Antioxidant activity, cytotoxicity, phenolic content, and phytochemical composition of Pithecellobium Diversifolium benth: a pilot study / Atividade antioxidante, citotóxica, conteúdo fenólico e composição fitoquímica de Pithecellobium Diversifolium benth: um estudo piloto / Actividad antioxidante, citotóxica, contenido fenólico y composición fitoquímica de Pithecellobium Diversifolium benth: un estudio piloto

Species of Pithecellobium (Fabaceae) are used in traditional medicine to treat diabetes, cough, bronchitis, and inflammation. This study aims to evaluate the content and determine the antioxidant activity, phenolic compounds content, and cytotoxicity of the extract and the fractions of Pithecellobium diversifolium. This is unprecedented research with an exotic species from the Caatinga, northeastern Brazil, using High-performance Liquid Chromatography-Electrospray Ionization-Mass Spectrometry (HPLC-ESI-MS). The MeOH fractions of leaves and stem barks showed a high content of flavonoids (198.1 ± 106.50 and 542.7 ± 2.52 mg EqQ/g). The CH2Cl2 fraction of peels showed a high content of total phenolic compounds (516.7 ± 3.00 mg EqAG /g). The DPPH test showed that the CH2Cl2 fraction (leaves) held an EC50 of 0.08 ± 0.02, a higher value than that observed for the standards used in the test­Butylated hydroxyanisole (BHA), Butylated hydroxytoluene (BHT), and ascorbic acid. The AcOEt and MeOH fractions of peels presented moderate cytotoxicity with values below 500 µg/mL. The MeOH fraction of leaves showed seven major compounds: myricetin, quercetin, quercetin-arabinofuranoside, apigenin-triglycosides, and apigenin-diglucoside, being the last three unpublished in studies involving the genus. The tests conducted in this study show the potential of P. diversifolium as a promising source of biomolecules with therapeutic applicability.

Espécies de Pithecellobium (Fabaceae) são usadas na medicina tradicional para tratar diabetes, tosse, bronquite e inflamação. Este estudo teve como objetivo avaliar o teor e determinar a atividade antioxidante, o teor de compostos fenólicos e a citotoxicidade do extrato e das frações de Pithecellobium diversifolium, uma pesquisa inédita com uma espécie exótica da Caatinga do Nordeste do Brasil, utilizando a instrumentação Clae-IES. As frações MeOH das folhas e cascas do caule apresentaram alto teor de flavonoides (198,1 ± 106,50 e 542,7 ± 2,52 mg EqQ/g). A fração CH2Cl2 das cascas apresentou um elevado teor de compostos fenólicos totais (516,7 ± 3,00 mg EqAG/g). O teste DPPH mostrou que a fração CH2Cl2 (folhas) apresentou um EC50 de 0,08 ± 0,02, valor superior ao observado para os padrões utilizados no teste ­ Butil hidroxianisol (BHA), Butil hidroxitolueno (BHT) e ácido ascórbico. As frações AcOEt e MeOH das cascas apresentaram citotoxicidade moderada com valores inferiores a 500 µg/mL. A fração MeOH das folhas apresentou sete compostos majoritários: miricetina, quercetina, quercetina-arabinofuranosídeo, apigenina-triglicosídeos e apigenina-diglucosídeo, sendo os três últimos inéditos em estudos envolvendo o gênero. Os testes realizados demonstram o potencial de P. diversifolium, uma promissora fonte de biomoléculas com aplicabilidade terapêutica.

Las especies de Pithecellobium (Fabaceae) se utilizan en la medicina tradicional para tratar diabetes, tos, bronquitis e inflamación. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el contenido y determinar la actividad antioxidante, el contenido de compuestos fenólicos y la citotoxicidad del extracto y de las fracciones de Pithecellobium diversifolium, un estudio inédito con una especie exótica de la Caatinga de la región Nordeste de Brasil, que utilizó la instrumentación HPLC-ESI. Las fracciones MeOH de hojas y cortezas de tallo mostraron un alto contenido de flavonoides (198,1 ± 106,50 y 542,7 ± 2,52 mg EqQ/g). La fracción CH2Cl2 de las cortezas presentó un alto contenido de compuestos fenólicos totales (516,7 ± 3,00 mg EqAG/g). El ensayo DPPH mostró que la fracción CH2Cl2 (hojas) tenía EC50 de 0,08 ± 0,02, valor superior a lo observado para los estándares utilizados en el ensayo ­Butilhidroxianisol (BHA), butilhidroxitolueno (BHT) y ácido ascórbico. Las fracciones AcOEt y MeOH de las cortezas presentaron una citotoxicidad moderada con valores inferiores a 500 µ g/mL. La fracción MeOH de las hojas contiene siete compuestos principales: miricetina, quercetina, quercetina-arabinofuranosido, apigenina-triglucósidos y apigenina-diglucósido, de los cuales los tres últimos son inéditos en estudios sobre el género. Las pruebas realizadas demuestran el potencial de P. diversifolium, una fuente prometedora de biomoléculas con aplicabilidad terapéutica.

Mosquitocidal activities of Chenopodium botrys whole plant n-hexane extract against Culex quinquefasciatus / Atividades mosquitocidas do extrato de n-hexano de planta inteira de Chenopodium botrys contra Culex quinquefasciatus

Abstract This research aimed to investigate various mosquitocidal activities of Chenopodium botrys whole- plant n-hexane extract against Culex quinquefasciatus. The extract showed remarkable larvicidal, pupicidal, adulticidal, oviposition deterrent and adult emergence inhibitory activities against Cx. quinquefasciatus. During the larvicidal and pupicidal activities, the 24-hour lethal concentration (LC50) of extract against 2nd instar larvae, 4th instar larvae and pupae were 324.6, 495.6 and 950.8 ppm, respectively. During the CDC (Centers for Disease Control and Prevention) bottle bioassay for adulticidal activity, the median knockdown times (KDT50) at 1.25% concentration was 123.4 minutes. During the filter paper impregnation bioassay for adulticidal activity, the KDT50 value at 0.138 mg/cm2 concentration was 48.6 minutes. The extract was fractionated into 14 fractions through silica gel column chromatography which were then combined into six fractions on the basis of similar retention factor (Rf) value. These fractions were screened for adulticidal activity by applying CDC bottle bioassay. The fraction obtained through 60:40 to 50:50% n-hexanes-chloroform mobile phase with 0.5 Rf value showed 100% adulticidal activity at 0.2% concentration. During oviposition deterrent activity, the highest concentration (1000 ppm) showed 71.3 ± 4.4% effective repellence and 0.6 ± 0.1 oviposition activity index. During adult emergence inhibition activity, the median emergence inhibition (EI50) value was 312.3 ppm. From the outcome of the present investigation, it is concluded that the n-hexane extract of C. botrys whole- plant possesses strong larvicidal, pupicidal, adulticidal, oviposition deterrent and adult emergence inhibitory activities against Cx. quinquefasciatus.

