente no cérebro, placenta e no pool fígado/coração. Houve baixo grau de concordância entre as três técnicas pelo índice kappa. A taxa de positividade para qualquer uma das técnicas (IHQ, nested-PCR PLUS e nested-PCR JB) foi de 24,8 por cento, devendo ser consideradas conjuntamente pelo fato de possuírem características distintas e serem, portanto, complementares no diagnóstico definitivo da neosporose.