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Antimicrob Agents Chemother ; 44(5): 1181-5, 2000 May.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-10770749

RESUMO

A simple assay for detection of compounds that bind to the active site in the transglycosylation domain of the essential bifunctional transglycosylase and transpeptidase penicillin-binding proteins (PBPs) is reported. The method is based on a competition with the specific transglycosylase inhibitor moenomycin. With moenomycin coupled to Affi-Gel beads, a simple filtration procedure allows the amount of labeled PBPs that bind to moenomycin beads in the presence of test substances to be determined. The PBPs can easily be labeled by the covalent binding of penicillin derivatives. Crude membrane extracts can be used as a source for the PBPs, and different kinds of labels for the penicillin-PBP complexes can be used. The assay can be adapted to high-throughput screens.


Assuntos
Proteínas de Bactérias , Bambermicinas/farmacologia , Proteínas de Transporte/antagonistas & inibidores , Glicosiltransferases/antagonistas & inibidores , Hexosiltransferases/farmacologia , Complexos Multienzimáticos/farmacologia , Muramilpentapeptídeo Carboxipeptidase/antagonistas & inibidores , Peptidil Transferases/farmacologia , Ligação Competitiva , Sequência de Carboidratos , Proteínas de Transporte/metabolismo , Avaliação Pré-Clínica de Medicamentos , Inibidores Enzimáticos/farmacologia , Escherichia coli/efeitos dos fármacos , Escherichia coli/enzimologia , Escherichia coli/metabolismo , Glicosiltransferases/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Complexos Multienzimáticos/antagonistas & inibidores , Complexos Multienzimáticos/metabolismo , Muramilpentapeptídeo Carboxipeptidase/metabolismo , Proteínas de Ligação às Penicilinas
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