A comparative analysis of the suitability of different peripheral blood samples for reverse transcriptase polymerase chain reaction / Análise comparativa da adequação de diferentes amostras de sangue periférico em ensaios de reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa
Rev. bras. hematol. hemoter
; Rev. bras. hematol. hemoter;32(5): 391-394, 2010. ilus
Article
em En
| LILACS
| ID: lil-571631
Biblioteca responsável:
BR408.1
ABSTRACT
Venipuncture is one of the easiest clinical procedures to obtain viable blood samples to evaluate gene expression using mRNA analysis. However, the use of this sample type in reverse transcriptase polymerase chain reaction tests (RT-PCR) without prior treatment is controversial. We therefore propose to compare the suitability of different peripheral blood samples (whole blood without treatment, whole blood with hemolysis, peripheral blood mononuclear cells and frozen whole blood) for RT-PCR analysis. The results showed that, despite the blood sample being peripheral, it is possible to extract a fair amount of RNA and perform target gene amplification. Thus, peripheral blood without prior treatment could be used to investigate the gene expression using Real Time PCR.
RESUMO
A punção venosa representa um dos procedimentos clínicos mais simples na obtenção de amostras de sangue periférico e avaliação da expressão gênica através da análise do RNA mensageiro. Contudo, a utilização desta amostra, sem um tratamento prévio, em ensaios de Transcrição Reversa (RT-PCR) é controverso. Desta forma, propomos comparar a adequação de diferentes amostras de sangue periférico (sangue total sem tratamento, sangue total após hemólise, células mononucleares do sangue periférico e sangue total congelado) em ensaios de Transcrição Reversa Os resultados mostraram que independente da amostra de sangue periférico é possível extrair RNA em quantidade adequada e realizar a amplificação do gene alvo. Desta forma, o sangue periférico sem tratamento prévio pode ser utilizado em abordagens que envolvam a avaliação da expressão gênica por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real.
Palavras-chave
Blood specimen collection; Coleta de amostras sanguíneas; Espectrofotômetros; Expressão gênica; Gene expression; Genetic; RNA mensageiro; RNA, messenger; Reação em cadeia da polimerase da transcriptase inversa; Reverse transcriptase polymerase chain reaction; Spectrophotometers; Transcrição genética
Texto completo:
1
Índice:
LILACS
Assunto principal:
Transcrição Gênica
/
RNA Mensageiro
/
Coleta de Amostras Sanguíneas
/
Expressão Gênica
/
Espectrofotômetros
/
Reação em Cadeia da Polimerase
Limite:
Humans
Idioma:
En
Revista:
Rev. bras. hematol. hemoter
/
Rev. bras. hematol. hemoter. (Online)
/
Revista brasileira de hematologia e hemoterapia (Impresso)
Assunto da revista:
HEMATOLOGIA
Ano de publicação:
2010
Tipo de documento:
Article