Identificación de histoplasma capsulatum en muestras clínicas mediante la técnica de PCR en dos rondas / Detection of histoplasma capsulatum by nested-PCR in clinical specimens

La histoplasmosis es una micosis profunda de distribución mundial cuyo diagnóstico se fundamenta en estudios clínicos, micológicos e inmunológicos. La identificación del agente etiológico en muestras biológicas es difícil de realizar. Se evaluó la técnica de PCR en dos rondas para identificar ADN de Histoplasma capsulatum en muestras clínicas (sangre y médula ósea) y cultivos del hongo. Se ensayaron 3 métodos de aislamiento de ADN basados en los reactivos Tiocianato de Guanidina, Cloruro de Bencilo y Triton-X-100. La técnica de aislamiento con Tiocianato de guanidina resultó de fácil aplicación en muestras clínicas. Sin embargo, se obtuvo un mayor rendimiento de ADN con el reactivo Triton-X-100. La aplicación de la prueba de PCR generó un amplificado de 210 pares de bases el cual fue identificado tanto en las cepas de referencia de H. capsulatum como en 5 muestras de sangre y 2 muestras de médula ósea. Para confirmar la especificidad de la prueba se analizaron cepas de otros hongos no relacionados, Paracoccidioides brasiliensis, Candida glabrata, Cryptococcus neoformans y Coccidioides immitis (C posadasii) las cuales resultaron negativas. La técnica de PCR mostró una sensibilidad de hasta 10pg de ADN de H. capsulatum confirmándose así su utilidad como herramienta de diagnóstico molecular.

Paracoccidioidosis brasiliensis preservados por 3-21 años con el método castellani: recuperación y patogenicidad / Brasiliensis paracoccidioides preserved for 3-21 years with castellani`s method: recovery and pathogenicity

Se estudiaron 31 cepas de paracoccidioides brasiliensis que habían sido mantenidas por un período de 3-21 años con el método de Castellani (agua destilada estéril) en la micoteca de la sección de micología. De estas cepas se recuperaron 18 por subcultivo en sablac y/o inoculación vía intraperitoneal a hámsters (directamente desde la cepa conservada en agua). Dos cepas fueron recuperadas solo después de ser inoculadas a los animales. De las cepas recuperadas por subcultivo solo una no mostró patogenicidad, aunque fue inoculada en tres oportunidades en los animales. El resto de las cepas fueron patógenas para los animales de experimentación y al ser reinoculadas a los mismos se incrementó su virulencia. Una vez más se demuestra que el método de castellani como técnica de conservación para hongos, es fácil, económica y efectiva para mantener la viabilidad de los hongos y en este caso del P. brasiliensis. En laboratorios como los nuestros de escasos recursos es el método ideal. Así mismo nosotros demostramos que se puede recuperar algunas cepas de P. brasiliensis mantenida por este método y con dificultad para crecer en subcultivo, inoculando los fragmentos del hongo junto con el agua de conservación por vía intraperitoneal a los animales de experimentación

Suceptibilidad de Candida albicans "In vitro" mediante los posos de difusión / \"In Vitro\" antifungal susceptibility of Candida albicans intervening the diffusion well

Se realizó un estudio de la susceptibilidad antifúngica "in vitro" de 20 cepas de Candida albicans para evaluar la eficacia y diferencias de sensibilidad, registradas frente a los derivados azoles: bifomazol, clorotrimazol, econazol, fluconazol, itraconazol, ketoconazol, miconazol y tioconazol. Se estadarizó y empleó el método de los posos de difusión. Se estableció la concentración de 0.1 mg/ml del antimicótico, como la apropiada. El tiempo de incubación de 24 horas a 30 grados centígrados en estufa se amplió la escala de interpretación de los resultados, sugerida por S.Shadomey y Espinel-Ingroff