Hemaglutinina de folhas de mandioca (Manihot esculenta Crantz): purificação parcial e toxicidade / Hemaglutinin of cassava leaves (Manihot esculenta Crantz): partial purification and toxicity

RESUMO

Um dos componentes da multimistura para suplementação alimentar de populações carentes é a farinha de folhas de mandioca (FFM) que possui elevado conteúdo em proteínas, vitaminas e minerais. Todavia, as folhas de mandioca também apresentam substâncias antinutritivas e/ou tóxicas, como cianeto, polifenóis, nitrato, ácido oxálico, hemaglutinina, saponinas e inibidores de tripsina. Objetivou-se neste trabalho extrair as proteínas da FFM, purificando-as em coluna cromatográfica e determinar sua atividade hemaglutinante e toxicidade. Foram testadas várias estratégias de extração e precipitação das proteínas, sendo que o maior teor protéico e atividade hemaglutinante foi obtido na extração com água destilada na proporção 120 (p/v) seguida da precipitação com sulfato de amônio a 80 por cento de saturação. As proteínas precipitadas foram purificadas em coluna Q-Sepharose. Das quatro frações obtidas na purificação (I, II, III e IV), a I e a II apresentaram maiores atividades hemaglutinantes. As mesmas frações foram injetadas via intraperitoneal em camundongos com doses de 2mg (fração I), 3mg (fração II), 54mg (fração III) e 52mg (fração IV) para cada animal com 20g de peso médio, não sendo observadas mortes ou quaisquer efeitos adversos após 120h.

ABSTRACT

One of the components of the multimixture to the feed supplementation of low-income populations is cassava leaf flour (FFM), with high content of proteins, vitamins and minerals. However, cassava leaves also present substance regarded as antinutritive and/or toxic, such as cyanide, polyphenols, nitrate, oxalic acid, hemagglutinin, saponins and trypsin inhibitors. The aim of this work was to extract proteins from FFM, purifying them in chromatographic column and determine their hemagglutinating activity and toxicity. A number of strategies of extraction and precipitation of proteins were tested; the highest protein content and hemagglutinating activity were obtained in the extraction with distilled water at the 120 ratio (p/v) followed by the precipitation with ammonium sulfate at 80 percent of saturation. The precipitated proteins were purified in Q-Sepharose Fast Flow column. Out of the four purification fractions (I, II, III e IV), the I and II activities presented higher specific activity. The same fractions were injected intraperitoneal via in mice of 20g weight with doses of 2mg (fraction I), 3mg (fraction II), 54mg (fraction III) and 52mg (fraction IV). No deaths or any adverse effects was observed after 120h.