Peripheral blood tumor-infiltrating lymphocytes in a neuroblastoma model. / Linfocitos infiltrantes de tumor en sangre periférica en un modelo de neuroblastoma.

ABSTRACT

OBJECTIVE: To detect tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) in the peripheral blood (PB) of a preclinical neuroblastoma model. MATERIALS AND METHODS: Two types of preclinical models - immunodeficient mice and immunocompetent mice - were generated by injecting a cell suspension of neuroblastoma cell line NB36769 with MYCN gene (TH-MYCN+) overexpression. Spleen, tumor, and peripheral blood were studied using flow cytometry to detect PD-1+ T-cells. TCR-ß immunosequencing was performed in matched samples (tumor and peripheral blood). RESULTS: Most PB T-cells of immunodeficient mice were CD4 (control 83.1%; tumor 86.1%), with a small proportion of PD-1+ T-cells (control 0.4%; tumor 0.3%). However, the percentage of PD-1+ T-cells in the spleen was higher (control 6.5%; tumor 6.2%), and it was expressed in the CD4+ subset only. Regarding the TCR repertoire of immunocompetent mice, the proportion of the 10 most frequent sequences was significantly higher in tumors (11.09% ± 2.83%) than in the peripheral blood (1.59% ± 0.59%) (p=0.024). These findings are suggestive of clonotype enrichment within the tumor. 9 out of the 10 most frequent tumor clones were identified in the matched peripheral blood sample in 2 mice, and 6 out of 10 in one mouse. In addition, TILs with shared sequences from different animals were found. CONCLUSIONS: Our results in terms of immunophenotype and clonality suggest the presence of PB T-cells which could include TILs in a preclinical neuroblastoma model.

RESUMEN

OBJETIVO: Comprobar la existencia de linfocitos T que incluyen linfocitos infiltrantes de tumor (TILs) en la sangre periférica (SP) de un modelo preclínico de neuroblastoma. MATERIAL Y METODOS: Utilizamos un modelo en ratones inmunodeficientes y otro en inmunocompetentes mediante inyección de suspensiones de la línea tumoral NB36769 con mutación de MYCN (TH-MYCN+). Se realizaron análisis por citometría de flujo (bazo, SP y tumor) y secuenciación del TCR-ß en el ADN de muestras pareadas de tumor y SP. RESULTADOS: En los ratones inmunodeficientes el componente principal en SP fue CD4 83,1% (control) y 86,1% (tumor), siendo PD-1+ el 0,4 y el 0,3%. En el bazo obtuvimos un mayor porcentaje de linfocitos T PD-1+ que en SP, siendo similar en el control (6,5%) y en el ratón con tumor (6,2%), en subpoblación CD4+ exclusivamente. En los ratones inmunocompetentes observamos que la proporción de los 10 clones más frecuentes en los tumores constituía el 11,09% ± 2,83% del repertorio del TCR, mientras en SP representaba el 1,59% ± 0,59% (p= 0,024). Estos resultados sugieren un enriquecimiento de clonotipos dentro del tumor. De los 10 clones más frecuentes en las muestras tumorales, localizamos 9 también en la SP en dos ratones y 6 en el tercero. Además, encontramos secuencias compartidas por TILs de animales diferentes. CONCLUSIONES: Nuestros resultados de inmunofenotipo y clonalidad apuntan a la existencia de linfocitos en SP que podrían contener TILs en un modelo experimental de neuroblastoma.