Neurological disease in cattle in southern Brazil associated with Bovine herpesvirus infection.

The occurrence of neurological disease in cattle caused by Bovine herpesvirus in 11 farms from southern Brazil between 1987 and 2007 is described. Twenty-two animals were necropsied. Major clinical signs included excessive salivation, nasal and ocular discharge, circling, recumbency, depression, incoordination, grinding of teeth, and paddling movements. Necropsy findings in 10 of 22 cattle included hyperemia and softening of the rostral portions of the telencephalic cortex, with flattening of gyri, and malacia. Cattle in 10 cases did not show any gross lesions. Histological examination in most cases revealed nonsuppurative and necrotizing meningoencephalitis with acute neuronal necrosis, edema, eosinophilic intranuclear inclusion bodies in astrocytes and neurons, and infiltration of gitter cells. No histologic lesions could be detected in 4 cases. The initial diagnosis was based upon the clinical, epidemiological, and pathological findings. The diagnosis was confirmed by virus isolation in cell culture followed by virus identification by a glycoprotein C-based polymerase chain reaction. Seven isolates were identified as Bovine herpesvirus 5, and 4 were identified as Bovine herpesvirus 1.

Antibodies against vesicular stomatitis virus in horses from southern, midwestern and northeastern Brazilian States / Anticorpos contra o vírus da estomatite vesicular em equinos de Estados das regiões sul, centro-oeste e nordeste do Brasil

ABSTRACT: Vesicular stomatitis virus (VSV) is the agent of a vesicular disease that affects many animal species and may be clinically confounded with foot-and-mouth disease in ruminant and swine. Horses are especially susceptible to VSV and may serve as sentinels for virus circulation. The present study investigated the presence of neutralizing antibodies against VSV Indiana III (VSIV-3) in serum samples of 3,626 horses from six states in three Brazilian regions: Southern (RS, n = 1,011), Midwest (GO/DF, n = 1,767) and Northeast (PB, PE, RN and CE, n = 848) collected between 2013 and 2014. Neutralizing antibodies against VSIV-3 (titers ≥40) were detected in 641 samples (positivity of 17.7%; CI95%:16.5-19.0%), being 317 samples from CE (87.3%; CI95%: 83.4-90.5 %); 109 from RN (65.7%; CI95%: 57.8 -72.7%); 124 from PB (45.4%; CI95%: 39.4-51.5%); 78 from GO/DF (4.4%; CI95%: 3.5-5.5%) and nine samples of RS (0.9%; CI95%: 0.4-1.7%). Several samples from the Northeast and Midwest harbored high neutralizing titers, indicating a recent exposure to the virus. In contrast, samples from RS had low titers, possibly due to a past remote exposure. Several positive samples presented neutralizing activity against other VSV serotypes (Indiana I and New Jersey), yet in lower titers, indicating the specificity of the response to VSIV-3. These results demonstrated a relatively recent circulation of VSIV-3 in northeastern Brazilian States, confirming clinical findings and demonstrating the sanitary importance of this infection.

