Ação antifúngica de extratos de plantas isolados sobre espécies de Candida albicans e Candida não-albicans / Antifungal action of isolated plant extracts on Candida albicans and Candida non-albicans species

As espécies de Candida spp. apresentam-se como o principal patógeno fúngico humano, podendo causar infecções superficiais e invasivas. A emergência de novas espécies em infecções, apresentando alta resistência aos antifúngicos utilizados desafia pesquisadores a propor novas terapias no controle desta infecção, entre as quais podemos citar a fitoterapia realizando o uso de extratos de plantas para propor novos protocolos. Por isto, este trabalho objetiva avaliar a ação antifúngica dos extratos isolados de Quilaia (Quillaja saponaria) e Alcachofra (Cynara scolymus) sobre C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis e C. dubliniensis em formas planctônica e biofilmes monotípicos. Inicialmente foram feitas análises da ação antifúngica dos extratos de Quilaia e Alcachofra por meio do teste de microdiluição em caldo (CLSI ­ Protocolo M27-S4), para determinar as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) e as Concentrações Fungicidas Mínimas (CFM) de espécies. Os biofilmes foram formados por 48 h em poços de microplacas, os quais receberam tratamentos de concentrações dos extratos (100 mg/mL, 50 mg/mL, 25 mg/mL, 12,5 mg/mL e 6,25 mg/mL), assim como foram testados os grupos controles positivo e negativo, para determinação da viabilidade celular por meio do teste MTT. Os dados foram analisados estatísticamente pelos testes ANOVA e Tukey, com significância de 5%. Os resultados da CIM e CFM para as espécies C. albicans, C. krusei e C. glabrata foram de 12,5mg/mL para ambos os extratos, os valores para C tropicalis foi 12,5 mg/mL para o extrato de Quilaia e 25 mg/mL para Alcachofra, ambos os extratos apresentaram o mesmo valor de 6,25 mg/mL para a espécie C. dubliniensis. A ação antibiofilme do extrato de Quilaia apresentou redução fúngica do biofilme principalmente nas duas maiores concentrações (100 mg/mL e 50 mg/mL) do extrato para ambos os tempos (5 min e 24 h) quando comparados com o grupo controle negativo que não recebeu tratamento, apresentando diferenças estatísticas significativas (p<0.001). A ação antibiofilme do extrato de Alcachofra apresentou reduções dos biofilmes significativas nas cinco concentrações (100 mg/mL, 50 mg/mL, 25 mg/mL, 12,5 mg/mL e 6,25 mg/mL) em ambos os tempos, na maioria das espécies, apresentando diferenças significativas (p<0.001). Diante disso, concluímos que os extratos glicólicos de Q. saponaria e C. scolymus apresentam ação antifúngica em todas as espécies de Candida spp. analisadas, sendo um potencial antifúngico para C. albicans e as espécies C. não-albicans, mas na espécie de C. krusei as reduções de biofilme só ocorrem nas maiores concentrações. Os resultados da ação antibiofilme manteve um padrão de ação, quanto maior a concentração do extrato, maior a redução, isto para ambos os extratos e para a maioria das espécies analisadas (AU)

Candida spp. They are the main human fungal pathogen and can cause superficial and invasive infections. The emergence of new species in infections, presenting high resistance to the antifungals used, challenges researchers to propose new therapies to control this infection, among which we can mention phytotherapy using plant extracts to propose new protocols. Therefore, this work aims to evaluate the antifungal action of extracts isolated from Quilaia (Quillaja saponaria) and Artichoke (Cynara scolymus) on C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis and C. dubliniensis in planktonic forms and biofilms monotypic. Initially, analyzes of the antifungal action of Quilaia and Artichoke extracts were carried out using the broth microdilution test (CLSI ­ Protocol M27-S4), to determine the Minimum Inhibitory Concentrations (MICs) and Minimum Fungicide Concentrations (MFCs) of species. Biofilms were formed for 48 h in microplate wells, which received extract concentration treatments (100 mg/mL, 50 mg/mL, 25 mg/mL, 12.5 mg/mL and 6.25 mg/mL), as well as the positive and negative control groups were tested to determine cell viability using the MTT test. The data were statistically analyzed using the ANOVA and Tukey tests, with a significance of 5%. The MIC and CFM results for the species C. albicans, C. krusei and C. glabrata were 12.5 mg/mL for both extracts, the values for C tropicalis were 12.5 mg/mL for the Quilaia extract and 25 mg/mL for Artichoke, both extracts presented the same value of 6.25 mg/mL for the species C. dubliniensis. The antibiofilm action of the Quilaia extract showed a fungal reduction of the biofilm mainly at the two highest concentrations (100 mg/mL and 50 mg/mL) of the extract for both times (5 min and 24 h) when compared with the negative control group that did not receive treatment, showing significant statistical differences (p<0.001). The antibiofilm action of Artichoke extract showed significant reductions in biofilms at the five concentrations (100 mg/mL, 50 mg/mL, 25 mg/mL, 12.5 mg/mL and 6.25 mg/mL) at both times, in most species, showing significant differences (p<0.001). Therefore, we conclude that glycolic extracts of Q. saponaria and C. scolymus have antifungal action on all species of Candida spp. analyzed, with antifungal potential for C. albicans and non-albicans C. species, but in the C. krusei species, biofilm reductions only occur at higher concentrations. The results of the antibiofilm action maintained a pattern of action, the higher the concentration of the extract, the greater the reduction, this for both extracts and for the majority of species analyzed(AU)

