Evaluation of the immunomodulatory effect of Bougainvillea xbuttiana (Var. Orange) on the cytokine production induced by Botrhops jararaca venom in macrophages / Evaluación del efecto inmunomodulador de Bougainvillea xbuttiana (var. naranja) sobre la producción de citoquinas de macrófagos inducida pelo veneno de Bothrops jararaca

To study the effect of 50% ethanol extract of Bougainvillea xbuttiana on the enzymatic activity, cell via bility and cytokine production provoked by the venom of Bothrops jararaca in macro - phages. Three assays were used to study the effects of B. xbuttiana extract on the damage pro - duced by B. jararaca : Enzymatic activity was detected by measuring the proteoly tic and phos - pholipase A2; macrophages cytotoxicity was determined by the MTT method; levels of cytokine were evaluated using ELISA and a biological assay. After treatment with 300 µg/mL B. xbuttiana extract for 30 min, the proteolytic and phospholipase A2 activities of the venom were reduced to 95 and 61%, respectively. In macrophages cultures treated with B. xbuttiana extract combined with venom, the production of TNF - α, IL - 6 and IFN - γ was reduced, whereas IL - 10 was potenti - ated. Our results support the potential effect of the B. xbuttiana extract as a complementary therapy against the toxicity caused by the venom of B . jararaca snakes

Estudiar el efecto del extracto etanólico al 50% de Bougainvillea xbuttiana sobre la actividad enzimática viabilidad celular y producci ón de citoquinas provocada por el veneno de Bothrops jararaca en macrófagos Se utilizaron tres ensayos para estudiar los efectos del extracto de B. xbuttiana sobre el daño producido por B. jararaca : Se detectó actividad enzimática mediante la medición del proteolítico y fosfolipasa A2; la citotoxicidad de los macrófagos se determinó por el método MTT; Los niveles de citoquinas se evaluaron utilizando ELISA y un ensayo biológico. Después del tratamiento con 300 µg/mL de extracto de B. xbuttiana durante 30 mi n, las actividades proteolíticas y de fosfolipasa A2 del veneno se redujeron a 95 y 61%, respectivamente. En cultivos de macrófagos tratados con extracto de B. xbuttiana combinado con veneno, la producción de TNF - α, IL - 6 e IFN - γ se redujeron, mientras que IL - 10 se potenció. Nuestros resultados apoyan el efecto potencial del extracto de B. xbuttiana como terapia complementaria frente a la toxicidad provocada por el veneno de B. jararaca .

Evaluación del efecto inmunomodulador de Bougainvillea xbuttiana (var. naranja) sobre la producción de citoquinas de macrófagos inducida pelo veneno de Bothrops jararaca

To study the effect of 50% ethanol extract of Bougainvillea xbuttianaon the enzymatic activity, cell viability and cytokine production provoked by the venom of Bothrops jararacain macro-phages. Three assays were used to study the effects of B. xbuttianaextract on the damage pro-duced by B. jararaca: Enzymatic activity was detected by measuring the proteolytic and phos-pholipase A2; macrophages cytotoxicity was determined by the MTT method; levels of cytokine were evaluated using ELISA and a biological assay. After treatment with 300 μg/mL B. xbuttianaextract for 30 min, the proteolytic and phospholipase A2activities of the venom were reduced to 95 and 61%, respectively. In macrophages cultures treated with B. xbuttianaextract combined with venom, the production of TNF-α, IL-6 and IFN-γ was reduced, whereas IL-10 was potenti-ated. Our results support the potential effect of the B. xbuttianaextract as a complementary therapy against the toxicity caused by the venom of B. jararacasnakes.

Efeitos da fotobiomodulação na atividade de nociceptores e na expressão de citocinas pró-inflamatórias após lesão do disco da articulação temporomandibular em ratos / Effects of Photobiomodulation on nociceptive activity and in the expression of inflammatory citokynes after injury of the Temporomandibular Joint disc after in rats

A dor na articulação temporomandibular (ATM) é comum na clínica, na forma de artralgia. Geralmente, é devido a distúrbios do disco articular, deslocamentos ou trauma. Nosso objetivo foi analisar os efeitos da fotobiomodulação (PBM) na atividade nociceptora e na expressão de substâncias pró-inflamatórias no disco da ATM após lesão unilateral em ratos. Foi realizada lesão no disco após acesso cirúrgico na ATM sob anestesia geral. 40 ratos foram divididos em 4 grupos (n = 10 cada): Grupo Op + PBM: Lesão cirúrgica do disco articular e PBM; Grupo SHAM: Falso operado +PBM; Grupo Op: lesão cirúrgica do disco articular; Grupo Naive: controle. Dez sessões foram realizadas com laser GaAs com comprimento de onda de 904 nm e densidade de energia 6J / cm2. Uma parte das amostras contendo tecidos moles articulares foram preparadas para determinação do conteúdo protéico por espectrofotometria da substância P (SP), receptor do potencial transiente vaniloide do subtipo-1 (TRPV-1) e peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), Interleucina 6 (IL-6), Interleucina 1 beta (IL1-) e Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-). Foi realizada análise de variância de duas vias com pós-teste de Tukey (p <0,050). Outra parte foi utilizada para análise histológica e histomorfometrica. Houve aumento da expressão das substâncias avaliadas após lesão e uma diminuição significante após PBM, quando comparado com os demais grupos. A análise histológica e histomorfométrica mostrou reparação com melhor organização tecidual no grupo Op + PBM O uso da PBM é eficaz na modulação da atividade nociceptora e nas expressões das citocinas pró-inflamatórias na ATM.

Pain in the temporomandibular joint (TMJ) is common in the clinic, in the form of arthralgia. It is usually due to joint disc disorders, dislocations, or trauma. Our objective was to analyze the effects of photobiomodulation (PBM) on nociceptor activity and on the expression of pro-inflammatory substances in the TMJ disc after unilateral injury in rats. Disc injury was performed after surgical access to the TMJ under general anesthesia. 40 rats were divided into 4 groups (n = 10 each): Group Op + PBM: Surgical lesion of the articular disc and PBM; SHAM group: False operated +PBM; Group Op: surgical lesion of the articular disk; Naive group: control. Ten sessions were performed with a GaAs laser with a wavelength of 904 nm and an energy density of 6J/cm2. A portion of the samples containing joint soft tissues were prepared for determination of protein content by spectrophotometry of substance P (SP), receptor transient vanilloid potential subtype-1 (TRPV-1) and calcitonin gene-related peptide (CGRP), Interleukin 6 (IL-6), Interleukin 1 beta (IL1-) and Tumor Necrosis Factor alpha (TNF-). Two-way analysis of variance with Tukey's post-test (p<0.050) was performed. Another part was used for histological and histomorphometric analysis. There was an increase in the expression of the evaluated substances after injury and a significant decrease after PBM, when compared to the other groups. Histological and histomorphometric analysis showed repair with better tissue organization in the Op + PBM group the use of PBM is effective in modulating nociceptor activity and expressions of pro-inflammatory cytokines in the TMJ.

Oral administration of n-3 fatty acids positively affect the mucosal lesions after experimental ischemic enteritis in the rat.

AIM: The purpose of the study was to evaluate the effect of oral administration of n-3 polyunsaturated fatty acids in experimental ischemic enteritis in rats. METHODS: Forty Wistar rats were submitted to control narrowing of the superior mesenteric artery and were divided in two groups: N3 polyunsaturated fatty acids, which received a high-molecular polymer solution of artificial total enteral nutrition enriched with n-3 fatty acids and CONTROL which received a high-molecular polymer solution of artificial total enteral nutrition. RESULTS: Reduction of the animals' body weight was observed in both groups, but there was no difference between the two groups. Regarding the level of cytokines interleukin (IL)-1b, IL-6, and tumor necrosis factor a (TNF-a) there was no statistically significant difference between the two groups. Ischemic lesions to the small bowel mucosa were observed in both groups. A statistically significant difference in the extent of intestinal lesions was observed between the two groups with the animals that received enteral nutrition enriched with n-3 fatty acid developing fewer lesions. CONCLUSION: Enteral nutrition enriched with n-3 polyunsaturated fatty acids reduces the mucosal lesions caused by mesenteric ischemia compared to standard enteral nutrition, by modifying the local, but not the systemic, immune, and inflammatory response.

