Prevalência de anticorpos anti-vírus da hepatite D (HDV) em pacientes com hepatite B no Rio de Janeiro e caracterização molecular do genoma completo do HDV / Prevalence of antibodies to hepatitis D virus (HDV) in patients with hepatitis B in Rio de Janeiro and molecular characterization of the complete genome of HDV

RESUMO

O vírus da hepatite D (Hepatitis D Virus ou HDV) é um vírus defectivo que necessita da presença do vírus da hepatite B (HBV) para completar seu ciclo infeccioso. A infecção pelo HDV está associada a uma forma mais grave de hepatite e com aumento do risco de progressão para complicações, tais como, cirrose e carcinoma hepatocelular. No Brasil, a Bacia Amazônica é uma área endêmica para a infecção pelo HDV, no entanto, poucos dados foram avaliados em outras regiões do país. Este estudo avaliou a prevalência de HDV em pacientes com infecção aguda ou crônica pelo HBV, acompanhados no Ambulatório Hepatites Virais, Rio de Janeiro, Brasil, entre 2006 e 2011. Um total de 368 amostras de soro de pacientes positivos para o antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) foi testado para a presença de anticorpos anti-HD utilizando o ensaio comercial ETI-AB-DELTAK-2, de acordo com as instruções do fabricante. Amostras com resultados reagentes ou indeterminados foram retestadas em duplicata, para confirmação ou não do resultado. Amostras anti-HD positivos foram testadas por PCR para amplificar um fragmento da região genômica do antígeno delta (HDAg). As amostras positivas para HDV RNA foram submetidas ao sequenciamento de nucleotídico, a fim de identificar o genótipo do HDV. As sequências obtidas foram alinhadas utilizando o programa Clustal X e a análise filogenética foi realizada usando o programa MEGA v.5. A carga viral do HBV foi quantificada por meio do ensaio comercial COBAS ® TaqMan ® HBV e o genótipo do HBV foi determinado pelo ensaio INNO-LIPA. Nossa população de estudo consistiu de 243 homens e 125 mulheres, com média de idade de 43 anos (1-82 anos), sendo 138 e 230 pacientes com infecção aguda e crônica pelo HBV, respectivamente. Cinco pacientes foram positivos para anticorpos anti-HD (infecção aguda pelo HBV, n = 1; infecção crônica pelo HBV, n = 4) e um dos pacientes com infecção crônica pelo HBV apresentou amostras com HDV RNA detectável. A análise filogenética mostrou que a sequência do HDV se agrupou com o genótipo 3. Dos quatro pacientes que tiveram HBV DNA detectado, três apresentaram baixos níveis de HBV DNA. Em relação ao genótipo de HBV, o genótipo A foi mais prevalente (n = 4). A fim de caracterizar a variabilidade genética de todo o genoma de HDV, o genoma completo foi sequenciado e as sequências de aminoácidos deduzidas foram inferidas utilizando o programa MEGA v.5. O genoma da amostra identificado no presente estudo é constituído por 1673 nucleotídeos e mostrou apenas 88,7% de similaridade com as sequências de genótipo 3 caracterizadas até o momento. A região LHDAg (large HDAg) da amostra brasileira contém múltiplas substituições de aminoácidos, que são conservadas em todas as sequências completas de genótipo 3, cujo significado ainda não foi estabelecido. Este trabalho constitui o primeiro estudo sobre a caracterização da variabilidade genética do genoma completo do HDV no Brasil. Em conclusão, apesar da soroprevalência de HDV ser considerada baixa em nossa coorte, este resultado destacou a importância da investigação infecção pelo HDV em áreas não endêmicas.