RESUMO: O vírus da estomatite vesicular (vesicular stomatitis virus, VSV) é o agente de doença vesicular que afeta várias espécies e que, em suínos e ruminantes, é clinicamente confundível com a febre aftosa. Os equinos são particularmente susceptíveis ao VSV, servindo de sentinelas para a circulação viral. O presente trabalho investigou a presença de anticorpos neutralizantes contra o VSV Indiana III (VSIV-3) em amostras de soro de 3626 equinos de seis estados das regiões Sul (RS, n=1011), Centro-oeste (GO e DF, n=1767) e Nordeste (PE, PB, RN e CE, n=848), coletadas entre 2013 e 2014. Anticorpos neutralizantes contra o VSIV-3 em títulos iguais ou superiores a 40 foram detectados em 641 amostras (17,7%; IC95%: 16,5-19,0%), sendo 317 do CE (positividade de 87,3%; IC95%: 83,4-90,5%); 109 do RN (65,7%; IC95%: 57,8-72,7%); 124 da PB (45,4%; IC95%: 39,4-51,5%); 78 de GO/DF (4,4%; IC95%: 3,5-5,5%) e em nove amostras do RS (0,9%; IC95%: 0,4-1,7%). Uma parcela das amostras dos estados do Nordeste e Centro-oeste apresentou altos títulos neutralizantes, indicando exposição recente ao vírus. Já as amostras do RS apresentaram títulos baixos de anticorpos, indicando provável exposição temporalmente remota. Quando testadas contra outros sorotipos do VSV (Indiana I e New Jersey), várias amostras apresentaram atividade neutralizante, porém em títulos muito inferiores, indicando a especificidade dos anticorpos para o VSIV-3. Esses resultados demonstram circulação relativamente recente do VSIV-3 em várias regiões do Brasil, sobretudo em estados do Nordeste, confirmando relatos clínicos e demonstrando a importância sanitária dessa infecção.

Pseudovaríola e estomatite papular em bovinos no Estado de Rondônia, Brasil / Pseudocowpox and papular stomatitis in cattle in the Rondonia state, Brazil

Casos de doença vesicular, suspeitos de febre aftosa ou estomatite vesicular, foram acompanhados em rebanhos de cria e recria de bovinos no município de Nova Brasilândia do Oeste, região centro-sul do Estado de Rondônia, nos meses de outubro e novembro de 2012. Os casos ocorreram em 13 rebanhos próximos, sendo que amostras de nove rebanhos foram submetidas ao diagnóstico laboratorial. O surto afetou 25 do total de 482 animais, a maioria com idade inferior a seis meses. Os animais apresentaram lesões papulares e vesiculares, principalmente na cavidade oral, mas também no focinho e na pele, com curso aproximado de 7 a 10 dias. Após diagnóstico negativo para febre aftosa, suabes e fragmentos de tecidos das lesões e crostas foram submetidos à pesquisa de outros vírus associados com doença vesicular: parapoxvírus bovinos, vírus da vaccínia e herpesvírus bovino tipo 2 por isolamento em cultivo celular e PCR. Amostras de animais de quatro propriedades foram positivas no PCR para o gene B2L dos parapoxvírus. Sequenciamento e análise filogenética dos produtos de PCR revelaram similaridade de nucleotídeos de 97-99% com o vírus da pseudovaríola (PCPV) em material de animais de três propriedades, e amostras de um rebanho apresentaram a mesma similaridade com o vírus da estomatite papular (BSPV). As demais amostras foram negativas para os vírus pesquisados. Esses resultados demonstram a circulação desses parapoxvírus em bovinos de Rondônia e alertam para a necessidade de diagnóstico etiológico rápido e correto para evitar e/ou abreviar as consequências de medidas restritivas em relação à febre aftosa, e também, para planejar estratégias de combate a essas infecções.

Cases of vesicular disease, initially suspected of foot-and-mouth disease or vesicular stomatitis were reported in cattle in Nova Brasilândia do Oeste county located at central-southern region of Rondonia state (Brazil), between October and November of 2012. The described outbreaks occurred in 13 neighbor herds affecting 25 of 482 animals, mainly calves (< six months-old). Samples from nine herds were submitted to laboratory diagnostic. The animals developed papulo-vesicular lesions, mainly in the oral cavity, but also in the muzzle and skin, with a clinical course of approximately 7 to 10 days. Samples collected from lesions were submitted initially to diagnosis of foot-and-mouth disease, resulting negative. Tissue fragments of lesions and swabs were submitted to diagnosis of other agents of vesicular disease: parapoxvirus, vaccinia virus, and bovine herpesvirus type 2, by virus isolation and PCR. Samples obtained from animals of four herds were positive to B2L gene of parapoxvirus by PCR. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of the amplicons indicated 97-99% of similarity with pseudocowpox virus in samples from three herds; samples from another herd presented the same similarity with bovine papular stomatitis virus. Samples from others herds were negative for all viruses. These results show the circulation of bovine parapoxviruses in Rondonia state, and indicate the need for fast and reliable diagnosis to avoid the consequences of restrictive measures related to foot-and-mouth disease, and to control and prevent these viral infections as well.