OBJETIVO: El propósito del estudio fue evaluar el efecto de la administración oral de ácidos grasos poliinsaturados n-3 en enteritis isquémica experimental en ratas. MÉTODOS: 40 ratas Wistar fueron sometidas a un estrechamiento controlado de la arteria mesentérica superior y se dividieron en dos grupos: N3PUFA, que recibieron una solución de polímero de alto peso molecular de nutrición enteral total artificial enriquecida con ácidos grasos n-3 y CONTROL que recibió un alto -Solución de polímero molecular de nutrición enteral total artificial. RESULTADOS: Se observó una reducción del peso corporal de los animales en ambos grupos, pero no hubo diferencias entre los dos grupos. Con respecto al nivel de citocinas IL-1b, IL-6 y TNF-a, no hubo diferencia estadísticamente significativa entre los dos grupos. Se observaron lesiones isquémicas de la mucosa del intestino delgado en ambos grupos. Se observó una diferencia estadísticamente significativa en la extensión de las lesiones intestinales entre los dos grupos y los animales que recibieron nutrición enteral enriquecida con ácido graso n-3 desarrollaron menos lesiones. CONCLUSIÓN: La nutrición enteral enriquecida con ácidos grasos poliinsaturados n-3 reduce las lesiones mucosas causadas por isquemia mesentérica en comparación con la nutrición enteral estándar, al modificar la respuesta local, pero no sistémica, inmunitaria e inflamatoria.

Alterações dos componentes imunes presentes no colostro de mães com diabetes mellitus gestacional / Changes in the immune components present in the colostrum of mothers with gestational diabetes mellitus

Introdução: O leite materno é considerado um alimento completo e fundamental para o recém-nascido (RN). Até os primeiros 7 dias após o parto aproximadamente, o leite excretado da mama é conhecido como colostro, um fluído de menor volume e rico em compostos imunológicos. Esse leite é responsável por fornecer nutrição ideal para o crescimento e desenvolvimento saudável dos bebês, bem como garantir a proteção e o desenvolvimento adequado do sistema imune do recém-nascido. Entretanto, alguns fatores maternos como a Diabetes Mellitus Gestacional (DMG), pode vir a alterar a concentração de citocinas e quimiocinas presentes no colostro. Nesse contexto, torna-se importante avaliar as alterações nas concentrações desses biomarcadores na presença da doença, uma vez que essas mudanças podem afetar o desenvolvimento do sistema imune do recém-nascido. Objetivo: O presente trabalho tem por objetivo avaliar se a ocorrência de DMG modifica a concentração de citocinas e quimiocinas presentes no colostro. Métodos: Estudo transversal, realizado com dois grupos de mulheres internadas no pós-parto imediato em uma Maternidade referência em Belo Horizonte. Os grupos foram separados de forma que em um deles todas as participantes apresentaram gestação saudável, e o outro grupo apresentou DMG. Foram coletados dados socioeconômicos, de saúde e antropométricos através da caderneta da gestante e avaliação no pós-parto. Também no pós-parto, foi coletado em ambos os grupos uma média de 2mL de colostro para análise da concentração das citocinas/quimiocinas por imunoensaio multiplex. Resultados: Foram incluídas no estudo 25 mulheres, sendo que 56% delas apresentaram uma gestação de risco habitual e 44% DMG. A média e desvio padrão da idade entre elas foi calculada para o grupo risco habitual e DMG respectivamente (24,86±5,26) e (30,09±6,25). No grupo DMG, observou-se aumento na concentração de IL-10, IFN- e IL-15 no colostro. Numa avaliação global, percebeu-se que o colostro das mulheres com DMG apresentam uma concentração mais alta de agentes inflamatórios, e também dos anti-inflamatórios e que há uma correlação positiva entre as citocinas e quimiocinas nesse grupo. Conclusão: Nessa perspectiva, os dados obtidos no trabalho suportam a idéia de que a doença leva a alterações imunes no colostro, sugerindo que no grupo DMG há um aumento global de citocinas e quimiocinas

Introduction: Breast milk is considered a complete and essential food for the newborn (NB). Until approximately the first 7 days after delivery, the milk excreted from the breast is known as colostrum, a fluid with less volume and rich in immunological compounds. This kind of milk is responsible for providing optimal nutrition for the healthy growth and development of babies, as well as ensuring the protection and proper development of the newborn's immune system. However, some maternal factors, such as Gestational Diabetes Mellitus (GDM), may change the concentration of cytokines and chemokines present in colostrum. In this context, it is important to evaluate changes variations in the concentrations of these biomarkers in the presence of this disease, since these variations can affect the development of the newborn's immune system. Objective: The present study aims to evaluate whether the occurrence of GDM changes the concentration of cytokines and chemokines present in colostrum. Methods: Cross-sectional study, carried out with two groups of women hospitalized in the immediate postpartum period at a reference maternity hospital in Belo Horizonte. The groups were separated so that in one of them all the participants had a healthy pregnancy, and the other group had GDM. Socioeconomic, health and anthropometric data were collected through the pregnant woman's handbook and postpartum assessment. Also in the postpartum period, an average of 2mL of colostrum was collected in both groups for analysis of cytokine / chemokine concentration by multiplex immunoassay. Results: 25 women were included in the study, 56% of whom had a normal risk pregnancy and 44% GDM. The mean and standard deviation of age between them were calculated for the usual risk and GDM groups, respectively (24.86 ± 5.26) and (30.09 ± 6.25). In the DMG group, an increase in the concentration of IL-10, IFN- and IL-15 was observed. In a global assessment, it was noticed that the colostrum of women with GDM has a higher concentration of inflammatory agents, as well as anti-inflammatory agents and that there is a positive correlation between cytokines and chemokines in this group. Conclusion: In this perspective, the data obtained in the study supports the idea that this disease leads to immune changes in colostrum, suggesting that there is an overall increase in cytokines and chemokines in the GDM group.

Avaliação da atividade imunomoduladora das pectinas in natura e modificadas obtidas de goiabas / Evaluation of immunomodulatory activity of non-modified and modified pectins from guava fruit

As pectinas presentes nas frutas, assim como sua versão modificada, estão entre as biomoléculas mais promissoras no campo da imunomodulação. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial imunomodulador de pectinas obtidas de goiabas verdes e maduras, bem como suas versões modificadas. As goiabas cv. Tailandesas foram avaliadas ao longo do amadurecimento, sendo acompanhadas as alterações da cor da polpa e casca, firmeza, produção de etileno e respiração, perda de massa e o teor de açúcares solúveis. Após a caracterização dos frutos, foram extraídas as pectinas e estas foram caracterizadas quanto ao conteúdo monossacarídico, peso molecular, presença de oligossacarídeos e grau de esterificação. As pectinas in natura de goiaba madura e verde, bem como a versão modificada desta última apresentaram frações de alto e baixo peso molecular, alta proporção de ácido galacturônico e alto teor de esterificação. Por outro lado, as pectinas modificadas derivadas de goiaba madura apresentaram maior desesterificação, com perda de frações de menor peso molecular, menor proporção de ácido galacturônico e baixo teor de esterificação. As pectinas foram incubadas com células THP-1 e RAW 264.7, e apesar da alta viabilidade celular e ausência de efeito citotóxico, resultou em expressiva produção de espécies reativas de oxigênio. De modo geral, as pectinas in natura de goiaba verde e madura, e pectina modificada de goiaba verde promoveram estímulo da produção de citocinas diversas, em especial inflamatórias, como IL-1ß, IL-12, CCL5, CXCL10 e CXCL9, para células THP-1 e IL-10 (antiinflamatória), TNF-α e MCP-1, demonstrando seu potencial imunomodulador, já para células RAW 264.7 as pectinas estimularam a produção de IL-10, TNF-α e MCP-1, demonstrando seu potencial imunomodulador. A pectina modificada derivada da goiaba madura não promoveu a indução significativa de nenhuma citocina. Estes resultados sugerem que as pectinas obtidas a partir de goiabas têm potencial imunomodulador e devem ser estudadas em outros modelos celulares e / ou em concentrações mais altas e modelos in vivo, para que esses benefícios possam realmente ser comprovados

The pectin present in fruits and their modified version are the most promising biomolecules in the immunomodulatory field. This study aimed to evaluate the immunomodulatory potential of pectins obtained from unripe and ripe guavas (Psidium guajava L.) cv. Thailandesa as well as their modified versions. The guavas were characterized during ripening regarding cell wall solubilization, sugar content, firmness, mass loss and ethylene production rate and respiration during 10th following harvest. After fruit characterization, pectins were extracted and characterized for monosaccharide content, molecular weight, presence of oligosaccharides and degree of esterification. Pectins from unripe and ripe guava as well as the modified versions of pectins had high and low molecular weight fractions, a high proportion of galacturonic acid and high esterification content. On the other hand, modified pectins derived from ripe guava showed higher de-esterification, with loss of lower molecular weight fractions, a lower proportion of galacturonic acid and low esterification content. The pectins were incubated with THP-1 and RAW 264.7 cells, and despite the high cell viability and absence of cytotoxic effect, the treatment resulted in the expressive production of reactive oxygen species. In general, pectins from ripe and unripe guava and modified pectin from unripe guava stimulated the production of diverse cytokines, especially inflammatory cytokines, such as IL-1ß, IL 12, CCL5, CXCL10, and CXCL9, for THP-1, while IL-10 (anti-inflammatory), TNF-α and MCP-1 were stimulated in RAW 264.7 cells, demonstrating their immunomodulatory potential. Modified pectin derived from ripe guava did not promote any significant induction of the cytokines investigated. These results suggest that pectins obtained from guavas have immunomodulatory potential and deserve a more in-depth investigation using other cellular models and/or use of higher concentrations and in vivo models tests so their immunomodulatory benefits can be prove

Can fish oil supplementation in breast cancer patients with neoadjuvant chemotherapy alter nutritional, biochemical and immunological parameters? / Suplementação de óleo de peixe em pacientes com câncer de mama com quimioterapia neoadjuvante pode alterar parâmetros nutricionais, bioquímicos e imunológicos?

