Método de aislamiento, cultivo y precondicionamiento con hipoxia de células madre derivadas de tejido adiposo en ratas / Method of isolation, culture and hypoxia preconditioning of adipose tissue stem cells in rats

Introducción y objetivo. Las células madre son candidatas terapéuticas para una amplia gama de enfermedades. Resultan de gran interés en Cirugía Plástica para el tratamiento de heridas crónicas, transferencia de tejido adiposo y colgajos. El objetivo de este estudio es describir el método de aislamiento, cultivo y caracterización de células madre derivadas de tejido adiposo y cómo estas pueden precondicionarse con hipoxia y generar cambios in vitro en su capacidad proliferativa y migratoria. El trabajo es un complemento didáctico a otro publicado por nosotros en esta misma revista utilizando esta metodología en comparación al grupo de retardo de colgajo y grupo control en colgajos cutáneos aleatorizados en ratas. Métodos. Obtuvimos las células madre de tejido graso ínguino-abdominal de ratas adultas: 10 en el grupo de células madre derivadas de tejido adiposo y otras 10 en el grupo de células madre derivadas de tejido adiposo precondicionadas con hipoxia (2% O2 y 5% CO2). Realizamos análisis morfológico directo y con inmunofluorescencia con el marcador vimentina y CD90 y estudio de proliferación y migración celular in vitro. Resultados: Utilizamos en promedio 1.64 +/- 1.13 gr de tejido adiposo en el grupo sin precondicionamiento y 0.93 +/- 0.34 gr en el grupo con precondicionamiento con hipoxia para el aislamiento. Las células madre derivadas de tejido adiposo precondicionadas con hipoxia presentaron un aumento de la capacidad migratoria a las 24 horas de 2.44 +/- 0.85 mm frente a 2.24 +/- 0.82 mm (p ≤ 0.01) y proliferativa 5.42 x105 +/- 1.03 x105 céls/ml frente a 3.26 x105 +/- 8.61 x104 céls/ml) (p ≤ 0.001) de forma significativa en comparación a las sin precondicionamiento. Conclusiones. Describimos en detalle un método de precondicionamiento de células madre mediante hipoxia. Logramos potenciar el efecto de las células madre aumentando en forma significativa su capacidad migratoria y proliferativa de forma precoz

Background and objective. Stem cells are therapeutic candidates for a wide range of diseases. They are of great interest in Plastic Surgery for the management of chronic wounds, adipose tissue transfer and flaps. The objective of this study is to describe the method of isolation, culture and characterization of stem cells derived from adipose tissue and how these can be preconditioned with hypoxia and generate in vitro changes in their proliferative and migratory capacity. This study is a didactic supplement to a paper published by us in this same journal using this methodology in comparison to the group of flap delay and control group in skin flaps randomized in rats. Methods. Stem cells were obtained from inguinal-abdominal fatty tissue of adult rats: 10 in the group of stem cells derived from adipose tissue and another 10 in the group of stem cells derived from adipose tissue preconditioned with hypoxia (2% O2 and 5% CO2). Direct morphological analysis was carried out and with immunofluorescence (vimentin and CD90 marker). Study proliferation and in vitro cell migration was performed. Results. An average of 1.64 +/- 1.13 gr of adipose tissue of the inguinoabdominal area was used in the group of stem cells without preconditioning and 0.93 +/- 0.34 gr. in the group with hypoxic preconditioning for the isolation. Stem cells derived from adipose tissue preconditioned with hypoxia showed an increase in migratory capacity at 24 hours of 2.44 +/- 0.85 mm v/s 2.24 +/- 0.82 mm (p ≤ 0.01) and proliferative of 5.42 x105 +/- 1.03 x105 cells / ml v/s 3.26 x 105 +/- 8.61 x104 cells / ml) (p ≤0.001) significantly compared to those without preconditioning. Conclusions. A method of preconditioning stem cells by hypoxia is described in detail. It is possible to enhance the effect of the stem cells, significantly increasing their early migratory and proliferative capacity

Impact of metformin treatment and swimming exercise on visfatin levels in high-fat-induced obesity rats / Impacto do tratamento com metformina e da natação nos níveis de visfatina em ratos com obesidade induzida por dieta com alto teor de gordura