Efeito de extratos vegetais de Hamamelis virginiana, Persea americana, Cynara scolymus L e Stryphnodendron barbatiman Msobre a expressão fenotípica dos fatores de virulência em biofilmes de Candida albicans / Effect of Hamamelis virginiana, Persea americana, Cynara scolymus L and Stryphnodendron barbatiman M plant extracts on the phenotypic expression of virulence factors in biofilms of the Candida albicans

Objetivo: Analisar a expressão fenotípica de fatores de virulência em biofilmes de Candida albicans frente a extratos glicólicos de plantas. Material e Métodos: Os biofilmes de Candida albicans (ATCC 18804) obtidos a partir de incubação de 48 horas foram expostos por 5 minutos e 24 horas a diferentes concentrações de extratos glicólicos de Hamamelis virginiana e Persea americana, Cynara scolymus L e Stryphnodendron barbatiman M, a fim de verificar a ação antifúngica da proteinase, fosfolipase e hemolisina. Resultados: Todos os extratos foram eficazes na redução do biofilme. Em contato por 5 minutos. os extratos reduziram 50% do biofilme. Após 24 horas. o extrato de Persea americana apresentou o biofilme em 90%, seguido de Cynara scolymus, que o interrompeu em 85%. Houve mudança na intensidade da proteinase após 5 minutos e 24 horas, com uma atividade enzimática média de 0,69 em comparação com o controle de 0,49. Cynara scolymus foi o extrato com maior concentração média de 100 mg/ml; a intensidade da fosfolipase foi alterada com Stryphnodendron barbatiman sendo mais efetivo em 24 horas em relação ao controle (p< 0,0001). A secreção de hemolisina foi modificada por Hamamelis virginiana (12,5 mg/ml) após 5 minutos de exposição e em 24 horas. todos os extratos foram capazes de causar alterações na secreção. Conclusão: Os extratos testados apresentam potencial antifúngico em biofilmes de Candida albicans, implicando em redução significativa dos fatores de virulência. Assim, estes podem ser indicados como uma ferramenta terapêutica alternativa para reduzir a morbidade dessas infecções, já que em ambos os tempos de exposição investigados, eles foram capazes de reduzir a secreção enzimática do fungo (AU)

Objective: Analyze the phenotypic expression of virulence factors in Candida albicans biofilms against plant glycolicextracts. Material and Methods: The biofilms of Candida albicans (ATCC 18804) obtained from incubation for 48 hours were exposed for 5 minutes and 24 hours to different concentrations of glycolic extracts of Hamamelis virginiana and Persea americana, Cynara scolymus L and Stryphnodendron barbatiman M, in order to verify the antifungal activity of the proteinase, phospholipase and hemolysin. Results: All extracts were effective in reducing biofilm. In contact for 5 minutes. the extracts reduced 50% of the biofilm. After 24 hours, the Persea americanaextract showed the biofilm at 90%, followed by Cynara scolymus, which interrupted it at 85%, There was a change in proteinase intensity after 5 minutes and 24 hours. with an average enzymatic activity of 0.69 compared to the control of 0.49. Cynara scolymus was the extract with the highest mean concentration of 100 mg/ml; the phospholipase intensity was changed with Stryphnodendron barbatiman being more effective in 24 hours compared to the control (p< 0.0001). The hemolysin secretion was modified by Hamamelis virginiana (12.5 mg/ml) after 5 minutes of exposure, and in 24 hours. all extracts were capable to cause changes in secretion. Conclusion: The tested extracts have antifungal potential in Candida albicans biofilms, implying a significant reduction in virulence factors. Thus, these can be indicated as an alternative therapeutic tool to reduce the morbidity of these infections, as in both investigated exposure times. they were able to reduce theenzymatic secretion of the fungus (AU)