The aim of this study was to evaluate the n-3 fatty acid supplementation effects in breast cancer patients. Methods: it was a prospective longitudinal study performed in breast cancer patients supplemented with fish oil during 8 weeks in neoadjuvant AC-T regimen. Anthropometric, Bioelectrical impedance (BIA) ((Lean Body Mass (LBM), and Phase Angle (PA)), food consumption, nutritional impact symptoms (NIS), metabolic and inflammatory profile were evaluated for 2 months. Results: supplemented patients presented weight gain of 1.4 kg, representing 1.8% of body weight. LBM was 42.3 Kg and PA 6.1º. Nausea, diarrhea and anorexia were the main NIS with reduction in incidence with the supplementation, but xerostomia and heartburn had increase. There was significant drop in hemoglobin values to 12.3 mg/ dL, metabolic parameters and nutritional prognosis (CRP/albumin ratio) were not altered. Cytokines levels of TNF-α and interleukin-6 did not change, however interleukin-2 have shown significant increasing. Conclusion: Body weight gain was noticed in breast cancer patients, independent of food consumption. Fish oil supplementation during neoadjuvant chemotherapy was able to reduce NIS incidence, but not avoiding the decrease of hemoglobin levels, but it keeps the maintenance of proinflammatory parameters, except for increased the cytokine IL-2 (AU)

O objetivo foi avaliar os efeitos da suplementação de ácidos graxos n-3 em pacientes com câncer de mama. Metodologia: estudo prospectivo longitudinal realizado em pacientes suplementados com óleo de peixe durante 8 semanas em quimioterapia neoadjuvante com regime AC-T. Antropometria e impedância bioelétrica (massa corporal magra (massa magra) - ângulo de fase (AP)), consumo alimentar, sintomas de impacto nutricional (SIN) e perfil metabólico e inflamatório foram avaliados. Resultados:Os pacientes apresentaram ganho de peso de 1,4 kg, representando 1,8% do peso corporal. LBM foi 42,3 kg e AP 6,1º. Náusea, diarreia e anorexia foram o SIN com redução na incidência com a suplementação, mas a xerostomia e a azia aumentaram. Houve uma queda significativa nos valores de hemoglobina para 12,3 mg/dL, parâmetros metabólicos e prognóstico nutricional (relação PCR/albumina) não foram alterados. Os níveis de citocinas de TNF-α e interleucina-6 não mudaram, entretanto a interleucina-2 mostrou um aumento significativo. Conclusão: O ganho de peso corporal foi observado nas pacientes com câncer de mama, independente do consumo alimentar. Durante a quimioterapia neoadjuvante com suplementação de óleo de peixe houve redução da presença de SIN, diminuição dos níveis de hemoglobina e manutenção de parâmetros bioquímicos e inflamatórios, exceto pelo aumento da citocina IL-2 (AU)

Resposta imune periapical à medicação intracanal à base de hidróxido de cálcio e selênio / Periapical immune response to intracanal medication based on calcium hydroxide and selenium

O tratamento endodôntico tem como objetivo eliminar a contaminação microbiana dos sistemas de canais radiculares (SCR) por meio da instrumentação mecânica e irrigação química (PMQ). Quando não for possível a resolução em uma única sessão, o SCR deverá ser preenchido com uma medicação intracanal para evitar a recolonização microbiana tardia. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação do hidróxido de cálcio, mundialmente utilizado como medicação intracanal, associado ao selênio (H.C + Se), em dentes portadores de necrose pulpar. A amostra foi composta por 60 pacientes que possuiam dentes com indicação de tratamento endodôntico, divididos em grupos (n=15): sem medicação intracanal (Empty); que foram medicados com hidróxido de cálcio (H.C), Selênio (Se) e hidróxido de cálcio + selênio (H.C + Se). Após a abertura coronária, 3 cones de papel absorvente foram inseridos no terço inicial do conduto e mantidos por 2 min para avaliação microbiana. Após o PMQ, novos cones foram introduzidos nos SCR, ultrapassando-se 2mm do ápice radicular, e mantidos no tecido perirradicular por 2min para a coleta do fluido intersticial periapical. A coleta foi novamente realizada 15 dias após o PMQ. A expressão gênica do mRNA do fragmento 16S de procariontes, das citocinas INF-γ, TNF-α, IL-1α, IL-17A, IL-10, IL-6 e MCP-1 foram quantificadas por PCR em tempo real. O mRNA 16S foi avaliado antes do PMQ e 15 dias após, nos grupos sem medicação e com medicação intracanal. A redução significativa da carga microbiana foi observada apenas no grupo com medicação intracanal (p<0,05). Observou-se um aumento da expressão gênica das citocinas (T15) TNF-α e IL-10 no grupo H.C+Se em comparação aos demais grupos (p<0,05). A expressão de mRNA de IFN-γ reduziu nos grupos tratados com as medicações (H.C, Se, H.C + Se). Conclui-se que o uso de medicação intracanal é imprescindível para se evitar a recolonização do SCR. A inclusão do selênio na pasta de hidróxido de cálcio resultou na potencialização da expressão de citocinas que permitirão o reparo dos tecidos perirradiculares.

Endodontic treatment aims to eliminate the microbial contamination of the root canal system (RCS) and is achieved with the use of mechanical instrumentation and chemical irrigation. When resolution in a single session is not possible, the RCS should be filled with intracanal medication to avoid subsequent recolonization. The present study aimed to evaluate the effect of calcium hydroxide, wich is used globally as an intracanal medication, in combination with selenium (CH + Se) as an intracanal medication in teeth with pulp necrosis. The sample consisted of 60 patients requiring endodontic treatment who were divided into groups: without intracanal medication (empty) and with medication; calcium hydroxide (CH), selenium (Se) and calcium hydroxide + selenium (CH + Se) (n = 15). After the coronary opening, three absorbent paper cones were inserted in the initial third of the RCS and maintained for 2min for microbial evaluation. After the cleaning and shaping procedures, new cones were introduced into the RCS, extending 2 mm from the root apex and were kept in the periradicular tissue for 2 min' to collect the periapical fluid. The collection was also performed 15 days later. Real time PCR was used to quantify the expression of the prokaryotic 16S ribosomal RNA gene. Additionally, the cytokines IFN-γ, TNF-α, IL-1α, IL-17A, IL-10, IL-6 and MCP-1 were also quantified by real-time PCR. The 16S mRNA was evaluated before the cleaning and shaping procedures and 15 days later in the groups treated with or without medication. A significant reduction in the microbial load was observed only in the intracanal group (p <0.05). There was an increase in the gene expression level of the cytokines (T15) TNF-α and IL-10 in the CH+ group compared to the other groups (p <0.05). The expression of IFN-γ mRNA was reduced in the groups treated with the medications (CH, Se, and CH + Se). The findings of the present study indicate that in the case of treatment over multiple sessions, the use of intracanal medication is essential to avoid the recolonization of the RCS. The inclusion of selenium with calcium hydroxide resulted in the potentiation of the anti-inflammatory phase of the periradicular tissues.