Objective : Visfatin is a recently discovered adipocytokine that contributes to glucose and obesity-related conditions. Until now, its responses to the insulin-sensitizing agent metformin and to exercise are largely unknown. We aim to investigate the impact of metformin treatment and/or swimming exercise on serum visfatin and visfatin levels in subcutaneous adipose tissue (SAT), peri-renal adipose tissue (PAT) and skeletal muscle (SM) of high-fat-induced obesity rats. Materials and methods : Sprague-Dawley rats were fed a normal diet or a high-fat diet for 16 weeks to develop obesity model. The high-fat-induced obesity model rats were then randomized to metformin (MET), swimming exercise (SWI), or adjunctive therapy of metformin and swimming exercise (MAS), besides high-fat obesity control group and a normal control group, all with 10 rats per group. Zoometric and glycemic parameters, lipid profile, and serum visfatin levels were assessed at baseline and after 6 weeks of therapy. Visfatin levels in SAT, PAT and SM were determined by Western Blot. Results : Metformin and swimming exercise improved lipid profile, and increased insulin sensitivity and body weight reduction were observed. Both metformin and swimming exercise down-regulated visfatin levels in SAT and PAT, while the adjunctive therapy conferred greater benefits, but no changes of visfatin levels were observed in SM. Conclusion : Our results indicate that visfatin down-regulation in SAT and PAT may be one of the mechanisms by which metformin and swimming exercise inhibit obesity. .

Objetivo : A visfatina é uma adipocina recentemente descoberta que contribui com as condições relacionadas à glicose e à obesidade. Até hoje, pouco se sabe da sua resposta à metformina, um agente sensibilizador de insulina, e ao exercício. Nosso objetivo foi investigar o impacto do tratamento com metformina e/ou da natação sobre a visfatina no soro e no tecido adiposo subcutâneo (TAS), tecido adiposo perirrenal (TAP) e músculo esquelético (ME) em ratos com obesidade induzida por dieta com alto teor de gordura. Materiais e métodos : Ratos Sprague-Dawley foram alimentados com uma dieta normal ou com alto teor de gordura por 16 semanas para o desenvolvimento de um modelo de obesidade. Os ratos do modelo de obesidade foram, então, randomizados para a metformina, natação ou terapia de combinação com metformina e natação, além do grupo controle de obesidade induzida por alto teor de gordura e do grupo controle normal. Cada grupo apresentava 10 ratos. Parâmetros zoométricos e glicêmicos, perfil lipídico e níveis de visfatina sérica foram avaliados no momento inicial e após seis semanas de tratamento. Os níveis de visfatina em TAS, TAP e ME foram determinados por Western Blot. Resultados : A metformina e a natação melhoraram o perfil lipídico e aumentaram a sensibilidade à insulina, com redução do peso corporal. Tanto a metformina quanto a natação levaram à regulação para baixo dos níveis de visfatina no TAS e TAP, enquanto a terapia de combinação apresentou os maiores benefícios, mas não foram observadas alterações nos níveis de visfatina no ME. Conclusão : Nossos resultados indicam que a regulação para baixo da visfatina no TAS e TAP pode ser um dos mecanismos pelos quais a metformina ...

Rápida visualización de la infiltración grasa en músculos dorsales del tronco a nivel de la columna lumbar en imágenes de resonancia magnética (RM) / Fast visualization of fat infiltration in dorsal muscles of the truk at lumbar spinal column by magnetic resonance images (MR)

En resonancia magnética, la grasa se considera un «artefacto o señal no deseada» que se suprime al realizar un estudio clínico, salvo especificación. El aumento de la obesidad y enfermedades asociadas ha hecho necesario estudiar los depósitos de grasa, tanto en tejido adiposo como de grasa ectópica. En el presente trabajo se analiza la información que en cualquier ordenador personal se puede obtener del CD que los pacientes reciben junto con el informe médico tras someterse a una resonancia magnética de abdomen, centrándonos en los depósitos grasos en músculos espinales de voluntarios adultos sanos o con dolor lumbar inespecífico La aplicación de interfaces o ventanas coloreadas a imágenes de resonancia en tonos grises es muy útil para visualizar depósitos grasos, especialmente para observadores no familiarizados con dichas imágenes. Es un método rápido, fácil e intuitivo de visualización semicuantitativa de grasa ectópica muscular (AU)

