Análise imuno- histoquímica das proteínas BRCA1 e Acetil Histona H3 no carcinoma de células escamosas oral / Immunohistochemical analysis of BRCA1 and Acetyl Histone H3 proteins in oral squamous cell carcinoma

RESUMO

O carcinoma de células escamosas da região de cabeça e pescoço é o 4° tipo de câncer mais comum em homens no mundo. A Carcinogênese oral é caracterizada por uma heterogeneidade clínica, patológica e biológica, gerando instabilidade genômica e ocasionando a progressão e desenvolvimento de uma desordem potencialmente maligna. O mecanismo DDR (DNA damage response) age como um mecanismo de autodefesa responsável pela manutenção da integridade da cromatina. Sua eficácia é dependente de seu acesso ao local do dano pelas proteínas envolvidas no processo, como as histonas (proteínas que compõem os nucleossomos e que auxiliam no desempacotamento da cromatina). O desequilíbrio da acetilação e deacetilação das histonas em regiões promotoras contribui para a desregulação da expressão gênica e tem sido associado à carcinogênese e à progressão do câncer. O mecanismo DDR é composto por diversas vias de sinalização interconectadas, como as vias do BRCA1. A proteína BRCA1 regula a transcrição, o remodelamento da cromatina, a ubiquitinação e o reparo da quebra de fita dupla de DNA, entre outras funções. Sua identificação tem sido relacionada à quimiorresistência e pior prognóstico, principalmente, em carcinomas de mama e ovário. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar a imunoexpressão das proteínas BRCA1 e Acetil Histona H3 em espécimes de biópsia incisional de carcinomas de células escamosas oral (CCEO) em língua móvel, e correlacionar sua expressão com dados epidemiológicos e com a gradação histopatológica dos tumores. Biopsias incisionais de 43 CCEO de língua móvel foram submetidas a análise imuno-histoquímica para os anticorpos BRCA1 e AcH3. As amostram foram microscopicamente subdividas em bem diferenciado (BD) e pouco diferenciado (PD) Todos os casos de CCEO apresentaram marcação nuclear positiva para a ACH3 e não houve correlação estatisticamente significativa entre este anticorpo e a gradação histológica (p=0.391). Todos os casos foram também positivos para a proteína BRCA1. O grupo PD apresentou uma expressão aberrante do BRCA1, com a maioria dos casos possuindo menos que 10% da marcação nuclear (p<0.01). Todos os casos do grupo PD apresentaram marcação citoplasmática (p=0.034). O grupo dos BD mostrou uma expressão majoritariamente nuclear com a maioria dos casos expressando mais de 50% das células positivas (p<0.01). Nossos resultados mostraram que as proteínas AcH3 e BRCA1 foram encontradas expressas em todos os casos de CCEO. Em geral, casos de CCEO apresentaram-se hipoacetilados. Houve uma diminuição significante na expressão da proteína BRCA1 no grupo PD em comparação ao BD. Além disso, a imunomarcação do BRCA1 nos casos PD foi exclusivamente citoplasmática. Nossos estudos corroboram com os achados de trabalhos anteriores para imuno-histoquímica de ambas proteínas BRCA1 e AcH3 em CCEO. O status hipoacetilado do CCEO evidencia a importância das mudanças epigenéticas na carcinogênese oral e na progressão tumoral como sendo um campo de investigação promissor. A imunoexpressão da proteína BRCA1 mostrou um declínio significativo nos casos PD com a proteína, em sua maioria, sendo encontrada no citoplasma. Apesar do estudo ter usado espécimes de biópsia incisional, nosso BRCA1 reproduziu o mesmo observado nos CCEO e em outras neoplasias, sugerindo a possibilidade de seu uso como um marcador prognóstico. (AU)

ABSTRACT

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common cancer of the head and neck region and is the fourth most prevalent cancer in men worldwide. The oral carcinogenesis is characterized by a clinical, pathological and biological heterogeneity, causing genomic instability with the progression and development of potentially malignant disorders. The DDR (DNA damage response) pathway acts as a mechanism of self-defense responsible for the detection of the chromatin integrity. Its efficacy is dependent on its access to the site of damage by the proteins involved in the process, such as the histones (proteins that constitute the nucleosomes and assist the packing of the chromatin). The instability of histone acetylation or deacetylation in promoter regions contribute for the dysregulation of the gene expression and has been associated to the carcinogenesis and cancer progression. The DDR mechanism is composed of several interconnected signaling pathways, such as BRCA1 pathways. The BRCA1 protein regulates transcription, chromatin remodeling and repair of double strand DNA breaks and other functions. Its identification has been related to chemoresistance and poor prognostic, especially in mama and ovarian carcinoma. The aim of the study was to evaluate the immunoexpression profile of BRCA1 and AcH3 proteins in fragments of incisional biopsy oral squamous cell carcinomas of the mobile tongue and correlate with the epidemiological data and histopathological gradation of the tumors. Incisional biopsy samples of 43 oral squamous cell carcinoma of the mobile tongue were submitted to immunohistochemical for AcH3 and BRCA1 antibodies. Samples were microscopically graded in well differentiated and the poor differentiated. All OSCC cases showed AcH3 positive nuclear expression and there was no correlation between AcH3 and histological grading (p=0.391). All the OSCC cases were positive for BRCA-1 expression. The PD group showed an aberrant expression of the BRCA1 protein, with most of the cases with less than 10% of nuclear staining (p<0.01). Moreover, all PD cases showed cytoplasmatic staining (p=0.034). The WD cases showed nuclear staining with most of the cases showing more than 50% of positive cells (p<0.01). Our results pointed that the AcH3 and BRCA1 protein were found to be expressed in all OSCC. In general, OSCC cases were hypoacetylated. There was a significant decrease in BRCA1 protein expression in the poor differentiated group in comparison to the well differentiated. Also, BRCA1 immunostaining was cytoplasmatic in the poor differentiated cases. Our results corroborate the few previous studies for both AcH3 and BRCA1 protein immunohistochemistry findings in OSCC. The hypoacetylated status of OSCC highlights the importance of epigenetics changes in oral carcinogenesis and tumor progression as a promising field of investigation. The BRCA1 protein imunnoexpression showed a significant decrease in the PD cases and the protein was mostly found into the cytoplasm. Although the present study used biopsy specimens, our BRCA1 results were the same observed not only in OSCC but in other cancers suggesting it as a promising prognostic marker.