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1.
J Biochem ; 164(6): 407-414, 2018 Dec 01.
Artículo en Inglés | MEDLINE | ID: mdl-30101295

RESUMEN

An active recombinant human pancreatic lipase (recHPL) was successfully prepared for the first time from the Escherichia coli expression system using short Strep-tag II (ST II). The recHPL-ST II was solubilized using 8 M urea from E.coli lysate and purified on a Strep-Tactin-Sepharose column. After refolding by stepwise dialyses in the presence of glycerol and Ca2+ for 2 days followed by gel filtration, 1.8-6 mg of active recHPL-ST II was obtained from 1 L of culture. The recHPL was non-glycosylated, but showed almost equal specific activity, pH-dependency and time-dependent stability compared to those of native porcine pancreatic lipase (PPL) at 37°C. However, the recHPL lost its lipolytic activity above 50°C, showing a lower heat-stability than that of native PPL, which retained half its activity at this temperature.


Asunto(s)
Lipasa/metabolismo , Proteínas Recombinantes de Fusión/metabolismo , Animales , Dicroismo Circular , Suplementos Dietéticos/efectos adversos , Inhibidores Enzimáticos/farmacología , Terapia de Reemplazo Enzimático/efectos adversos , Estabilidad de Enzimas , Escherichia coli/crecimiento & desarrollo , Escherichia coli/metabolismo , Glicosilación , Calor/efectos adversos , Humanos , Cuerpos de Inclusión/enzimología , Cuerpos de Inclusión/metabolismo , Cinética , Lipasa/efectos adversos , Lipasa/antagonistas & inhibidores , Lipasa/química , Lipasa/genética , Lipasa/aislamiento & purificación , Oligopéptidos/química , Oligopéptidos/genética , Oligopéptidos/aislamiento & purificación , Oligopéptidos/metabolismo , Orlistat/farmacología , Conformación Proteica , Procesamiento Proteico-Postraduccional , Replegamiento Proteico , Proteínas Recombinantes de Fusión/química , Proteínas Recombinantes de Fusión/genética , Proteínas Recombinantes de Fusión/aislamiento & purificación , Solubilidad , Sus scrofa
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