In magnetic resonance, fat is considered an «unwanted artifact or signal» which is suppressed when performing a clinical study, unless otherwise specified. The increase in obesity and associated diseases has become necessary to study fat deposits both in adipose tissue and ectopic fat. In this paper, we analyze the information that is available from the CD which patients receive after undergoing magnetic resonance imaging of the abdomen along with the medical report, using a personal computer, focusing on the fat deposits in spinal muscles of healthy adult volunteers or analyzes nonspecific low back pain. The application of colored interfaces or windows on gray resonance images is very useful to display fat deposits, especially when the observer is not familiar with these images. It is a fast, easy and intuitive method of semiquantitative muscle visualization of the ectopic fat (AU)

Histomorphometric changes in the perirenal adipocytes of adrenalectomized rats treated with dexamethasone

INTRODUCTION: Prolonged steroid treatment administered to any patient can cause visceral obesity, which is associated with metabolic disease and Cushing's syndrome. Glucocorticoids have a profound negative effect on adipose tissue mass, giving rise to obesity, which in turn is regulated by the 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 enzyme. Adrenalectomized rats treated with dexamethasone exhibited an increase in visceral fat deposition but not in body weight. OBJECTIVES: The main aim of this study was to determine the effect of dexamethasone on the histomorphometric characteristics of perirenal adipocytes of adrenalectomized, dexamethasone-treated rats (ADR+Dexa) and the association of dexamethasone treatment with the expression and activity of 11 β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11 β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1). METHODS: A total of 20 male Sprague Dawley rats were divided into 3 groups: a baseline control group (n = 6), a sham-operated group (n = 7) and an adrenalectomized group (n=7). The adrenalectomized group was given intramuscular dexamethasone (ADR+Dexa) 2 weeks post adrenalectomy, and the rats from the sham-operated group were administered intramuscular vehicle (olive oil). RESULTS: Treatment with 120 μg/kg intramuscular dexamethasone for 8 weeks resulted in a significant decrease in the diameter of the perirenal adipocytes (p<0.05) and a significant increase in the number of perirenal adipocytes (p<0.05). There was minimal weight gain but pronounced fat deposition in the dexamethasone-treated rats. These changes in the perirenal adipocytes were associated with high expression and dehydrogenase activity of 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1. CONCLUSIONS: In conclusion, dexamethasone increased the deposition of perirenal fat by hyperplasia, which causes increases in the expression and dehydrogenase activity of 11 β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 in adrenalectomized rats.

Influencia de la Leptina y adiponectina en el cáncer de próstata / Influence of leptin and adiponectin on prostate cancer

OBJETIVO: Numerosos estudios han investigado la asociación entre la obesidad, las sustancias secretadas por el tejido adiposo (leptina y adiponectina) y el cáncer de próstata (CaP), aunque los resultados no han sido concluyentes. El objetivo del presente trabajo es realizar una revisión bibliográfica sobre el rol de la leptina y la adiponectina en el desarrollo del CaP.MÉTODOS: Se realizó una búsqueda bibliográfica y lectura compresiva de artículos relacionados con “leptina”, “adiponectina”, “obesidad” y “cáncer de próstata” en Pubmed y revistas científicas; y se efectuó una breve descripción sobre el tema.RESULTADOS: Estudios recientes indican que el tejido adiposo y las diferentes sustancias que éste secreta, denominadas adipoquinas, podrían promover o prevenir el desarrollo del CaP. La leptina tendría un efecto promotor del tumor; mientras que la adiponectina tendría un efecto protector.CONCLUSIÓN: La obesidad podría influenciar la carcinogénesis prostática mediante un mecanismo molecular en el que participarían las adipoquinas(AU)

OBJECTIVES: Many studies have investi-gated the association between obesity, adipose tissue-derived factors (leptin and adiponectin) and prostate cancer (CaP) but the results are still inconsistent.METHODS: The aim of this study was to carry out a comprehensive review of the existing evidence about the role of leptin and adiponectin in prostate carcinoge-nesis and to provide an overview of it.RESULTS: Recent evidence suggests that leptin may play a rol in prostate cancer progression, while adiponectin may act as an “anti- prostatic cancer” adipokine.CONCLUSIONS: Obesity may promote the progression of established prostate cancer and and adipokines may provide a molecular mechanism whereby obesity exerts its effects on prostate tumour biology(AU)