Involvement of adenosine A1 receptor in electroacupuncture-mediated inhibition of astrocyte activation during neuropathic pain / Envolvimento do receptor de adenosina A1 na inibição da ativação de astrócitos mediada por eletroacupuntura durante a dor neuropática

ABSTRACT Neuropathic pain is a chronic pain condition caused by damage or dysfunction of the central or peripheral nervous system. Electroacupuncture (EA) has an antinociceptive effect on neuropathic pain, which is partially due to inhibiting astrocyte activation in the spinal cord. We found that an intrathecal injection of 8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX), a selective adenosine A1 receptor antagonist, reversed the antinociceptive effects of EA in a chronic constriction injury-induced neuropathic pain model. The expression of GFAP in L4-L6 spinal cord was significantly upgraded, while DPCPX suppressed the effect of the EA-mediating inhibition of astrocyte activation, as well as wiping out the EA-induced suppression of cytokine content (TNF-α). These results indicated that the adenosine A1 receptor is involved in EA actions during neuropathic pain through suppressing astrocyte activation as well as TNF-α upregulation of EA, giving enlightenment to the mechanisms of acupuncture analgesia and development of therapeutic targets for neuropathic pain.

RESUMO A dor neuropática é uma condição de dor crônica causada por dano ou disfunção do sistema nervoso central ou periférico. A eletroacupuntura (EA) tem um efeito antinociceptivo durante a dor neuropática, que é parcialmente devido à inibição da ativação de astrócitos na medula espinhal. Descobrimos que a injeção intratecal de 8-ciclopentil-1,3-dipropilxantina (DPCPX), um antagonista seletivo do receptor de adenosina A1, reverteu os efeitos antinociceptivos da EA no modelo de dor neuropática induzida por lesão por constrição crônica (CCI). A expressão da GFAP na medula espinal L4-L6 foi significativamente melhorada, enquanto a DPCPX suprimiu o efeito da inibição mediadora da EA na ativação de astrócitos, bem como eliminou a supressão induzida pela EA do conteúdo de citocina (TNF-α). Esses resultados indicam que o receptor de adenosina A1 está envolvido nas ações da EA durante a dor neuropática, suprimindo a ativação astrocitária, bem como o aumento da TNF-α na EA, fornecendo esclarecimentos sobre os mecanismos de analgesia da acupuntura e o desenvolvimento de alvos terapêuticos para dor neuropática.

Fatty acid profile in erythrocytes associated with serum cytokines in pediatric cystic fibrosis patients / Perfil de ácidos graxos nos eritrócitos associados com citocinas séricas em pacientes pediátricos com Fibrose Cística

ABSTRACT Objective To analyze erythrocyte fatty acid composition and its association with serum cytokine levels in pediatric cystic fibrosis patients. Methods A cross-sectional study was performed at a reference center in Rio de Janeiro, Brazil. We have included all pediatric patients aged 5-19 years with confirmed cystic fibrosis diagnosis. Erythrocyte fatty acid composition and serum cytokine (TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-8) and C-reactive protein levels were measured. The cut-off point to determine essential fatty acids deficiency was the linoleic acid concentration of <21%. Results Twenty-six children (<10 years old) and thirty-one adolescents were studied. Most patients were female and heterozygous for DF508 mutation and suffered from exocrine pancreatic insufficiency. Both children and adolescents had lower linoleic acid concentration (<21%). TNF-α was the only pro-inflammatory marker whose levels were increased; the increase was greater in children. An association between fatty acid composition in erythrocytes and cytokines IL-1β and IL-6 was observed (p<0.05). Conclusion The pediatric cystic fibrosis patients studied presented a deficiency of essential fatty acids, and an association between fatty acid profile in erythrocytes and serum pro-inflammatory cytokines was observed. These findings highlight the importance of this type of assessment that may open new possibilities for studying pathophysiology and treating cystic fibrosis patients, such as the dietary supplementation with n-3 fatty acids (eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids). However, further longitudinal studies are needed for better clarification of the imbalance in lipid metabolism and inflammation in cystic fibrosis

RESUMO Objetivo Analisar a composição dos ácidos graxos nos eritrócitos e sua associação com os níveis séricos de citocinas em pacientes pediátricos com fibrose cística. Métodos Estudo transversal, realizado em um centro de referência no Rio de Janeiro/Brasil. Foram incluídos todos os pacientes pediátricos com diagnóstico confirmado de fibrose cística, entre cinco e 19 anos de idade. Foram analisadas a composição de ácidos graxos nos eritrócitos, as citocinas séricas (TNFα, IL-1, IL-6 e IL-8) e a proteína C reativa. O ponto de corte para determinar a deficiência de ácidos graxos essenciais foi a concentração de ácido linoleico <21%. Resultados Foram estudadas 26 crianças (<10 anos) e 31 adolescentes, sendo a maioria do sexo feminino, heterozigoto para a mutação DF508 e com insuficiência pancreática exócrina. Nas crianças e nos adolescentes as concentrações de ácido graxo linoleico eram baixas (<21%). O TNF-α foi o único marcador pró-inflamatório cujas concentrações estavam aumentadas, principalmente nas crianças. Uma associação entre a composição de ácidos graxos nos eritrócitos e as citocinas IL-1β e IL-6 foi observada (p<0,05). Conclusão Os pacientes pediátricos estudados apresentaram deficiência de ácidos graxos essenciais e foi observada associação entre o perfil de ácidos graxos nos eritrócitos com as citocinas pró-inflamatórias séricas. Os achados destacam a importância deste tipo de avaliação sobre a fisiopatologia e o tratamento de pacientes com fibrose cística, como a suplementação com ácidos graxos n-3 (eicosapentaenoico e docosahexaenoico). No entanto são necessários mais estudos longitudinais no esclarecimento entre o desequilíbrio do metabolismo lipídico e a inflamação na fibrose cística.

Análise epidemiológica e imunológica em indígenas das etnias Sateré Mawé e Tikuna portadores de infecções endodônticas / Epidemiological and immunological analysis in indigenous people of the Sateré Mawé and Tikuna ethnic groups with endodontic infections

Os povos indígenas compõem 305 etnias, distribuídas por todas as unidades federativas do Brasil. Esta diversidade cultural consiste em uma das maiores riquezas do país, mas, ao mesmo tempo, é também um grande desafio para a elaboração e implementação de políticas públicas específicas e diferenciadas. O objetivo deste estudo foi analisar o perfil epidemiológico de saúde bucal e a necessidade de tratamento endodôntico de indígenas das etnias SATERÉ MAWÉ, que vivem em Barreirinha-AM, e TIKUNA, residentes na zona urbana de MANAUS-AM. Após determinar a necessidade de tratamento endodôntico, este estudo comparou as respostas perirradiculares de infecções endodônticas entre membros de uma civilização ocidental, residentes em Belo Horizonte MG, e indígenas não miscigenados da etnia TIKUNA. Para a análise epidemiológica participaram do estudo 138 indivíduos, sendo 98 pertencentes à etnia TIKUNA e 40 SATERÉ-MAWE; distribuídos nos grupos etários de 7 a 50 anos ou mais. Para a analise imunológica das alterações perirradiculares das populações selecionas, coletaram-se as amostras clínicas em dentes portadores de necrose pulpar. Os indígenas da etnia Tikuna foram atendidos na Clínica de Endodontia da UNIP (Universidade Paulista), campus Manaus. Os membros da população ocidental foram atendidos nas clínicas da Faculdade de Odontologia da UFMG. As amostras foram coletadas imediatamente após a instrumentação do SCR, introduzindo-se cones absorventes nos SCR, 1 mm além do ápice radicular. Subsequentemente, as amostras foram transferidas para um tubo estéril, e mantidas na temperatura de - 70 º C até a sua análise. Utilizando-se o PCR em tempo real, avaliou-se a expressão das citocinas e quimiocinas TNF-, IL-1-, IL-9, INF-, IL-17, IL-10, CXCR-4, CCL-2/MCP-1 e CCR-6. Os resultados demonstram que, em relação à etnia SATERÉ-MAWÉ, na faixa etária de 7 a 12 anos, o CPO-d apresentou valor médio de 3.17. Comparando-se o índice CPO-d e a necessidade de tratamento endodôntico em cada uma das etnias, verificou-se que estas variáveis estão correlacionadas, uma vez que, à medida que o CPO-d aumentou, verificou-se um aumento na necessidade de tratamento endodôntico. Os molares prevaleceram dentre os os dentes mais acometidos por cárie e com necessidade de tratamento endodôntico. Quanto à análise imunológica, observou-se um aumento significativo na expressão gênica de TNF, CCL-2/MCP-1, CXCR4, e CCR6, após os procedimentos de limpeza e formatação dos SCR apenas na população ocidental. Os níveis de INF- aumentaram na 2a coleta na população indigena, enquanto, em ambas as populações, houve um aumento significativo na expressão de IL-10 e IL-17 após os procedimentos de limpeza e formataçao. Não observaram-se diferenças significativas entre as expressões de IL-1 , IL-9, e CCL4, entre a 1ª e 2ª coleta, em ambas as populações. Conclui-se que as populações indígenas encontram-se desasistidas, visto que o CPO-d de ambas as etnias se encontram acima dos padrões recomendados pela OMS, principalmente na faixa etária de 07 a 12anos. Ademais, o nível de escolaridade ainda é muito baixo nas populações indígenas analisadas, mesmo na comunidade Tikuna, situada na zona urbana de Manaus/AM. Finalmente, observaram-se padrões imunes distintos quando se comparou as respostas das comunidades ocidentais e Tikuna, sugerindo que os determinantes genéticos e ambientais devem ser mais bem avaliados no futuro.