O polietilenoglicol aumenta a penetração do vírus da diarréia viral bovina, do vírus da estomatite vesicular e do vírus sincicial respiratório bovino em células de cultivo / Polyethylene glycol increases the penetration of bovine viral diarrhea virus, vesicular stomatitis virus and bovine respiratory syncytial virus in cultured cells

A baixa eficiência de penetração de alguns vírus em células de cultivo pode representar uma dificuldade para o isolamento e a multiplicação viral in vitro. No presente estudo investigou-se o efeito do polietilenoglicol (PEG) na replicação de sete vírus bovinos em células de linhagem de rim bovino (MDBK). A eficiência de penetração e replicação foi mensurada pela contagem do número de placas virais produzidas em tapetes celulares, após adsorção do inóculo viral (100 DICC50 mL-1) com ou sem a adição de PEG a 5 por cento (peso molecular 6.000). A adição de PEG ao inóculo resultou em aumentos significativos do número de placas para o vírus da diarréia viral bovina (BVDV) (aumento de 3,4 vezes), vírus da estomatite vesicular (VSV) (2,2 vezes) e vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) (1,5 vezes). A adição de PEG não produziu aumento significativo no número de placas dos herpesvírus bovinos 1, 2 e 5 (BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5). Por outro lado, o PEG produziu uma redução do número de placas (1,4 vezes) produzidas pelo vírus da parainfluenza bovina (bPI-3V). A adição de PEG a 5 por cento também aumentou a sensibilidade de detecção (entre 10 e 100 vezes) do BVDV no soro de três bezerros persistentemente infectados. Para o BRSV, a adição de PEG aumentou em duas vezes a sensibilidade do isolamento viral de secreções nasais de duas ovelhas infectadas experimentalmente. Esses resultados demonstram que o PEG aumenta a eficiência de infecção do BVDV, VSV e BRSV em células de cultivo, podendo ser utilizado para aumentar a sensibilidade de detecção desses vírus em amostras clínicas (isolamento viral) e/ou, para aumentar os títulos de vírus produzidos em cultivo celular.

The low efficiency of penetration of some viruses in cultured cells may represent an obstacle for viral isolation and/or viral multiplication in tissue culture. This study investigated the effect of polyethylene glycol (PEG) on the penetration and replication of seven bovine enveloped viruses in culture cells. Penetration efficiency was measured by counting the number of viral plaques produced in bovine kidney cells (MDBK). The addition of 5 percent PEG (molecular weight 6.000) to the viral inoculum containing 100 TCID50 mL-1 (tissue culture median infectious dosis) of each virus, during adsorption for 2h at 37ºC, resulted in a significant increase in the number of plaques for bovine viral diarrhea virus (BVDV) (increase of 3.4-fold), vesicular stomatitis virus (VSV) (2.2-fold) and bovine respiratory syncytial virus (BRSV) (1.5-fold). The addition of 5 percent PEG to the inoculum of bovine herpesviruses 1, 2 and 5 (BoHV-1, BoHV-2 and BoHV-5) did not increase the number of viral plaques. On the other hand, PEG produced a reduction in the number of plaques by bovine parainfluenza virus (bPI-3V) (1.4-fold). Furthermore, the addition of 5 percent PEG produced a 10- to 1000-fold increase in the sensitivity of BVDV detection in the serum of three persistently infected calves; and doubled the sensitivity of detection of BRSV in nasal secretions of two experimentally infected sheep. These results demonstrate that PEG enhances the efficiency of infection by BVDV, VSV and BRSV in cultured bovine cells and therefore may be used to increase the sensitivity of virus detection in clinical samples (viral isolation), and/or to increase virus titers in cell cultures.