Direct expression of a modified foot-and mouth-disease virus RNA-polymerase in Escherichia coli

RESUMO

A RNA-polimerase (RNA-pol) do vírus da Febre Aftosa foi expressa em Escherichia coli de uma maneira controlável. Para isso um vetor de expressäo foi construído, clonando-se um cDNA do gene contendo o primeiro codon (AGT) e as sequências de Shine & Delgarno foi adicionada no terminal 5' do gene. Após termoinduçäo da cepa recombinante, a RNA-pol do virus da Febre Aftosa foi expressa, chegando a atingir 10% da proteína total da célula. Esta RNA-pol recombinante apresentava um peso molecular esperado (50Kda) assim como reaçäo cruzada em Wstern blot com soros anti RNA-pol (natural) e de bovinos convalescentes de Febre Aftosa. Um soro policlonal contra a RNA-pol recombinante foi capaz de inibir a atividade enzimática da RNA-pol natural. A expressäo da RNA-pol do vírus da Febre Aftosa em E. coli facilitará a análise da atividade enzimática desta molécula assim como tornará possível o desenvolvimento de um método diagnóstico eficiente e seguro para a Febre Aftosa