The indigenous peoples comprise 305 ethnic groups, distributed by all the federative units of Brazil. This cultural diversity is one of the most significant assets of the country, but at the same time, it is also a great challenge for the elaboration and implementation of specific and differentiated public policies. The objective of this study was to analyse the epidemiological profile of oral health and the need for endodontic treatment of SATERÉ MAWÉ indigenous people living in Barreirinha-AM, and TIKUNA, living in the urban area of MANAUS-AM. After determining the need for endodontic treatment, this study compared the perirradicular responses of endodontic infections among members of western civilisation, living in Belo Horizonte - MG, and no - mixed indigenous TIKUNA. For the epidemiological analysis, the study consisted of 138 individuals, of whom 98 were TIKUNA ethnicity, and 40 were SATERÉ-MAWE ethnics; aged between 7 and 50 years or more. For the immunological analysis of the perirradicular alterations of the selected populations, the clinical samples were collected in teeth with pulp necrosis. The Tikuna Indians were treated at the Endodontics Clinic of UNIP (Universidade Paulista), Manaus campus. The members of the western population were attended in the clinics of the Faculty of Dentistry of UFMG. Samples were collected immediately after SCR instrumentation, introducing absorbent cones in the SCR, 1 mm beyond the root apex. Subsequently, the samples were transferred to a sterile tube and maintained at -70 ° C until analysed. Using the real-time PCR, the expression of cytokines and chemokines TNF-, IL-1-, IL-9, INF-, IL-17, IL-10, CXCR- 2 / MCP-1 and CCR-6. The results show that, concerning the ethnicity SATERÉ-MAWÉ, in the age group of 7 to 12 years, the CPO-d presented a mean value of 3.17. Comparing the CPO-d index and the need for endodontic treatment in each of the ethnicities, these variables were correlated, since, as CPO-d increased, there was an increase in the demand for endodontic treatment. The molars prevailed among the teeth most affected by caries and in need of endodontic treatment. As for the immunological analysis, a significant increase in the gene expression of TNF, CCL-2 / MCP-1, CXCR4, and CCR6 was observed after the SCR cleaning and formatting procedures only in the western population. INF- levels increased in the second collection in the Indian community, while in both people, there was a significant increase in the expression of IL-10 and IL-17 after the cleaning and shaping procedures. There were no significant differences between IL-1, IL-9, and CCL4, between the 1st and 2nd collection, in both populations. It is concluded that the indigenous people are disassociated, since the CPO-d of both ethnic groups is above the standards recommended by the WHO, especially in the age group from 07 to 12 years. Besides, the educational level is still shallow in the indigenous populations analysed, even in the Tikuna community, located in the urban area of Manaus / AM. Finally, distinct immune patterns were observed when comparing Western societies and Tikuna responses, suggesting that genetic and environmental determinants should be better evaluated in the future. Keywords: endodontic treatment, epidemiology, indigenous, cytokines, chemokines, periapical lesion.

Avaliação da expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias após estímulo celular com diferentes agentes irrigantes / Evaluation of the expression of pro and anti-inflammatory cytokines after cellular stimulation with different irrigating agents

O objetivo do trabalho foi investigar o efeito de diferentes soluções químicas auxiliares, em concentrações subcitotóxicas, na expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias, quando em contato com células da linhagem de linfoma humano, diferenciadas em macrófagos, human macrophage-like (U937), através da adição de 125ng/mL de PMA. As concentrações, citotóxica e subcitotóxica, de cada solução, foram determinadas de acordo com padrão ISO, utilizando-se fibroblastos de camundongos (L929). As células L929 foram cultivadas em meio MEM completo e mantidas em placas de 96 poços. As células foram então colocadas em contato com as diluições das soluções químicas auxiliares (a partir das concentrações recomendadas para uso, NaOCL 5,25%; CHX 2%; Quitosana 0,2%; HEBP 18%; GSE de Vitis vinífera, 6,5%), por 24 horas a 37ºC em estufa de CO2. Em seguida, o meio de cultivo contendo 1mg/mL de MTT foi adicionado aos poços em triplicata, para avaliação da viabilidade celular e determinação das concentrações citotóxicas (30% de morte das células L929) e subcitotóxicas (15% de morte) por regressão linear por meio do programa GraphPad Prism versão 6.0. As concentrações subcitotóxicas foram colocadas em contato com as células human macrophage-like (U937) por 60 min. Os sobrenadantes da pré-incubação (controles sem substâncias químicas auxiliares), e incubação com as soluções químicas auxiliares em meio DMEM completo foram congelados em freezer ultrafrio (­ 80ºC) e avaliados para as concentrações de dezessete citocinas através do kit Bio-Plex Pro Human Th17 Cytokine Panel® pelo método Luminex®. Foi possível obter valores de expressão de 7 citocinas pró-inflamatórias: IL-1ß, TNFα, IL-6, IL-17A, IL-17F, IL-22 e IL-23. As substâncias com maior atividade citotóxica (padrão ISO para morte celular) foram em ordem de grandeza, a quitosana, a CHX, o NaOCl, o HEBP e o GSE de Vitis vinifera. As concentrações subcitotóxicas das soluções químicas auxiliares, CHX e NaOCl, induziram ao aumento da maioria das citocinas pró-inflamatórias, exceto para a IL-6. Quanto a IL-1ß, a quitosana e a CHX, estas foram as que mais induziram a expressão pelas células U937 (P<0,05),enquanto o NaOCl induziu maior expressão de TNFα (P>0,05). Dentre as citocinas relacionadas ao fenótipo Th17, a CHX foi a que mais induziu a expressão de IL-17A (P<0,05), IL-17F e IL-23, seguido do NaOCl(P<0,05). O NaOCl induziu maior expressão de IL22 seguido da CHX (p<0,05). Quanto a IL-6, todas as substâncias modularam a sua expressão pelas células U937(p>0.05). O HEBP atuou como um excelente modulador da expressão de citocinas pró-inflamatórias, induzindo a redução da expressão de todas as citocinas testadas (P<0,05). O GSE de Vitis vinifera, apesar de ser o menos citotóxico não apresentou diferença estatística para o controle em nenhuma das situações avaliadas, exceto para a redução da IL-6 (assim como o HEBP e a quitosana) (p<0,05). A quitosana comportou-se de forma similar ao GSE de Vitis vinífera (p>0,05) exceto para a IL-1ß. Conforme observado, as substâncias químicas auxiliares são capazes de induzir a expressão de citocinas pró-inflamatórias diversas. O HEBP foi o agente químico que melhor modulou a expressão de citocinas pró-inflamatórias.