Adipose tissue expression of 11beta-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1 in cushing's syndrome and in obesity

Glucocorticoids have a major role in determining adipose tissue metabolism and distribution. 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11betaHSD1) is a NADPH-dependent enzyme highly expressed in the liver and adipose tissue. In most intact cells and tissues it functions as a reductase (to convert inactive cortisone to active cortisol). It has been hypothesized that tissue-specific deregulation of cortisol metabolism may be involved in the complex pathophysiology of the metabolic syndrome (MS) and obesity. Transgenic mice overexpressing 11betaHSD1 in adipose tissue develop obesity with all features of the MS, whereas 11betaHSD1-knockout mice are protected from both. The bulk of evidences points to an overexpression and increased activity of 11betaHSD1 also in human adipose tissue. However, 11betaHSD1 seems to adjust local cortisol concentrations independently of its plasma levels. In Cushing's syndrome, 11betaHSD1 is downregulated and may not be responsible for the abdominal fat depots; it also undergoes downregulation in response to weight loss in human obesity. The nonselective 11betaHSD1 inhibitor carbenoxolone improves insulin sensitivity in humans, and selective inhibitors enhance insulin action in diabetic mice liver, thereby lowering blood glucose. Thus, 11betaHSD1 is now emerging as a modulator of energy partitioning and a promising pharmacological target to treat the MS and diabetes.

Os glicocorticóides (GC) têm papel importante na determinação do metabolismo e da distribuição do tecido adiposo. A 11beta-hidroxisteróide desidrogenase tipo 1 (11betaHSD1) é uma enzima dependente de NADPH, altamente expressa nos tecidos hepático e adiposo. Em muitas células e tecidos intactos, ela funciona como redutase (convertendo cortisona em cortisol). Postula-se que uma desregulação tecido-específica do cortisol estaria envolvida na complexa fisiopatologia da síndrome metabólica (SM) e obesidade. Ratos que super-expressam 11betaHSD1 no tecido adiposo desenvolvem obesidade e todas as características da SM, enquanto ratos knockout para 11betaHSD1 são protegidos. Evidências apontam para uma super-expressão e aumento da atividade 11betaHSD1 também no tecido adiposo humano. Entretanto, a 11betaHSD1 parece ajustar a concentração local de cortisol independente da sua concentração sérica. Na síndrome de Cushing, a expressão da 11betaHSD1 é regulada para baixo, não devendo ser a causa dos depósitos de gordura visceral; em obesos, há também regulação para baixo em resposta à perda de peso. A carbenoxolona, um inibidor não seletivo da 11betaHSD1, melhora a sensibilidade insulínica em humanos e inibidores seletivos aumentam a sensibilidade insulínica hepática e melhoram o controle glicêmico em ratos diabéticos. Assim, a 11betaHSD1 está emergindo como um modulador da compartimentalização de energia e um alvo farmacológico promissor para o tratamento da SM e do diabetes.

Influence of high-fat diet on amine oxidase activity in white adipose tissue of mice prone or resistant to diet-induced obesity

Decreased monoamine oxidase (MAO) activity has been observed in adipose tissue of obese patients. Since substrates of MAO and semicarbazide-sensitive amine oxidase (SSAO) can modify adipocyte metabolism, this work investigates whether changes in amine oxidase activity may occur during white adipose tissue (WAT) development. We evaluated MAO and SSAO activities in WAT of high-fat diet (HFD) and low-fat diet fed mice. To distinguish the effect of HFD on its own from the effect of fat mass enlargement, obesity-prone transgenic line of the FVBn strain lacking b3-adrenergic receptors (AR) but expressing human b3-AR and a2-AR (mb3-/-, hb3+/+, ha2+/-) was compared to its obesity-resistant control (mb3-/-, hb3+/+). As already reported, the former mice became obese while the latter resisted to HFD. No significant change in SSAO or MAO activity was found in WAT of both strains after HFD when expressing oxidase activity per milligram of protein. However, when considering the overall capacity of the fat depots to oxidize tyramine or benzylamine, there was an increase in MAO and SSAO activity only in the enlarged WAT of HFD-induced obese mice. Therefore, the comparison of these models allowed to demonstrate that the higher amine oxidase capacity hold in enlarged fat stores of obese mice is more likely the consequence of increased fat cell number rather than the result of an increased expression of MAO or SSAO in the adipocyte

