Assuntos
Glicosídeo Hidrolases/isolamento & purificação , Glicosídeo Hidrolases/metabolismo , Oligossacarídeos/química , Oligossacarídeos/metabolismo , Animais , Aspergillus/enzimologia , Configuração de Carboidratos , Sequência de Carboidratos , Cromatografia em Gel/métodos , Cromatografia por Troca Iônica/métodos , Café/enzimologia , Fabaceae/enzimologia , Fígado/enzimologia , Manosidases/isolamento & purificação , Manosidases/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Neuraminidase/isolamento & purificação , Neuraminidase/metabolismo , Vírus da Doença de Newcastle/enzimologia , Plantas Medicinais , Especificidade por Substrato , Suínos , alfa-Galactosidase/isolamento & purificação , alfa-Galactosidase/metabolismo , alfa-Glucosidases/isolamento & purificação , alfa-Glucosidases/metabolismo , alfa-Manosidase , beta-Galactosidase/isolamento & purificação , beta-Galactosidase/metabolismo , beta-N-Acetil-Hexosaminidases/isolamento & purificação , beta-N-Acetil-Hexosaminidases/metabolismoRESUMO
A sensitive and reproducible high performance chromatographic procedure is described for the assay of jack bean beta-galactosidase in which the reaction products are separated on a Dionex AS6 ion exchange column under alkaline conditions and detected by triple-pulsed amperometry. Quantition of the enzyme-released galactose is accomplished by using either fucose or lactose, the substrate, as an internal standard. The validity of the procedure as a general method for the assay and kinetic characterization of exoglycosidases was demonstrated by performing parallel measurements of galactose using an established coupled-enzyme assay, and using these values to calculate Km and Vmax values against lactose. Additional data are presented which establish the applicability of using a similar HPLC approach for the assay of glycosyltransferases.