The aim of this investigation was to analyze the effect of different chemical endodontic solutions, in subcytotoxic concentrations, on the expression of pro and anti-inflammatory cytokines when in contact with human lymphoma lineage differentiated into human macrophages, human macrophage-like (U937), by the addition of 125ng/ml PMA. The cytotoxic and subcytotoxic concentrations of each solution were determined according to ISO standard using mouse fibroblasts (L929). L929 cells were cultured in complete MEM medium and maintained in 96-well plates. Dilutions of the auxiliary chemical solutions, from the recommended concentrations for use: NaOCL 5,25%; CHX 2%; Chitosan 0.2%; Etidronic acid 18% and Grape seed extract, Vitis vinifera, 6.5%, were carried out in complete MEM medium, and placed in contact with the cells for 24 hours at 37ºC in CO2 cell incubator, in triplicate. Thereafter, the culture medium containing 1 mg/mL MTT was added to the wells. Cytotoxic concentrations (30% death of L929 cells) and subcytotoxic (15% death) were determined by linear regression using GraphPad Prism version 6.0. Subcytotoxic concentrations were obtained in complete DMEM medium and maintained in contact for 60 min. with U937 cells. Controls without chemical substances were also performed. Supernatants from the pre-incubation, incubation with the chemical solutions and complete DMEM were removed, frozen in ultra-cold freezer (-80ºC) and evaluated for the concentrations of 17 cytokines through the Bio-Plex Pro Human Th17 Cytokine Panel® kit by Luminex®. The substances with higher cytotoxic activity were in order of magnitude: chitosan, CHX, NaOCl, etidronic acid and Vitis vinifera extract. The values of 7 pro-inflammatory cytokines: IL-1ß, TNFα, IL-6, IL-17A, IL-17F, IL-22 and IL-23 were obtained. Subcytotoxic concentrations of the irrigant agents (chlorhexidine and NaOCl) generally induced the increase of most pro-inflammatory cytokines, except for IL-6. Chitosan and CHX were the agents that most induced the expression of IL-1ß by U937 cells, whereas NaOCl induced higher TNFα expression (P> 0,05). Among the cytokines related to the Th17 phenotype, CHX was the agent that induced the highest expression of IL-17A (P <0,05), IL-17F and IL-23, followed by NaOCl (P<0,05). NaOCl induced the highest expression of IL22 followed by CHX. All of the substances modulated the expression of IL-6 by U937 cells (P >0,05). HEBP was an excellent modulator of the expression of pro-inflammatory cytokines, inducing the reduction of the expression of all cytokines tested. Vitis vinifera extract, despite being the least cytotoxic agent, did not present statistical differences compared to the control for any of the evaluated cytokines, except for the reduction of IL-6 (as well as etidronic acid and chitosan) (P<0,05). Chitosan, except for IL-1 ß, was very similar to the Vitis vinifera (P>0,05) extract. As observed, the auxiliary substances (especially the irrigants) are capable of inducing the expression of various pro-inflammatory cytokines. Etidronic acid was the chemical that modulated the expression of pro-inflammatory cytokines.

Omega-3 fatty acids, inflammatory status and biochemical markers of patients with systemic lupus erythematosus: a pilot study / Ácidos graxos ômega-3, estado inflamatório e marcadores bioquímicos de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico: estudo piloto

Abstract Background: Studies have shown that omega-3 fatty acids reduce the concentrations of eicosanoids, cytokines, chemokines, C-reactive protein (CRP) and other inflammatory mediators. Objective: To investigate the effects of omega-3 fatty acids on circulating levels of inflammatory mediators and biochemical markers in women with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods: Experimental clinical study (clinical trial: NCT02524795); 49 women with SLE (ACR1982/1997) were randomized: 22 to the omega-3 group (daily intake of 1080 mg EPA + 200 mg DHA, for 12 weeks) and 27 to the control group. The inflammatory mediators and biochemical markers at T0 and T1 in omega-3 group were compared using Wilcoxon test. U-Mann-Whitney test was used to compare variations of measured variables [ΔV = pre-treatment (T0) − post-treatment (T1) concentrations] between groups. p < 0.05 was considered significant. Results: The median (interquartile range - IQR) of age was 37 (29-48) years old, of disease duration was 7 (4-13) years, and of SLEDAI-2K was 1 (0-2). The median (IQR) of variation in CRP levels between the two groups showed a decrease in omega-3 group while there was an increase in control group (p = 0.008). The serum concentrations of IL-6 and IL-10, leptin and adiponectin did not change after a 12 week treatment. Conclusions: Supplementation with omega-3 had no impact on serum concentrations of IL-6, IL-10, leptin and adiponectin in women with SLE and low disease activity. There was a significant decrease of CRP levels as well as evidence that omega-3 may impact total and LDL-cholesterol.

Resumo Introdução: Estudos têm mostrado que os ácidos graxos ômega-3 reduzem as concentrações de eicosanoides, citocinas, quimiocinas, proteína C-reativa (PCR) e outros mediadores inflamatórios. Objetivo: Investigar os efeitos dos ácidos graxos ômega-3 sobre os níveis circulantes de mediadores inflamatórios e marcadores bioquímicos em mulheres com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: Ensaio clínico randomizado (ensaio clínico: NCT02524795); randomizaram-se 49 mulheres com LES (ACR1982/1997): 22 para o grupo ômega-3 (dose diária de 1.080 mg de EPA + 200 mg de DHA durante 12 semanas) e 27 para o grupo controle. Os mediadores inflamatórios e marcadores bioquímicos em T0 e T1 no grupo ômega-3 foram comparados pelo teste de Wilcoxon. O teste U de Mann-Whitney foi usado para comparar variações das variáveis mensuradas [ΔV = concentrações pré-tratamento (T0) menos concentrações pós-tratamento (T1)] entre os grupos. Um p < 0,05 foi considerado significativo. Resultados: A mediana (intervalo interquartil-IIQ) da idade foi de 37 anos (29-48), a duração da doença foi de sete anos (4-13) anos e o Systemic Lupus Disease Activity Index (Sledai-2 K) foi de 1 (0-2). A mediana (IIQ) da variação nos níveis de PCR entre os dois grupos mostrou um decréscimo no grupo ômega-3, enquanto houve um aumento no grupo controle (p = 0,008). As concentrações séricas de IL-6 e IL-10, leptina e adiponectina não se alteraram após um tratamento de 12 semanas. Conclusões: A suplementação de ômega-3 não teve impacto sobre as concentrações séricas de IL-6, IL-10, leptina e adiponectina em mulheres com LES e baixa atividade da doença. Houve uma diminuição significativa nos níveis de PCR, bem como evidências de que o ômega-3 pode impactar sobre o colesterol total e LDL.

Specific immune response in neonate Holstein heifer calves fed fresh or frozen colostrum / Resposta imune específica em bezerras holandesas recém-nascidas alimentadas com colostro fresco ou congelado

The objective of this study was to evaluate the influence of viable cells from colostrum on immune development in dairy heifer calves during the first 28 days of life. The animals were distributed between 2 groups: COL+ (n=9) receiving fresh whole colostrum from their own damns; and COL- (n=10) receiving pooled frozen colostrum, containing no viable cells, from a pool of donor cows. These calves were assessed before colostrum intake (D0), 48 hours of age (D2), and weekly from D7 to D28. The development of immunity was evaluated by assessment of the phenotype of blood leukocyte subsets, and induced cytokine production after 72 hours of stimulation in culture with concanavalin A (ConA), killed Staphylococcus aureus (S.aureus) and killed Escherichia coli (E. coli) by peripheral blood mononuclear cell (PBMC). The clinical history of these calves was marked by a high frequency of diarrhea in both groups. However, COL- had greater diarrhea intensity scores (fecal score~3 of 4), and rectal temperature on D7 than COL+ calves. Moreover, bronchopneumonia (n=1) and navel inflammation were observed only in COL- calves. COL- had a lower concentration of serum iron, and a higher absolute number of lymphocytes on D7 than COL+. COL- also had a higher percentage of anemic calves than the COL+ calves on D21 and D28. In general, the percent of cells within each subset of leukocytes was similar between the groups over the experiment, except on week 1 when COL- calves had a higher percentage of lymphocytes expressing CD45RO+ (P=0.07). A steady increase in CD45RO+ and concomitant decline in CD45RO- leukocytes was observed over the course of the study, indicating the development of immune memory. The proportion of CD14MHCII+ leukocytes increased with age (P≤0.05). The median background cytokine production by PBMC that were not stimulated was below the level of detection of the assays used for both groups. The PBMC from COL+ calves stimulated with ConA secreted a larger quantity of IL-17 week 2 (COL+=2060.0pg/mL and COL-=0.0pg/mL, P=0.00). PBMC from COL+ calves stimulated with killed S. aureus whole cell antigen (P=0.05) and killed E. coli whole cell antigen (P=0.05) also secreted higher levels of IL17 than COL- calves at week 4. Clear production of IL17 was observed in PBML from COL+ calves at week 2, but the difference was not statistical different between groups. In conclusion, calves fed fresh and frozen colostrum showed no difference in cells subset profile overall. The increased percentage of leukocytes expressing the memory CD45RO+ or CD14MHCII+ over the course of the experiment indicated a maturation of the adaptive immune response after natural exposure to pathogens in the environment of the calf. The enhanced IL17 secretion by COL+ calves indicated that viable maternal cells modulated T-cell Th17 production that was primed by bacterial antigens. This mechanism could be responsible for quick and efficient activation of neutrophils for bacterial clearance. The differences in cytokine production observed between groups may help to explain the different clinical pictures observed for calves COL+ and COL- calves.(AU)