En trabajos previos se describe que la actividad monoamino oxidasa (MAO) en el tejido adiposo disminuye en pacientes obesos. Dado que los sustratos de la MAO y de la amino oxidasa sensible a semicarbazida (SSAO) pueden modificar el metabolismo de los adipocitos, se investiga en este trabajo si se producen cambios en la actividad amino oxidasa durante el desarrollo del tejido adiposo blanco. Para ello, se evalúa el efecto de la dieta rica en grasa (HFD) respecto de la dieta control sobre la actividad MAO y SSAO en tejido adiposo de ratones transgénicos que no expresan sus propios receptores adrenérgicos b3 y que son de dos líneas diferentes: los que expresan los receptores adrenérgicos humanos b3 Y a2 (mb3 -/-, hb3+/+, ha2+/-) y que son no susceptibles a la obesidad y los que sólo expresan los b3 humanos (mb3 -/-, hb3+/+) y que son resistentes a la obesidad. Los resultados no muestran cambios significativos por efecto de la dieta en ninguno de los dos grupos de ratones sobre la actividad MAO y SSAO cuando se expresa referida a mg de proteína. Sin embargo, cuando se considera la capacidad total de los depósitos grasos para oxidar tiramina o benzilamina, so observa un aumento significativo en ambas actividades MAO y SSAO sólo en el incrementado tejido adiposo blanco de los ratones obesos por efecto de la dieta HFD. Por tanto, estos datos indican que la mayor actividad amino oxidasa de los depósitos grasos de los ratones obesos es probablemente debida al aumento del número de células adiposas, mas que a un incremento de la expresión de MAO y SSAO en los adipocitos

Phorbol myristate acetate does not impair the inhibitory branch of adenylate cyclase in hamster adipocytes

La activación de alfa2-adrenoreceptores o Ri-adenosinreceptores en células adiposas disminuyó considerablemente la acumulación de AMP cíclico inducido por el agonista beta-adrenérgico isoprenalina. Esta acción casi fue abolida en células de hamster tratadas con toxina de la tosferina. El ester forbol activo, forbol 12-miristrato 13 acetato, fue incapaz de reproducir el efecto de la toxina en este modelo. Los datos indican que la activación de la proteinoquinasa C en este modelo celular no altera la rama inhibitoria de la adenil ciclasa

Apoptosis en Adipocitos Marrones: Implicación en Obesidad y Cáncer / Apoptosis in Brown Adipocytes: Implication in Obesity and Cancer

El mantenimiento de la homeostasis tisular consiste en un complejo equilibrio entre los procesos de proliferación y muerte celular, aunque el balance resulta favorable a la apoptosis durante algunas etapas de la embriogénesis o durante la involución de tejidos adultos. La apoptosis es una muerte celular programada fisiológicamente que afecta a células individuales y no produce respuesta inflamatoria. Muchas enfermedades están asociadas con la inducción o inhibición de apoptosis, lo que conduce a una pérdida celular (desórdenes neurodegenerativos o daños isquémicos), o a la acumulación celular (cáncer o desórdenes autoinmunes). En nuestro laboratorio hemos desarrollado un modelo de células mesenquimales no fibroblásticas, los adipocitos marrones fetales de rata, que responden al IGF-I/insulina aumentando la proliferación y la diferencación celular. Los resultados muestran que la ausencia de suero en una línea celular de adipocitos marrones da lugar a la inducción de apoptosis. Hemos visto que la inhibición de caspasas rescata a estas células de apoptosis disminuyendo la expresión de Bcl-xs y aumentando la de BCL-2. La insulina y el IGF-I son factores de supervivencia para estas células a través de una ruta dependiente de PI 3-quinasa/Akt y de MAP-quinasa. (AU)

Un método para la determinación de lipasa lipoproteínica en corazón y tejido adiposo epididimal / A method for lipoprotein lipase determination at heart and epididymal fat tissue

Se propone un método relativamente económico y de equipamiento sencillo, para la determinación de actividad de lipasa lipoproteínica en corazón y tejido adiposo epididimal de rata. Este método emplea intralipid como substrato artificial, albúmina bovina fracción V, suero de caballo y solución amortiguadora CINH4/NH4OH 0,1M, pH 8,6 en el medio de incubación. El análisis de varianza de la regresión indica buena linealidad cuando se compara actividad enzimática vs. tiempos de ambos tejidos (p<0,01), actividad enzimática vs. cantidad de tejido adiposo (como medida de la concentración de enzima en el homogeneizado) (p<0,01), actividad vs. cantidad de tejido cardíaco (p<0,05). La inhibición de la actividad por CINa y sulfato de protamina (1M y Lmg/ml en el medio de incubación, respectivamente), mostró resultados estadísticamente significativos (p=0,025), demostrando la especialidad del método(AU)

Actividad de la lipasa de lipoproteínas en corazón y tejido adiposo epididimal de rata después de la inyección de intralipid / Lipoprotein lipase activity in heart and epididyal adipose tissue in rats after intralipid injection

Se investigó la respuesta aguda de las lipasas de lipoproteínas (LPL) de corazón y tejido adiposo epididimal de rata a una sobrecarga de triglicéridos (TG) administrada por vía endovenosa en forma de Intralipid 10

. En los animales ayunados previamente se observó una depresión significativa (p<0,01) en la actividad de la enzima de corazón al final de la primera hora que siguió a la administración de TG y una recuperación de dicha actividad al final del experimento (2h). En los animales alimentados hubo aumento mantenido de la actividad LPL de corazón todo el tiempo, hasta hacerse significativo al final de la segunda hora (p<0,02), acompañado de una disminución rápida de TG circulantes. La enzima de tejido adiposo epididimal de ratas ayunadas experimentó un aumento significativo en su actividad, detectado a los 60 min (p<0,05), que se mantuvo hasta el final del experimento (p<0,01). En las ratas alimentadas se produjo también un aumento (no significativo) en la actividad de LPL de tejido adiposo (AU)

Regulación dietética de la enzima piruvatoquinasa en tejidos de ratas / Diet regulation of the pyruvate kinase enzye in rat tissues

Se estudió la actividad de la enzima piruvatoquinasa en el hígado, musculos y el tejido adiposo de ratas sometidas a un ciclo de ayuno y realimentación. Se evaluó el papel de la insulina en la modificación de la actividad de la piruvatoquinasa

Regulación dietética de la enzima piruvatoquinasa en tejidos de ratas / Diet regulation of the pyruvate kinase enzyme in rat tissues

Se estudió la actividad de la enzima piruvatoquinasa en el hígado, musculos y el tejido adiposo de ratas sometidas a un ciclo de ayuno y realimentación. Se evaluó el papel de la insulina en la modificación de la actividad de la piruvatoquinasa

Actividad de la lipasa de lipoproteínas en corazón y tejido adiposo epididimal de rata después de la inyección de intralipid / Lipoprotein lipase activity in heart and epididymal adipose tissue in rats after intralipid injection

Se investigó la respuesta aguda de las lipasas de lipoproteínas (LPL) de corazón y tejido adiposo epididimal de rata a una sobrecarga de triglicéridos (TG) administrada por vía endovenosa en forma de Intralipid 10%. En los animales ayunados previamente se observó una depresión significativa (p<0,01) en la actividad de la enzima de corazón al final de la primera hora que siguió a la administración de TG y una recuperación de dicha actividad al final del experimento (2h). En los animales alimentados hubo aumento mantenido de la actividad LPL de corazón todo el tiempo, hasta hacerse significativo al final de la segunda hora (p<0,02), acompañado de una disminución rápida de TG circulantes. La enzima de tejido adiposo epididimal de ratas ayunadas experimentó un aumento significativo en su actividad, detectado a los 60 min (p<0,05), que se mantuvo hasta el final del experimento (p<0,01). En las ratas alimentadas se produjo también un aumento (no significativo) en la actividad de LPL de tejido adiposo