Resumo Esta pesquisa teve como objetivo investigar várias atividades mosquitocidas do extrato n-hexano de planta inteira de Chenopodium botrys contra Culex quinquefasciatus. O extrato mostrou atividades larvicida, pupicida, adulticida, dissuasora de oviposição e inibidora da emergência de adultos contra a Cx. quinquefasciatus. Durante as atividades larvicida e pupicida, a concentração letal de 24 horas (CL50) do extrato contra larvas de 2º estádio, larvas de 4º estádio e pupa foi de 324,6, 495,6 e 950,8 ppm, respectivamente. Durante o bioensaio com frasco do CDC (Centros para Controle e Prevenção de Doenças) para adulticida, o tempo médio de desativação (KDT50) na concentração de 1,25% foi de 123,4 minutos. Durante o bioensaio de impregnação com papel de filtro para a atividade adulticida do extrato, o valor KDT50 na concentração de 0,138 mg / cm2 foi de 48,6 minutos. O extrato foi fracionado em 14 frações através de cromatografia em coluna de gel de sílica que foram então combinadas em seis frações com base em um valor de fator de retenção (Rf) semelhante. Essas frações foram selecionadas quanto à atividade adulticida por meio da aplicação do bioensaio com garrafa do CDC. A fração obtida através da fase móvel de n-hexanos-clorofórmio 60:40% a 50:50% com valor de 0,5 Rf apresentou atividade adulticida de 100% na concentração de 0,2%. Durante a atividade de dissuasão da oviposição, a maior concentração de extrato (1000 ppm) apresentou repelência efetiva de 71,3 ± 4,4% e índice de atividade de oviposição de 0,6 ± 0,1. Durante a atividade de inibição da emergência de adultos, o valor médio de inibição da emergência (EI50) foi de 312,3 ppm. A partir do resultado da presente investigação, conclui-se que o extrato de n-hexano da planta inteira de C. botrys possui fortes atividades larvicida, pupicida, adulticida, dissuasora da oviposição e inibidora da emergência de adultos contra a Cx. quinquefasciatus.

Phytochemical screening of Cordia glabrata (MART.) A.DC. extracts and its potential antioxidant, photoprotective, antimicrobial and antiviral activities / Triagem fitoquímica de extratos de Cordia glabrata (MART.) A.DC. e sua potencial atividade antioxidante, fotoprotetora, antimicrobiana e antiviral

Abstract Species of the genus Cordia have shown biological activities, such as anti-inflammatory, analgesic, antioxidant, antiviral, and antifungal activities. The species Cordia glabrata (MART) A.DC. Has no information concerning its phytochemical profile and possible biological activities. Thus, this study aimed to evaluate this profile in ethanolic extracts of young, adult and senescent leaves, as well as their antioxidant, photoprotective, antimicrobial, and virucidal potentials. Phytochemical analysis was performed by TLC (thin-layer chromatography) and showed the presence of flavonoids, tannins, and terpenes. The evaluation by UPLC-MS/MS (Ultra performance liquid chromatography - tandem mass spectrometer) evidenced the presence of caffeic (3.89 mgL-1), p-cumaric (6.13 mgL-1), and ferulic (0.58 mgL-1) acids, whilst, in GC/MS (Gas chromatography-mass spectrometry) analysis there was a greater amount of palmitic (51.17%), stearic (20.34%), linoleic (9.62%), and miristic (8.16%) fatty acids. The DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) and ABTS+ (2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) radicals were used to verify the potential antioxidant activity, observing a better activity for the leaf extract in the adult phenological stage: 54.63 ± 1.06 µgmL-1 (DPPH) and 44.21 ± 1.69 mM (ABTS). The potential photoprotective activity of the extracts was determined by spectrophotometry and the in vitro values of SPF (Sun Protection Factor) in young and adult leaves (5.47 and 5.41, respectively) showed values close to the minimum SPF of 6.0 required by ANVISA (Brazilian Health Regulatory Agency). It was not observed an antimicrobial activity for Staphylococcus aureus with a minimum inhibitory concentration of 2000 μgmL-1, however the anti-herpetic assay against the Herpes simplex virus type 2 (HSV-2) showed a potent virucidal activity at the tested concentrations with CV50 value <0.195 μgmL-1 and a Selectivity Index (SI = CC50 / CV50) greater than 448. The results obtained in this study suggest that extracts of leaves of C. glabrata in their adult phenological stage have potential antioxidant, photoprotective and virucidal activity, considering in vitro test results.

Resumo Espécies do gênero Cordia apresentam atividades biológicas, como anti-inflamatória, analgésica, antioxidante, antiviral e antifúngica. Para a espécie Cordia glabrata (MART) A.DC., ainda não existem informações sobre seu perfil fitoquímico e possíveis atividades biológicas, deste modo, o presente estudo teve como objetivo avaliar este perfil em extratos etanólicos de folhas jovens, adultas e senescentes, bem como o potencial antioxidante, fotoprotetor, antimicrobiano e virucida. A análise fitoquímica foi realizada por CCD (Cromatografia em Camada Delgada), mostrando a presença de flavonóides, taninos e terpenos. Na avaliação por CLAE EM/EM (Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência acoplada a Espectrometria de Massas) foi evidenciado a presença dos ácidos caféico (3,89 mgL-1), p-cumárico (6,13 mgL-1) e ferúlico (0,58 mgL-1), paralelamente, na CG/EM (Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas) verificou-se maior quantidade dos ácidos graxos palmítico (51,17%), esteárico (20,34%), linoléico (9,62%) e mirístico (8,16%). Os radicais DPPH (2,2-Difenil-1-picrilhidrazil) e ABTS+ (2′-Azino-bis (ácido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico)) foram utilizados para verificar o potencial antioxidante, observando-se uma atividade superior para o extrato da folha em sua fase fenológica adulta: 54,63 ± 1,06 µgmL-1 (DPPH) e 44,21 ± 1,69 mM (ABTS+). A potencial atividade fotoprotetora dos extratos foi determinada espectrofotometricamente e os valores in vitro de FPS (Fator de Proteção Solar) em folhas jovens e adultas (5,47 e 5,41 respectivamente) apresentaram valores próximos ao FPS mínimo de 6,0 exigido pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária). Não foi observada atividade antimicrobiana para Staphylococcus aureus sendo a concentração inibitória mínima de 2000 μgmL-1, no entanto o ensaio anti-herpético contra o vírus Herpes simplex tipo 2 (HSV-2) mostrou uma potente atividade virucida nas concentrações testadas com um valor de CV50 <0,195 μgmL-1 e um Índice de Seletividade (IS = CC50 / CV50) maior que 448. Os resultados obtidos neste estudo sugerem que extratos de folhas de C. glabrata em seu estágio fenológico adulto apresentam potencial antioxidante, fotoprotetora e virucida, considerando os resultados de testes in vitro.

