RESUMEN
OBJETIVO: estandarizar el uso de electroforesis horizontal en poliacrilamida como un método rápido de fácil implementación y de alta sensibilidad para la detección y tipificación del virus del papiloma humano por reacción en cadena de la polimerasa-polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción con la enzima HpyCH4V como única enzima de restricción. MÉTODOS: Se utilizó el ácido desoxirribonucleico de 17 tipos de virus del papiloma humano, clonados en la colección del Laboratorio de Biología y Medicina Experimental (LABIOMEX-ULA), para la amplificación de la región flanqueada por los oligonucleótidos MY09/ MY11, los amplificados obtenidos se sometieron a digestión enzimática con la enzima HpyCH4V. El producto se corrió en geles de poliacrilamida de rápida polimerización en equipos de electroforesis horizontales. El ácido desoxirribonucleico se tiñó con bromuro de etidio y fueron fotografiados con la utilización de un trans-iluminador de luz ultravioleta. RESULTADOS: Se corrieron muestras de 17 tipos diferentes de virus del papiloma humano en geles de poliacrilamida en electroforesis horizontal sudmarina. Se observaron patrones de digestión, con la enzima de restricción HpyCH4V, bien definidos y distintos para 15 tipos diferentes. Se presentó una coincidencia de patrón polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción para los tipos 45 y 52 ambos de alto riesgo. Se obtuvo una excelente resolución en corridas de 2,5 cm de longitud para cualquier patrón polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción de los 17 tipos de virus del papiloma humano analizados. CONCLUSIÓN: El análisis de las corridas permitió una eficiente caracterización de los 17 tipos virales. La comparación del índice de movilidad relativa con polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción virtual de los fragmentos amplificados presentó diferencias mínimas, el análisis de la movilidad en agarosa y poliacrilamida se ajustaron perfectamente permitiendo la sustitución de la agarosa por la poliacrilamida.
OBJECTIVE: to standardize the use of horizontal electrophoresis in polyacrylamide as a quick method of easy implementation and high sensitivity for the detection and typing of Human Papillomavirus by PCR-FRLP with HpyCH4V enzyme as unique restriction enzyme. METHODS: DNA from 17 Human Papillomavirus types, cloned in the collection of the Laboratory of Experimental Biology and Medicine, for amplification of the region flanked by the MY09/ MY11 oligonucleotides were used, the amplified obtained were subjected to enzymatic digestion with the enzyme HpyCH4V. The product was run on polyacrylamide gels rapid polymerization horizontal electrophoresis equipment. Stained with ethidium bromide and were photographed with the use of a trans-illuminating UV. RESULTS: Samples of 17 different Human Papillomavirus types polyacrylamide gel electrophoresis were run horizontally. Digestion patterns were observed with the restriction enzyme HpyCH4V, well-defined and different for different types 15. A pattern match for RFLP types 45 and 52 both high risk presented. Excellent resolution on runs of 2.5 cm in length for any RFLP pattern of the 17 Human Papillomavirus types analyzed was obtained. CONCLUSION: The analysis of the runs allows efficient characterization of the 17 Human Papillomavirus types. Comparing the relative mobility rate with the virtual RFLP of amplified fragments present minimal differences, analyzing mobility in agarose and polyacrylamide perfectly adjusted allowing for substitution of agarose by polyacrylamide.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Oligonucleótidos , ADN , Neoplasias del Cuello Uterino , Electroforesis , Electroforesis en Gel de Poliacrilamida , Papillomavirus Humano 11 , Biología Molecular , Factores EpidemiológicosRESUMEN
BACKGROUND: Accurate classification of multiple sclerosis (MS) lesions in the brain cortex may be important in understanding their impact on cognitive impairment (CI). Improved accuracy in identification/classification of cortical lesions was demonstrated in a study combining two magnetic resonance imaging (MRI) sequences: double inversion recovery (DIR) and T1-weighted phase-sensitive inversion recovery (PSIR). OBJECTIVE: To evaluate the role of intracortical lesions (IC) in MS-related CI and compare it with the role of mixed (MX), juxtacortical (JX), the sum of IC + MX and with total lesions as detected on DIR/PSIR images. Correlations between CI and brain atrophy, disease severity and disease duration were also sought. METHODS: A total of 39 patients underwent extensive neuropsychological testing and were classified into normal and impaired groups. Images were obtained on a 3T scanner and cortical lesions were assessed blind to the cognitive status of the subjects. RESULTS: Some 238 cortical lesions were identified (130 IC, 108 MX) in 82% of the patients; 39 JX lesions were also identified. Correlations between CI and MX lesions alone (p = 0.010) and with the sum of IC + MX lesions (p = 0.030) were found. A correlation between severity of CI and Expanded Disability Status Scale was also seen (p = 0.009). CONCLUSION: Cortical lesions play an important role in CI. However, our results suggest that lesions that remain contained within the cortical ribbon do not play a more important role than ones extending into the adjacent white matter; furthermore, the size of the cortical lesion, and not the tissue-specific location, may better explain their correlation with CI.
Asunto(s)
Corteza Cerebral/patología , Trastornos del Conocimiento/patología , Esclerosis Múltiple/patología , Adolescente , Adulto , Atrofia/patología , Atrofia/fisiopatología , Corteza Cerebral/fisiopatología , Cognición/fisiología , Trastornos del Conocimiento/fisiopatología , Trastornos del Conocimiento/psicología , Función Ejecutiva/fisiología , Femenino , Humanos , Masculino , Memoria/fisiología , Persona de Mediana Edad , Esclerosis Múltiple/fisiopatología , Esclerosis Múltiple/psicología , Pruebas NeuropsicológicasAsunto(s)
Investigación Biomédica/ética , Conflicto de Intereses , Industria Farmacéutica/ética , Ética Médica , Gobierno Federal , Universidades/ética , Investigación Biomédica/economía , Conflicto de Intereses/economía , Conflicto de Intereses/legislación & jurisprudencia , Industria Farmacéutica/economía , Adhesión a Directriz/economía , Adhesión a Directriz/ética , Guías como Asunto/normas , National Institutes of Health (U.S.) , Estados Unidos , Universidades/economíaRESUMEN
Se reporta que el análisis del motivo de indicación de estudios cromosómicos y del tipo y frecuencia de las aberraciones cromosómicas (AC) encontradas en 734 pacientes procedentes de consultas de genética clínica, instituciones de impedidos físicos y mentales y del Registro Cubano de Malformaciones Congénitas reveló que, en el período de enero de 1985 a mayo de 1987 la frecuencia global de AC fue del 23,8 %, para el 16,2 % en el año 1985, 17,6 % en 1986 y del 35,1 % en el periodo estudiado de 1987. Se señala que el incremento se corresponde con el mayor número de pacientes estudiados con retraso mental y patrón dismórfico, en cuyo grupo la frecuencia de AC era del 55,4 %, para representar el 47,6 % al síndrome de Down y el 15,4 % a otras AC, así como a la inclusión en nuestro servicio del estudio del síndrome frágil X, que ha permitido el diagnóstico de 17 pacientes de los 48 del sexo masculino a los cuales se les hizo la indicación. El incremento de AC indica buen criterio clínico para este estudio