O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência das células do colostro no desenvolvimento imune em bezerras leiteiras durante os primeiros 28 dias de vida. Os animais foram distribuídas em 2 grupos: COL+ (n=9) recebeu colostro fresco de suas próprias mães; e COL- (n=10) recebeu pool de colostro congelado sem células viáveis oriundo de vacas doadoras. Estas bezerras foram avaliadas antes da ingestão do colostro (D0); às 48 horas (D2) e semanalmente entre o D7 e D28. O desenvolvimento da imunidade foi avaliada pela fenotipagem das subpopulações celulares do sangue e produção de citocinas pelas células mononucleares sanguíneas após 72 horas de estimulação com concanavalina A (ConA), Staphylococcus aureus (S. aureus) e Escherichia coli (E. coli) inativadas. O histórico clínico das bezerras foi marcado por elevada frequência de diarreias em ambos os grupos. Entretanto, COL- apresentou maior intensidade de diarreia (escore de fezes ~ 3 de 4) e maior temperatura retal no D7 do que as bezerras COL+. Além disso, broncopneumonia (n=1) e inflamações umbilicais foram diagnosticadas apenas nas bezerras COL-. O grupo COL- apresentou menor concentração de ferro sérico e maior número de linfócitos no D7 do que o grupo COL+. COL- também apresentou maior frequência de anemias que o grupo COL+ no D21 e D28. Em geral, a fração das subpopulações celulares foram semelhantes entre os dois grupos ao longo do tempo estudado, exceto na semana 1, onde as bezerras COL- apresentaram maior proporção de CD45RO+ (P=0.07). Observou-se um constante aumento de CD45RO+ com declínio concomitante de CD45RO- ao longo do estudo, indicando o desenvolvimento da resposta imune. A proporção de células CD14MHCII+ aumentou de acordo com a idade (P≤0.05). As medianas das citocinas produzidas a partir do PBMC não estimuladas apresentaram valores abaixo do nível de detecção em ambos os grupos. O PBMC do COL+ estimulado com ConA secretou elevada concentração de IL17 na semana 2 (COL+=2060.0pg/mL e COL-=0.0pg/ml, P=0.00). PBMC do COL+ estimuladas com S. aureus inativado (P=0.05) e E. coli inativada (P=0.05) secretaram níveis mais elevados de IL17 que as bezerras COL- na semana 4. Outros picos de IL17 foram observados no COL+ na semana 2, porém não foi possível detectar diferenças estatísticas entre os grupos. Conclui-se que as bezerras alimentadas com colostro fresco e congelado apresentaram perfil similar entre as proporções das subpopulações celulares. O aumento de células expressando os marcadores de memória CD45RO+ e CD14MHCII+ demonstram, ao longo do experimento, o amadurecimento do sistema imune específico das bezerras após estimulação natural por patógenos após o nascimento. A maior secreção de IL17 pelas células das bezerras COL+ indica que as células maternas podem modular resposta imune Th17 direcionada aos antígenos bacterianos. Este mecanismo poderia ser responsável pela rápida e eficiente quimiotaxia de neutrófilos e eliminação dos microrganismos bacterianos. Os diferentes perfis de citocinas podem ser responsáveis pelos diferentes históricos clínicos relatados para as bezerras COL+ e COL-.(AU)

Omega-3 fatty acids, inflammatory status and biochemical markers of patients with systemic lupus erythematosus: a pilot study.

BACKGROUND: Studies have shown that omega-3 fatty acids reduce the concentrations of eicosanoids, cytokines, chemokines, C-reactive protein (CRP) and other inflammatory mediators. OBJECTIVE: To investigate the effects of omega-3 fatty acids on circulating levels of inflammatory mediators and biochemical markers in women with systemic lupus erythematosus (SLE). METHODS: Experimental clinical study (clinical trial: NCT02524795); 49 women with SLE (ACR1982/1997) were randomized: 22 to the omega-3 group (daily intake of 1080mg EPA+200mg DHA, for 12 weeks) and 27 to the control group. The inflammatory mediators and biochemical markers at T0 and T1 in omega-3 group were compared using Wilcoxon test. U-Mann-Whitney test was used to compare variations of measured variables [ΔV=pre-treatment (T0)-post-treatment (T1) concentrations] between groups. p<0.05 was considered significant. RESULTS: The median (interquartile range - IQR) of age was 37 (29-48) years old, of disease duration was 7 (4-13) years, and of SLEDAI-2K was 1 (0-2). The median (IQR) of variation in CRP levels between the two groups showed a decrease in omega-3 group while there was an increase in control group (p=0.008). The serum concentrations of IL-6 and IL-10, leptin and adiponectin did not change after a 12 week treatment. CONCLUSIONS: Supplementation with omega-3 had no impact on serum concentrations of IL-6, IL-10, leptin and adiponectin in women with SLE and low disease activity. There was a significant decrease of CRP levels as well as evidence that omega-3 may impact total and LDL-cholesterol.

Avaliação do controle da expressão gênica de citocinas pró inflamatórias mediado pela IL-10. Participação da IL-10 na modulação da resposta inflamatória exercida pela glutamina e na restrição alimentar / Proinflammatory cytokines gene expression control mediated by IL-10. Participation of IL-10 on inflammatory response exerted by glutamine and dietary restriction

O desenvolvimento de uma resposta imune adequada é um processo extremamente importante para a manutenção da homeostase do organismo. Uma série de processos são desencadeados a partir do primeiro contato com micro-organismos patógenos até a efetivação da resposta imune de memória. Todos esses processos envolvem a participação e a complexa atuação de mediadores como as citocinas inflamatórias e também citocinas regulatórias, que exercerão efeitos controlando o processo inflamatório. Diversos mecanismos moleculares, subjacentes à resposta inflamatória, ainda não estão totalmente compreendidos, como por exemplo o controle da expressão de genes inflamatórios exercido pela IL-10. Os processos envolvidos na resposta inflamatória são mantidos às custas do consumo de nutrientes, dentre eles podemos destacar o aminoácido glutamina, que atua em nível molecular, fornecendo nitrogênio para a formação do material genético e fonte energética para determinadas células do sistema imunológico como os macrófagos. Portanto, neste trabalho, investigamos os efeitos da IL-10 na modificação de nucleossomos, evidenciando o papel dessa citocina em regular a expressão de genes inflamatórios em macrófagos. Avaliamos também a função da glutamina, modulando a expressão de RNAm de citocinas inflamatórias e regulatórias dessas células. E por último, desenvolvemos um modelo de restrição alimentar em camundongos, nos quais avaliamos os efeitos desse modelo considerando-se alguns aspectos hematológicos e estudamos as alterações na resposta inflamatória em células esplênicas e do peritônio, bem como avaliamos a suplementação de glutamina in vitro na produção das citocinas (IL-12, TNF-alfa, IL-10) e a expressão do fator de transcrição NFkB. Os resultados compilados mostraram que a IL-10 leva a uma rápida redução da acetilação de nucleossomos, modulando a arquitetura da cromatina de genes inflamatórios como a IL-12. A glutamina modula a expressão de citocinas inflamatórias, regulando positivamente a expressão de IL-10 e Interferon beta. E a restrição alimentar induz a redução de citocinas proinflamatórias (IL-12 e TNF-α), influenciadas pelo aumento da produção de IL-10 e finalmente a suplementação com glutamina não interfere nesses parâmetros nas células peritoneiais e esplênicas do grupo submetido à restrição alimentar. Conclusão: a IL-10 modula a expressão gênica através da modificação de nucleossomos em macrófagos derivados da medula; a glutamina modula a expressão de IL-10 inibindo a resposta inflamatória, e a restrição alimentar modula alguns aspectos hematológicos e possui propriedades anti-inflamatórias.

The development of an appropriate immune response is an important process to the organism's homeostatic maintenance. A series of processes are triggered upon the very first contact with pathogens, up to the immunological memory establishment. These processes implicate in the participation of complex mediators, such as inflammatory and regulatory cytokines that will control the inflammatory process. Some mechanisms underlying the inflammatory response are not totally understood, the control of inflammatory genes exerted by IL-10 is an example. The processes involved in the inflammatory response are kept with nutrients expense, among these nutrients we can highlight the amino acid glutamine. It acts in a molecular level, supplying nitrogen to genetic material formation and as an energy supply for immune cells such as macrophages. Thus, we investigated the IL-10 effects on nucleosome modifications evidencing this cytokine role regulating inflammatory genes expression in macrophages. We also evaluated glutamine functions modulating inflammatory and regulatory cytokines mRNA expression on these cells. Ultimately, we developed a dietary restriction animal model where we evaluated it's effects on selected haematological aspects, analyzing the alteration in the inflammatory response of splenic and peritoneal cells. We also evaluated in vitro glutamine supplementation assessing cytokines production (IL-12, TNF-α, and IL-10) and the expression of NFkB transcription factor. The compiled results a expressive reduction in nucleosome acetylation modifying the chromatin architecture of inflammatory genes such as IL-12 and IL-6. Glutamine modulates inflammatory cytokines gene expression upregulating the expression of IL-10 and interferon beta. The dietary restriction reduces proinflammatory cytokines production (IL-12 and TNF-α), these results are influenced by the upregulated IL-10 production, glutamine supplementation have no effect on these parameters in the dietary restriction group. In conclusion, we can infer that IL-10 modulates gene expression trough nucleosome modification in bone marrow derived macrophages, glutamine has a potential effect on IL-10 expression, inhibiting the inflammatory response and dietary restriction modifies hematological parameters, presenting anti-inflammatory properties.