Caracterização de cereja-do-rio grande (Eugenia involucrata DC. ) e grumixama (Eugenia brasiliensis LAM. ), frutos nativos da Mata Atlântica, quanto a compostos voláteis e precursores / Volatile compounds and precursors characterization of the Grumixama (Eugenia brasiliensis LAM. ) and Cereja-do-Rio-Grande (Eugenia involucrata DC. ), atlantic forest native fruits

Mesmo reduzida e fragmentada, o vasto bioma da Mata Atlântica abriga milhares de plantas. Como destaque, tem-se as espécies frutíferas, aos quais podem ser atribuídas um importante valor para a segurança alimentar, nutricional e sociocultural. Entre elas, têm-se a cereja-do-rio grande (Eugenia involucrata DC.) e a grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.), caracterizadas pela polpa de sabor doce-acidulado, sendo muito apreciadas e utilizadas tanto in natura, quanto no preparo de doces, xaropes, licores e geleias. Uma das características determinantes para o sucesso e aceitação destes frutos pelo consumidor, são os atributos de qualidade sensorial. As propriedades aromáticas dos frutos dependem da potência individual dos voláteis e a concentração de cada um, bem como a combinação com outros compostos. Todavia, apesar do grande potencial de mercado, devido às características nutricionais, fitoterápicas, potencial funcional e ao sabor exótico, os plantios existentes destas são oriundos de multiplicação por sementes, resultando em plantas desuniformes quanto as características de produção e qualidade. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo identificar metabólitos voláteis que confiram características sensoriais desejáveis aos frutos. Auxiliando na identificação de plantas que produzem frutos com voláteis de interesse para o sabor, o que permitirá a clonagem e propagação de plantas com homogeneidade na produção. Os compostos voláteis foram analisados em triplicata, de acordo com o método de microextração em fase sólida (SPME, do inglês Solid Phase Microextraction). Os resultados mostraram que os grupos de frutos das diversas regiões se diferenciaram quanto a composição dos metabolitos voláteis, bem como na abundância destes compostos. Observou-se também uma variação de composição entre as árvores da mesma região demonstrando tal irregularidade ocasionada pela propagação por sementes. A maioria de compostos voláteis produzidos foram identificados como terpenos, sendo estes já conhecidos pela importância no flavor em frutos. Desta forma, conhecer o aroma fornecerá um conjunto de dados que são subsídios para outros pesquisadores trabalharem em suas diversas áreas buscando características necessárias para o sucesso da comercialização, ocasionando no incentivo ao cultivo e valorização da riqueza nacional, no âmbito das espécies frutíferas, com vistas à proteção ambiental e em defesa da biodiversidade brasileira

The Atlantic Forest harbors thousands of plants despite of its reduced and fragmented character. It is important to highlight the fruit species which hold attributed and important value for food and socio-cultural security. Among them, there are the big cherry (Eugenia involucrata DC.) And the grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.), fruit with sweet-acidulated flavor, which is much appreciated and used in the preparation of sweets, syrups, liqueurs, and jellies. One of the determining characteristics for the success and acceptance of these fruits by the consumer are the attributes of sensorial quality. The aromatic properties of the fruits depend on the individual potency of the volatiles and the concentration in each one of them, as well as the combination with other compounds. Despite of the great market potential due to the nutritional, phytotherapic and exotic flavor characteristics, the existing plantations of these fruits are originated from seed multiplication, resulting on uneven plants in terms of production and quality characteristics. In this sense, the presented work below was aimed to identify volatile metabolites that confer desirable sensorial characteristics to the fruits. The volatile compounds were analyzed in triplicate according to the Solid Phase Microextraction (SPME) method. The results showed that the fruit groups from different regions differed in terms of the composition of volatile metabolites, as well as in the abundance of these compounds. There was also a variation of composition among the trees of the same region which demonstrated such heterogeneity caused by seed propagation. Most volatile compounds produced were identified as terpenes which are known for playing an important role in the flavor of fruits. In this way, by knowing the aroma, a set of data will be provided and used as an allowance for other researchers who are working in the various areas related to the pursue of the necessary characteristics for the commercial success, resulting on the motivation to cultivate and value the forest

Caracterização de cereja-do-rio grande (Eugenia involucrata DC. ) e grumixama (Eugenia brasiliensis LAM. ), frutos nativos da Mata Atlântica, quanto a compostos voláteis e precursores / Volatile compounds and precursors characterization of the Grumixama (Eugenia brasiliensis LAM. ) and Cereja-do-Rio-Grande (Eugenia involucrata DC. ), atlantic forest native fruits

Mesmo reduzida e fragmentada, o vasto bioma da Mata Atlântica abriga milhares de plantas. Como destaque, tem-se as espécies frutíferas, aos quais podem ser atribuídas um importante valor para a segurança alimentar, nutricional e sociocultural. Entre elas, têm-se a cereja-do-rio grande (Eugenia involucrata DC.) e a grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.), caracterizadas pela polpa de sabor doce-acidulado, sendo muito apreciadas e utilizadas tanto in natura, quanto no preparo de doces, xaropes, licores e geleias. Uma das características determinantes para o sucesso e aceitação destes frutos pelo consumidor, são os atributos de qualidade sensorial. As propriedades aromáticas dos frutos dependem da potência individual dos voláteis e a concentração de cada um, bem como a combinação com outros compostos. Todavia, apesar do grande potencial de mercado, devido às características nutricionais, fitoterápicas, potencial funcional e ao sabor exótico, os plantios existentes destas são oriundos de multiplicação por sementes, resultando em plantas desuniformes quanto as características de produção e qualidade. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo identificar metabólitos voláteis que confiram características sensoriais desejáveis aos frutos. Auxiliando na identificação de plantas que produzem frutos com voláteis de interesse para o sabor, o que permitirá a clonagem e propagação de plantas com homogeneidade na produção. Os compostos voláteis foram analisados em triplicata, de acordo com o método de microextração em fase sólida (SPME, do inglês Solid Phase Microextraction). Os resultados mostraram que os grupos de frutos das diversas regiões se diferenciaram quanto a composição dos metabolitos voláteis, bem como na abundância destes compostos. Observou-se também uma variação de composição entre as árvores da mesma região demonstrando tal irregularidade ocasionada pela propagação por sementes. A maioria de compostos voláteis produzidos foram identificados como terpenos, sendo estes já conhecidos pela importância no flavor em frutos. Desta forma, conhecer o aroma fornecerá um conjunto de dados que são subsídios para outros pesquisadores trabalharem em suas diversas áreas buscando características necessárias para o sucesso da comercialização, ocasionando no incentivo ao cultivo e valorização da riqueza nacional, no âmbito das espécies frutíferas, com vistas à proteção ambiental e em defesa da biodiversidade brasileira

The Atlantic Forest harbors thousands of plants despite of its reduced and fragmented character. It is important to highlight the fruit species which hold attributed and important value for food and socio-cultural security. Among them, there are the big cherry (Eugenia involucrata DC.) And the grumixama (Eugenia brasiliensis Lam.), fruit with sweet-acidulated flavor, which is much appreciated and used in the preparation of sweets, syrups, liqueurs, and jellies. One of the determining characteristics for the success and acceptance of these fruits by the consumer are the attributes of sensorial quality. The aromatic properties of the fruits depend on the individual potency of the volatiles and the concentration in each one of them, as well as the combination with other compounds. Despite of the great market potential due to the nutritional, phytotherapic and exotic flavor characteristics, the existing plantations of these fruits are originated from seed multiplication, resulting on uneven plants in terms of production and quality characteristics. In this sense, the presented work below was aimed to identify volatile metabolites that confer desirable sensorial characteristics to the fruits. The volatile compounds were analyzed in triplicate according to the Solid Phase Microextraction (SPME) method. The results showed that the fruit groups from different regions differed in terms of the composition of volatile metabolites, as well as in the abundance of these compounds. There was also a variation of composition among the trees of the same region which demonstrated such heterogeneity caused by seed propagation. Most volatile compounds produced were identified as terpenes which are known for playing an important role in the flavor of fruits. In this way, by knowing the aroma, a set of data will be provided and used as an allowance for other researchers who are working in the various areas related to the pursue of the necessary characteristics for the commercial success, resulting on the motivation to cultivate and value the forest

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-¹. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência(HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark

Abstract The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-1. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

Resumo O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico-química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-1. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físicoquímica, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Verificação de adulterações em cúrcuma, gengibre, noz-moscada, páprica, pimenta-do-reino e colorífico, comercializados no estado de São Paulo, Brasil. (Parte II) / Verification of adulterations in turmeric, ginger, nutmeg, paprika, black pepper and colorífico marketed in the state of São Paulo, Brazil. (Part II)

Especiarias são produtos constituídos de partes de espécies vegetais com importante valor alimentício e diversos benefícios para a saúde. O objetivo deste trabalho foi pesquisar adulterações na composição de cúrcuma (Curcuma longa Linnaeus), gengibre (Zingiber officinale Roscoe), noz-moscada (Myristica fragrans Houttuyn), páprica (Capsicum annuum Linnaeus), pimenta-do-reino (Piper nigrum Linnaeus) e colorífico (mistura de urucum, Bixa orellana Linnaeus, com fubá). Foram analisadas 180 amostras adquiridas em municípios do estado de São Paulo. A investigação dos elementos histológicos foi feita por microscopia óptica, a análise dos corantes por cromatografia em papel e a quantificação da bixina por cromatografia líquida de alta eficiência. Das amostras analisadas, 16,1% apresentaram elementos histológicos estranhos ao produto, sendo que nenhuma amostra apresentou corante orgânico artificial. A concentração de bixina nas amostras de colorífico variou entre 0,6 e 105,3 mg/100g, com média de 18,9 mg/100g e desvio padrão de 17,7 mg/100g. A avaliação microscópica revelou que a maioria das adulterações ocorre pela adição de amido de Zea mays. O colorífico não apresentou adulterações, porém foi constatada a necessidade de uma padronização da concentração de bixina. Este estudo demonstrou a necessidade da intensificação do monitoramento de adulterações em especiarias para que a comercialização de alimentos fidedignos seja garantida. (AU)

Spices are products made up of parts of plant species, with important nutritional value and many health benefits. The aim of this work was to evaluate adulterations in turmeric (Curcuma longa Linnaeus), ginger (Zingiber officinale Roscoe), nutmeg (Myristica fragrans Houttuyn), paprika (Capsicum annuum Linnaeus), black pepper (Piper nigrumLinnaeus) and colorific (mixture containing Bixa orellana with cornmeal). A total of 180 samples purchased in the municipalities of the state of São Paulo were analyzed. The investigation of the histological elements was performed by optical microscopy, the analysis of the dyes was carried out using paper chromatography and the quantification of the bixin was performance by high performance liquid chromatography. Of the 180 samples analyzed, 16.1% presented strange histological elements, classified as adulterations. Among the adulterated samples, none showed organic dye. Bixin analysis was carried out on colorific samples, ranging from 0.6 ­ 105.3 mg/100g, with an average of 18.9 mg/100g and standard deviation of 17.7 mg/100g, demonstrating the need to regulate the annatto extract concentration range added into the condiment. The evaluation demonstrated the necessity to monitor adulteration in spices, so that producers and merchants provide food with quality to the consumer. (AU)

Evaluación de las características fisicoquímicas y de la actividad antimicrobiana del aceite del árbol de té contra Cutibacterium acnes (Propionibacterium acnes) ATCC 6919 / Evaluation of tea tree oil physicochemical features and its antimicrobial activity against Cutibacterium acnes (Propionibacterium acnes) ATCC 6919

Resumen: Introducción. El aceite del árbol de té es un aceite esencial reconocido por sus propiedades antimicrobianas. Objetivos. Evaluar la composición, características y efecto antimicrobiano del aceite al 2 % del árbol de té y su concentración inhibitoria mínima (CIM) contra Cutibacterium acnes (Propionibacterium acnes). Materiales y métodos. Se evaluó el quimiotipo en tres lotes diferentes de este aceite mediante cromatografía de gases, así como su actividad antimicrobiana en concentración al 2 % v/v y la CIM contra C. acnes mediante ensayo de difusión en agar (guía M11-A8 CLSI). Resultados. Los lotes evaluados presentaron los quimiotipos ajustados a la norma ISO 4730, lo que indicó la alta calidad del producto. Los lotes contenían de 30 a 40 % de terpinen-4-ol, compuesto que favorece la actividad antimicrobiana, la cual presentó en todos los lotes un efecto dependiente de la concentración contra C. acnes, con una inhibición del crecimiento microbiano en concentración al 2 % v/v en todas las pruebas. La concentración inhibitoria mínima fue de 0,25 % v/v. La actividad antimicrobiana del aceite del árbol de té contra este microorganismo ya ha sido reportada con una concentración inhibitoria mínima entre 0,05 y 1,25 % v/v, rango que cobija la obtenida en este estudio. Conclusiones. Los resultados evidenciaron la gran calidad de este producto y su capacidad como agente antibacteriano contra C. acnes. Se deben hacer estudios con otros aislamientos del microorganismo provenientes de pacientes con acné vulgar para confirmar su actividad general y la de cada uno de sus componentes.

Abstract: Introduction: Tea tree oil is an essential oil recognized for its antimicrobial properties. Objective: To evaluate the composition, features, and antimicrobial effect at 2% v/v, and its minimal inhibitory concentration (MIC) against Cutibacterium acnes (Propionibacterium acnes). Materials and methods: Three different batches of tea tree oil were evaluated. We characterized its chemotype by gas chromatography and its 2% v/v antimicrobial activity against C. acnes by agar diffusion assay (guide M11-A8 CLSI). Results: The three batches of oil had the chemotypes required by the ISO 4730 standard, which indicates that it is a high-quality product. Additionally, they had 30% to 40% of terpinen-4-ol, a compound that favors its antimicrobial activity. Antimicrobial activity against C. acnes for all batches had a concentration-dependent effect with microbial growth inhibitory activity in all assays at 2% v/v. The MIC obtained against C. acnes for all batches was 0.25% v/v. The antimicrobial activity of tea tree oil against this microorganism has been previously reported with a MIC between 0.05% and 1.25% v/v, a range that covers the one obtained in this study. Conclusion: These results show the high quality of the oil and its capacity as an antibacterial agent against C. acnes. New studies should be conducted to confirm its activity and that of its components in isolates of the microorganism from patients with acne vulgaris.

Phenolic compounds, biological activities and trace elements of Capparis ovata var. canescens / Compuestos fenólicos, actividades biológicas y elementos traza de Capparis ovata var. canescens

Introduction: Capparis species (Capparaceae), also called caper, grow naturally in various regions of the world. Caper is a plant with medicinal and aromatic properties. Flower buds, root bark, and fruits of the plant areused in folk medicine due to their analgesic, wound healing,cell regeneration, tonic, and diuretic effects. Objective: The aim of this research was to evaluate in vitro (anti-urease, antioxidant, anticholinesterase) and in vivo (anti-inflammatory) biological activities of caper (C. ovatavar.canescens). In addition, we aimed to identify its major phenolic compounds using high performance liquid chromatography with a photodiode array detector (HPLC-DAD) and confirmate them using quadrupole time-of-flight liquid chromatography with tandem mass spectrometry (Q-TOF-LC/MS). Also, we quantified the concentrations of several trace and major elements in plant samples using inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS). Methods: The antioxidant, anti-urease and anticholinesterase activities of different plant extracts were evaluated using DPPH, FRAP, ABTS/TEAC, Indophenol and Ellman tests. The identification of phenolic compounds and trace element contents was performed using HPLC and Q-TOF-LC/MS and ICP-MS. Results: Soxhlet methanol extract exhibited the strongest anti-urease, antioxidant (ABTS/TEAC) and anticholinesterase activity. Soxhlet and maceration methanol extracts demonstrated significant anti-inflammatory effect in the altered edema size after the second hour of carrageenan injection. The active phenolic compounds in Soxhlet methanol extract were identified as rutin, quercetin-hexoside-hexoside, quercetin-3-O-hexoside and kaempferol-3-O-rutinoside. In addition, the average concentrations of vanadium, chromium, manganese, cobalt, copper, nickel, arsenic, selenium, zinc and lead were within the permissible limits defined by WHO for medicinal plants. However, it was found that the concentrations of cadmium and iron were higher than the maximum permissible limits. Conclusion: Our results suggest that although caper has a strong biological activity, it should be consumed carefully due to the excess amount of cadmium and iron elements it contains.

Introducción: Las especies de Capparis (Capparaceae), también llamadas alcaparras, crecen naturalmente en varias regiones del mundo. La alcaparra es una planta con propiedades medicinales y aromáticas. Los botones florales, la corteza de la raíz y los frutos de la planta se usan en la medicina popular debido a sus efectos analgésicos, cicatrizantes, de regeneración celular, tónicos y diuréticos. Objetivo: El objetivo de esta investigación fue evaluar las actividades biológicas in vitro (anti-ureasa, antioxidante, anticolinesterasa) e in vivo (antiinflamatorio) de la alcaparra (C. ovata var. canescens). Además, nuestro objetivo fue identificar sus principales compuestos fenólicos mediante cromatografía líquida de alto rendimiento con un detector de matriz de fotodiodos (HPLC-DAD) y confirmarlos mediante cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem (Q-TOF-LC/MS). Además, cuantificamos las concentraciones de varios elementos traza y elementos mayores en muestras de la planta utilizando espectrometría de masas con plasma acoplado inductivamente (ICP-MS). Métodos: Se evaluaron las actividades antioxidantes, anti-ureasa y anticolinesterasa de diferentes extractos de la planta usando las pruebas DPPH, FRAP, ABTS/TEAC, Indofenol y Ellman. La identificación de los compuestos fenólicos y el contenido de los elementos traza se realizó mediante HPLC y Q-TOF-LC/MS e ICP-MS. Resultados: El extracto de metanol Soxhlet exhibió la mayor actividad anti-ureasa, antioxidante (ABTS/TEAC) y anticolinesterasa. Los extractos de metanol Soxhlet y por maceración demostraron un efecto antiinflamatorio significativo en el tamaño alterado del edema después de la segunda hora de la inyección de carragenano. Los compuestos fenólicos activos en el extracto de metanol Soxhlet se identificaron como rutina, quercetina-hexósido-hexósido, quercetina-3-O-hexósido y kaempferol-3-O-rutinósido. Además, las concentraciones promedio de vanadio, cromo, manganeso, cobalto, cobre, níquel, arsénico, selenio, zinc y plomo estaban dentro de los límites permisibles definidos por la OMS para las plantas medicinales. Sin embargo, se encontró que las concentraciones de cadmio y hierro fueron más altas que los límites máximos permitidos. Conclusión: Nuestros resultados sugieren que, aunque la alcaparra tiene una fuerte actividad biológica, debe consumirse con cuidado debido al exceso de cadmio y hierro que contiene.

Isolamento do estigmasterol do extrato hexânico das folhas de Sphagneticola trilobata Pruski (Asteraceae) / Isolation of stigmaterol from hexanic extract of the leaves of Sphagneticola trilobata Pruski (Asteraceae)

O interesse de pesquisadores e da população geral é bastante evidente, e tem crescido bastante na atualidade, no uso de plantas medicinais. A espécie de interesse deste trabalho, a Sphagneticola trilobata Pruski é uma planta herbácea pertencente à família Asteraceae. Alguns relatos têm mostrado a presença de diversos constituintes químicos nesta planta, principalmente diterpenos. O presente trabalho realizou o estudo fitoquímico de uma fração do extrato hexânico, devido ao baixo rendimento da fração diclorometânica, através da utilização de diversos métodos cromatográficos, na qual isolouse o fitoesterol estigmasterol. Este composto foi confirmado por meio de dados espectroscópicos e de literaturas, e o isolamento de compostos desta classe de substâncias indicam uma nova vertente para o uso medicinal desta planta como um futuro hipocolesterolêmico. Para isto, estudos serão direcionados para o isolamento de fitoesteróis, com posterior realização de ensaios biológicos (AU)

The interest of researchers and the general population is quite evident, and has grown considerably today, in the use of medicinal plants. The species of interest in this work, Sphagneticola trilobata Pruski is a herbaceous plant, belonging to Asteraceae family. Some reports have shown the presence of several chemical constituents in this plant, mainly diterpenes. The present work carried out the phytochemical study of a fraction of the hexane extract, due to the low yield of the dichloromethane fraction, by several chromatographic methods, in which the phytosterol estigmasterol was isolated. This compound has been confirmed by means of spectroscopic and literature data, and the isolation of compounds of this class of substances indicates a new strand for the medicinal use of this plant as a hypocholesterolemic future. For this, studies will be directed to the isolation of phytosterols, with subsequent biological tests (AU)

Characterization of odour-active volatiles and sensory analyses of roasted oak (Quercus humboldtii Bonpl) acorns, a coffee substitute / Caracterización de los compuestos activos olfativamente y análisis sensorial de los frutos tostados del roble (Quercus humboldtii Bonpl), como una bebida sustituta de café

Background: Oak acorns are roasted and grounded to produce a powder that is used to prepare a coffee substitute beverage. Objective: To identify the odour-active volatiles of the powder derived from roasted acorns of Quercus humboldtii and to perform a quantitative descriptive analysis (QDA) of its appearance, odour, and taste. Methods: The odour-active volatiles of roasted oak acorn powder were extracted by SDE and analyzed by GC/MS and olfactory analyses (GC/O). Sensorial analyses of this beverage were done by QDA (Quantitative Descriptive Analysis). Results: Nineteen compounds were identified, showing acid, buttery/caramel, smoke/roasted, and fruity odour notes, which are common to those of roasted coffee. Ketones, aldehydes, aliphatic acids, furanic alcohols and pyrazines were identified as relevant for this coffee substitute beverage. The major volatile compounds were furfural, 5-methyl furfural, furfuryl alcohol, and 3-hydroxy-2-butanone, some of them related to the sugar breakdown by heating. Odour attributes characterized by QDA, were in agreement with those detected by GC-O (Gas Chromatography coupled to Olfactometry), but some off-taste notes were detected. Conclusions: The results of molecular sensory approach confirmed that this product resembles coffee; however, QDA analyses showed the presence of undesirable taste. More studies are needed in order to improve the taste quality of this coffee substitute.

Antecedentes: los frutos del roble se tuestan y muelen para producir un polvo que es empleado en la preparación de una bebida sustituta del café. Objetivos: identificar los compuestos volátiles activos olfativamente presentes en el polvo proveniente de los frutos tostados de Quercus humboldtii; así como llevar a cabo un análisis cuantitativo descriptivo (QDA) de la apariencia, olor y sabor de este polvo. Métodos: os compuestos volátiles activos olfativamente del polvo de los frutos tostados del roble se extrajeron por DES y se analizaron por CG-EM y análisis olfativo (CG-O). La caracterización sensorial de esta bebida sustituta de café fue realizada mediante el empleo de QDA. Resultados: se identificaron diecinueve compuestos y se evidenció la presencia de notas de olor como manteca/caramelo, ahumado/tostado y frutal, similares a las encontradas en el café tostado. Los componentes mayoritarios identificados para este sustituto de café fueron cetonas, aldehídos, ácidos alifáticos, alcoholes furánicos y pirazinas. Los compuestos mayoritarios detectados fueron furfural, 5-metil furfural, alcohol furfurílico y 3-hidroxi-2-butanona, algunos de ellos relacionados con la descomposición térmica de azúcares. Los atributos de olor caracterizados por QDA fueron similares a los detectados por CG-O, aunque se detectaron algunas notas de sabor desagradable. Conclusiones: los resultados del molecular sensory approach confirmaron que este producto se parece al café; sin embargo el QDA mostró la presencia de un sabor desagradable. Estudios adicionales son necesarios para mejorar la calidad del sabor de este sustituto de café.

Evaluation of Dunaliella salina growth and corresponding ß-carotene production in tubular photobioreactor / Avaliação do crescimento da Dunaliella salina e correspondente produção de ß-caroteno em fotobiorreator tubula

Microalgae, photosynthetic microorganisms, are rich in lipids, polyunsaturated fatty acids, carbohydrates, proteins, vitamins, as well as carotenoids, which are antioxidants that may protect human body from various diseases including obesity, cardiovascular disease, vision-related diseases such as macular degeneration and certain types of cancer. These natural pigments have applications in the pharmaceutical (nutraceutical), food (coloring, functional food, and supplements), and cosmetics industries (e.g. sunscreen), as well as in aquaculture (animal feed). The Dunaliella salina microalga can synthesize 10% of dry weight in ß-carotene (orange pigment, pro-vitamin A activity) under high light intensity and nitrogen and phosphorus limitation, among other stress conditions. The first chapter of this thesis presents a review focused on microalgae carotenoids: culture systems, mode of operation, and applications. In this bibliographic survey, the advantages of microalgae cultivation in relation to traditional sources (higher plants) were discussed, as well as a discussion of the main cultivation systems and their importance in cell growth. This review presented a critical analysis of the different operational regimes like batch, fed-batch, semi-continuous and continuous. Relevant information on the most important world producers of microalgae carotenoids were presented. Chapter II presents the development of a modified method of dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) for rapid extraction of ß-carotene from Dunaliella salina cultivated in tubular photobioreactor, with subsequent development of a rapid chromatographic screening method using a C4 column for separation of geometric isomer of ß-carotene. The use of benzene as extraction solvent and water with 50% acetone as dispersant provided the best condition for the extraction of this carotenoid. In HPLC (High Performance Liquid Chromatography), employing mobile phase composed of methanol and water (95:5, v/v), it was possible to detect/quantify ß-carotene at 14 min (retention time). Besides the short analysis time (<20 min), by the miniaturized extraction (< 10 mL organic waste) this method abide by green chemistry analytical principles. It is known that nitrogen, phosphorus, as well as carbon and vitamins are vital elements for the growth of microalgae, also determining the biochemical composition of biomass. In this sense, Chapter III presents the study of the influence of different amounts of sodium nitrate (1N = 75 mg L-1; 1.5N = 112.5 mg L-1, and 3N = 225 mg L-1) and phosphate monobasic dehydrate (1P = 5.65 mg L-1, 1.5P = 8.47 mg L-1, and 3P = 16.95 mg L-1) in seawater-based f/2 medium on the growth of Dunaliella salina and ß-carotene biosynthesis, by continuous process with different replenishment proportions (R = 20% and 80%). Best results of cell productivity were obtained by semicontinuous process (mean values of Px up to 6.7 x 104 cells mL-1 d-1 with medium 1N:1P; R =20%) in comparison with batch process cultivation. Maximum cell density (Xm) obtained in this work was not dependent of R, but the best results were obtained when using medium 1.5N:1.5P (mean values up to 5.6 x 105 cells mL-1 with R =80%) instead of 1N:1P. The content of ß-carotene in the cells, in general, was higher in cells grown in medium 1N:1P (mean yield values up to 57.5 mg g-1 with R =80%) in comparison with medium 1.5N:1.5P. The cultivation of D. salina with media 3N:3P led to a long lag phase, followed by decrease in cell density and cell lysis. The use of a tubular photobioreactor contributed to successfully cultivate this microalga without contamination by protozoa. The cultivation of Dunaliella salina in tubular photobioreactor with the use of 12:12 photoperiod was appropriate, as well as to induce carotenogenesis, in the second stage, by increasing the light intensity and absence of pH control

As microalgas, micro-organismos fotossintetizantes, são ricas em lipídios, ácidos graxos poli-insaturados, carboidratos, proteínas, vitaminas, além de carotenoides que são antioxidantes com potencial de proteger o organismo humano de várias doenças incluindo a obesidade, doenças cardiovasculares, doenças relacionadas à visão como a degeneração macular e certos tipos de câncer, entre outras. Esses pigmentos naturais têm aplicações em indústrias farmacêuticas (nutracêuticos), alimentícias (colorantes, alimentos funcionais e suplementos) e de cosméticos (exemplo: filtro solar) e na aquacultura (ração animal). A microalga Dunaliella salina é capaz de sintetizar, sob alta intensidade luminosa e limitação de nutrientes como fontes de fósforo e nitrogênio, dentre outras condições de estresse, 10 % do peso seco em ß-caroteno (pigmento laranja com atividade pró-vitamina A). Assim, neste trabalho, numa primeira etapa, foi feita uma revisão da literatura abordando a produção de carotenoides por microalgas, bem como sua aplicação. Nesse levantamento bibliográfico abordou-se, dentre outros assuntos, as vantagens do cultivo de microalgas em relação as fontes tradicionais (plantas superiores), assim como uma discussão dos diferentes sistemas de cultivos e sua importância no crescimento celular. Esse review apresentou uma análise crítica dos principais regimes operacionais como batch, fed-batch, semicontínuo e contínuo. Apresentou-se também informações relevantes sobre os mais importantes produtores mundiais de carotenoides de microalgas. Numa segunda etapa, foi desenvolvido um método modificado de microextração líquido-líquido dispersivo modificado (DLLME) para a rápida extração de ß-caroteno de Dunaliella salina cultivada em fotobiorreatores tubulares, com subsequente desenvolvimento de método cromatográfico em uma coluna C4 para a separação do isômero geométrico de ß-caroteno. A extração ótima de ß-caroteno foi obtida com benzeno como solvente extrator e água com 50% de acetona como dispersante. Empregando uma fase móvel composta por metanol e água (95:5, v/v) em HPLC, foi possível a detecção/quantificação de ß-caroteno com 14 minutos de tempo de retenção. Além dos tempos curtos de análises (<20 min), pela extração em volume reduzido (< 10 mL resíduos orgânicos) este método obedece aos princípios da química verde. Sabe-se que nitrogênio, fósforo, assim como carbono e vitaminas são elementos vitais para o crescimento das microalgas e também exercem influência na composição bioquímica da biomassa. Assim, na terceira etapa deste trabalho, estudou-se a influência das quantidades de nitrato de sódio (75 mg L-1, denominado 1N; 112,5 mg L-1, denominado 1,5N; 225 mg L-1, denominado 3N) e de fosfato monobásico dihidratado (5,65 mg L-1, denominado 1P; 8,47 mg L-1, denominado 1,5P; 16,95 mg L-1, denominado 3P) em meio f/2, que tem como base a água do mar, no crescimento e na síntese de ß-caroteno da Dunaliella salina por processo semicontínuo, com uso de frações de corte (R) de 20% e 80%. Foram obtidas produtividades celulares mais elevadas em processos semicontínuos do que em processo descontínuo, com produtividades médias de até 6,7 x 104 células mL-1 d-1 (meio 1N:1P; R =20%). A máxima concentração celular (Xm) obtida neste trabalho não foi dependente de R. Os melhores resultados de Xm foram obtidos quando se usou meio 1,5N:1,5P em vez de meio, com 1N:1P, com valores médios de até 5,6 x 105 células m L-1 (R =80%). O conteúdo de ß-caroteno nas células, de maneira geral, foi maior nas células cultivadas em meio 1N:1P do que no meio 1,5N:1,5P, com valores até 57,5 mg g-1 (R =80%). O cultivo de D. salina com o meio 3N:3P levou a uma longa fase lag, seguida por uma diminuição na concentração celular e sua lise. O cultivo de células em um fotobiorreator tubular contribuiu para um crescimento celular sem contaminação por protozoários. O cultivo de Dunaliella salina em fotobiorreator tubular com o uso de fotoperíodo 12:12 foi apropriado, assim como induzir a carotenogênese, no segundo estágio, por meio do aumento da intensidade luminosa e ausência de controle de pH

Determinação de estimulantes, esteroides anabolizantes, diuréticos e laxante por HPLC-DAD e LC-MS/MS em suplementos alimentares adulterados disponíveis no Brasil / Determination of stimulants, anabolic steroids, diuretics and laxative by HPLC-DAD and LC-MS/MS in adulterated dietary supplements available in Brazil

A adulteração de suplementos alimentares pela adição de substâncias farmacologicamente ativas e um problema que vem se agravando nos últimos anos. Essas substâncias são adicionadas intencionalmente nos produtos, com objetivo de melhorar a sua eficácia, sem que essa adição seja devidamente informada nos rótulos. O consumo de suplementos adicionados de substâncias farmacologicamente ativas nao declaras nos rótulos e, alem de um problema de saúde pública, um risco a carreira de atletas profissionais, quando se trata de doping no esporte. Neste trabalho foram desenvolvidos métodos analíticos baseados em cromatografia líquida para detecção de 19 substâncias farmacologicamente ativas em amostras de suplementos alimentares, nos niveis de contaminação cruzada e adulteração. Para tal, empregou-se a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD) e a cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS). As substâncias investigadas apresentam ação androgênica e anabólica (i.e. testosterona, metiltestostetona, propionato de testosterona, decanoato de testosterona, trembolona, estanozolol, dehidroepiandrosterona, androstenediona, decanoato de nandrolona, oxandrolona e metasterona), estimulante (i.e. cafeína), anorexigena (i.e. sibutramina), diurética (i.e. amilorida, bumetanida, furosemida, hidroclorotiazida e clortalidona) e laxante (i.e. fenolftaleina). Entre os métodos de preparo de amostra avaliados (Quechers e extração sólido-líquido seguida de uma etapa de precipitação de proteína), a extração sólido-líquido empregando metanol como solvente extrator e ZnSO4 como agente precipitante apresentou-recuperação acima de 80% para todas as substâncias avaliadas, sendo selecionado para o fim deste estudo. Os métodos analíticos propostos apresentaram limites de detecção e de quantificação na faixa de contaminação, foram seletivos e lineares com r2 superior a 0,99 na faixa de concentração de interesse para todas as substâncias e valores de recuperação, precisão e exatidão dentro dos valores aceitáveis. Um conjunto amostral representativo dos suplementos alimentares comercializados no Brasil, constituído por 230 amostras, foi analisado sendo que mais de 25% do conjunto amostra foram positivos para cafeína (48), sibutramina (14), fenolftaleína (2) e furosemida (3), isoladas ou associadas entre si. Os métodos desenvolvidos utilizaram um preparo de amostra simples e apresentaram resultados satisfatórios para a investigação de possível adulteração ou contaminação com 19 das substâncias de interesse. Dos 58 suplementos alimentares adulterados, apenas 11 podem ser considerados adulterados por contaminação cruzada. Os demais, são consideradas adições dolosas por parte dos fabricantes com objetivo de melhorar a eficiência dos seus produtos. Os resultados aqui apresentados indicam a necessidade de ações mais efetivas por parte das autoridades sanitárias no sentido de fiscalizar com mais eficiência a produção e a comercialização desses produtos e alertar a população para que fiquem atentos a possível adulteração de suplementos alimentares e aos riscos associados ao consumo desses produtos

The adulteration of dietary supplements by the addition of pharmacologically active substances is a serious issue, which is aggravating steadily. These substances are added intentionally in various products, with the aim of improving their effectiveness, but without proper labeling stating so. In addition to a public health problem, the consumption ofsupplements added with undeclared pharmacologically active substances also represents a career risk for professional athletes when it comes to doping in sport. In the present work, analytical methods based on liquid chromatography were developed for the detection of 19 pharmacologically active substances in dietary supplement samples at the levels of crosscontamination and adulteration. For this purpose, high performance liquid chromatography/diode array detector (HPLC-DAD) and liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) were used. The investigated substances comprise of androgenic and anabolic effects (ie testosterone, testosterone propionate, testosterone decanoate, trenbolone, stanozolol, dehydroepiandrosterone, androstenedione, nandrolone decanoate, oxandrolone and metasterone), stimulant (ie caffeine), anorexigenic (ie sibutramine), diuretic (ie amiloride, bumetanide, furosemide, hydrochlorothiazide and chlorthalidone) and laxative (ie phenolphthalein). Among the sample preparation methods evaluated (Quechers and solidliquid extraction followed by a protein precipitation step), solid-liquid extraction using methanol as extraction solvent and ZnSO4 as the precipitating agent has been chosen as it has shown recovery values above 80% for all evaluated substances. The proposed analytical methods had limits of detection and quantification within the contamination range, they were also selective and linear showing r2 values higher than 0.99 in the concentration range of interest for all substances and accuracy within acceptable values. A representative sampling of dietary supplements marketed in Brazil, consisting of 230 samples, was analyzed and more than 25% have shown to be positive for caffeine (48), sibutramine (14), phenolphthalein (2) and furosemide (3), isolated or associated with each other. The methods developed used a simple sample preparation and presented satisfactory results for the investigation of possible adulteration or cross-contamination for the 19 of the substances of interest. From a total of 58 adulterated dietary supplements, only 11 could be considered adulterated by crosscontamination. The remaining are considered to be intentional additions by manufacturers in order to improve the efficiency of their products. The results presented in this study indicate the need for more effective measures by the health authorities towards the production and marketing of these products so that the general public is aware of their potential adulteration and the risks associated with their consumption

Improved method for diagnosis of Nerium oleander poisoning in necropsy tissues / Método aprimorado para diagnóstico da intoxicação por Nerium oleander em tecidos de necropsia

Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001μg g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.(AU)

Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001μg g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.(AU)

Metabolites from endophytic Aspergillus fumigatus and their in vitro effect against the causal agent of tuberculosis / Metabolitos de Aspergillus fumigatus endofítico e seu efeito in vitro contra o agente causal da tuberculose

ABSTRACT Tuberculosis (TB) remains one of the most deadly communicable infectious diseases, causing 1.4 million deaths in 2015 worldwide due to many conditions, including the inadequate treatment and the emergence of multidrug-resistant strains of the causal agent, Mycobacterium tuberculosis. Therefore, drugs developed from natural sources, as microorganisms and plant extracts, are a frequent target for the research and discovery of antimicrobial compounds. The current study started the characterization of compounds produced by an Aspergillus fumigatus isolated from copaíba (Copaifera multijuga) that efficiently inhibits M. tuberculosis by releasing the compounds into the fermentation broth under specific culture conditions. A preliminary assay was carried out with a correlate species, M. smegmatis, aiming to detect an antimicrobial effect related to A. fumigatus fermentation broth. The direct use of this substrate in antibiosis assays againstM. tuberculosis H37Rv strain (ATCC 27294) allowed the detection of antimicrobial activity with a minimal inhibitory concentration of 256 μg mL-1, demonstrating that purification processes developed by the Biotage Flash Chromatography System are robust and reliable techniques for purification of compounds from natural sources. Also, this chromatographic system can be used in combination with specific biochemical tests, improving the search for reliable results. We conclude that this fraction can express a broad action range, inhibiting both Mycobacterium species used as target organisms.

RESUMO A tuberculose continua a ser uma das doenças infecciosas transmissíveis mais mortais, causando 1,4 milhão de mortes em 2015 em todo o mundo devido a vários fatores, incluindo o tratamento inadequado e o surgimento de cepas multirresistentes do agente causal, Mycobacterium tuberculosis. Portanto, as drogas desenvolvidas a partir de fontes naturais, como micro-organismos e extratos de plantas, são um alvo freqüente para a pesquisa e descoberta de compostos antimicrobianos. O presente estudo foi um ponto de partida para caracterizar compostos produzidos por um Aspergillus fumigatus isolado de copaíba (Copaifera multijuga) que inibe eficientemente M. tuberculosis, liberando os compostos no caldo de fermentação em condições de cultura específicas. Realizou-se um ensaio preliminar com uma espécie correlata, M. smegmatis, com o objetivo de detectar um efeito antimicrobiano relacionado ao caldo de fermentação de A. fumigatus. O uso direto deste substrato em ensaios de antibiose contra a estirpe H37Rv de M. tuberculosis (ATCC 27294) permitiu a detecção de atividade antimicrobiana com uma concentração inibitória mínima de 256 μg mL-1, demonstrando que os processos de purificação desenvolvidos pelo Biotage Flash Chromatography System são técnicas robustas e confiáveis para purificar compostos de fontes naturais. Além disso, este sistema cromatográfico pode ser usado em combinação com testes bioquímicos específicos, melhorando a busca de resultados confiáveis. Concluímos que esta fração pode expressar uma ampla gama de ação, inibindo ambas as espécies de Mycobacterium utilizadas como organismos-alvo.

Estructura química de compuestos fenólicos del extracto etanólico de hojas de Clinopodium pulchellum (Kunth) Govaerts "panisara" / Chemical structure of phenolic compounds of the ethanolic extract of leaves of Clinopodium pulchellum (Kunth) Govaerts "Panisara"

Objetivos: Proponer la estructura química de componentes fenólicos aislados del extracto etanólico de hojas de Satureja pulchella "panisara", quien en la actualidad presenta el nombre de Clinopodium pulchellum (Kunth) Govaerts y evaluar preliminarmente el posible efecto antioxidante de los compuestos fenólicos. Materiales y métodos: Se realizó una identificación fitoquímica mediante ensayos de solubilidad, tamizaje fitoquímico, cromatografía en capa fina y espectroscopía UV/VIS. Por otro lado, se realizó un ensayo preliminar de la actividad antioxidante usando la prueba de 1,1-difenil-2-picrilhidracilo (DPPH). Resultados: Se determinó que el extracto etanólico de hojas de Clinopodium pulchellum (Kunth) Govaerts "panisara" es soluble en solventes polares. Los metabolitos secundarios encontrados son compuestos fenólicos tipo flavonoides, alcaloides, quinonas y glicosidos. Se propone siete estructuras químicas de flavonoides a través del análisis de los espectros UV/Vis, y mediante comparación con lo publicado por TJ Mabry y Olga Lock. Al realizar el ensayo preliminar de la actividad antioxidante usando la prueba de 1,1-difenil-2-picrilhidracilo (DPPH) se observó disminución de absorbancia, al aplicar el extracto frente al control. Conclusiones: Se propone la estructura química de 7 metabolitos secundarios tipo flavonas que podrían explicar una posible acción antioxidante del extracto etanólico de hojas de Clinopodium pulchellum (Kunth) Govaerts "panisara".

Caracterización de compuestos fenólicos presentes en el extracto etanólico de hojas de Alternanthera lanceolata (Benth) Schinz, "lancetilla" / Characterization of phenolic compounds present in the ethanolic extract of leaves of Alternanthera lanceolata (Benth.) Schinz, "lancetilla"

Objetivos: Caracterizar compuestos fenólicos presentes en el extracto etanólico de las hojas de Alternanthera lanceolata (Benth.) Schinz "lancetilla". Materiales y métodos: Se preparó un extracto etanólico de las hojas de Alternanthera lanceolata (Benth.) Schinz "lancetilla". Se evaluó la solubilidad del extracto en solventes de polaridad creciente. Se detectaron los componentes químicos del extracto etanólico mediante un tamizaje fitoquímico empleando gelatina, tricloruro férrico, reacción de Shinoda, entre otros. Se realizó cromatografía en capa fina, desorción y propuesta de estructuras químicas para los metabolitos tipo flavonoides presentes en el extracto etanólico de hojas de Alternanthera lanceolata (Benth.) Schinz "lancetilla" mediante espectroscopía UV-Vis. Resultados: El extracto etanólico presentó mejor solubilidad en solventes de mediana polaridad. El tamizaje fitoquímico dio resultados positivos para presencia de compuestos fenólicos, flavonoides y glicósidos. Se propuso la estructura química de siete flavonas en el extracto investigado. Conclusiones: Se caracterizó y propuso las estructuras de compuestos fenólicos tipo flavonas en el extracto etanólico de las hojas de Alternanthera lanceolata (Benth.) Schinz "lancetilla".

Determinacion estructural de flavonoides en el extracto etanolico de cladodios de Opuntia ficus-indica (L.) Mill. "Tuna Verde" / Structural identification of flavonoids in ethanolic extract of Opuntia ficus-indica (L.) Mill. "Tuna Verde" cladodes

Objetivos: Determinar estructuralmente los flavonoides encontrados en el extracto etanólico de cladodios de Opuntia ficus-indica (L.) Mill. "Tuna Verde". Materiales y métodos: Se preparó el extracto etanólico de cladodios de Opuntia ficus-indica (L.) Mill. Luego se detectaron sus componentes mediante un tamizaje fitoquímico. A través de cromatografía en capa fina se aislaron los compuestos fenólicos tipo flavonoides. Finalmente, usando espectroscopia UV/Vis se propuso la posible estructura de los flavonoides encontrados. Resultados: El tamizaje fitoquímico mostró presencia de compuestos fenólicos, flavonoides y glicósidos. Se propuso cinco estructuras químicas de compuestos fenólicos, todas con un núcleo en común: flavona, mediante las lecturas en el espectrofotómetro UV/Vis y por comparación con lo publicado por TJ Mabry. Conclusión: Se determinó la posible estructura química de cinco flavonoides presentes en el extracto etanólico de cladodios de Opuntia ficus-indica (L.) Mill. "Tuna Verde".