Avaliação do controle da expressão gênica de citocinas pró inflamatórias mediado pela IL-10. Participação da IL-10 na modulação da resposta inflamatória exercida pela glutamina e na restrição alimentar / Proinflammatory cytokines gene expression control mediated by IL-10. Participation of IL-10 on inflammatory response exerted by glutamine and dietary restriction

O desenvolvimento de uma resposta imune adequada é um processo extremamente importante para a manutenção da homeostase do organismo. Uma série de processos são desencadeados a partir do primeiro contato com micro-organismos patógenos até a efetivação da resposta imune de memória. Todos esses processos envolvem a participação e a complexa atuação de mediadores como as citocinas inflamatórias e também citocinas regulatórias, que exercerão efeitos controlando o processo inflamatório. Diversos mecanismos moleculares, subjacentes à resposta inflamatória, ainda não estão totalmente compreendidos, como por exemplo o controle da expressão de genes inflamatórios exercido pela IL-10. Os processos envolvidos na resposta inflamatória são mantidos às custas do consumo de nutrientes, dentre eles podemos destacar o aminoácido glutamina, que atua em nível molecular, fornecendo nitrogênio para a formação do material genético e fonte energética para determinadas células do sistema imunológico como os macrófagos. Portanto, neste trabalho, investigamos os efeitos da IL-10 na modificação de nucleossomos, evidenciando o papel dessa citocina em regular a expressão de genes inflamatórios em macrófagos. Avaliamos também a função da glutamina, modulando a expressão de RNAm de citocinas inflamatórias e regulatórias dessas células. E por último, desenvolvemos um modelo de restrição alimentar em camundongos, nos quais avaliamos os efeitos desse modelo considerando-se alguns aspectos hematológicos e estudamos as alterações na resposta inflamatória em células esplênicas e do peritônio, bem como avaliamos a suplementação de glutamina in vitro na produção das citocinas (IL-12, TNF-alfa, IL-10) e a expressão do fator de transcrição NFkB. Os resultados compilados mostraram que a IL-10 leva a uma rápida redução da acetilação de nucleossomos, modulando a arquitetura da cromatina de genes inflamatórios como a IL-12. A glutamina modula a expressão de citocinas inflamatórias, regulando positivamente a expressão de IL-10 e Interferon beta. E a restrição alimentar induz a redução de citocinas proinflamatórias (IL-12 e TNF-α), influenciadas pelo aumento da produção de IL-10 e finalmente a suplementação com glutamina não interfere nesses parâmetros nas células peritoneiais e esplênicas do grupo submetido à restrição alimentar. Conclusão: a IL-10 modula a expressão gênica através da modificação de nucleossomos em macrófagos derivados da medula; a glutamina modula a expressão de IL-10 inibindo a resposta inflamatória, e a restrição alimentar modula alguns aspectos hematológicos e possui propriedades anti-inflamatórias

The development of an appropriate immune response is an important process to the organism's homeostatic maintenance. A series of processes are triggered upon the very first contact with pathogens, up to the immunological memory establishment. These processes implicate in the participation of complex mediators, such as inflammatory and regulatory cytokines that will control the inflammatory process. Some mechanisms underlying the inflammatory response are not totally understood, the control of inflammatory genes exerted by IL-10 is an example. The processes involved in the inflammatory response are kept with nutrients expense, among these nutrients we can highlight the amino acid glutamine. It acts in a molecular level, supplying nitrogen to genetic material formation and as an energy supply for immune cells such as macrophages. Thus, we investigated the IL-10 effects on nucleosome modifications evidencing this cytokine role regulating inflammatory genes expression in macrophages. We also evaluated glutamine functions modulating inflammatory and regulatory cytokines mRNA expression on these cells. Ultimately, we developed a dietary restriction animal model where we evaluated it's effects on selected haematological aspects, analyzing the alteration in the inflammatory response of splenic and peritoneal cells. We also evaluated in vitro glutamine supplementation assessing cytokines production (IL-12, TNF-α, and IL-10) and the expression of NFkB transcription factor. The compiled results a expressive reduction in nucleosome acetylation modifying the chromatin architecture of inflammatory genes such as IL-12 and IL-6. Glutamine modulates inflammatory cytokines gene expression upregulating the expression of IL-10 and interferon beta. The dietary restriction reduces proinflammatory cytokines production (IL-12 and TNF-α), these results are influenced by the upregulated IL-10 production, glutamine supplementation have no effect on these parameters in the dietary restriction group. In conclusion, we can infer that IL-10 modulates gene expression trough nucleosome modification in bone marrow derived macrophages, glutamine has a potential effect on IL-10 expression, inhibiting the inflammatory response and dietary restriction modifies hematological parameters, presenting anti-inflammatory properties

Efecto biológico de la recuperación nutricional en las concentraciones séricas de citocinas inflamatorias en el niño desnutrido grave / Biological effect of nutritional recovery on serum concentrations of inflammation cytokines in the malnourished child

El niño con desnutrición grave tiene una disfunción de la respuesta inmune que puede aumentar de manera significativa la morbilidad y la mortalidad por infecciones. El objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de la recuperación nutricional en las concentraciones séricas de citocinas inflamatorias; tales como: interleucina 12 (IL-12), interleucina 17 (IL-17), interferón gamma (IFN-γ) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α). En un estudio de tipo prospectivo y longitudinal, se seleccionó la población con base a criterios clínicos y antropométricos, constituida por 24 niños desnutridos graves en edades comprendidas entre 1 y 2 años, quienes formaban parte de un programa de recuperación nutricional. La concentración sérica de las citocinas investigadas se determinó antes y después del tratamiento nutricional, empleando la técnica de Inmunoanálisis Enzimático (ELISA) de doble anticuerpo. Para establecer comparaciones se utilizó la t de Student, y se consideró una p<0,05 como estadísticamente significante. Se observó una diferencia en las concentraciones de IL-12, IL-17, IFN-γ y TNF-α antes y después del tratamiento (p<0,05), lo cual parece indicar que la desnutrición per se provoca un estado inflamatorio y que 2 meses de apoyo nutricional intensivo, favorecen no solo la recuperación clínica del niño desnutrido grave, sino también la recuperación de su respuesta inmunitaria en cuanto a la producción de mediadores solubles como son las citocinas.

Children with severe malnutrition have a dysfunction of the immune response that can significantly increase morbidity and mortality from infections. The aim of this investigation was to evaluate the effect of nutritional recovery in serum measurements of inflammatory cytokines; such as interleukin 12 (IL-12), interleukin 17 (IL-17), interferon gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α). In a prospective and longitudinal study, 24 severe malnourished children aged between 1 and 2 years-old, who were part of a program of nutritional recovery, were selected based on clinical and anthropometric criteria. Serum measurements of cytokines were determined before and after dietary treatment, using the technique of sandwich Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA). For comparisons, Student’s t test was used, considered p <0.05 as statistically significant. A difference was observed in the concentrations of IL-12, IL-17, IFN-γ and TNF-α before and after treatment (p <0.05), which suggests that malnutrition provokes an inflammatory state and two months of intensive nutritional support, not only promotes the clinical recovery of severe malnourished children, but also the recovery of the immune response with regard to the production of soluble mediators, such as cytokines.

Produção de IL-1beta, IL-6 e IL-8 por fibroblastos estimulados por cimentos endodônticos e submetidos à terapia laser de baixa potência / IL-1beta, IL-6 and IL-8 fibroblasts production stimulated by endodontic sealers and submitted to Low-Level Laser Therapy

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1β, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias ± erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA...

Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1β, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media ± standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckey’s test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed...

Produção de IL-1beta, IL-6 e IL-8 por fibroblastos estimulados por cimentos endodônticos e submetidos à terapia laser de baixa potência / IL-1beta, IL-6 and IL-8 fibroblasts production stimulated by endodontic sealers and submitted to Low-Level Laser Therapy

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1β, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias ± erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA ...

Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1β, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media ± standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckey’s test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed ...